CN103349724A - 一种知母总黄酮提取物及其同时制备知母总黄酮提取物及总皂苷提取物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种知母总黄酮提取物，及其可同时制备知母总黄酮和总皂苷、知母总黄酮合总皂苷提取物的方法，知母总黄酮提取物和总皂苷提取物、知母总黄酮合总皂苷提取物均有多种不同的药理活性，可应用于多种常用制品。本发明中，知母通过溶剂回流提取，再通过色谱法分离纯化，同时制备得到知母总黄酮提取物和知母总皂苷提取物、知母总黄酮合总皂苷提取物、基于制备得到的知母总黄酮提取物和知母总皂苷提取物可获得二者的相应组合物。

Description

一种知母总黄酮提取物及其同时制备知母总黄酮提取物及总皂苷提取物的方法

技术领域

本发明属食品医药技术领域，具体涉及一种知母总黄酮提取物，及其可同时制备知母总黄酮和总皂苷提取物的方法。

背景技术

中药知母(ANEMARRHENAE RHIZOMA)为百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloidesBge)的干燥根茎，春、秋二季采挖。味苦，性寒，归肺、胃、肾经，具有清热泻火、滋阴润燥、止渴除烦等功效，主治温热病，高热烦渴，咳嗽气喘等症。

据文献报道，知母的化学成分主要有甾体皂苷、双苯吡酮类黄酮、木质素、生物碱、挥发油、多糖和微量元素。其中甾体皂苷为含量最多的一类化合物，大约占药材的6％，且已有大量研究表明该类化合物有很多药理活性，经研究表明知母皂苷可改善心肌缺血，降低血脂和抗动脉粥样硬化；对脑缺血再灌注大鼠具有保护的作用；同时，知母皂苷还有一定的抗衰老作用。其次含量较多且活性较高的即为黄酮类化合物，知母总黄酮可以有效降低溴酸钾诱导的小鼠肾损伤模型中低血清肌酐的水平和肾组织中丙二醛的含量，同时提高肾组织的抗氧化能力指数以及谷胱甘肽、半胱氨酸及维生素C的水平，并在体外显示出较强的抗氧化能力。故申请人对此两类有效组分的提取富集工艺及其质量控制方法进行了研究，建立了稳定可行、适合工业化生产的制备工艺和科学合理的质量控制方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种知母总黄酮提取物，本发明的另一个目的在干提供同时制得知母总黄酮和总皂苷两类提取物的制备方法及工艺，本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法，本发明的第四个目的在于提供知母总黄酮提取物、总皂苷提取物、总黄酮合总皂苷提取物、总黄酮提取物与总皂苷提取物的组合物的制品及其在药品、食品领域的应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

步骤1：取知母药材，溶剂回流提取；

步骤2：色谱法纯化；

该知母总黄酮提取物中总黄酮含量为2～100％，总皂苷提取物中总皂苷含量为5～100％；总黄酮合总皂苷提取物中总黄酮含量为1～95％，总皂苷提取物中总皂苷含量为2～96％；、该知母总黄酮提取物中总黄酮含量优选为20～100％，同时，总皂苷提取物中总皂苷含量优选为20～100％；总黄酮合总皂苷提取物中总黄酮含量为10～95％，总皂苷提取物中总皂苷含量为20～96％；

将以上所得提取物，可单独或混合应用，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂。

上述提取物，可单独或混合应用，可作为辅料或添加剂，加至食品、饮料及其他制品中，制成可接受的任意常规制品。

上述步骤1中，知母药材用30～95％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得知母乙醇提取物。

上述步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以知母药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂，上样量以生药量计为与0.10～2.50g/ml，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～5BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得知母总黄酮提取物。

上述步骤2中，用20～60％乙醇洗脱后，再用61～90％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h。收集61～90％乙醇洗脱液，回收溶剂，残留物减压干燥，即得知母总皂苷提取物。

上述步骤2中，树脂柱用0～20％乙醇洗脱1～5BV进行除杂，弃去，用60～95％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得知母总黄酮合总皂苷提取物。

上述步骤2中所用大孔吸附树脂优选为AB-8、HPD-400、HPD-826型等弱极性或中等极性大孔吸附树脂。

本发明知母总黄酮提取物主要包括黄酮类物质，如芒果苷，新芒果苷，异芒果苷，宝藿苷-I、淫羊藿苷-I及其衍生物等黄酮类成分。知母总黄酮提取物中芒果苷、新芒果苷，及其黄酮类衍生物成分百分含量的总和为5～100％(w/w)。

本发明知母总皂苷提取物主要包括知母皂苷A I～AIV、知母皂苷B I～BVI、知母皂苷C、D、E₁、E₂、F、G、H₁、H₂、I、Ia、1₁、1₂、N、O等甾体皂苷类成分。知母总皂苷提取物中知母皂苷AI～AIV、知母皂苷BI～BVI、及其甾体皂苷类衍生物成分百分含量的总和为5～100％(w/w)。

本发明知母总黄酮提取物为知母经乙醇、或其他醇类、稀醇、或其他有机溶剂或水提取再通过大孔吸附树脂或其他色谱方法，如聚酰胺色谱法等，或溶剂法，如溶剂萃取法等纯化得到。

知母总黄酮提取物，可从知母中以及含有相同黄酮类成分的天然产物中获取，也可通过结构修饰、化学合成、微生物转化等途径获取。

知母总皂苷提取物，可从知母中以及含有相同皂苷类成分的天然产物中获取，也可通过结构修饰、化学合成、微生物转化等途径获取。

实验例

含有本发明提出的提取物的制剂可根据本领域公知的方法制备。可将本发明提出的提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅料结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，如液体剂型可以是真溶液剂型、胶体溶液剂型、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、酒剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳液等；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、霜剂、栓剂、散剂、膏剂等。

含有本发明提出的提取物的制剂，可以是普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统等。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子包括，赋形剂如碳酸钙、乳糖、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝、葡聚糖、胶态二氧化硅、阿拉伯胶、明胶、三硅酸镁、角蛋白等；湿润剂与粘合剂如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂如干燥淀粉、海藻酸钠、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可酯、氢化植物油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、三乙胺硬脂酸、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片等。

为了将单位给药剂型制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可酯、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄耆胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将单位给药剂型制成胶囊，可将本发明提出的提取物与上述各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬明胶胶囊或软胶囊中。也可将本发明提出的提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

为了将单位给药剂型制成口服液体制剂，如乳液、溶液、悬浮液、糖浆等，可根据需要任选添加剂如着色剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、矫味剂(如薄荷、冬青油等)、甜味剂(如蔗糖、乳糖等)或其他材料。

为了将单位给药剂型制成注射用含水或非水制剂，如溶液剂、混悬型溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体，如稀释剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂，以及常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3一丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、植物油(如橄榄油、玉米油等)、明胶、可注射用有机酯(如油酸乙酯、脂肪酸酯等)、聚氧乙烯山梨醇等。为了制备等渗注射剂，还可以添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油。

具体实施方式

实施例1：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用4倍量30％乙醇回流提取5次，每次1小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.15g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积AB-8树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为1∶2，径高比为1∶5，预处理后上样，上样流速为1BV·h^-1。用20％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱4BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得知母总黄酮提取物，之后用70％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得知母总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为50％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为706。

实施例2：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用6倍量40％乙醇回流提取2次，每次2小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.25g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积HPD-400树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为2∶1，径高比为1∶9，预处理后上样，上样流速为1BV·h^-1。用20％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱4BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得总黄酮组分，之后用90％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为50％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷有提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为70％。

实施例3：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺.

取1kg知母药材，分别用6倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.20g·ml^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积AB-8树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为2∶1，径高比为1∶9，预处理后上样，上样流速为1BV·h^-1。用40％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱4BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得总黄酮组分，之后用70％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷组分。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为556。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为75％。

实施例4：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用6倍量60％乙醇回流提取1次，每次3小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.25g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积HPD-400树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为1∶4，径高比为1∶8，预处理后上样，上样流速为4BV·h^-1。用50％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱8BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得总黄酮提取物，之后用80％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为60％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10mi容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为706。

实施例5：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用6倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.25g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积AB-8树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为1∶6，径高比为1∶5，预处理后上样，上样流速为4BV·h^-1。用55％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱4BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得总黄酮提取物，之后用85％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为64％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为73％。

实施例6：知母总黄酮提取物和总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用6倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.15g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积HPD-826树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为2∶1，径高比为1∶5，预处理后上样，上样流速为3BV·h^-1。用20％7醇以2BV·h^-1速度洗脱3BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得总黄酮提取物，之后用80％乙醇以4BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为65％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为75％。

实施例7：知母总黄酮合总皂苷提取物制备工艺

取1kg知母药材，分别用4倍量30％乙醇回流提取5次，每次1小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.15g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积AB-8树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为1∶2，径高比为1∶5，预处理后上样，上样流速为1BV·h^-1。用20％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱4BV，洗脱液弃去，用40％乙醇以2BV·h^-1洗脱5BV，回收乙醇真空干燥后得知母总黄酮提取物，之后用70％乙醇以2BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得知母总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为35％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min，之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为40％。

实施例8：知母总黄酮合总皂苷提取物制备工艺

取lkg知母药材，分别用6倍量70％乙醇回流提取2次，每次2小时。回收提取液至无醇味后，加水稀释至药液浓度为0.15g·m1^-1(生药·体积^-1)的上样液，取一定体积HPD-826树脂装入合适的玻璃柱中，使树脂体积与相应上样液体积比为2∶1，径高比为1∶5，预处理后上样，上样流速为3BV·h^-1。用20％乙醇以2BV·h^-1速度洗脱3BV，洗脱液弃去之后用80％乙醇以4BV·h^-1流速洗脱3BV，回收乙醇真空干燥后得总皂苷提取物。

总黄酮含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取芒果苷适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总黄酮提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用盐酸镁粉显色法，分别精密吸取一定量的芒果苷对照品溶液和提取物样品溶液0.2ml加入装有150mg镁粉的试管中，缓慢加入盐酸至4ml，40℃加热35min，放置室温，加70％甲醇定容至5ml，于474±5nm下测定吸收度，外标两点法计算含量，经测定总黄酮含量为25％。

总皂苷含量测定方法：

对照品溶液的制备：称取知母皂苷AIII适量，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液；

样品溶液制备：称取总皂苷提取物适量，置10ml容量瓶中，加70％甲醇超声溶解并定容，摇匀，作为样品溶液；

测定方法：采用香草醛-高氯酸显色方法，分别精密吸取一定量的知母皂苷AIII对照品溶液和提取物样品0.2ml，蒸干。加0.3m15％香草醛-冰醋酸，再加0.4ml高氯酸，摇匀。于70℃水浴加热20min后，冰浴5min；之后加5ml冰醋酸定容，静置30min后在606nm±5nm处检测吸光度下外标两点法计算含量，经测定总皂苷含量为35％。

实施例9：知母总黄酮提取物胶囊剂的制备

取知母总黄酮提取物200g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素100g混合均匀，以95％乙醇制粒，干燥，以20目筛整粒，灌装胶囊。

实施例10：知母总黄酮提取物片剂的制备

取知母总黄酮提取物50g，粉碎，过80目筛，与微晶纤维素70g、羧甲基淀粉钠5g混合均匀，以5％PVP制粒，干燥，以20目筛整粒，加入硬脂酸镁2g，压片。

实施例11：知母总黄酮提取物滴丸剂的制备

取知母总黄酮提取物60g，粉碎，过80目筛，混合均匀，投入180g加热熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至溶解，转移至贮液瓶中，密闭并保温在80～90℃，调节滴丸机液滴定量阀门，由上往下滴入10～15℃的液体石蜡中，将形成的滴丸沥干并擦除液体石蜡，干燥。

实施例12：知母总黄酮提取物口服液的制备

取知母总黄酮提取物70g，粉碎，过80目筛，混合均匀，与蜂蜜1000g、蔗糖200g、苯甲酸钠10g及蒸馏水2000ml混合，加热至85～90℃，搅拌使溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至4000ml，搅拌均匀，灌封，灭菌。

实施例13：知母总黄酮提取物注射液的制备

取知母总黄酮提取物100g，加注射用水适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至10L左右，加氯化钠调节渗透压至等渗，调节pH7.5～8.0，超滤，灌封，100℃灭菌30min。

实施例14：知母总黄酮提取物粉针剂的制备

取知母总黄酮提取物100g，加注射用水及稀氢氧化钠适量使溶解，加配置量的0.02％的活性炭搅拌5～10min，滤过，滤液稀释至1L，调节pH6.5～7.8，超滤，喷雾干燥，干粉无菌分装。每支100mg，临用前加注射用水适量使溶解，用氯化钠输液250～500ml稀释后缓慢静脉滴注。

实施例15·知母提取物饮料的制备

取知母总黄酮提取物100g，加至合适的饮料中，使之全部溶解。

Claims (12)

1.一种知母总黄酮提物物，其特征在于该提取物的制备方法包括如下步骤： 

步骤1：取知母药材，溶剂回流提取； 

步骤2：色谱法纯化； 

该知母总黄酮提取物中总黄酮含量为5～100％。 

2.如权利要求1所述的知母总黄酮提取物，其特征在于步骤1中，知母药材用30～95％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得知母乙醇提取物。 

3.如权利要求1所述的知母总黄酮提取物，其特征在于步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以知母药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱或其它色谱柱，上样量以生药量计为与0.10～2.50g/ml，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～5BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得知母黄酮提取物。 

4.如权利要求1～3所述知母总黄酮提取物，其特征在于主要包括芒果苷、新芒果苷、异芒果苷、宝藿苷-I、淫羊藿苷-I等成分。 

5.如权利要求1～3任一所述的知母总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤1中，知母药材用30～90％乙醇回流提取2～3次，每次提取1～2小时，合并提取液，减压回收溶剂至干，得知母乙醇提取物。 

6.如权利要求1所述的知母总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤2中，将步骤1所得乙醇提取物加水分散溶解，以知母药材计，上样液浓度为0.08～0.25g/ml，通过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱或其他色谱柱，上样量以生药量计为与0.10～2.50g/ml，吸附流速为1～9BV/h，树脂柱径高比为1∶3～10，用0～20％乙醇洗脱1～5BV进行除杂，弃去，用20～60％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，再用65～90％乙醇洗脱3～6BV，洗脱流速为2～9BV/h，收集20～60％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，即得知母总黄酮提取物。 

7.如权利要求8所述的知母总黄酮提取物的制备方法，其特征在于可分别或同时制备知母总皂苷提取物，收集20～60％乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，即得知母总黄酮提取物，收集61～95％乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥，即得知母总皂苷提取物，或步骤2中，树脂柱除杂后，采用60～95％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，蒸干，即得知母总黄酮合总皂苷提取物。 

8.如权利要求6～7所述知母总皂苷提取物，其特征在于主要包括知母皂苷A I～AIV、知母皂苷B I～BVI、知母皂苷C、D、E₁、E₂、F、G、H₁、H₂、I、Ia、I₁、I₂、N、O等甾体皂苷类成分，知母总皂苷类成分转移率为5～100％。 

9.如权利要求1～3所述知母总黄酮提取物，其特征在于可从知母中以及含有相同黄酮类成分的天然产物中获取，也可通过结构修饰、化学合成、微生物转化等途径获取。 

10.如权利要求6～8所述知母总皂苷提取物，其特征在于可从知母中以及含有相同皂苷类成分的天然产物中获取，也可通过结构修饰、化学合成、微生物转化等途径获取。 

11.如权利要求1～10所述知母总黄酮提取物、知母总皂苷提取物、知母总黄酮合总皂苷提取物，知母总黄酮提取物与知母总皂苷提取物组合物，其特征在于可加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂。 

12.如权利要求1～10所述知母总黄酮提取物、知母总皂苷提取物以及知母总黄酮合总皂苷提取物，知母总黄酮提取物与知母总皂苷提取物组合物，其特征在于作为辅料或添加剂，加至食品、饮料及其他制品中，制成可接受的任意常规制品。