CN106236791A - 骆驼蓬总碱乳膏剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种骆驼蓬生物碱乳膏剂，包括骆驼蓬生物碱提取物以及药理上可接受的乳膏剂基质。本发明所具有的优点是：对银屑病动物模型与皮肤瘙痒模型有效，且具有良好的透皮吸收和皮内滞留特性，可以持续局部发挥作用。本发明还公开了该骆驼蓬生物碱乳膏剂的制备方法。

Description

骆驼蓬总碱乳膏剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种骆驼蓬总碱乳膏剂，本发明还涉及该骆驼蓬总碱乳膏剂的制备方法。

背景技术

皮肤瘙痒是皮炎、湿疹、荨麻疹、接触性皮炎、结节性痒疹、皮肤干燥症、浅部真菌感染、银屑病和特应性皮炎等皮肤疾病最常见的临床表现，也是糖尿病、胆汁淤积症、慢性肾病、肿瘤和艾滋病( AIDS) 等系统性疾病重要的临床表现，其严重影响患者的生活质量，需要及时进行有效治疗。调查显示，35～60岁的人群中有67.57%的人认为皮肤瘙痒症影响其生活质量，20～35岁人群中有29.05%的人认为皮肤瘙痒症影响其生活质量。其中，老年性皮肤瘙痒症是一种老年人常见的皮肤病，多发于60岁以上，男性多于女性，临床表现常仅有瘙痒症状而无原发性皮肤损害。该病病程缠绵，使人难以忍受而又缺乏有效的治疗手段，严重影响老年患者的身心健康。

依据神经生理学发病机制和临床特征，皮肤瘙痒可分为几种不同类型：皮肤源性皮肤瘙痒( pruritoceptive itch) ，是皮肤炎症、干燥和其他伤害性刺激诱发的皮肤瘙痒， 致敏的C-神经纤维亚单位是瘙痒信号的特定传导通路， 如疥疮、荨麻疹和虫咬反应诱发的皮肤瘙痒；神经病源性皮肤瘙痒( neuropathic itch) ，是神经系统损伤诱发的皮肤瘙痒， 如带状疱疹后遗神经痛患者同时伴发的皮肤瘙痒，多发性硬化症患者突然发作的阵发性皮肤瘙痒；神经源性皮肤瘙痒( neurogenic itch)，其与功能正常的神经系统有关，如胆汁淤积症患者的皮肤瘙痒，吸入κ受体激动剂和μ受体阻断剂布托菲诺对其治疗有效。此外还有精神源性皮肤瘙痒(psychogenic itch)等。

皮肤的主要组成细胞角质形成细胞在瘙痒的发病机制中具有重要作用。 病理条件下，角质形成细胞可以分泌细胞因子、胺类、神经肽、神经生长因子、类罂粟碱和类花生酸等多种内源性致痒物质，刺激肥大细胞释放组胺或直接致敏皮肤C-神经纤维感受器诱发皮肤瘙痒。

皮肤瘙痒的临床治疗困难， 目前仍无特效方法，临床主要以抗组胺H1 和H2 受体拮抗剂、糖皮质激素、免疫调节及局部UV 照射治疗为主，但常因出现不良反应无法长期应用，治疗间断后，瘙痒迅速复发。目前临床抗瘙痒的药物治疗取得了一定进展，如临床应用以TRPV-1 为作用靶点的辣椒碱( 0.025% ~0.1%) 治疗结节性痒疹和光敏诱发的皮肤瘙痒有效；联合应用氯卓斯汀、左旋西替利嗪和非索菲那定等抗组胺药物治疗结节性痒疹、特应性皮炎和老年性皮肤瘙痒有效。

乳膏剂是软膏剂的一种，主要有保护创面、润滑皮肤和局部治疗的作用，某些软膏剂中的药物透皮吸收后，亦能产生全身治疗作用。中药提取液或粉末直接加入乳剂型基质中制成软膏，克服了传统中药硬膏剂的制备工艺复杂、质量难以控制、药物使用率低、使用不方便及局部刺激等缺点，提高了药物有效成分的生物利用度，增加了药物成分的协同作用，同时也为中草药的利用提供了新剂型。北京美兰德医药信息咨询有限公司于2004年5月到6月期间，在全国30个省会城市对居民家庭皮肤病外用药情况进行了电话抽样调查。彼次调查共涉及5128个家庭，其中访问了1108个在最近两个月内购买过皮肤病外用药的家庭。调查中消费者提及的皮肤病外用药超过100种，其中多为西药品种，占90％。调查结果表明，皮肤病外用药的剂型比较单一，在城市居民家庭购买的各种皮肤病外用药中，乳膏剂产品占了82.6％，远远高于其他剂型产品。这主要是因为O/W型基质能与大量水混和，含水量较高；乳剂型基质不阻止皮肤表面分泌物的分泌和水分蒸发，对皮肤的正常功能影响较小，药物的释放和透皮吸收亦相对较快。由于基质中水分的存在，使其增强了润滑性，较易于涂布。因此乳膏剂成为皮肤外用制剂中病人依从性较好的一种。

骆驼蓬是蒺藜科骆驼蓬( Peganum harmala L )的全草及种子，在我国主要分布于西北部新、蒙、陕、甘、宁等干旱地区，植物资源丰富。植物中种子所含生物碱的含量最高，主要为骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱。新疆医学院一附院烧伤整形科王根厚、冯德华于1982年至1996年14年间将骆驼蓬各种制剂用于临床，观察其对120例1%-50%Ⅱ°Ⅲ°烧伤创面愈合部位的不同时期止痒、抗炎作用，120例均获得显著疗效， 有效率100%。尤其是采用骆驼蓬提出物骆骆蓬碱精制剂霜后效果更佳，疗效优于皮炎平霜。陈蔚如等报道了骆驼蓬生物碱的抗炎、镇痛、止痒作用，骆驼蓬生物碱明显对抗右旋糖苷40在小鼠诱发的疹痒， 使痰痒发作次数、发作持续时间减少。并呈现出良好的剂量一效应关系。

发明内容

本发明的目的是提供一种骆驼蓬总碱软膏剂，它具有减少瘙痒症病人症状、易于涂布与使用、药物释放和透皮吸收较快的特点。本发明还公开了该骆驼蓬总碱软膏剂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述骆驼蓬总碱乳膏剂包括骆驼蓬总碱以及药理上可接受的乳膏基质，且骆驼蓬总碱中骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的含量在50～99％。

所述骆驼蓬总碱乳膏剂中骆驼蓬总碱的重量百分比为0.3～1.2%。

所述骆驼蓬总碱乳膏剂中骆驼蓬总碱的重量百分比为0.6%。

所述乳膏基质由占乳膏剂的重量比0～12％的单硬脂酸甘油酯、占乳膏剂的重量比0～10％的白凡士林、占乳膏剂的重量比0～16％液体石蜡、占乳膏剂的重量比0～3.8％的司盘-80、占乳膏剂的重量比0～4％的氮酮、占乳膏剂的重量比0～0.2％的尼泊金乙酯、占乳膏剂的重量比0～6％的甘油、占乳膏剂的重量比0～7.6％的吐温-80、占乳膏剂的重量比0～1.2％的十二烷基硫酸钠、占乳膏剂的重量比40～70％的蒸馏水组成。

所述乳膏基质由占乳膏剂的重量比9％的单硬脂酸甘油酯、占乳膏剂的重量比5％的白凡士林、占乳膏剂的重量比8％的液体石蜡、占乳膏剂的重量比1.9％的司盘-80、占乳膏剂的重量比2％的氮酮、占乳膏剂的重量比0.1％的尼泊金乙酯、占乳膏剂的重量比3％的甘油、占乳膏剂的重量比3.8％的吐温-80、占乳膏剂的重量比0.6％的十二烷基硫酸钠、占乳膏剂的重量比66.6％的蒸馏水组成。

前述骆驼蓬生物碱乳膏剂的方法，包括以下步骤：

A）按所需重量称取各组分；

B）制备骆驼蓬总碱：骆驼蓬种子粉碎加20～80%的乙醇2～8倍量回流提取1～10小时，滤过，60℃、0.08MPa减压浓缩、干燥，得干浸膏；干浸膏加0.1～3.0%的盐酸2～8倍量超声10min溶解或搅拌溶解，氨水调pH为8～11，放置24小时；滤过，60℃、0.08MPa减压浓缩并干燥，得骆驼蓬总碱粗粉；骆驼蓬总碱粗粉加80～95%的乙醇2～8倍量，调节pH为10～14，乙醇回流法提取10～60min，60℃、0.08MPa减压浓缩并干燥，得骆驼蓬总碱；

C）制备骆驼蓬总碱乳膏剂：将单硬脂酸甘油酯、凡士林、液体石蜡、司盘-80、氮酮、尼泊金乙酯混合后，水浴加热至79°C；另取吐温-80、十二烷基硫酸钠混合后加蒸馏水溶解，水浴加热至81°C，水浴10～60min；在500r/min搅拌状况下将水相缓缓加入油相，搅拌5min；再加入与甘油研和后的总碱，保持转速不变，继续搅拌5min，冷水冷却至室温，即得骆驼蓬总碱乳膏剂。

经实际验证，本发明和现有技术相比所具有的优点是：1、对银屑病动物模型与皮肤瘙痒模型有效，具有广泛的应用前景。2、具有良好的透皮吸收和皮内滞留特性，可以持续局部发挥作用。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明：

图1是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号的透皮吸收曲线图；

图2是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号对小鼠阴道细胞的有丝分裂影响的病理学检查（×400）-正常组，箭头指示基底层细胞；

图3是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号对小鼠阴道细胞的有丝分裂影响的病理学检查（×400）-模型组，箭头指示核分裂相细胞；

图4是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号对小鼠阴道细胞的有丝分裂影响的病理学检查（×400）-乳膏基质组，箭头指示核分裂相细胞；

图5是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号对小鼠阴道细胞的有丝分裂影响的病理学检查（×400）-牛皮癣软膏组，箭头指示基底层细胞；

图6是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号对小鼠阴道细胞的有丝分裂影响的病理学检查（×400）-骆驼蓬总碱乳膏组，箭头指示基底层细胞；

图7是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号不同试验药物组小鼠尾部颗粒层病理学检查（×400）-正常组，箭头指示颗粒层细胞；

图8是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号不同试验药物组小鼠尾部颗粒层病理学检查（×400）-乳膏基质组，箭头指示颗粒层细胞；

图9是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号不同试验药物组小鼠尾部颗粒层病理学检查（×400）-牛皮癣软膏组，箭头指示颗粒层细胞；

图10是本发明的骆驼蓬生物碱乳膏剂1号不同试验药物组小鼠尾部颗粒层病理学检查（×400）-骆驼蓬总碱乳膏组，箭头指示颗粒层细胞。

具体实施方式

实施例1

采取以下方法制备骆驼蓬总碱乳膏剂：

A、制备骆驼蓬总碱，包括以下步骤：

1）称取骆驼蓬种子粉碎，过20目筛备用。

2）称取粉末700克，加30%的乙醇4倍量回流提取7小时，滤过，在60℃、0.08MPa条件下减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加0.5%的盐酸4倍量超声10min溶解，氨水调pH为9，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇3倍量，调节pH为13.5，乙醇回流法提取15min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

B、制备软膏剂，包括以下步骤：

1）称取药物的原料。即，称取骆驼蓬总碱6g。

2）称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——19g

氮酮——20g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——38g

十二烷基硫酸钠——6g

蒸馏水——660g

取上述量单硬脂酸甘油酯、凡士林、液体石蜡、司盘-80、氮酮、尼泊金乙酯混合后，水浴加热至79°C；另取吐温-80、十二烷基硫酸钠混合后加蒸馏水溶解，水浴加热至81°C，水浴20min。在500r/min搅拌状况下将水相缓缓加入油相，搅拌5min；再加入与甘油研和后的总碱，保持转速不变，继续搅拌5min，冷水冷却至室温，即得骆驼蓬总碱乳膏剂1号1000g。

实施例2

与实施例1的区别在于：

步骤A中：

称取粉末732克，加40%的乙醇6倍量回流提取2小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加1.5%的盐酸6倍量超声15min溶解，氨水调pH为9.0，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇4倍量，调节pH为8.0，乙醇回流法提取30min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——11g

氮酮——20g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——22g

十二烷基硫酸钠——2g

蒸馏水——688g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂2号共1000g。

实施例3

与实施例1的区别在于：

步骤A中：

称取粉末732克，加50%的乙醇10倍量回流提取3小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加2.0%的盐酸8倍量超声30min溶解，氨水调pH为9.5，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇5倍量，调节pH为8.5，乙醇回流法提取35min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——12g

氮酮——20g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——24g

十二烷基硫酸钠——3g

蒸馏水——684g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂3号共1000g。

实施例4

与实施例1的区别在于：

步骤A中：

称取粉末732克，加60%的乙醇10倍量回流提取4小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加2.0%的盐酸10倍量超声25min溶解，氨水调pH为8.5，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇6倍量，调节pH为9，乙醇回流法提取40min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——15g

氮酮——15g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——26g

十二烷基硫酸钠——5g

蒸馏水——672g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂4号共1000g。

实施例5

与实施例1的区别在于：

步骤A中称取：

称取粉末732克，加70%的乙醇12倍量回流提取5小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加2.5%的盐酸12倍量超声30min溶解，氨水调pH为10.5，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇7倍量，调节pH为9.5，乙醇回流法提取75min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——16g

氮酮——12g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——28g

十二烷基硫酸钠——6g

蒸馏水——681g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂5号共1000g。

实施例6

与实施例1的区别在于：

步骤A中：

称取粉末732克，加80%的乙醇14倍量回流提取6小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加3.0%的盐酸10倍量超声35min溶解，氨水调pH为11，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇8倍量，调节pH为13.0，乙醇回流法提取90min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——17g

氮酮——10g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——30g

十二烷基硫酸钠——6g

蒸馏水——680g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂6号共1000g。

实施例7

与实施例1的区别在于：

步骤A中：

称取粉末732克，加90%的乙醇16倍量回流提取7小时，滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得干浸膏。干浸膏加3.5%的盐酸12倍量超声40min溶解，氨水调pH为11.5，放置24小时。滤过，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱粗粉。骆驼蓬总碱粗粉加95%的乙醇9倍量，调节pH为13.5，乙醇回流法提取105min，60℃(0.08MPa)减压浓缩、干燥，得骆驼蓬总碱。

步骤B中称取软膏剂的基质。即，称取：

单硬脂酸甘油酯——90g

白凡士林——50g

液体石蜡——80g

司盘-80——17g

氮酮——10g

尼泊金乙酯——1 g

甘油——30g

吐温-80——30g

十二烷基硫酸钠——6g

蒸馏水——680g

按实施例1乳膏剂制备方法制成骆驼蓬生物碱乳膏剂7号共1000g。

实施例8

使用方法：

本专利产品为乳膏剂，制成每支10g，成人一日两次，每次适量。

效果例1

骆驼蓬生物碱乳膏剂体外透皮吸收性能的考察

1.1空白校正值的测定

1.1.1接受液A₀的确定 以空白乳膏基质为样品，测得各时间点及24h后鼠皮内药物滞留量的A₀，结果见表1。

表 1 各时间点 A ₀ 值

1.1.2空白鼠皮A₀的确定 按“2.5.2.2”项下方法处理试验后鼠皮，测得鼠皮内的基质吸光度值为0.0627，作为鼠皮内药物滞留含量计算的A₀。

乳膏透皮试验结果

以普通乳膏为样品，测得各时间点的A，按公式（1）、（2）、（3）、（4）分别计算A_n、C_n、C_n′及Q_n；鼠皮内滞留药物量按公式（1）、（2）计算，重复3次，结果分别见表1，渗透动力学曲线见图1。

A_n=A －A₀ （1）

C_n= (A_n －0.024)/0.069 （2）

（3）

Q_n= C_n′×V₀ （4）

A：测量吸光度值；A₀：空白校正值；V：取样体积；V₀：接受室体积

表 2 普通乳膏透皮吸收试验结果（ n=3 ）

普通乳膏透皮吸收速率平均值为22.07µg/h，鼠皮内药物滞留量平均为227.5µg/g（n=3）。

效果例2

骆驼蓬生物碱乳膏剂对瘙痒动物模型的作用

1、氢骆驼蓬碱乳膏对磷酸组胺所致皮肤瘙痒的影响

1.1动物分组：

昆明种小鼠60只，体重20±2g，雌雄各半，分为6组，分别为模型对照组、阳性对照组(皮炎平软膏0.00375mg·g-1)、基质组(空白基质5mg·g-1)、低剂量乳膏组（0.018 mg·g^-1）、中剂量乳膏组（0.036mg·g^-1）、高剂量乳膏组（0.072mg·g^-1）。

1.2磷酸组胺所致皮肤瘙痒动物模型：

用细砂纸打磨小鼠右后足背部皮肤，以皮肤发红渗血而不出血为度，抽取0.02%的磷酸组胺0.1ml滴于打磨过的皮肤之上，立即观察记录15min内小鼠的瘙痒次数及持续时间。瘙痒指征为小鼠回头舔啃右后足背皮肤；瘙痒持续时间间隔3秒以上记为两次瘙痒，小于3秒记一次瘙痒。

1.3试验方法：

药物组、阳性对照组、基质组涂抹于小鼠右后足背部皮肤并轻柔片刻至吸收，30min后造模，观察记录15min内小鼠的瘙痒次数及持续时间。结果见表3。

表3骆驼蓬碱乳膏对磷酸组胺所致皮肤瘙痒的影响

注：与模型组比较，^＊ p＜0.05；^＊＊ p＜0.01。与对照组比较，^△ p＜0.05；^△△ p＜0.01

2、骆驼蓬碱乳膏对5-羟色胺所致皮肤瘙痒的影响

2.1动物分组：昆明种小鼠72只，分组方法同“1.1”

2.2羟色胺所致皮肤瘙痒动物模型:

吸取0.5mg/ml的5-羟色胺0.05ml注射于小鼠右后足垫内，立即观察记录1h内小鼠的瘙痒次数及持续时间，瘙痒指征为小鼠回头舔啃右后足背皮肤；瘙痒持续时间间隔3秒以上记为两次瘙痒，小于3秒记为一次瘙痒。

2.3试验方法：

药物组、阳性对照组、基质组涂抹于小鼠右后足背部皮肤并轻柔片刻至吸收，30min后造模，观察记录1h内小鼠的瘙痒次数及持续时间。结果见表4。

表4 骆驼蓬碱乳膏对5-羟色胺所致皮肤瘙痒的影响

注：与模型组比较，^＊ p＜0.05；^＊＊ p＜0.01。与对照组比较，^△ p＜0.05；^△△ p＜0.01

效果例3

骆驼蓬生物碱乳膏剂抗银屑病药效学

1、对小鼠增生上皮细胞有丝核分裂的影响

将50只昆明种雌性小鼠随机分为5组，分别为正常组、模型组、乳膏基质组（阴性对照）、牛皮癣软膏组（阳性对照）、骆驼蓬总碱乳膏组。除正常组腹腔注射0.01mL•g^-1•d^-1生理盐水外，其余各组均给予苯甲酸雌二醇0.01mg•g^-1 •d^-1，连续3 d（3d后隔天注射1次，至实验结束）使小鼠阴道上皮处于增生状态。除正常组和模型组灌注生理盐水外，其余各组于第4天按乳膏3.25mg•g^-1•d^-1剂量分别灌注空白乳膏基质、牛皮癣软膏、骆驼蓬总碱乳膏和HM·HCl乳膏于小鼠阴道内，连续10d。第14天末次给药1h后给各组小鼠腹腔注射秋水仙碱2mg•kg^-1，使其细胞处于有丝分裂中期以便计数。5h后处死小鼠，切取阴道组织以10%甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色。在光镜下计数300个基底细胞的有丝分裂数，换算成100个基底细胞的有丝分裂数（有丝分裂指数），并对各组数据进行统计学处理。结果见表5和图2。

表 5 不同药物组对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响

与正常组相比，**P <0.01；与模型组相比，^ΔΔ P <0.01；与牛皮癣软膏组相比，^▲▲ P <0.01。

病理学检查可见：正常组小鼠阴道组织被覆分化良好的鳞状上皮，基底层偶见处于核分裂相的细胞；模型组小鼠阴道上皮细胞呈多层，基底层细胞增生活跃，有较多细胞核浓缩深染，呈不规则的分裂或多核状态，体积增大；阳性组、骆驼蓬总碱乳膏组的基底层处于核分裂相的细胞较模型组减少。与正常组比较，模型组、乳膏基质组、骆驼蓬总碱组小鼠阴道上皮细胞基底层细胞增生活跃（P <0.01）；与模型组比较，牛皮癣软膏组、骆驼蓬总碱乳膏组均可显著抑制阴道上皮基底细胞的有丝分裂（P <0.01）。

2、对表皮分化（颗粒层生成）的影响

取50只昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为5组，分别为正常组、乳膏基质组（阴性对照）、牛皮癣软膏组（阳性对照）、骆驼蓬总碱乳膏组和HM·HCl乳膏组。除正常组外，其余各组均按乳膏0.2mg•g^-1•d^-1涂抹小鼠尾部，连续14d。末次给药结束后4h处死小鼠，取距鼠尾根1～2cm处大小约1.5cm×0.2cm的皮肤，10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色，在光镜下进行观察。凡是两个相邻的毛囊间表皮（即鳞片表皮）具有连续的颗粒层细胞者称为有颗粒层的鳞片，计数每100个鳞片中有颗粒层的鳞片数，并对各组数据进行统计学处理。结果见表6和图3。

表 6 不同药物组对鼠尾颗粒层细胞形成的影响

与正常组相比，**P <0.01；与阳性对照组相比，^▲▲ P <0.01。

病理学检查可见：正常组缺乏或仅有少量的颗粒层，牛皮癣软膏组、骆驼蓬总碱乳膏组颗粒层细胞均有不同程度的增加。与正常组相比，牛皮癣软膏组和骆驼蓬总碱乳膏组均可显著促进小鼠尾部表皮分化（P<0.01）。骆驼蓬总碱乳膏组对表皮分化的影响与牛皮癣软膏组相比无统计学差异（P>0.05）。

以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (6)

1.骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述骆驼蓬总碱乳膏剂包括骆驼蓬总碱以及药理上可接受的乳膏基质，且骆驼蓬总碱中骆驼蓬碱与去氢骆驼蓬碱的含量在50～99％。

2.根据权利要求1所述的骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述骆驼蓬总碱乳膏剂中骆驼蓬总碱的重量百分比为0.3～1.2%。

3.根据权利要求2所述的骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述骆驼蓬总碱乳膏剂中骆驼蓬总碱的重量百分比为0.6%。

4.根据权利要求1所述的骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述乳膏基质由占乳膏剂的重量比0～12％的单硬脂酸甘油酯、占乳膏剂的重量比0～10％的白凡士林、占乳膏剂的重量比0～16％液体石蜡、占乳膏剂的重量比0～3.8％的司盘-80、占乳膏剂的重量比0～4％的氮酮、占乳膏剂的重量比0～0.2％的尼泊金乙酯、占乳膏剂的重量比0～6％的甘油、占乳膏剂的重量比0～7.6％的吐温-80、占乳膏剂的重量比0～1.2％的十二烷基硫酸钠、占乳膏剂的重量比40～70％的蒸馏水组成。

5.根据权利要求4所述的骆驼蓬总碱乳膏剂，其特征在于：所述乳膏基质由占乳膏剂的重量比9％的单硬脂酸甘油酯、占乳膏剂的重量比5％的白凡士林、占乳膏剂的重量比8％的液体石蜡、占乳膏剂的重量比1.9％的司盘-80、占乳膏剂的重量比2％的氮酮、占乳膏剂的重量比0.1％的尼泊金乙酯、占乳膏剂的重量比3％的甘油、占乳膏剂的重量比3.8％的吐温-80、占乳膏剂的重量比0.6％的十二烷基硫酸钠、占乳膏剂的重量比66.6％的蒸馏水组成。

6.制备权利要求1至5任一项所述的骆驼蓬生物碱乳膏剂的方法，包括以下步骤：

A）按所需重量称取各组分；

B）制备骆驼蓬总碱：骆驼蓬种子粉碎加20～80%的乙醇2～8倍量回流提取1～10小时，滤过，60℃、0.08MPa减压浓缩、干燥，得干浸膏；干浸膏加0.1～3.0%的盐酸2～8倍量超声10min溶解或搅拌溶解，氨水调pH为8～11，放置24小时；滤过，60℃、0.08MPa减压浓缩并干燥，得骆驼蓬总碱粗粉；骆驼蓬总碱粗粉加80～95%的乙醇2～8倍量，调节pH为10～14，乙醇回流法提取10～60min，60℃、0.08MPa减压浓缩并干燥，得骆驼蓬总碱；

C）制备骆驼蓬总碱乳膏剂：将单硬脂酸甘油酯、凡士林、液体石蜡、司盘-80、氮酮、尼泊金乙酯混合后，水浴加热至79℃；另取吐温-80、十二烷基硫酸钠混合后加蒸馏水溶解，水浴加热至81℃，水浴10～60min；在500r/min搅拌状况下将水相缓缓加入油相，搅拌5min；再加入与甘油研和后的总碱，保持转速不变，继续搅拌5min，冷水冷却至室温，即得骆驼蓬总碱乳膏剂。