CN101156883A - 甜叶菊有效部位及其活性和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甜叶菊有效部位及其活性和应用。该有效部位主要包括甜菊苷类和黄酮类,系从甜叶菊干燥叶中提取分离得到,其中甜菊苷部位中甜菊苷类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),主要包含有甜菊苷、斯替维伯苷、莱鲍迪苷A、B、C、D、E、F和杜尔可苷A及其衍生物等;黄酮部位中黄酮类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),主要包含有木犀草素,槲皮素,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷,槲皮苷,槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]及其衍生物,以及4,5-双咖啡酰奎宁酸及其衍生物等。该有效部位具有显著的降糖与降脂作用,可单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品,用于高血糖和高血脂症的治疗。
Description
技术领域
本发明属食品医药技术领域,具体涉及甜叶菊有效部位甜菊苷类和黄酮类,以及该有效部位的降糖降脂活性和应用。
背景技术
近几年来,人们营养过剩的问题日益严重,戒糖的呼声越来越高,食用蔗糖过量给人们带来的众多危害促使科学家不断寻找开发新型的糖源。甜叶菊叶片提取物中的甜菊苷及其它双萜糖苷相关物作为一类高甜度、低热值的天然甜味剂产品越来越受到广大消费者的青睐。它不仅符合现代饮食健康的要求,而且也为糖尿病、肥胖病、高血压、心脏病的患者提供了不诱发病情的甜味代替品,有着广阔的发展前途。近年来,甜菊苷在食品、饮料和医药卫生方面获得了广泛的应用,被誉为世界“第三糖源”。1985年6月我国卫生部审定批准甜菊苷可以在各种食品、饮料及药品中使用。
甜叶菊(Stevia Rebaudiana Bertoni.)属菊科甜菊属多年生草本植物,别名甜茶。甜叶菊原产于巴拉圭东北部与巴西接壤的阿曼拜山脉,当地居民把它作为甜药饮用已有一百多年的历史。甜叶菊性味甘、平,甜叶菊叶中富含甜叶菊苷类成分,除此之外,还含有甾醇类和黄酮类成分。目前,从甜叶菊中确定出降糖降脂有效部位尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甜叶菊有效部位,该有效部位主要包括甜菊苷类和黄酮类。
本发明的另一个目的在于提供甜叶菊有效部位的降糖降脂活性。
本发明的再一个目的在于提供甜菊苷有效部位的制剂及其在药品、食品领域的应用。
本发明的目的是通过以下途径实现的:
本发明提出的甜叶菊有效部位系从甜叶菊干燥叶中提取分离得到。其提取工艺为:甜叶菊干燥叶片加30~90%乙醇,回流提取2~3次,每次提取1~2小时,溶剂用量为5~15倍量(L/kg)。大孔吸附树脂纯化工艺为:选用AB-8、HPD400等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂,甜叶菊乙醇提取物上样液浓度1∶4~1∶12(以生药量(g)∶分散毫升数),吸附流速2~9BV/h,树脂柱径高比1∶5~1∶10,上样量为100~500mg/mL(以生药量计),0~40%乙醇洗脱1~4倍树脂体积进行除杂,用40~90%乙醇洗脱3~6倍树脂体积,洗脱流速为2~9 BV/h。收集40~90%乙醇洗脱液,回收溶剂,残留物减压干燥,即得甜叶菊有效部位。聚酰胺柱色谱纯化工艺为:甜叶菊乙醇提取物上样液浓度1∶4~1∶12(以生药量(g)∶分散毫升数),吸附流速2~9BV/h,树脂柱径高比1∶5~1∶10,上样量为100~500mg/mL(以生药量计),先用0~40%乙醇洗脱1~4倍树脂体积,收集洗脱液,回收溶剂,残留物减压干燥,得到甜菊苷部位;聚酰胺柱再用40~90%乙醇洗脱3~6倍树脂体积,洗脱流速为2~9BV/h,收集洗脱液,回收溶剂,残留物减压干燥,得到黄酮部位。将甜菊苷部位与黄酮部位适当调配,即为甜叶菊有效部位。
本发明提出的甜叶菊有效部位主要包括甜菊苷类和黄酮类,其中甜菊苷部位主要包含有甜菊苷、斯替维伯苷、莱鲍迪苷A、B、C、D、E、F和杜尔可苷A及其衍生物等;黄酮部位主要包含有木犀草素,槲皮素,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷,槲皮苷,槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]及其衍生物,以及4,5-双咖啡酰奎宁酸及其衍生物等。甜菊苷部位中甜菊苷类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),黄酮部位中黄酮类成分百分含量的总和为5~100%(w/w)。
本发明提出的甜菊苷有效部位具有显著的降糖与降脂作用。
1实验材料
1.1药物与试剂
甜叶菊有效部位。
四氧嘧啶:购自SIGMA公司,货号:A7413-25G,样品批号:073K1626,白色粉末状。
葡萄糖:北京试剂二厂,批号:910208。
盐酸二甲双胍:贵州天安药业股份有限公司产品,国药准字H52020469。
吉非罗齐胶囊:哈药集团制药总厂产品,国药准字H23020994。
1.2动物
ICR小鼠,SPF级,雌雄各半,体重18~22g,由维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2002-0003
SD大鼠,SPF级,雌雄各半,体重为180-200g,由维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证号:SCXK(京)2002-0003。
饲料购自北京科澳协力公司, 每天喂食1次。
2试验方法
2.1对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影响
造模:ICR小鼠80只,雌雄各半,初始体重18~20g,适应性喂养2天。禁食(不禁水)12h后,尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg,72小时后尾部取血,用血糖仪测禁食不禁水3~6h后的空腹血糖值,筛选空腹血糖>11.1mmol/L的小鼠40只作为糖尿病模型小鼠。
分组:将糖尿病模型小鼠按血糖值分层随机分为4组:①甜叶菊有效部位组,②正常对照组,③模型对照组,④二甲双胍对照组。每组10只动物,雌雄各半。按10ml/kg灌胃给药,每天1次,连续给药21天。
指标测定:(1)食量和饮水量测定:给药期间,每天称体重,每周测食量和饮水量。(2)糖耐量测定:给药第21天,禁食不禁水3~6h,取血测定血糖作为服糖前的血糖值,立即灌胃葡萄糖2.5g/kg,测定给糖后0.5小时,1小时及2小时的血糖值。
统计方法:对各试验组测定血糖值取均值,采用孙瑞元,陈志扬,郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行组间Student’t检验判定显著性差异。
2.2对高脂饲料喂养所致高血脂模型大鼠血脂含量的影响
造模:SD大鼠32只,雌雄各半,初始体重180~200g。适应性喂养3天后,按体重分层随机分为4组:①甜叶菊有效部位组,②正常对照组,③模型对照组,④吉非罗齐对照组(110mg/kg)。每组8只动物,雌雄各半。除空白对照组用基础饲料喂养外,其余各组均采用高脂饲料(0.3%胆酸盐,15%猪油,10%蛋黄粉,74.7%基础饲料)饲养4w。
给药:造模期间,大鼠按10ml/kg灌胃给药,每天1次,连续6w。正常对照组和模型对照组分别给等体积溶媒。
指标测定:于给药第29天,摘眼球取血2ml,离心,制备血清。用自动生化仪测定血清TG(甘油三酯)、T-CHO(总胆固醇)、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平。剖取肝脏和腹后壁脂肪称重。
统计方法:对各试验组测定血清TG、T-CHO、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白值取均值,采用孙瑞元,陈志扬,郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行组间Student’t检验判定显著性差异。
3结果
3.1对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影响
造模后,试验各组小鼠血糖值与正常对照比较,均有显著性的升高,表明四氧嘧啶造成的糖尿病模型成功。
糖尿病小鼠给与试药甜叶菊有效部位组治疗后,血糖值逐步下降,给药21天后血糖值显著性下降,与模型对照组比较有生物统计学意义,表明甜叶菊有效部位组对四氧嘧啶造成的胰岛β细胞损伤而引起的实验性糖尿病具有治疗作用,结果见表1。
糖耐量试验结果如表2,二甲双胍有效地抑制了葡萄糖灌胃后血糖的升高(P<0.001),受试药甜叶菊有效部位组也显示了一定的抑制作用,在1小时及2小时血糖水平出现了显著性下降。表明试药能显著抑制葡萄糖负荷糖尿病小鼠的血糖值升高,具有显著的降糖作用。
表1甜叶菊有效部位对糖尿病小鼠血糖的影响()
组别 | 血糖值(mmol/l) | 降糖率(%) | ||
给药前 | 给药后10d | 给药后21d | ||
正常对照组模型对照组二甲双胍组 | 6.5±0.717.3±4.6##17.9±4.9 | 6.6±0.923.7±5.5##20.4±5.9* | 6.7±1.320.4±7.23##13.8±4.6** | --32.35 |
甜叶菊有效部位组 | 16.0±4.1 | 21.0±3.8 | 14.9±2.3* | 26.96 |
组别 | 血糖值(mmol/l) | |||
给糖前 | 给糖30min | 给糖60min | 给糖120min | |
正常对照组模型对照组二甲双胍组 | 6.7±1.320.4±7.2##13.8±4.6** | 10.4±5.223.8±2.10##18.1±4.7* | 7.3±2.225.8±2.6##12.5±3.5** | 6.9±1.224.2±4.5##12.01±3.4** |
甜叶菊有效部位组 | 14.90±2.3* | 19.3±7.3 | 13.3±5.8** | 13.1±5.7** |
注:给药组与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;模型与对照组比较:#P<0.05,##P<0.01
3.2对高脂饲料喂养所致高血脂模型大鼠血脂含量的影响
3.2.1对血脂的影响
通过高脂饲料造模后,模型组大鼠血脂各项指标甘油三酯、总胆固醇、LDL均显著高于空白对照组,说明高脂模型造模成功。
阳性对照药物吉非罗齐组显著降低血清中甘油三酯(P<0.05)、显著升高HDL(P<0.05),本试验结果与本品的作用机制及文献报道结果基本一致。
甜叶菊有效部位组显著降低血清中甘油三酯(P<0.05)和LDL、显著升高HDL(P<0.05)。表明受试药甜叶菊有效部位具有显著降低血脂作用。
表3对高脂模型大鼠血脂的影响
空白对照组 | 模型组 | 吉非罗齐组 | 甜叶菊有效部位组 | |
甘油三酯 | 0.667±0.23 | 1.625±0.59## | 1.074±0.28* | 1.098±0.31* |
总胆固醇 | 1.131±0.21 | 2.190±0.57## | 2.270±0.358 | 2.124±0.66 |
HDL | 0.516±0.12 | 0.518±0.11 | 0.746±0.14* | 0.669±0.12* |
LDL | 0.157±0.05 | 0.308±0.10## | 0.253±0.10 | 0.204±0.06* |
注:与空白对照组比较,#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
本发明提出的有效部位可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品。
含有本发明提出的有效部位的制剂可根据本领域公知的方法制备。可将本发明提出的有效部位与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅料结合,制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
含有本发明提出的有效部位的制剂,可以单位剂量形式给药,给药途径可为肠道或非肠道,如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型,如液体剂型可以是真溶液剂型、胶体溶液剂型、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、酒剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳液等;固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、霜剂、栓剂、散剂、膏剂等。
含有本发明提出的有效部位的制剂,可以是普通制剂,也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统等。
为了将单位给药剂型制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子包括,赋形剂如碳酸钙、乳糖、磷酸钙、磷酸钠;稀释剂与吸收剂如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝、葡聚糖、胶态二氧化硅、阿拉伯胶、明胶、三硅酸镁、角蛋白等;湿润剂与粘合剂如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂如干燥淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氢化植物油等;吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片,如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片,或双层片和多层片等。
为了将单位给药剂型制成丸剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可酯、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等;崩解剂如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
为了将单位给药剂型制成胶囊,可将本发明提出的有效部位与上述各种载体混合,并将由此得到的混合物置于硬明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明提出的有效部位制成微囊剂,混悬于水性介质中形成混悬剂,亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
为了将单位给药剂型制成口服液体制剂,如乳液、溶液、悬浮液、糖浆等,可根据需要任选添加剂如着色剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、矫味剂(如薄荷、冬青油等)、甜味剂(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。
为了将单位给药剂型制成注射用含水或非水制剂,如溶液剂、混悬型溶液剂、乳剂、冻干粉针剂,可含一种和/或多种药效学上可接受的载体,如稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂,以及常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、植物油(如橄榄油、玉米油等)、明胶、可注射用有机酯(如油酸乙酯、脂肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。为了制备等渗注射剂,还可以添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油。
具体实施方式
实施例1:甜叶菊有效部位胶囊剂的制备
取甜叶菊有效部位200g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素100g混合均匀,以95%乙醇制粒,干燥,以20目筛整粒,灌装胶囊。
实施例2:甜叶菊有效部位片剂的制备
取甜叶菊有效部位50g,粉碎,过80目筛,与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀,以5%PVP制粒,干燥,以20目筛整粒,加入硬脂酸镁2g,压片。
实施例3:甜叶菊有效部位滴丸剂的制备
取甜叶菊有效部位60g,粉碎,过80目筛,混合均匀,投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中,搅拌至溶解,转移至贮液瓶中,密闭并保温在80~90℃,调节滴丸机液滴定量阀门,由上往下滴入10~15℃的液体石蜡中,将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡,干燥。
实施例4:甜叶菊有效部位口服液的制备
取甜叶菊有效部位70g,粉碎,过80目筛,混合均匀,与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合,加热至85~90℃,搅拌使溶解,保温30min,滤过,滤液加水稀释至4000ml,搅拌均匀,灌封,灭菌。
实施例5:甜叶菊有效部位注射液的制备
取甜叶菊有效部位100g,加注射用水适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至10L左右,加氯化钠调节渗透压至等渗,调节pH7.5~8.0,超滤,灌封,100℃灭菌30min。
实施例6:甜叶菊有效部位粉针剂的制备
取甜叶菊有效部位100g,加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解,加配置量的0.02%的活性炭搅拌5~10min,滤过,滤液稀释至1L,调节pH6.5~7.8,超滤,喷雾干燥,干粉无菌分装。每支100mg,临用前加注射用水适量使溶解,用氯化钠输液250~500ml稀释后缓慢静脉滴注。
Claims (5)
1.一种甜叶菊有效部位,其特征在于该有效部位包括甜菊苷类和黄酮类,系从甜叶菊干燥叶中提取分离得到,其中甜菊苷部位主要包含有甜菊苷、斯替维伯苷、莱鲍迪苷A、B、C、D、E、F和杜尔可苷A及其衍生物等;黄酮部位主要包含有木犀草素,槲皮素,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷,槲皮苷,槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]及其衍生物,以及4,5-双咖啡酰奎宁酸及其衍生物等。
2.如权利要求1所述的甜叶菊有效部位,其特征在于甜菊苷部位中甜菊苷类成分百分含量的总和为5~100%(w/w),黄酮部位中黄酮类成分百分含量的总和为5~100%(w/w)。
3.如权利要求1所述的甜叶菊有效部位,其特征在于该有效部位具有显著的降糖与降脂作用。
4.如权利要求1所述的甜叶菊有效部位的应用,其特征在于,该有效部位可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍,用于制备药物或功能性食品。
5.如权利要求4所述的甜叶菊有效部位的应用,其特征在于,将该有效部位与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅料结合,制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式,包括普通制剂、缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统等,给药途径可为肠道或非肠道,给药剂型可为液体剂型或固体剂型,如胶囊剂、片剂、丸剂、滴丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂等。
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080409 |