CN106220614B - 吡啶酮/吡嗪酮、其制备方法及使用方法 - Google Patents

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Abstract

Description

吡啶酮/吡嗪酮、其制备方法及使用方法
本申请是2011年8月31日提交的发明名称为“吡啶酮/吡嗪酮、其制备方法及使用方法”的中国专利申请201180052506.1的分案申请。
相关申请的交叉引用
根据37CFR§1.53(b)提交的该非临时申请，根据35USC§119(e)要求于2010年9月1日提交的美国临时申请61/379,044的利益，所述美国临时申请通过援引整体加入本文。
技术领域
本发明概括地涉及用于治疗包括炎症、免疫性病症和癌症在内的由Bruton酪氨酸激酶(Btk)介导的病症的化合物，更具体地涉及抑制Btk活性的化合物。本发明还涉及利用所述化合物在体外、原位及体内诊断或治疗哺乳动物细胞或相关病理状态的方法。
背景技术
蛋白激酶是最大的人类酶家族，包括超过500种蛋白质。Bruton酪氨酸激酶(Btk)是酪氨酸激酶中的Tec家族的成员，并且是早期B细胞发育及成熟B细胞活化、信号转导和存活的调节剂。
经B细胞受体(BCR)的B细胞信号转导能产生广泛的生物学输出信号(biologicaloutput)，而所述信号转而取决于B细胞的发育阶段。BCR信号的强度和持续时间必须被精确地调节。异常的BCR介导的信号转导能造成失调的B细胞活化和/或形成导致多种自身免疫疾病和/或炎性疾病的致病性自身抗体。人体内Btk的突变导致X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)。这种疾病与B细胞成熟受损、免疫球蛋白产生减少、不依赖T细胞的免疫应答受损以及在BCR刺激时持续的钙信号的显著减弱有关。
Btk在变态反应性疾病和/或自身免疫疾病和/或炎性疾病中起作用的证据已经在Btk-缺陷小鼠模型中得到确定。例如，在系统性红斑狼疮(SLE)的标准鼠类临床前模型中，已经表明Btk缺陷引起疾病进展的明显改善。而且，Btk缺陷小鼠还能抵抗形成胶原诱发性关节炎并能对葡萄球菌诱发性关节炎更不易感。
大量的证据支持B细胞和体液免疫系统在自身免疫疾病和/或炎性疾病的发病机制中的作用。已开发的为了耗竭B细胞的蛋白质系治疗剂(诸如Rituxan)代表治疗许多自身免疫疾病和/或炎性疾病的方法。由于Btk在B细胞活化中的作用，Btk抑制剂可以被用作B细胞介导的致病性活动(例如产生自身抗体)的抑制剂。
Btk也在破骨细胞、肥大细胞和单核细胞中表达，并且显示其对于这些细胞的功能很重要。例如，小鼠Btk缺陷与IgE介导的肥大细胞活化受损(显著减少TNF-α及其它炎性细胞因子的释放)有关，并且人Btk缺陷与激活的单核细胞产生TNF-α大大减少有关。
因此，抑制Btk活性可以用于治疗变态反应性病症和/或自身免疫疾病和/或炎性疾病，例如：SLE、类风湿性关节炎、多血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、变应性鼻炎和哮喘。此外，据报道，Btk在凋亡中起作用；因此，抑制Btk活性可用于癌症以及治疗B细胞淋巴瘤和白血病。而且，考虑到Btk在破骨细胞功能方面的作用，抑制Btk活性可用于治疗骨病例如骨质疏松。
发明内容
本发明概括地涉及具有Bruton酪氨酸激酶(Btk)调节活性的式I的化合物。
式I的化合物具有以下结构：
包括其立体异构体、互变异构体或药学可接受的盐。各种取代基的定义如下。
本发明的一方面是药物组合物，其包含式I化合物以及药学可接受的载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。所述药物组合物还可包含另一治疗剂。
本发明的另一方面是制备药物组合物的方法，其包括将式I化合物与药学可接受的载体混合。
本发明包括治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向患有疾病或病症的患者给药治疗有效量的式I化合物，所述疾病或病症选自免疫性病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经病，并由Bruton酪氨酸激酶介导。
本发明包括用于治疗由Bruton酪氨酸激酶介导的病症的药盒，其包含：a)包含式I化合物的第一药物组合物；和b)使用说明书。
本发明包括式I化合物，其用作药物并且用于治疗疾病或病症，所述疾病或病症选自免疫性病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经病，并由Bruton酪氨酸激酶介导。
本发明包括式I化合物在制备用于治疗免疫性病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、炎症、代谢/内分泌功能障碍和神经病的药物中的用途，并且其中所述药物调节Bruton酪氨酸激酶。
本发明包括制备式I化合物的方法。
附图简要说明
图1显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将双环pyrolone 4与甲基苯或羟甲基苯5偶联以得到中间体6的Buchwald偶联反应，随后进行连续的Suzuki反应以制备硼酸酯(boronate)7并将其与溴吡啶酮或溴吡嗪酮2偶联，或者进行单次Suzuki反应以将6与吡啶酮硼酸酯或吡嗪酮硼酸酯3偶联。溴吡啶酮或溴吡嗪酮2可通过二溴吡啶酮或二溴吡嗪酮与杂环胺或苯胺的Buchwald反应制备。吡啶酮硼酸酯或吡嗪酮硼酸酯3可以通过2与二硼酸酯的Suzuki反应制备。
图2显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将所述双环pyrolone结合在溴苯胺衍生物上，以得到溴化物，所述溴化物可用于图1所描绘的作用中。
图3显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将所述双环pyrolone结合在分子12的剩余部分的氨基衍生物上。
具体实施方式
现详细描述本发明的某些实施方案，其实例在随附结构和分子式中说明。虽然结合列举的实施方案来描述本发明，但是应理解本发明并不限于那些实施方案。相反，本发明意在涵盖可包括在本发明的由权利要求书限定的范围内的所有替代方案、修改和等效。本领域技术人员会认识到，与本文中所述的那些相似或等同的许多方法和材料可用于实施本发明。本发明绝不限于所述的方法和材料。在所引的文献、专利及相似的材料中的一者或多者与本申请(包括但不限于定义的术语、术语用法、所述的技术等)不同或矛盾的情况下，以本申请为准。
定义
术语“烷基”用于本文中是指具有1-12个碳原子(C1-C12)的饱和的直链或支链一价烃基，其中所述烷基可任选地独立地被下述一种或多种取代基取代。在另一个实施方案中，烷基具有1-8个碳原子(C1-C8)，或者1-6个碳原子(C1-C6)。烷基的实例包括但不限于：甲基(Me,-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。
术语“亚烷基”用于本文中是指具有1-12个碳原子(C1-C12)的饱和直链或支链二价烃基，其中所述亚烷基可任选地独立地被下述一种或多种取代基取代。在另一个实施方案中，亚烷基具有1-8个碳原子(C1-C8)，或者1-6个碳原子(C1-C6)。亚烷基的实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。
术语“碳环(carbocycle)”、“碳环基”、“碳环(carbocyclic ring)”和“环烷基”是指具有3-12个碳原子(C3-C12)的单环形式的、或具有7-12个碳原子的双环形式的一价非芳香性饱和或部分不饱和的环。具有7–12个原子的双环碳环可排列成例如双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统，具有9或10个环原子的双环碳环可排列成双环[5,6]或[6,6]系统或者可排列成桥环系统，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷。单环碳环的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基等。
“芳基”是指通过从母体芳香性环系统的单个碳原子除去一个氢原子而得的具有6-20个碳原子(C6-C20)的一价芳香性烃基。一些芳基在示例结构中表示为“Ar”。芳基包括包含与饱和的、部分不饱和的环或芳香性碳环稠合的芳香环的双环基团。典型的芳基包括但不限于由苯(苯基)、取代苯、萘、蒽、联苯基、茚基、茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等得到的基团。芳基任选地独立地被本文所述的一种或多种取代基取代。
“亚芳基”是指通过从母体芳香性环系统的两个碳原子除去两个氢原子而得的具有6-20个碳原子(C6-C20)的二价芳香性烃基。一些亚芳基在示例结构中表示为“Ar”。亚芳基包括包含与饱和的、部分不饱和的环或芳香性碳环稠合的芳香环的双环基团。典型的亚芳基包括但不限于由苯(亚苯基)、取代苯、萘、蒽、亚联苯基、亚茚基、亚茚满基、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘基等得到的基团。亚芳基任选地被取代。
术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基”和“杂环(heterocyclic ring)”在本文中可互换使用，并且是指具有3–约20个环原子、其中至少一个环原子是选自氮、氧、磷、硫和硅的杂原子且其余环原子是C的饱和或部分不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)碳环基团，其中一个或多个环原子任选地独立地被下述一个或多个取代基取代。杂环可以是具有3–7个环成员(2-6个碳原子和1–4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环，或者具有7–10个环成员(4-9个碳原子和1–6个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环在Paquette,Leo A.；“Principles of Modern HeterocyclicChemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968),特别是第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistryof HeterocyclicCompounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950发行)，特别是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中有述。“杂环基”还包括其中杂环基与饱和的、部分不饱和的环或者芳香性碳环或杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于：吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌啶酮基、氧代哌嗪基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代吗啉-4-基、S-二氧代硫代吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫代吗啉代、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂基、二氮杂基、硫氮杂基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基和N-吡啶基脲。螺环基团也包括在此定义的范围内。其中2个环原子被氧代(＝O)基团替代的杂环基的实例是嘧啶酮基和1,1-二氧代硫代吗啉基。本文中的杂环基团任选地独立地被本文所述的一个或多个取代基取代。
术语“杂芳基”是指5元、6元或7元环的一价芳香性基团，还包括具有5-20个原子的稠合环系统(至少其一是芳香性的)，所述5元、6元或7元环的一价芳香性基团和所述稠合环系统含有一个或多个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的实例是：吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、中氮茚基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。杂芳基任选地独立地被本文所述的一种或多种取代基取代。
在可能的情况下，所述杂环或杂芳基可以是碳键合的(碳连接的)或氮键合的(氮连接)。作为示例而非限制，碳键合的杂环或杂芳基是在以下位置成键：吡啶的2、3、4、5或6位，哒嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氢呋喃、噻吩(thiofuran)、噻吩(thiophene)、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2或3位，氮杂环丁烷的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位，或者异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
作为示例而非限制，氮键合的杂环或杂芳基是在以下位置成键：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位，异吲哚或异吲哚啉的2位，吗啉的4位，以及咔唑或β-咔啉的9位。
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性的处置，其目的是减缓(减轻)不期望的生理学变化或病症，例如关节炎或癌症的形成或扩散。出于本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于，缓解症状、缩小疾病的范围、稳定疾病状态(即不恶化)、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态，以及缓解(无论部分或完全地缓解)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以指与若不接受治疗时的预期存活时间相比延长存活时间。需要治疗的那些包括具有病患或病症的那些。
短语“治疗有效量的”是指(i)治疗本文所述的特定的疾病、病况或病症，(ii)减轻、改善或消除所述特定的疾病、病况或病症的一种或多种症状，或者(iii)预防或延迟所述特定的疾病、病况或病症的一种或多种症状的发作的本发明的化合物的量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可以减少癌细胞数量；缩小肿瘤尺寸；抑制(即，在一定程度上减缓而且优选终止)癌细胞侵润进入周围器官中；抑制(即，在一定程度上减缓而且优选终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。只要药物可防止现存的癌细胞生长和/或杀死现存的癌细胞，它就可以是抑制细胞生长的和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，可通过例如评估疾病进展的时间(TTP)和/或测定应答率(RR)来量度效力。
“炎性病症”用于本文中可以是指其中过度或失调的炎性反应造成过度的炎性症状、宿主组织损伤或者组织功能丧失的任何疾病、病症或综合征。“炎性病症”也指由白细胞流入和/或中性白细胞趋化介导的病理学状态。
“炎症”用于本文中是指由组织的损伤或破坏引发的局部保护性反应，其起到破坏、稀释或屏蔽(隔离)有害物质和受伤组织的作用。炎症明显与白细胞流入和/或中性白细胞趋化相关。炎症可起因于致病生物体和病毒导致的感染，以及诸如外伤或者在心肌梗塞或中风之后再灌注、对外来抗原的免疫反应和自身免疫性反应之类的非感染性途径。因此，顺应式I化合物治疗的炎性病症包括与特异性防御系统的反应以及非特异性防御系统的反应相关的病症。
“特异性防御系统”是指对特异性抗原的存在做出反应的免疫系统的组成部分。由特异性防御系统的应答所致的炎症的实例包括对外来抗原的常规应答、自身免疫疾病和由T细胞介导的迟发型超敏反应。特异性防御系统的炎性反应的其它实例还有慢性炎性疾病、对实体移植的组织和器官例如肾移植和骨髓移植的排斥，以及移植物抗宿主疾病(GVHD)。
术语“非特异性防御系统”用于本文中是指由不能够免疫记忆的白细胞(例如粒细胞和巨噬细胞)介导的炎性病症。至少部分起因于非特异性防御系统的反应的炎症的实例包括与诸如以下的病症相关的炎症：成人(急性)呼吸窘迫综合征(ARDS)或者多器官损伤综合征；再灌注损伤；急性肾小球肾炎；反应性关节炎；伴有急性炎性部分的皮肤病；急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性病症例如中风；热损伤；炎性肠疾病；粒细胞输血相关综合征；和细胞因子引发的中毒。
“自身免疫疾病”用于本文中是指其中组织损伤与由体液或细胞介导的对身体自身组成部分的反应相关的任一类病症。
“变态反应性疾病”用于本文中是指由变态反应产生的任何症状、组织损伤或组织功能丧失。“关节炎性疾病”用于本文中是指以可归因于各种病因学的关节炎性损伤为特征的任何疾病。“皮炎”用于本文中是指以可归因于各种病因学的皮肤炎症为特征的一大类疾病中的任一种。“移植排斥”用于本文中是指以移植的组织和周围组织功能丧失、疼痛、肿胀、白细胞增多和血小板减少为特征的针对移植的组织例如器官或细胞(例如骨髓)的任何免疫反应。本发明的治疗方法包括用于治疗与炎性细胞激活相关的病症的方法。
“炎性细胞激活”是指通过增生性细胞反应的刺激物(包括但不限于细胞因子、抗原或自身抗体)、可溶性介质(包括但不限于细胞因子、氧自由基、酶、前列腺素或血管活性胺)的产生、或者在炎性细胞(包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、粒细胞(即多形核白细胞例如中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、肥大细胞、树突细胞、Langerhans细胞和内皮细胞)中新的或增量的介质(包括但不限于主要的组织相容性抗原或细胞粘附分子)的细胞表面表达来诱导。本领域技术人员可理解，在这些细胞中的这些表型中的一种或组合的激活可促进炎性病症的引发、永久化或恶化。
术语“NSAID”是“"非甾体抗炎药”的首字母缩略词，是具有止痛、退烧(降低身体的高温并且缓解疼痛而不损及知觉)并且在较高剂量下具有抗炎效力(减轻炎症)的治疗剂。术语“非甾体”用来将这些药物与具有相似的降低类二十烷酸、抗炎作用的甾类相区分。作为镇痛药，NSAID的不寻常之处在于它们是非麻醉性的。NSAID包括阿司匹林、布洛芬和萘普生。NSAID通常指定用于治疗其中伴有疼痛和炎症的急性或慢性病症。NSAID一般指定用于在症状上缓解以下病症：类风湿性关节炎、骨性关节炎、炎性关节病(例如强直性脊柱炎、银屑病关节炎、莱特尔综合征、急性痛风、痛经、转移性骨痛、头痛和偏头痛、术后疼痛、因炎症和组织损伤所致的轻度至中度疼痛、发热、肠梗阻和肾绞痛。大多数NSAID用作环氧合酶的非选择性抑制剂，抑制环氧合酶-1(COX-1)和环氧合酶-2(COX-2)同功酶。环氧合酶催化由花生四烯酸(其本身通过磷脂酶A2由细胞磷脂双层而得)形成前列腺素和血栓素。前列腺素尤其在炎症过程中用作信使分子。COX-2抑制剂包括塞来考昔、依托考昔、芦米考昔、帕瑞考昔、罗非考昔、罗非考昔和伐地考昔。
术语“癌症”是指或描述哺乳动物中以细胞生长失调为典型特征的生理状况。“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于：癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺瘤和肺鳞癌在内的肺癌、腹膜癌、肝细胞癌、包括胃肠癌在内的胃癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌，以及头颈癌。
“化疗剂”是用于治疗癌症的化合物，无论作用机制如何。化疗剂的类别包括但不限于：烷化剂、抗代谢物、纺锤体毒素植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗体、光敏剂和激酶抑制剂。化疗剂包括用于“靶向治疗”和常规化疗中的化合物。化疗剂的实例包括：厄洛替尼(Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶,5-氟尿嘧啶,CAS号51-21-8)、吉西他滨(Lilly)、PD-0325901(CAS号391210-10-9,Pfizer)、顺铂(顺-二胺,二氯化铂(II),CAS号15663-27-1)、卡铂(CAS号41575-94-4)、紫杉醇(Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲司珠单抗(Genentech)、替莫唑胺(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮杂双环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,CAS号85622-93-1, Schering Plough)、他莫昔芬((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺,)和多柔比星Akti-1/2、HPPD和雷帕霉素。
化疗剂的更多实例包括：奥沙利铂(Sanofi)、硼替佐米(Millennium Pharm.)、sutent(SU11248,Pfizer)、来曲唑(Novartis)、伊马替尼甲磺酸盐(Novartis)、XL-518(Mek抑制剂,Exelixis,WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制剂,AZD6244,Array BioPharma,AstraZeneca)、SF-1126(PI3K抑制剂,Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147(PI3K抑制剂,Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(AstraZeneca)、亚叶酸钙(亚叶酸)、雷帕霉素(西罗莫司,Wyeth)、拉帕替尼(GSK572016,Glaxo Smith Kline)、氯那法尼(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼(BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(AstraZeneca)、伊立替康(CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(Tipifarnib)(ZARNESTRATM,Johnson&Johnson)、ABRAXANETM(Cremophor-free)、紫杉醇的白蛋白工程化纳米颗粒制剂(American PharmaceuticalPartners,Schaumberg,Il)、凡德他尼(rINN,ZD6474,AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、坦罗莫司(Wyeth)、帕唑帕尼(GlaxoSmithKline)、坎磷酰胺(Telik)、塞替派和环磷酰胺烷基磺酸酯例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶例如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺类(methylamelamine)包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；己酸配质(acetogenin)(特别是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑素；海绵多烯酮类；CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀；duocarmycin(包括合成类似物,KW-2189和CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵素；氮芥例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类例如烯二炔抗生素类(例如刺孢霉素、刺孢霉素γ1I、刺孢霉素ωI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；dynemicin、dynemicin A；二膦酸盐类例如氯膦酸盐；埃斯波霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、authramycin、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素c、carabicin、去甲柔红霉素、嗜癌霉素、色霉素(chromomycinis)、放线菌素d、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、奈柔比星、马塞罗霉素、丝裂霉素类例如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物例如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物例如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤、硫代鸟嘌呤；嘧啶类似物例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄性激素例如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂例如frolinic acid；醋葡醛内酯；丙醛氧基磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明(lonidainine)；美坦生类例如美坦生和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶(nitraerine)；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；利索新；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(特别是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物例如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨诺安托；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨蝶呤；卡培他滨(Roche)；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维生素A例如视黄酸；以及上述任一种的药学可接受的盐、酸和衍生物。
“化疗剂”的定义还包括：(i)用来调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬柠檬酸盐)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮和(枸橼酸托瑞米芬)；(ii)抑制调节肾上腺中的雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、(醋酸甲地孕酮)、(依西美坦；Pfizer)、福美坦、法罗唑、(伏罗唑)、(来曲唑；Novartis)和(阿那罗唑；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素类，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂，例如MEK抑制剂(WO 2007/044515)；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制与异常的细胞增殖相关的信号转导途径中的基因例如PKC-α、Raf和H-Ras的表达那些，例如奥利美生(GentaInc.)；(vii)核酶，例如VEGF表达抑制剂(例如)和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，例如基因治疗疫苗，例如和rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂，例如rmRH；(ix)抗血管生成剂，例如贝伐珠单抗(Genentech)；以及上述任一种的药学可接受的盐、酸和衍生物。
“化疗剂”的定义还包括治疗性抗体，例如阿仑珠单抗(Campath)、贝伐珠单抗(Genentech)；西妥昔单抗(Imclone)；帕木单抗(Amgen)、利妥昔单抗(Genentech/Biogen Idec)、培妥珠单抗(OMNITARGTM,2C4,Genentech)、曲司珠单抗(Genentech)、托西莫单抗(Bexxar,Corixia)，以及抗体药物缀合物，吉妥珠单抗奥加米星(Wyeth)。
与本发明的Btk抑制剂联用的、作为化疗剂的具有治疗效力的人源化单克隆抗体包括：阿仑珠单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、atlizumab、巴匹珠单抗、贝伐珠单抗、比伐珠单抗美登素(bivatuzumab mertansine)、美坎珠单抗美登素(cantuzumab mertansine)、西利珠单抗、培舍珠单抗、cidfusituzumab、cidtuzumab、达克珠单抗、依库珠单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、泛维珠单抗、芳妥珠单抗、吉妥珠单抗奥加米星、伊珠单抗奥佐米星、伊匹木单抗、拉贝珠单抗、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊珠单抗、莫维珠单抗、motovizumab、那他珠单抗、尼妥珠单抗、nolovizumab、numavizumab、奥瑞珠单抗、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、pecfusituzumab、pectuzumab、培妥珠单抗、培克珠单抗、ralivizumab、雷珠单抗、瑞利珠单抗(reslivizumab)、瑞利珠单抗、resyvizumab、罗维珠单抗、卢利珠单抗、西罗珠单抗、西利珠单抗、松妥珠单抗、他珠单抗替塞坦、他度珠单抗、他利珠单抗、替非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、曲司珠单抗、西莫白介素单抗、tucusituzumab、umavizumab、乌珠单抗，以及维西珠单抗。
“代谢物”是特定的化合物或其盐通过体内代谢产生的产物。化合物的代谢物可利用本领域已知的常规技术进行鉴定并且可利用诸如本文中所述的那些试验测定它们的活性。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱脂化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过包括使本发明的式I化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间段的方法产生的化合物。
术语“包装说明书”用来指治疗性产品的商业包装中通常包含的说明书，其包含关于适应症、用途、剂量、给药、与此类治疗性产品的使用相关的禁忌症和/或警告的信息。
术语“手性”是指具有镜像对的不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可在它们的镜像对上重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有相同的化学组成但原子或基团的空间排列不同的化合物。
“非对映异构体”是指具有两个或多个手性中心并且其分子彼此不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨率的分析方法例如电泳法和色谱法进行分离。
“对映异构体”是指化合物的彼此呈不可重叠的镜像的两种立体异构体。
本文中所用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.和Wilen,S.,“Stereochemistry of Organic Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,NewYork,1994。本发明的化合物可包含非对称的或手性的中心，因此以不同的立体异构体形式存在。本发明的化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于其非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物，意在构成本发明的一部分。许多有机化合物以旋光形式存在，即，它们具有使平面偏振光的平面旋转的能力。在表述旋光化合物时，前缀D和L，或者R和S，用来表示分子的手性中心的绝对构型。前缀d和l或者(+)和(-)用来指示化合物使平面偏振光旋转的符号，其中(-)或1是指化合物是左旋的。具有前缀(+)或d的化合物是右旋的。对于特定的化学结构，这些立体异构体是相同的，只是它们彼此互为镜像。特定的立体异构体还可称为对映异构体，并且这样的异构体的混合物常称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋物，其可在化学反应或过程没有立体选择性或立体专一性的情况下出现。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种对映异构体的等摩尔混合物，不具有旋光性。在一方面，本发明的立体异构体可以占主导的形式存在，例如，大于50％ee(对映体过量)，大于80％ee，大于90％ee，大于95％ee，或者大于99％ee。
术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可通过低能垒互相转化的能量不同的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移互相转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组互相转化。
术语“非对映异构体”是指不是对映异构体的立体异构分子。非对映异构体包括具有相同的分子式但几何结构不同的顺-反异构体和构象异构体。
术语“药学可接受的盐”用于本文中是指本发明的化合物的药学可接受的有机或无机盐。示例性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖质酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1’-亚甲基-双(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药学可接受的盐可包括诸如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它反荷离子的另一种分子的包合。所述反荷离子可以是使母体化合物上的电荷稳定的任何有机或无机离子。此外，药学可接受的盐在其结构中可具有多于一个带电荷的原子。多个带电荷的原子为药学可接受的盐的部分的情况可具有多个反荷离子。因此，药学可接受的盐可具有一个或多个带电荷的原子和/或一个或多个反荷离子。
若本发明的化合物是碱，期望的药学可接受的盐可通过本领域中可利用的任何适合的方法制备，例如，用无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等或者用有机酸例如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷基酸例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸例如柠檬酸或酒石酸、氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸、芳香酸例如苯甲酸或肉桂酸、磺酸例如对甲基苯磺酸或乙磺酸等处理游离的碱。
若本发明的化合物是酸，期望的药学可接受的盐可通过任何适合的方法制备，例如，用无机碱或有机碱例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离的酸。适合的盐的示例性实例包括但不限于，得自氨基酸例如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环胺例如哌啶、吗啉和哌嗪的有机盐，以及得自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。
术语“药学可接受的”是指物质或组合物必须与构成制剂的其它组分和/或用其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容。
“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物的缔合或络合。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
术语“本发明的化合物”包括式I的化合物及其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物和药学可接受的盐及前药。
本文中所示的任何分子式或结构，包括式I化合物在内，还意在表示这些化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物，及其混合物。
本文中所示的任何式或结构，包括式I化合物在内，还意在表示所述化合物的未标记形式和同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有本文给出的分子式所示的结构，除了一个或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子替代。本发明的化合物中可包含的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如，但不限于2H(氘,D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。各种同位素标记的本发明的化合物，例如，其中包含诸如3H、13C和14C的放射性同位素的那些。这样的同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或显像技术，例如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射断层摄影术(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或者用于患者的放射性治疗。本发明的氘标记的或取代的治疗性化合物可具有改进的有关分布、代谢和排泄(ADME)的DMPK(药物代谢和药物动力学)性质。用较重的同位素例如氘取代可能由于较大的代谢稳定性而提供某些治疗优点，例如，体内半衰期增长，或者剂量要求减小。18F标记的化合物可用于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记的化合物及其前药一般可通过实施路线或实施例中公开的方法和下述制备方法，以易得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂进行制备。此外，用较重的同位素特别是氘(即2H或D)取代可由于较大的代谢稳定性而提供某些治疗优点，例如，体内半衰期增长或者剂量要求减小或者治疗指数改进。应理解，在此情况中氘被视为式(I)的化合物中的取代基。可通过同位素富集系数定义这样的较重的同位素特别是氘的浓度。在本发明的化合物中，未明确指明为特定同位素的任何原子意在表示该原子的任何稳定的同位素。除非另外说明，当明确以“H”或“氢”标明某位置时，应理解为该位置具有其天然丰度同位素组成的氢。因此，在本发明的化合物中，明确标明氘(D)的任何原子意在表示氘。
吡啶酮和吡嗪酮化合物
本发明提供包括式Ia-bf在内的式I的吡啶酮和吡嗪酮化合物及其药物制剂，其可用于治疗由Btk激酶调节的疾病、病患和/或病症。
式I化合物具有以下结构：
及其立体异构体、互变异构体或药学可接受的盐，其中：
R1选自：
其中波浪线指示连接点；
R4选自OH、CN、NRbRc、哌啶基、任选地被C1-C6烷基或C1-C4卤代烷基取代的C3-C6环烷基以及任选地被OH或OC1-C4烷基取代的C1-C6烷基；
R2是H、CH3或CF3；
环B选自苯基、具有至少一个氮环原子的5-6元杂芳基和具有至少一个氮环原子的8-11元杂环基；
R3独立地选自H、-Ra、-ORb、-SRb、-NRbRc、卤素、氰基、硝基、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-CO2Rb、-CONRbRc、-NRcCORb、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRbRc和-NRcSO2Ra；或者两个相邻的R3基团任选地一起形成具有0-2个选自O、S或N的杂原子的5-6元环，其中所述5-6元环与环B稠合；
Ra是C1-C6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中Ra的每个成员任选地被1-3个R11基团取代；
Rb是H、C1-C6烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中Rb的除H以外的每个成员任选地被1-3个R11基团取代；
Rc是H、或任选地被1或3个R11基团取代的C1-C4烷基；或者，Rb和Rc与它们所连接的氮形成任选地取代的杂环烷基；
R11各自独立地选自C1-C4烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基-、杂芳基-C1-C4烷基-、环烷基-C1-C4烷基-、杂环烷基-C1-C4烷基-、C1-C4卤代烷基-、-OC1-C4烷基、-O-杂环烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4卤代烷基)；
R5是H或F；
R6是H、CH3、F、Cl、CN、OCH3、OH、或被OH、OCH3或者一个或多个卤素基团取代的甲基；
R7是H、CH3、F、Cl、CN或OCH3；
R8是H、CH3、CF3、F、Cl、CN或OCH3；
V是CH或N；
R9各自独立地是C1-C3烷基；并且
R10各自独立地是H或CH3。
式I化合物的示例性实施方案包括R2是H或CH3。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3是H、-Ra、-NRbRc或-C(O)Rb。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3选自任选地被F、OH、CH3或COCH3取代的环丙基、氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、氧代哌啶基、哌嗪基和氧代哌嗪基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R3是：
其中波浪线指示连接点。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R4是H、叔丁基、N-吡咯烷基、N-哌啶基、N-氮杂环庚烷基、2-羟基-2-甲基丙基、丙-1-烯-2-基、-N(CH3)Et、异丙基、环戊基、环己基、3-甲基丁-2-基、-N(CH3)(i-Pr)或-NH(环丙基)。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R5是H或F。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R6是H、CH3、F或CH2OH。
式I化合物的示例性实施方案包括其中R7是H或F。
式I化合物的示例性实施方案包括其中B是吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、吡唑-3-基、嘧啶-4-基或吡啶-2-基。
式I化合物的示例性实施方案包括其中：
选自以下结构：
其中波浪线指示连接点。
式I化合物的示例性实施方案包括具有式Ia的结构的化合物：
式I化合物的示例性实施方案包括具有式Ib的结构的化合物：
式I化合物的示例性实施方案包括具有式Ic的结构的化合物：
式I化合物的示例性实施方案包括选自表1和表2的化合物。
本发明的式I化合物可包含不对称中心或手性中心，因而以不同的立体异构体形式存在。本发明化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于其非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物例如外消旋混合物，意在构成本发明的一部分。
此外，本发明涵盖所有的非对映异构体，包括顺-反(几何)异构体和构象异构体。例如，若式I化合物包含双键或稠合环，则顺式和反式形式以及其混合物被涵盖在本发明的范围内。
在本文所示的结构中，若未指明任何具体手性原子的立体化学，则所有的立体异构体被视为并被包含为本发明的化合物。若以表示具体构型的楔形实线或虚线指明立体化学，则如此指明和定义该立体异构体。
本发明的化合物可以未溶剂化的形式、以及用药学可接受的溶剂例如水、乙醇等溶剂化的形式存在，并且本发明意在涵盖溶剂化的和未溶剂化的形式。
本发明的化合物还可以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式都被涵盖在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指通过低能垒可互相转变的能量不同的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子的迁移互相转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组互相转化。
生物学评价
可通过测定每种化合物将活性抑制到预定程度时的浓度而后将结果对比来确定式I化合物作为酶活性(或其它生物活性)的抑制剂的相对效力。通常，优选测定的是在生化测定中抑制50％的活性时的浓度，即，50％抑制浓度或“IC50”。可利用本领域已知的常规技术完成IC50值的测定。一般可通过测量特定酶在一系列浓度的待研究的抑制剂存在下的活性来确定IC50。然后以实验获得的酶活性值对所用的抑制剂浓度作图。将显示50％酶活性(与不存在任何抑制剂时的活性相比)时的抑制剂浓度作为IC50值。类似地，可通过适当地测定活性来确定其它的抑制浓度。例如，在一些情况中可能期望确定90％抑制浓度，即IC90等。
通过标准生化Btk激酶测定来测试式I化合物(实施例901)。
可用来测试式I化合物的标准细胞Btk激酶测定的一般方法是Ramos细胞Btk测定(实施例902)。
标准细胞B细胞增殖测定可用来以从Balb/c小鼠脾纯化的B细胞测试式I化合物(实施例903)。
标准T细胞增殖测定可用来以从Balb/c小鼠脾纯化的T细胞测试式I化合物(实施例904)。
为了抑制B细胞活性，可以用从8-16周龄的Balb/c小鼠脾纯化的全小鼠脾细胞对式I化合物进行CD86抑制测定(实施例905)。
为了测定在培养物中存活的B-ALL细胞的数量，可以对式I化合物对进行B-ALL细胞存活测定(实施例906)。
为了测定化合物抑制由人全血中受具有羊F(ab’)2抗-人IgM的交联表面IgM激活的B淋巴细胞产生的CD69的能力，可以对式I化合物进行CD69全血测定(实施例907)。
按照本发明的方法制备和表征了表1和2中示例性的式I化合物，并且测试了它们对Btk的抑制，所述示例性的式I化合物其具有以下结构和相应的名称(ChemDraw Ultra,9.0.1版,和ChemBioDraw,11.0版,CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA)。在多于一种名称与式I化合物或中间体相关的情况中，应以化学结构定义该化合物。
表1.
使用与实施例101-126的方法类似的方法制备了表2中的实施例。
表2.
式I化合物的给药
本发明的化合物可通过适合于要治疗的病症的任何途径给药。适合的途径包括口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬脑膜外)、透皮、直肠、鼻、局部(包括含服和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。为了局部免疫抑制治疗，可通过损伤区内给药(包括灌注或者在移植前使抑制剂接触移植物)来给药所述化合物。应理解，优选的途径可随着例如接受者的状况而改变。在口服给药所述化合物的情况中，可将其与药学可接受的载体或赋形剂一起制备成丸剂、胶囊剂、片剂等。在通过肠胃外给药所述化合物的情况中，如下所详述的，可将其与药学可接受的肠胃外载体一起以单位剂量可注射形式配制。
治疗人类患者的剂量可以为约10mg至约1000mg的式I化合物。典型的剂量可以是约100mg至约300mg的所述化合物。取决于具体化合物的包括吸收、分布、代谢和排泄在内的药物代谢动力学和药效学性质，剂量可以每天一次(QID)、每天两次(BID)或更频繁地给药。此外，毒性因素可影响剂量和给药方案。当口服给药时，可每天或频度较小地吞服丸剂、胶囊或片剂，持续规定的时间段。可持续数个治疗周期地重复所述方案。
用式I化合物治疗的方法
本发明的式I化合物用于治疗患有起因于与Btk激酶相关的异常的细胞生长、功能或行为的疾病或病症的人或动物患者，所述疾病或病症是例如免疫性病症、心血管疾病、病毒感染、炎症、癌症、代谢/内分泌障碍或神经病，因此可通过包括向其给药如上定义的本发明的化合物的方法来治疗。患有癌症的人或动物患者还可通过包括向其给药如上定义的本发明的化合物的方法来治疗。由此可改进或改善所述患者的病况。
式I化合物可用于在体外、原位或体内诊断或治疗哺乳动物细胞、生物体或相关的病理状态，例如系统性和局部性炎症、免疫炎性疾病例如类风湿性关节炎、免疫抑制、器官移植排斥、变态反应、溃疡性结肠炎、克罗恩病、皮炎、哮喘、系统性红斑狼疮、斯耶格伦综合征、多发性硬化、硬皮病/系统性硬化病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、银屑病，以及总体关节保护效力。
本发明的方法还包括治疗疾病例如：关节疾病例如类风湿性关节炎、单关节关节炎、骨性关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎；贝切特病；脓毒症、败血症性休克、内毒素性休克、革兰阴性脓毒症、革兰阳性脓毒症和中毒性休克综合征；败血病继发性多器官损伤综合征、外伤或出血；眼病例如变态反应性结膜炎、春季结膜炎、葡萄膜炎以及甲状腺相关的眼病；嗜酸性细胞肉芽肿；肺部或呼吸道病症例如哮喘、慢性支气管炎、变态反应性鼻炎、ARDS、慢性肺部炎性疾病(例如慢性阻塞性肺病)、矽肺、肺结节病、胸膜炎、肺泡炎、血管炎、肺气肿、肺炎、支气管扩张和肺型氧中毒；心肌、脑或肢端的再灌注损伤；纤维化例如囊性纤维化；瘢痕疙瘩形成或疤痕组织形成；动脉粥样硬化；自身免疫疾病例如系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化、糖尿病的一些形式和雷诺综合征；以及移植排斥性病症例如GVHD和同种异体移植物排斥；慢性肾小球肾炎；炎性肠病例如慢性炎性肠病(CIBD)、克罗恩病、溃疡性结肠炎和坏死性小肠结肠炎；炎性皮肤病例如接触性皮炎、特应性皮炎、银屑病或风疹；起因于感染的发烧和肌痛；中枢或周围神经系统炎性病症例如脑膜炎、脑炎以及起因于较轻外伤的脑或脊髓损伤；斯耶格伦综合征；涉及白细胞渗出的疾病；酒精性肝炎；细菌性肺炎；抗原-抗体复合物介导的疾病；低血容量性休克；I型糖尿病；急性和迟发性超敏反应；起因于白细胞恶液质和转移的病况；热损伤；粒细胞输血相关的综合征；以及细胞因子诱导的中毒。
本发明的方法还包括治疗选自以下的癌症：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、胰腺癌、骨髓病症、淋巴瘤、多毛细胞(hairy cells)、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌、何杰金淋巴瘤、白血病、支气管癌、甲状腺癌、肝和肝内胆管癌、肝细胞癌、胃癌、神经胶质瘤/成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、黑素瘤、肾和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子宫颈癌、多发性骨髓瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞白血病、髓样白血病、口腔和咽癌、非何杰金淋巴瘤、黑素瘤和结肠绒毛腺瘤。
本发明的方法可用于治疗受到或可能受到再灌注损伤(即，由组织或器官经受一段时间的缺血而后再灌注的情形造成的损伤)的对象。术语“缺血”是指由阻塞动脉血的流入导致的局部组织贫血。短暂缺血而后再灌注特征性地导致中性粒细胞激活并移形经过受影响区域中的血管的内皮。被激活的中性粒细胞的积累转而导致产生反应性氧代谢物，其损害相关组织或器官的组成部分。“再灌注损伤”的这种现象通常与诸如血管中风(包括全脑缺血和病灶缺血)、出血性休克、心肌缺血或梗死形成、器官移植和脑血管痉挛之类的病症相关。举例说明，再灌注损伤发生在心脏搭桥手术结束时或者发生在心脏停博的过程中(当曾被阻止接受血液的心脏开始再灌注时)。据预期，对Btk活性的抑制可导致在这样的情形中再灌注损伤的量减小。
药物制剂
为了将本发明的化合物用于治疗包括人在内的哺乳动物，通常遵照标准药学方法将其制备成药物组合物。根据本发明的此方面，提供药物组合物，其包含本发明的化合物和药学可接受的稀释剂或载体。
典型的制剂是通过将本发明的化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合进行制备的。适合的载体、稀释剂和赋形剂为本领域技术人员公知，并且包括例如糖类、蜡、水溶性和/或水溶胀性聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等材料。所用的具体的载体、稀释剂或赋形剂取决于应用本发明的化合物的途径和目的。一般根据本领域技术人员公认为施用于哺乳动物是安全(GRAS)的溶剂来选择溶剂。一般安全的溶剂是无毒性的水性溶剂例如水及其它可溶于或混溶于水中的无毒性溶剂。适合的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等，以及其混合物。所述制剂还可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、避光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂及其它已知的添加剂，以赋予药物(即本发明的化合物或其药物组合物)雅致的外观或者有助于药学产品(即药品)的生产。
所述制剂可利用常规的溶解和混合方法进行制备。例如，将大批药物物质(即本发明的化合物或该化合物的稳定形式(例如与环糊精衍生物或其它已知的络合剂形成的络合物))在一种或多种上述赋形剂存在下溶于适合的溶剂中。通常将本发明的化合物制备成药学剂型，以容易地控制药物剂量并且使患者能够顺从处方的治疗方案。
施用的药物组合物(或制剂)可以多种方式包装，取决于给药该药物所采用的方法。通常用于分配的制品包括其中放置有适当形式的药物制剂的容器。适合的容器是本领域技术人员公知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等之类的材料。所述容器还可包括防感染的装置以防不慎触及包装的内容物。此外，所述容器在其上置有说明该容器的内容物的标签。所述标签还可包括适当的警示。
可针对各种给药途径和类型制备本发明化合物的药物制剂。例如，可将具有期望纯度的式I化合物任选地与药学可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂(Remington’sPharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.Ed.)混合成冻干制剂、粉碎的散剂或水溶液剂的形式。可通过在环境温度下，在适当的pH下，以期望的纯度与生理学可接受的载体(即在所用的剂量和浓度下对接受者无毒性的载体)一起混合进行制备。所述制备的pH主要取决于具体的用途和化合物的浓度，但是可以是约3-约8。在pH5的乙酸盐缓冲剂中制备是一个适合的实施方案。
所述化合物通常可以固体组合物、冻干制剂或水溶液的形式储藏。
本发明的药物组合物可以遵循优质医疗规范的方式(即，给药的量、浓度、时间安排、疗程、载体以及途径)进行制备、服用和给药。在此情况中要考虑的因素包括：要治疗的具体病症、要治疗的具体哺乳动物、各个患者的临床状况、病症的起因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排以及开业医生所知的其它因素。要给药的化合物的“治疗有效量”取决于这些的考虑因素，并且是改善或治疗过度增殖性病症所需的最小量。
作为一般的建议，每剂肠胃外给药的抑制剂的初始药学有效量可以是约0.01-100mg/kg，即每天约0.1-20mg/kg患者体重，其中所用化合物的一般初始范围是0.3-15mg/kg/天。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂是在所用的剂量和浓度下对接受者无毒性的，并且包括缓冲剂例如磷酸盐、柠檬酸盐及其它有机酸；包括抗坏血酸和蛋氨酸在内的抗氧化剂；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物例如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；包括葡萄糖、甘露糖或糊精在内的单糖、二糖以及其它糖类；螯合剂例如EDTA；糖类例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐的反荷离子例如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白复合物)；和/或非离子型表面活性剂例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米颗粒和纳米胶囊)或者粗乳液(macroemulsion)中，还可将所述活性药学成分分别包封在通过例如凝聚技术或界面聚合制得的微胶囊(例如羟甲基纤维素微胶囊或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中。这样的技术公开在Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.Ed.(1980)中。
可以制备式I化合物的缓释制剂。缓释制剂的适合的实例包括含有式I化合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质是成型的制品例如膜或微胶囊的形式。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(US3773919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(包含乳酸-乙醇酸共聚物和亮丙瑞林乙酸盐的可注射的微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
所述制剂包括适合于本文所述的给药途径的那些。所述制剂可以方便地采用单位剂量形式，并且可以通过药剂学领域公知的任何方法进行制备。技术和制剂一般在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)中查到。这样的方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常通过使所述活性成分与液体载体、粉碎的固体载体或此二者均匀且紧密地结合而后任选地使产品成型来制备所述制剂。
适合于口服给药的式I化合物的制剂可以制成各自含有预定量的式I化合物的分离的单元，例如丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。可通过在适合的机器中将自由流动的例如粉末或颗粒形式的活性成分压紧，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合来制备压片剂。可通过在适合的机器中对用惰性液体稀释剂润湿的粉碎的活性成分的混合物进行模塑来制备模制片剂。所述片剂可以任选地被包衣和划痕，并且任选地对其进行配制以从其中缓慢或受控地释放活性成分。可制备片剂、糖锭剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的散剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂例如明胶胶囊、糖浆剂或酏剂用于口服。用于口服的式I化合物的制剂可以按照药物组合物制备领域已知的任何方法进行制备，并且这样的组合物可以包含包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂在内的一种或多种物质以提供可口的制剂。包含与适合于制备片剂的无毒性药学可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可以是，例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂例如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；以及润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是无包衣的，或者可以通过包括微囊化在内的已知技术包衣以延迟在胃肠道内崩解和吸收，由此在较长的时期提供持续的作用。可以单独使用例如延时材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，或者与蜡一起使用。
为了治疗眼或其它外部组织例如口和皮肤，所述制剂优选地以局部软膏剂或乳膏剂形式施用，并且包含例如0.075％-20％w/w的量的活性成分。在将活性成分制备成软膏剂时，活性成分可以与石蜡族的或水混溶性的软膏基质一起使用。或者，活性成分可以与水包油乳膏基质一起制备成乳膏剂。若期望，乳膏基质的水相可包含多元醇，即含有两个或多个羟基的醇，例如丙二醇、1,3-丁二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及其混合物。局部制剂可以适合地包含增强活性成分吸收或渗透过皮肤或其它受感染区域的化合物。这样的皮肤促渗剂的实例包括二甲亚砜和相关的类似物。本发明的乳剂的油相可以已知的方式由已知的成分形成。虽然该相可以仅包含乳化剂，但其适合地包含至少一种乳化剂与脂肪或油、或者与脂肪和油的混合物。优选包含亲水性乳化剂和亲脂性乳化剂作为稳定剂的。还优选包含油和脂肪。总之，所述乳化剂与任选存在的稳定剂一起组成所谓的乳化蜡，并且该蜡与油和脂肪一起组成所谓的乳化软膏基质，所述基质形成乳膏制剂的油性分散相。适合用于本发明的制剂中的乳化剂和乳剂稳定剂包括60、80、鲸蜡硬脂醇、苄醇、肉豆蔻醇和单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。
式I化合物的水性混悬剂包含和适合于制备水性混悬剂的赋形剂混合的活性材料。这样的赋形剂包括：助悬剂例如羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶，以及分散剂或湿润剂例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和脱水己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性混悬剂还可包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂以及一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。
式I化合物的药物组合物可以是无菌注射剂的形式，例如无菌可注射的水性或油性混悬剂。可按照已知的技术利用上述那些适合的分散剂或湿润剂和助悬剂制备此混悬剂。无菌注射剂还可以是在无毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射的溶液剂或混悬剂，例如1,3-丁二醇中的溶液剂，或者制备成冻干粉末。可使用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏液和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常可用作溶剂或混悬介质。为此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸例如油酸也可用于制备注射剂。
可与载体材料组合以制备单一剂型的活性成分的量可随着要治疗的宿主和具体的给药模式而改变。例如，意在向人类口服给药的延时释放制剂可包含约1-1000mg的活性材料，并与可占总组合物的约5重量％-约95重量％的适当且合宜的量的载体材料混和。可制备药物组合物以容易地测定给药量。例如，预期用于静脉内输注的水溶液剂可包含约3-500μg的活性成分/毫升溶液剂，从而可实现以约30mL/hr的速度输注适合的体积。
适合于肠胃外给药的制剂包括：水性和非水性的无菌注射溶液剂，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使该制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及可包含助悬剂和稠化剂的水性和非水性的无菌混悬剂。
适合于向眼局部给药的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于适合的载体中，特别是活性成分的水性溶剂。优选地，存在于这样的制剂中的活性成分的浓度为约0.5％-20％w/w，例如约0.5％-10％w/w，例如约1.5％w/w。
适合于在口中局部给药的制剂包括：锭剂，其包含在调味基质通常是蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶中的活性成分；糖锭剂，其包含在惰性基质例如明胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯树胶中的活性成分；以及漱口液，其包含在适合的液体载体中的活性成分。
用于直肠给药的制剂可以是栓剂，其包含含有例如可可脂或水杨酸酯的适合的基质。
适合于肺内或鼻内给药的制剂的粒度是例如0.1-500微米(包括在0.1-500微米之间以微米增量的范围内的粒度，例如0.5、1、30微米，35微米等)，通过经鼻道快速吸入或者通过经口吸入进行给药以达到肺泡囊。适合的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适合于喷雾或干粉给药的制剂可按照常规方法进行制备，并且可与其它治疗剂例如上述用于治疗或预防下述病症的化合物一起递送。
适合于阴道给药的制剂可以是阴道栓剂、卫生棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，其除了活性成分之外还包含本领域已知的适合的载体。
所述制剂可包装在单位剂量或多剂量容器中，例如，密封的安瓿和小瓶，并且可在冷冻干燥(冻干)的条件下储藏，为了在使用前立即注射，仅需要加入无菌液体载体例如水。临时注射用的溶液剂和混悬剂由上述种类的无菌的散剂、颗粒剂和片剂制得。优选的单位剂量制剂是包含上文所述的日剂量或单位日分剂量或其适当部分的活性成分的那些。
本发明还提供兽医学组合物，其包含至少一种上述活性成分和兽医学载体。兽医学载体是用于给药所述组合物的目的的材料，并且可以是惰性的或兽医学可接受的并且与所述活性成分相容的固体、液体或气体物质。这些兽医学组合物可通过肠胃外、口服或通过任何其它期望的途径给药。
组合治疗
式I化合物可单独使用，或者与用于治疗本文所述的疾病或病症例如炎症或过度增殖性病症(例如癌症)的其它治疗剂组合使用。在一些实施方案中，在药学组合制剂或者作为组合治疗的给药方案中，将式I化合物与具有抗炎性或抗过度增殖性或者用于治疗炎症、免疫反应性病症或过度增殖性病症(例如癌)的另一治疗性化合物组合。所述另一治疗剂可以是NSAID抗炎药。所述另一治疗剂可以是化疗剂。所述药学组合制剂或给药方法的第二化合物优选地具有与式I化合物互补的活性，从而它们不会不利地相互影响。这样的化合物适合地以对预期目的有效的量组合存在。在一个实施方案中，本发明的组合物包含式I化合物或其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药学可接受的盐或前药，以及治疗剂例如NSAID。
联合治疗可以同时或依次的方案施用。当依次施用时，该组合可以在两次或多次给药中施用。组合给药包括，使用分开的制剂或者单一药物制剂同时给药，以及以任意顺序相继地给药，其中优选存在两种(或所有)活性剂同时发挥它们的生物活性的时间段。
上述同时给药的药物中的任一种的适合的剂量是当前使用的那些，并且由于新鉴定的药物与其它治疗剂或治疗的组合(协同)作用，可以降低。
组合治疗可提供“协同作用”并证明是“协同的”，即，活性成分在一起使用时所达到的效果大于分开使用所述化合物时所产生的效果之和。当所述活性成分：(1)在组合的单位剂量制剂中共同配制并同时给药或者递送时；(2)作为分开的制剂交替或平行地递送时；或者(3)通过一些其它方案时，可达到协同效果。当在交替疗法中递送时，当所述化合物例如通过在分开的注射器中分别注射、通过分开的丸剂或胶囊剂、或通过分开的输注依次给药或递送时，可达到协同效果。通常在交替疗法中，相继地，即连续地，给药有效剂量的各活性成分，而在组合治疗中，一起给药有效剂量的两种或多种活性成分。
在治疗的一个具体的实施方案中，式I化合物、其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药学可接受的盐或前药可以与例如本文所述的那些的其它治疗剂、激素或抗体组合，还可与外科治疗和放疗组合。因此，本发明的组合治疗包括给药至少一种式I化合物、其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药学可接受的盐或前药，以及使用至少一种其它癌症治疗方法。为了达到期望的组合治疗效果，选择式I化合物和其它药学活性治疗剂的量以及给药的相对时机。
式I化合物的代谢物
本文所述的式I化合物的体内代谢产物也在本发明的范围内。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱脂化、酶解等产生。因此，本发明包括式I化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
代谢产物通常通过制备本发明的放射性同位素(例如14C或3H)标记的化合物，将其以可检测的剂量(例如大于约0.5mg/kg)向动物例如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴或人肠胃外给药，代谢足够的时间(通常约30秒至30小时)，然后从尿、血液或其它生物样品分离其转化产物进行鉴定。这些产物易于分离，因为它们是标记的(其它的通过使用能够结合代谢物中存余的表位的抗体进行分离)。代谢物结构以常规方法测定，例如通过MS、LC/MS或NMR分析。通过以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相同的方式进行代谢物的分析。代谢产物，只要未在体内发现它们，可用于诊断测定中，以治疗性给药本发明的化合物。
制品
在本发明的另一个实施方案中，提供包含用于治疗上述疾病和病症的材料的制品或“药盒”。在一个实施方案中，所述药盒包括包含式I化合物、其立体异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药学可接受的盐或前药的容器。所述药盒还可包括在所述容器上或伴随所述容器的标签或包装说明书。术语“包装说明书”是指治疗产品的商业包装中通常包含的说明书，其包含使用该治疗产品相关的适应征、用法、剂量、给药、禁忌和/或警示的信息。适合的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可以由各种材料例如玻璃和塑料制成。所述容器可容纳对治疗病症有效的式I化合物或其制剂，并且可具有无菌入口(例如，所述容器可以是静脉内溶液剂袋或者具有可被皮下注射针刺穿的瓶塞的小瓶)。所述组合物中的至少一种活性成分是式I化合物。标签或包装说明书指明所述组合物用于治疗所选的病症例如癌症。此外，标签或包装说明书可指明要治疗的患者是患有诸如过度增殖性病症、神经变性、心脏肥厚、疼痛、偏头痛或神经外伤性疾病或事件之类病症的患者。在一个实施方案中，标签或包装说明书指明包含式I化合物的组合物可用来治疗起因于异常细胞生长的病症。标签或包装说明书还可指明所述组合物可用来治疗其它病症。替代地，或者额外地，所述制品还可包括第二容器，其包含药学可接受的缓冲剂例如抑菌的注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏液和葡萄糖溶液。所述制品还可包括就商业和用户而言令人期望的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、填料、针和注射器。
所述药盒还可包括给药式I化合物和第二药物制剂(若存在)的说明书。例如，若所述药盒包括含有式I化合物的第一组合物和第二药物制剂，则该药盒还可包括向有此需要的患者同时、相继或分开地给药第一药物组合物和第二药物组合物的说明书。
在另一个实施方案中，所述药盒适合于递送式I化合物的固体口服形式例如片剂或胶囊剂。这样的药盒优选地包括多个单位剂量。这样的药盒可包括具有以它们的预期用途定位的剂量的卡片。这样的药盒的一个实例是“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是公知的并且广泛用于包装药学单位剂量形式。若期望，可以例如指定在治疗时间表中可给药之日的数字、字母或其它标记或者日历插页的形式提供记忆辅助工具。
根据一个实施方案，药盒可包括(a)其中容纳有式I化合物的第一容器；并任选地包括(b)其中容纳有第二药物制剂的第二容器，其中所述第二药物制剂包含具有抗过度增殖活性的第二化合物。替代地，或者额外地，所述药盒还可包括第三容器，其包含药学可接受的缓冲剂例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏液和葡萄糖溶液。所述药盒还可包括就商业和用户而言令人期望的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、填料、针和注射器。
在其中所述药盒包括式I化合物的组合物和另一治疗剂的一些其它实施方案中，所述药盒可包括用于容纳分开的组合物的容器例如分开的瓶或分开的箔包装，但是，分开的组合物还可容纳在单个的未分开的容器中。通常，所述药盒包括给药分开的组分的说明书。所述药盒形式在以下情形中特别有利：在分开的组分优选地以不同的剂型(例如口服和肠胃外)给药或者以不同的间隔给药时，或者在处方医师期望逐步增加组合中的e各个组分的剂量时。
式I化合物的制备
式I的化合物可通过包括与化学领域中公知的那些方法类似的方法在内的合成路线合成，具体地参见本文中的说明书，以及在Comprehensive Heterocyclic ChemistryII,Katritzky和Rees著,Elsevier,1997,例如Volume 3；Liebigs Annalen der Chemie,(9):1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41:1052-60,(1958)；Arzneimittel-Forschung,40(12):1328-31,(1990)(分别通过援引明确地加入本文中)中对其它杂环的那些描述。原料一般可从商业来源例如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)获得，或者利用本领域技术人员公知的方法容易地制得(例如通过在Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v。1-23,Wiley,N.Y.(1967-2006ed.)，或者BeilsteinsHandbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin,包括附录(也可通过Beilstein在线数据库获得)中概述的方法制得。
用于合成式I化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)以及所需的试剂和中间体是本领域已知的，并且包括，例如，在R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groupsin Organic Synthesis,3rd Ed.,John Wiley and Sons(1999)；和L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其后续版本中所述的那些。
式I化合物可单独地或者以包含至少2种例如5-1,000种化合物或者10–100种化合物的化合物库的形式进行制备。式I的化合物库可以按照本领域技术人员已知的方法通过组合的‘分开和混合’方法，或者通过多级平行合成，利用液相或固相化学进行制备。因此，根据本发明的另一方面，提供包含至少2种化合物或其药学可接受的盐的化合物库。
附图和实施例提供制备式I化合物的示例性方法。本领域技术人员会理解，其它合成路线可用来合成式I化合物。虽然在附图和实施例中描述和讨论了具体的原料和试剂，但是可容易地替换成其它原料和试剂以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，还可参考本公开，利用本领域技术人员公知的常规化学对通过所述方法制得的许多实例化合物进一步进行修饰。
在制备式I化合物时，可能需要保护中间体的远端官能团(例如伯胺或仲胺)。对这种保护的需要可随着远端官能团的性质以及制备方法的条件而改变。适合的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧基羰基(CBz)和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。本领域技术人员容易地确定这样保护的必要性。关于保护基的概述及它们的用途，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,NewYork,1991。
一般方法A Suzuki偶联
Suzuki型偶联反应用来形成碳-碳键，以连接式I化合物和中间体例如A-3的环(Suzuki(1991)Pure Appl.Chem.63:419-422；Miyaura和Suzuki(1979)Chem.Reviews 95(7):2457-2483；Suzuki(1999)J.Organometal.Chem.576:147-168)。Suzuki偶联是钯介导的芳基卤例如B-2或B-5与硼酸例如A-1或A-2的交叉偶联反应。例如，可将B-2与约1.5当量的4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)混合，并且溶于约3当量的碳酸钠(1M水溶液)和等体积的乙腈中。加入催化量或更多的低价钯试剂例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)。在一些情况中，用乙酸钾替代碳酸钠来调节水层的pH。然后将反应在微波反应器例如Biotage Optimizer(Biotage,Inc.)中，在压力下加热至约140-150℃持续10-30分钟。用乙酸乙酯或另一种有机溶剂萃取内容物。在蒸发有机层后，可在硅胶上或通过反相HPLC纯化硼酸酯A-1。取代基Y1、Y2、R5和R6是如所定义的那样，或者是其受保护形式或前体。同样，可将溴化物中间体B-5硼酸酯化得到A-2。取代基Y1、Y2、R1、R2、R3、R4、Z1、Z2、Z3、Z4和X是如所定义的那样，或是其被保护形式或前体。
B-2和A-2或者A-1和B-5的Suzuki偶联产生式I化合物或中间体A-3。将硼酸酯(或硼酸)(1.5eq)A-1或A-2和钯催化剂例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.05eq)加入到卤代中间体(1eq)B-2或B-5在乙腈和1M碳酸钠水溶液(与乙腈等体积)中的混合物中。将反应混合物在微波中加热至约150℃持续约15min。LC/MS指示何时反应完成。将水加入到混合物中，过滤沉淀的产物，然后通过HPLC纯化得到产物A-3。取代基R1’、R2’、R4’可以是所定义的R1、R2、R4，或者其被保护的形式或前体。
在Suzuki偶联步骤中可使用各种钯催化剂。各种低价Pd(II)和Pd(0)催化剂可用于Suzuki偶联反应，包括PdCl2(PPh3)2、Pd(t-Bu)3、PdCl2dppfCH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)/PPh3、Cl2Pd[(Pet3)]2、Pd(DIPHOS)2、Cl2Pd(Bipy)、[PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2、Cl2Pd[P(o-tol)3]2、Pd2(dba)3/P(o-tol)3、Pd2(dba)/P(furyl)3、Cl2Pd[P(furyl)3]2、Cl2Pd(PMePh2)2、Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2、Cl2Pd[P(C6F6)3]2、Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2、Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2，以及包封的催化剂Pd EnCatTM 30、Pd EnCatTM TPP30和Pd(II)EnCatTM BINAP30(US 2004/0254066)。
一般方法B Buchwald反应
Buchwald反应用于氨化6-溴中间体B-1(Wolf和Buchwald(2004)Org.SynthColl.Vol。10:423；Paul等人(1994)Jour.Amer.Chem.Soc。116:5969-5970)。向卤代中间体B-1在DMF中的溶液中加入适合的胺R5-NH2(200mol％)、Cs2CO3(50mol％)、Pd2(dba)3(5mol％)和XANTPHOS(10mol％)。将反应在Biotage Optimizer微波反应器中,在压力下加热至约110℃持续约30min。在真空中浓缩所得的溶液得到B-2。可使用其它钯催化剂和膦配体。
N-芳基酰胺中间体B-5也可用环酰胺中间体B-3和芳基溴B-4通过Buchwald反应进行制备。
图1显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将双环pyrolone 4与甲基苯或羟甲基苯5偶联以得到中间体6的Buchwald偶联反应，随后进行连续的Suzuki反应以制备硼酸酯(boronate)7并将其与溴吡啶酮或溴吡嗪酮2偶联，或者进行单次Suzuki反应以将6与吡啶酮硼酸酯或吡嗪酮硼酸酯3偶联。溴吡啶酮或溴吡嗪酮2可通过二溴吡啶酮或二溴吡嗪酮与杂环胺或苯胺的Buchwald反应制备。吡啶酮硼酸酯或吡嗪酮硼酸酯3可以通过2与二硼酸酯的Suzuki反应制备。
图2显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将所述双环pyrolone安装在溴苯胺衍生物上，以得到溴化物，所述溴化物可用于图1所描绘的作用中。
图3显示制备式I化合物8的示例性合成路线，其包括将所述双环pyrolone结合在分子12的剩余部分的氨基衍生物上。
实施例
实施例101
实施例101a 4-叔丁基-2-甲基苯甲酸101a
向250mL圆底烧瓶中装入在THF(34mL)中的四甲基乙二胺(5.6mL,37mmol)。将混合物冷却至–92℃(N2(液)/CH2Cl2浴)，然后加入sec-BuLi(26.5mL,37mmol,在环己烷中的1.4M溶液)，接着滴加4-叔丁基苯甲酸(3g,16.8mmol)溶解在THF(22mL)中的溶液。搅拌1h，然后于–80℃向混合物加入碘甲烷(4.5mL,72.4mmol)。于–80℃搅拌10min，然后用H2O(20mL)终止反应混合物。温热至室温后，用HCl水溶液(1M)将水相调节至pH＝2。用EtOAc(2x 15mL)萃取水相，并用Na2SO4干燥合并的有机萃取液，并浓缩。对残余物进行色谱(梯度：10％-60％EtOAc/己烷)，得到630mg(20％)101a。
实施例101b 4-叔丁基-2-甲基苯甲酸乙酯101b
向装有在CH2Cl2(20mL)中的酸101a(630mg,3.3mmol)的100mL圆底烧瓶中加入草酰氯(4.9mL,9.8mmol,在CH2Cl2中的2.0M溶液)，然后加入DMF(1滴)。在室温下搅拌反应8h，然后浓缩。向残余物中加入Et2O(25mL)，并浓缩混合物。重复此操作以除去任何过量的草酰氯。将残余物溶于CH2Cl2(15mL)和EtOH(15mL)。在室温下搅拌反应30min，然后浓缩。将残余物溶于EtOAc(15mL)，并用HCl水溶液(15mL,1M)、H2O(15mL)、盐水(15mL)洗涤该有机相，用Na2SO4干燥并浓缩。粗品101b(660mg,91％)不经进一步纯化加以使用。
实施例101c 2-(溴甲基)-4-叔丁基苯甲酸乙酯101c
向100mL圆底烧瓶中装入在苯(5mL)中的酯101b(230mg,1.04mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(214mg,1.2mmol)、过氧化苯甲酰(25mg,0.1mmol)。在回流下搅拌混合物4h，然后加入H2O(10mL)。用CH2Cl2(2x10mL)萃取水相，并用盐水(10mL)洗涤合并的有机萃取液，用Na2SO4干燥并浓缩。粗品101c(287mg,92％)不经进一步纯化加以使用。
实施例101d 5-溴-1-甲基-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基]-1H-吡嗪-2-酮101d
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶中装入3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(J.Heterocycl.Chem.1983,20,919)(21.8g,81.4mmol)、4-氨基苯并酰基吗啉(4-aminobenzmorpholide)(23.6g,114mmol)和二甲基乙酰胺(130mL)。然后，在氮气下于105℃加热反应混合物14h(注意：用铲打碎加热4h后形成的固体)。然后，将悬浮液冷却至室温，导入搅拌的水(1.5L)中并过滤。用水(2×250mL)洗涤所得沉淀，并使之在滤纸上部分地干燥10-15分钟。然后，用热乙酸乙酯(2×250mL)、然后用热乙醇(250mL)洗涤滤饼，并减压干燥，得到63％收率(24.3g)的101d，为浅橙色固体：mp 276–277℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.39(bs,1H),7.81(dd,2H,J＝9.0,2.0Hz),7.45(dd,2H,J＝9.0,2.0Hz),6.81(s,1H),3.71(m,8H),3.55(s,3H)；MS(ESI+)m/z 393(M+H)。
实施例101e 4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基-3-硝基苯基)-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷101e
用氮气吹扫安装了机械搅拌器和温度调节器的1-L三颈圆底烧瓶并装入2-溴-6-硝基甲苯(60.2g；278mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(85.2g；336mmol)、乙酸钾(82.4g；840mmol)和DMSO(320mL)。将氮气流通过所得悬浮液30min，然后加入[1,1’-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯化钯(II)与氯甲烷(1:1)的络合物(7.60g；9.30mmol)，并于85℃加热20h。然后，将混合物冷却至环境温度，倒入水(1300mL)和甲基叔丁基醚(500mL)的混合物中，并用Cellpure P65(150cc)处理。将所得悬浮液通过填入玻璃漏斗(ID 185mm)中的Cellpure 65(200cc)垫过滤。用MtBE(3×180mL)洗涤滤饼并分离滤液的有机层，用水(3×1L)洗涤并用硫酸钠干燥。滤除硫酸钠，浓缩滤液并通过快速色谱纯化，得到4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基-3-硝基苯基)-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷101e，为浅黄色固体：mp 52-53℃；MS(APCI+)m/z 264(M+H)。
实施例101f 2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基胺101f
向安装了磁搅拌器的500-mL圆底烧瓶中装入4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基-3-硝基苯基)-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷101e(8.44g；32.1mmol)和甲醇(150mL)。将反应烧瓶抽空两次并回充入氩气。然后向溶液中加入10％炭载钯(含水50％,425mg干重)，并三次抽空反应烧瓶和回充入氢气。然后，在室温下于氢气囊压力下搅拌反应13h。然后，抽空烧瓶两次并回充入氩气，然后通过Celite 521垫过滤，并真空浓缩滤液。高真空下干燥所得残余物1d，得到定量收率(8.16g)的2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基胺101f，为白色固体：mp 110-112℃；MS(ESI+)m/z 234(M+H)。
实施例101g 5-(3-氨基-2-甲基苯基)-1-甲基-3-[4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基]-1H-吡嗪-2-酮101g
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶中装入101d(9.23g,23.5mmol)、1,4-二噁烷(250mL)和0.71M碳酸钠水溶液(50mL,35.5mmol)。向所得溶液中通入氩气15分钟，然后加入101f(6.58g,28.2mmol)和四(三苯基膦)钯(4.06g,3.51mmol)，然后100℃加热反应混合物38h。然后，将反应冷却至室温并在水(1L)和二氯甲烷(300mL)之间分配。分离水相并用二氯甲烷(2×300mL)重新萃取。分离并保留存在于合并的有机萃取液中的产物的白色沉淀。用2N盐酸(2×200mL)萃取有机相然后弃去。用2N氢氧化钠使酸性的水相变碱性，达到pH 8-10，并用二氯甲烷(3×300mL)萃取。用硫酸钠干燥合并的有机萃取液，过滤，然后与白色沉淀(见上)合并并减压浓缩。用热乙醇(100mL)研磨所得白色固体，过滤并用乙醇(2×40mL)洗涤。将滤饼溶于氯仿中，减压浓缩溶液，在高真空下于50℃干燥至恒重，得到84％收率的101g(8.31g)，为灰白色固体：mp 274–275℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.40(s,1H),8.09(d,2H,J＝8.5Hz),7.34(d,2H,J＝8.5Hz),7.14(s,1H),6.93(t,1H,J＝7.5Hz),6.66(d,1H,J＝7.5Hz),6.57(d,1H,J＝7.5Hz),4.92(bs,2H),3.58(bs,4H),3.54(s,3H),3.48(bs,4H),2.09(s,3H)；MS(ESI+)m/z 420(M+H)。
实施例101h 4-叔丁基-2-((2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基氨基)甲基)苯甲酸乙酯101h
向安装了磁搅拌棒的48-mL密封罐中装入在EtOH(3mL)中的溴化物101c(120mg,0.4mmol)、苯胺101g(168mg,0.4mmol)、二异丙基乙胺(0.08mL,0.48mmol)。在100℃下搅拌混合物16h，然后加入Na2CO3水溶液(5mL)。用EtOAc(2x 5mL)萃取水相，并用盐水(5mL)洗涤合并的有机萃取液，用Na2SO4干燥并浓缩。对残余物进行色谱(梯度：50％-100％EtOAc/己烷)，得到100mg(42％)101h。
实施例101i 4-叔丁基-2-((2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基氨基)甲基)苯甲酸101i
向25mL圆底烧瓶中装入在THF(2mL)、EtOH(2mL)和H2O(2mL)中的酯101h(100mg,0.16mmol)和LiOH(20mg,0.47mmol)。在60℃下搅拌混合物16h，用1M HCl水溶液将pH调节至7。用EtOAc(2x 10mL)萃取水相，并用盐水(10mL)洗涤合并的有机萃取液，用Na2SO4干燥并浓缩。粗品101i(97mg,99％)不经进一步纯化加以使用。
实施例101 5-叔丁基-2-(2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)异吲哚啉-1-酮101
向装有在DMF(5mL)中的酸101i(97mg,0.16mmol)、二异丙基乙胺(0.08mL,0.48mmol)的25mL圆底烧瓶中加入(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(84mg,0.19mmol)。在室温下搅拌反应2h，然后加入H2O(5mL)和EtOAc(10mL)。用HCl水溶液(1M,2x 5mL)、H2O(5mL)、Na2CO3水溶液(1M,5mL)、盐水(5mL)萃取有机相，用Na2SO4干燥并浓缩。对残余物进行色谱(梯度，0％-100％60:35:5CH2Cl2:Et2O:MeOH/CH2Cl2)，得到45mg(48％)101。MH+(m/z):MH+(m/z):591.5。1H NMR(300MHz,CDCl3)δm；8.44(s,1H),8.39(m,1H),7.88(s,1H),7.82(s,1H),7.39-7.49(m,5H),7.31-7.35(,2H),7.07(d,J＝7.5Hz,1H),6.81(s,1H),6.58(d,J＝7.5Hz,1H),3.69(宽s,6H),3.62(s,3H),3.07(m,1H),2.21(s,3H),1.35(s,3H),1.33(s,3H)；MS(ESI+)m/z(M+H)590.58。
实施例102
实施例102a 3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯102a
将在30mL甲醇中的3-甲基噻吩-2-甲酰氯(1)(10mL,18mmol)在回流下加热到沸腾持续18小时，然后真空浓缩。将残余物在乙醚和水之间分配。用Na2SO4干燥有机层并浓缩，得到102a(12.12g,100％)，为澄清油，其不经进一步纯化加以使用。
实施例102b 5-叔丁基-3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯102b
将AlCl3(15.60g,117mMol)悬浮于CH2Cl2(18mL)，并将混合物冷却至-78℃。在5min内滴加12.28g(78mMol)102a在CH2Cl2(9mL)中的溶液。将混合物搅拌5分钟。然后在45min内加入8.9mL(82mMol)2-氯-2-甲基丙烷在CH2Cl2(9mL)中的溶液，并在-78℃搅拌所得混合物1h。然后缓慢地将反应混合物温热至室温并搅拌24h。然后将反应混合物倒在冰上并用CH2Cl2萃取。用Na2SO4干燥有机层并浓缩成油，将其在硅胶上纯化，用CH2Cl2在己烷中的梯度(0-10％)洗脱，得到9.94g(60％)102b。
实施例102c 3-(溴甲基)-5-叔丁基噻吩-2-羧酸甲酯102c
将3.15g(14.8mMol)102b、3.17g(17.8mMol)N-溴代琥珀酰亚胺和0.122g(0.742mmol)2,2’-偶氮二异丁腈在40mL四氯化碳中的混合物于85℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温并过滤。真空浓缩滤液，并在硅胶上纯化所得残余物：ISCO 40g柱，0-20％CH2Cl2己烷溶液。分离出3.0g(70％)102c。
实施例102d 3-((3-溴-2-甲基苯基氨基)甲基)-5-叔丁基噻吩-2-羧酸甲酯102d
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入102c(1.09g,4.68mmol)、3-溴-2-甲基苯胺(2.61g,14.0mmol)和乙腈(25mL)。加入碳酸铯(1.67g,5.15mmol)并在室温下搅拌混合物16h。然后将反应混合物减压浓缩。通过柱色谱纯化所得残余物，得到70％收率(1.30g)的102d，为黄色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.92(m,2H),6.85(s,1H),6.57(dd,1H,J＝4.8,2.1Hz),4.60(s,2H),3.86(s,3H),2.29(s,3H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 396.2(M+H)。
实施例102e 3-((3-溴-2-甲基苯基氨基)甲基)-5-叔丁基噻吩-2-羧酸102e
在安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶中装入102d(1.30g,3.28mmol)、THF(5.0mL)、甲醇(5.0mL)和水(5.0mL)。加入氢氧化锂(1.38g,32.8mmol)并将混合物置于40℃油浴中。16h后，将反应混合物冷却至室温，并减压出去挥发物。用2N盐酸将所得水溶液酸化至pH 4。滤出所得固体并于40℃真空干燥，得到定量收率(1.25g)的102e，为白色固体：mp150–152℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.85(t,1H,J＝7.8Hz),6.75–6.67(m,3H),4.35(s,2H),2.18(s,3H),1.26(s,9H)；MS(APCI–)m/z 380.2(M–H)。
实施例102f 5-(3-溴-2-甲基苯基)-2-叔丁基-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-6(5H)-酮102f
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入102e(1.12g,2.93mmol)和无水二氯甲烷(50mL)。加入(1.25g,10.5mmol)亚硫酰氯并在环境温度下搅拌反应。16h后，减压浓缩反应。通过柱色谱纯化所得残余物，得到65％收率(757mg)的102f，为白色固体：mp 185–186℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.56(dd,1H,J＝6.6,1.2Hz),7.20(dd,1H,J＝6.3,1.5Hz),7.11(t,1H,7.8Hz),6.87(s,1H),4.56(s,2H),2.33(s,3H),1.45(s,9H)；MS(ESI+)m/z 364.2(M+H)。
实施例102g 2-叔丁基-5-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-6(5H)-酮102g
在安装了磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶中装入102f(757mg,2.08mmol)、双(戊酰)二硼(554mg,2.18mmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(191mg,0.21mmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦(X-Phos)(198mg,0.42mmol)、乙酸钾(306mg,3.12mmol)和无水二噁烷(10mL)。然后密封烧瓶，并通过三次抽空烧瓶和再充入氮气将混合物脱气。然后将反应置于80℃油浴中。16h后，将反应冷却至室温并减压浓缩成残余物。然后，用乙酸乙酯(300mL)稀释所得残余物并用水(120mL)洗涤。然后分离有机层并用硫酸钠干燥。通过真空过滤除去干燥剂；减压浓缩滤液，并通过柱色谱纯化所得残余物，得到102g，收率63％(541mg)，为黄色泡沫：mp 102–104℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.79(dd,1H,J＝5.4,1.8Hz),7.29(m,1H),7.23(m,1H),6.86(s,1H),4.53(s,2H),2.45(s,3H),1.41(s,9H),1.27(s,12H)；MS(APCI+)m/z 411.2(M)。
实施例102h 1-甲基-3-(4-硝基苯基)-5,6-二氢吡嗪-2(1H)-酮102h
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶，装入4-硝基苯基丙酮酸乙酯(5.00g,22.4mmol)和无水甲醇(112mL)。用冰浴将所得溶液冷却至0℃，并滴加N-甲基乙二胺(1.66g,22.4mmol)。完成添加后，除去冷却浴并在室温下搅拌反应18h。然后，减压浓缩反应。通过柱色谱纯化残余物，得到1-甲基-3-(4-硝基苯基)-5,6-二氢吡嗪-2(1H)-酮(102h)，收率20％(1.02g)，为黄色固体：mp 191–192℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,2H,J＝6.9Hz),8.05(d,2H,J＝7.2Hz),3.94(t,2H,J＝6.3Hz),3.55(t,2H,J＝6.3Hz),3.02(s,3H)；MS(ESI+)m/z 234.1(M+H)。
实施例102i 4-甲基-2-(4-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102i
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的25-mL单颈圆底烧瓶，装入1-甲基-3-(4-硝基苯基)-5,6-二氢吡嗪-2(1H)-酮102h(233mg,1.00mmol)和甲醇(7mL)。加入氰基硼氢化钠(80mg,1.30mmol)和无水氯化锌(204mg,1.50mmol)在无水甲醇(7mL)中的悬浮液，并在室温下搅拌反应1h。然后，加入二碳酸二叔丁酯(436mg,2.00mmol)，并在室温下搅拌反应18h。然后，将反应在10％碳酸钾水溶液(25mL)和乙酸乙酯(75mL)之间分配。分离水溶液并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机层，用水(20mL)洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂并减压浓缩滤液，得到4-甲基-2-(4-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102i，收率96％(320mg)，为琥珀色油：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,2H,J＝9.0Hz),7.63(d,2H,J＝8.7Hz),5.48(s,1H),3.93(m,1H),3.51(m,1H),3.47(m,2H),2.91(s,1H),1.35(s,9H)；MS(ESI+)m/z 236.1(M+H-Boc)。
实施例102j 2-(4-氨基苯基)-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102j
用氮气吹扫250-mL Parr氢化瓶并装入10％炭载钯(含水50％,10mg干重)，然后装入4-甲基-2-(4-硝基苯基)-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(102i)(1.00g,2.99mmol)在乙醇(40mL)中的溶液。将瓶抽真空，然后充入氢气至50psi的压力，并且在Parr氢化装置上，在室温下于50psi震荡18h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。通过Celite 521垫过滤所得悬浮液。用乙醇(2×20mL)洗涤滤饼，并将滤液减压蒸发至干燥，得到99％收率(904mg)的2-(4-氨基苯基)-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102j，为黄色浆状物：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.93(d,2H,J＝8.4Hz),6.51(d,2H,J＝8.4Hz),5.27(bs,1H),5.09(s,1H),3.83(d,1H,J＝10.8Hz),3.44(m,1H),3.24(m,2H),2.84(s,3H),1.40(s,9H)；MS(ESI+)m/z306.2(M+H)。
实施例102k 2-(4-(6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基氨基)苯基)-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102k
向安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的50-mL单颈圆底烧瓶中装入2-(4-氨基苯基)-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102j(880mg,2.88mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(770mg,2.88mmol)、碳酸铯(2.06g,6.34mmol)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得溶液通入氮气30分钟，然后加入Xantphos(166mg,0.288mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(47mg,0.144mmol)，并在回流下加热反应混合物18h。然后，将反应冷却至室温，在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之间分配，过滤，并用乙酸乙酯(2×25mL)洗涤滤饼。分离有机层，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。通过柱色谱纯化残余物，得到102k(850mg,60％)，为橙色泡沫：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.28(s,1Hδ7.16(d,2H,J＝8.4Hz),6.65(d,2H,J＝8.4Hz),5.65(s,1H),4.02(m,1H),3.51(m,1H),3.30(m,3H),3.05(s,3H),1.47(s,9H),MS(ESI+)m/z 492.1(M+H)。
实施例102l 2-(4-(6-(3-(2-叔丁基-6-氧代-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5(6H)-基)-2-甲基苯基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基氨基)苯基)-4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯102l
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的25-mL三颈圆底烧瓶中装入102k(200mg,0.486mmol)、102g(217mg,0.442mmol)、碳酸钠(115mg,1.08mmol)、水(1.5mL)、1,4-二噁烷(5mL)和DMF(2mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(83mg,0.07mmol)，并在回流下加热反应混合物16h。然后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(40mL)和水(5mL)稀释。分离有机层，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，得到88％收率(272mg)的102l，为棕色泡沫：mp 120–123℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.79(d,2H,J＝6.9Hz),7.71–7.28(m,5H),6.92(s,1H),6.75(s,1H),5.30(s,3H),4.63(s,2H),4.619s,1H),3.62(s,3H),3.50(m,2H),3.42–3.22(m,2H),3.04(m,4H),1.46(s,18H)；MS(APCI+)m/z 697.5(M+H)。
实施例102 2-叔丁基-5-(2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(4-甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6(5H)-酮102
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的10-mL单颈圆底烧瓶并装入102l(270mg,0.39mmol)、甲醇(6mL)和4M HCl二噁烷溶液(6mL)，并搅拌混合物2h。然后，加入乙酸乙酯(60mL)和水(60mL)。用10％碳酸钾水溶液将pH调节至6.5。分离水层并用乙酸乙酯(2×75mL)萃取。用盐水(60mL)洗涤合并的有机层，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液成残余物，并通过柱色谱纯化残余物，得到36％收率(83mg)的102，为灰白色固体：mp164–166℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),7.90(d,2H,J＝5.1Hz),7.41(t,2H,J＝8.0Hz),7.33(t,1H,J＝7.5Hz),7.22(d,3H,J＝9.5Hz),7.14(s,1H),4.77(s,2H),4.29(s,1H),3.56(s,3H),3.38(m,1H),3.24(m,1H),2.97–2.86(m,3H),2.84(s,3H),2.23(s,3H),1.42(9H)；MS(ESI+)m/z 597.2(M+H)。
实施例103
实施例103a 4-叔丁基-N,N-二乙基-2-甲酰基苯甲酰胺103a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和回流冷凝器的1-L三颈圆底烧瓶并装入TMEDA(11.6g,100mmol)和THF(160mL)。将反应冷却至–70℃，滴加s-BuLi(1.4M己烷溶液,69mL,96.7mmol)并在–70℃搅拌反应25min。在氮气下向安装了磁搅拌器的单独的100-mL三颈圆底烧瓶加入4-叔丁基-N,N-二乙基苯甲酰胺(18.6g,79.8mmol)和THF(50mL)。将溶液冷却至–70℃，并在保持温度在–75至–70℃的情况下在8min内导入到TMEDA/s-BuLi的冷(–75℃)溶液中。完成加入后，在–70℃搅拌反应20min。此后，在保持温度低于–70℃的情况下在2min内滴加DMF(17.9g,245mmol)。在–70℃搅拌70min，然后除去冷却浴并使反应在20min内温热至–30℃。此后，加入4M盐酸(80mL,320mmol)(溶液pH 6.5)。搅拌30min后，分离有机层并减压浓缩至干燥。然后将残余物在己烷(200mL)和水(200mL)之间分配。分离有机层，用硫酸钠干燥，并过滤。减压浓缩滤液，并通过柱色谱纯化所得残余物，得到88％收率(18.3g)的103a，为黄色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.0(s,1H),7.93(s,1H),7.71(d,1H,J＝6.3Hz),7.28(d,1H,J＝6.4Hz),3.62(m,2H),3.18(m,2H),1.36(s,9H),1.31(t,3H,J＝7.2Hz),1.07(t,3H,J＝7.1Hz)。
实施例103b 5-叔丁基-2-(二乙基氨基甲酰基)苄基氨基甲酸甲酯103b
向安装了磁搅拌器的25-mL微波小瓶中装入103a(1.00g,3.83mmol)、氨基甲酸甲酯(575mg,7.66mmol)、三氟乙酸(871mg,7.66mmol)、三乙基甲硅烷(888mg,7.66mmol)和乙腈(10mL)。将小瓶加载到Biotage微波中并于130℃加热1.5h。此后，真空浓缩溶液。将所得残余物在二氯甲烷(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)之间分配。用二氯甲烷(3×20mL)萃取水层。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％-60％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到71％收率(858mg)的103b，为无色油：1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.42(s,1H),7.29(m,1H),7.12(d,1H,J＝7.7Hz),5.60(br s,1H),4.27(br s,2H),3.65(s,3H),3.57(q,2H,J＝6.8Hz),3.20(q,2H,J＝6.7Hz),1.31(s,9H),1.26(t,3H,J＝6.7Hz),1.09(t,3H,J＝6.8Hz)；MS(ESI+)m/z 321.2(M+H)。
实施例103c 5-叔丁基异吲哚啉-1-酮103c
向安装了磁搅拌器的25-mL微波小瓶中装入103b(858mg,2.68mmol)、四氢呋喃(5mL)、甲醇(5mL)和2M氢氧化锂水溶液(5mL)。将小瓶加载到Biotage微波中并于110℃加热2.5h。此后，用2M盐酸中和溶液至pH 7，并真空浓缩。将所得残余物在乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)之间分配。用乙酸乙酯(3×20mL)萃取水层。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,50％乙酸乙酯至100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到56％收率(285mg)的103c，为灰白色固体：mp＝132–134℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.80(d,1H,J＝7.8Hz),7.52(m,2H),6.71(br s,1H),4.44(s,2H),1.37(s,9H),MS(ESI+)m/z190.1(M+H)。
实施例103d 2,6-二溴苄基乙酸酯(2d 1,3-二溴-2-(溴甲基)苯103d
用氮气吹扫安装了磁搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的250-mL单颈圆底烧瓶并装入2,6-二溴甲苯(2.50g,10.0mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(1.78g,10.0mmol)和四氯化碳(40mL)。将溶液加热至80℃(油浴温度)，并加入2,2’-偶氮二异丁腈(164mg,1.00mmol)。将所得混合物回流14h。然后，将混合物冷却至室温并过滤。用四氯化碳(2×20mL)洗涤滤饼。用乙酸乙酯(200mL)稀释滤液并用水(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和盐水(40mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩得到定量收率(3.28g)的1,3-二溴-2-(溴甲基)苯，为黄色固体：mp 77–78℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.55(d,2H,J＝8.1Hz),7.07(t,1H,J＝8.1Hz),4.83(s,2H)。用氮气吹扫安装了磁搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的250-mL单颈圆底烧瓶并装入该残余物(3.28g,10.0mmol)、乙酸钾(3.93g,40.0mmol)和DMF(100mL)。在室温下搅拌溶液14h。此后，用水(900mL)稀释反应混合物并用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，得到88％收率(2.70g)的103d，为灰白色固体：mp 62–65℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.57(d,2H,J＝8.0Hz),7.07(t,1H,J＝7.9Hz),5.42(s,2H),2.11(s,3H)；MS(ESI+)m/z 306.9(M+H)。
实施例103e 2-溴-6-(5-叔丁基-1-氧代异吲哚啉-2-基)苄基乙酸酯103e
用氮气吹扫安装了回流冷凝器、磁搅拌器的100-mL三颈圆底烧瓶并装入103c(570mg,3.02mmol)、103d(1.85g,6.04mmol)、碳酸铯(1.96g,6.04mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(266mg,3.02mmol)和1,4-二噁烷(27mL)。鼓入氮气通过所得悬浮液30min，然后加入碘化铜(287mg,1.51mmol)，并于105℃(油浴温度)加热反应混合物14h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释滤液。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到41％收率(555mg)的103e，为灰白色固体：mp 176–178℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.86(d,1H,J＝8.1Hz),7.66(dd,1H,J＝7.9,1.5Hz),7.59(dd,1H,J＝8.1,1.5Hz),7.52(s,1H),7.29(m,2H),5.20(s,2H),4.77(s,2H),1.99(s,3H),1.40(s,9H)；MS(ESI+)m/z 416.1(M+H)。
实施例103f 2-(5-叔丁基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基乙酸酯103f
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL三颈圆底烧瓶中装入103e(555mg,1.34mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.36g,5.35mmol)、乙酸钾(527mg,5.35mmol)和1,4-二噁烷(20mL)。鼓入氮气通过所得悬浮液30min，然后加入XPhos(128mg,0.268mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(123mg,0.134mmol)，并在105℃(油浴温度)下加热反应混合物14h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯(3×20mL)洗涤滤饼。用乙酸乙酯(150mL)和水(40mL)稀释滤液。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩，得到74％收率(444mg)的粗品103f，为黄色油。该材料不经进一步纯化用于下一步骤。
实施例103g(3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇103g
用氮气吹扫安装有机械搅拌器、滴液漏斗和氮气入口的3-L三颈圆底烧瓶，装入3-硝基吡唑-5-羧酸(28.0g,178mmol)和THF(420mL)并使用冰/丙酮浴冷却至–5℃。以维持内部反应温度低于5℃速度加入硼烷-THF络合物(1.0M,535mL,535mmol)。完成添加后，除去冷却浴并在室温下搅拌反应18h。此后，使用冰/丙酮浴将反应冷却至-5℃，加入水(70mL)和4N盐酸(70mL)，并于回流下搅拌反应1h，以用吡唑破坏硼烷络合物。将反应冷却至室温并减压浓缩到约30mL的体积。加入乙酸乙酯(175mL)并搅拌混合物15min。分离水层并用乙酸乙酯(4×200mL)萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液(2×50mL)、盐水(50mL)洗涤合并的有机层并用硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，得到(3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇103g，收率94％(24.0g)，为浅黄色固体：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.90(br s,1H),6.87(s,1H),5.58(t,1H,J＝5.4Hz),4.53(d,2H,J＝5.1Hz)；MS(ESI+)m/z 144.0(M+H)。
实施例103h(1-(2-溴乙基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇103h
用氮气吹扫安装了机械搅拌器和温度调节器的1-L三颈圆底烧瓶并装入(3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇103g(25.0g,175mmol)、DMF(250mL)和碳酸铯(70.0g,215mmol)，于104℃加热5min。然后使用冰/丙酮浴将反应混合物冷却至0℃，并分批加入二溴乙烷(329g,1.75mol)(无放热)。于0℃搅拌反应1h，然后在室温下搅拌4h。此后，缓慢地加入KH2PO4(40g)在水(400mL)中的溶液。在室温下搅拌反应混合物30min。加入乙酸乙酯(450mL)，分离水层并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，并过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，得到86％收率(37.5g)的粗品(1-(2-溴乙基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇(103h)，为橙色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.85(s,1H),4.82(d,2H,J＝5.4Hz),4.66(t,2H,J＝6.3Hz),3.83(t,2H,J＝6.3Hz)；MS(ESI+)m/z 249.9(M+H)。
实施例103i 1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑103i
用氮气吹扫安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的500-mL三颈圆底烧瓶并装入(1-(2-溴乙基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)甲醇103h(37.0g,148mmol)和氯仿(160mL)。使用冰/丙酮浴将反应冷却至–5℃并滴加三溴化磷(40.0g,148mmol)。除去冷却浴并在回流下搅拌反应2h。此后，将反应冷却至–5℃，并加入饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)，直至达到pH8.5。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取混合物，并用饱和碳酸钠水溶液(2×50mL)、盐水(75mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，并过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，得到黄色残余物，在微热下将其溶于二氯甲烷(60mL)。加入己烷(约20mL)，溶液变浑浊。加热混合物直至形成固体沉淀，加入二氯甲烷(9mL)，溶液变澄清。使溶液冷却至室温，在4h后通过真空过滤收集所得的晶体。用冰冷的二氯甲烷:己烷的1:2混合物洗涤滤饼(2×20mL)，得到1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑103i(19.7g)。蒸发合并的滤液，再进行该程序，得到额外9.70g1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑103i。合并固体并在高真空下干燥18h，得到57％收率(26.0g)的1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑103i，为白色晶体：mp 95–97℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.93(s,1H),4.63(t,2H,J＝6.0Hz),4.54(s,2H),3.86(t,2H,J＝6.0Hz)。
实施例103j 5-甲基-2-硝基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪103j
向安装了磁搅拌器和氮气入口的1-L单颈圆底烧瓶中装入THF(350mL)、1-(2-溴乙基)-5-(溴甲基)-3-硝基-1H-吡唑103i(10.0g,32.2mmol)、2M甲胺THF溶液(113mL,225mmol)，并在室温下搅拌72h。此后，减压浓缩反应至干燥，并用乙酸乙酯(75mL)和10％碳酸钾水溶液(75mL)搅拌所得固体。分离水层并用乙酸乙酯(2×75mL)萃取。用10％碳酸钾水溶液(75mL)、然后用盐水(50mL)洗涤合并的有机萃取液，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液，得到5-甲基-2-硝基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪103j，收率97％(5.70g)，为黄色固体：1H NMR(300MHz,CDCl3)d 6.62(s,1H),4.28(t,2H,J＝5.4Hz),3.67(s,2H),2.95(t,2H,J＝5.4Hz),2.52(s,3H)；MS(ESI+)m/z 183.0(M+H)。
实施例103k 5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺103k
用氮气吹扫Parr反应器瓶并装入10％炭载钯(含水50％,800mg干重)和5-甲基-2-硝基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪103j(4.00g,2.20mmol)在乙醇(160mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽真空，充入氢气至45psi的压力并摇晃2h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite521(1.0g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×75mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液至干燥，得到99％收率的5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-胺103k(3.31g)，为橙色固体：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.34(s,1H),3.98(t,2H,J＝5.4Hz),3.52(s,3H),2.84(t,2H,J＝5.7Hz),2.45(s,3H)；MS(ESI+)m/z 153.1(M+H)。
实施例103l 5-溴-1-甲基-3-(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基氨基)吡啶-2(1H)-酮103l
向安装了磁搅拌器和螺旋帽的15-mL耐压管中装入103k(100mg,0.657mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(351mg,1.30mmol)、碳酸铯(644mg,1.98mmol)和1,4-二噁烷(5mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入Xantphos(33mg,0.057mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(31mg,0.034mmol)；将管密封，并在130℃浴中加热反应混合物16h。然后，将混合物冷却到室温，并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到91％收率(204mg)的103i，为灰白色固体：mp 174–176℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),8.00(d,1H,J＝2.6Hz),7.37(d,1H,J＝2.6Hz),5.86(s,1H),3.99(t,2H,J＝5.0Hz),3.49(m,5H),2.81(t,2H,J＝5.4Hz),2.36(s,3H)；MS(ESI+)m/z 338.1(M+H)。
实施例103 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮103
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的25-mL三颈圆底烧瓶中装入103f(444mg,0.99mmol)、103l(258mg,0.76mmol)、碳酸钠(242mg,2.29mmol)、DMF(5mL)、水(2.5mL)和1,4-二噁烷(8mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(89mg,0.076mmol)，并在回流下加热反应混合物14h。然后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(100mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×25mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到50％收率(210mg)的103，为灰白色固体：146–147℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.11(s,1H),7.98(d,1H,J＝2.3Hz),7.72(m,2H),7.61(m,1H),7.48(m,1H),7.41(m,1H),7.35(m,1H),7.23(d,1H,J＝2.2Hz),5.87(s,1H),4.93(s,2H),4.88(t,1H,J＝5.1Hz),4.34(d,2H,J＝5.0Hz),3.91(t,2H,J＝4.9Hz),3.57(s,3H),3.48(s,2H),2.77(t,2H,J＝5.1Hz),2.34(s,3H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 553.2(M+H)。
实施例104
实施例104a 3-(4-硝基苯基)-5,6-二氢吡嗪-2(1H)-酮104a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶，装入4-硝基苯基丙酮酸乙酯(223mg,1.00mmol)、3片分子筛(4-8目,3A)和无水甲醇(10mL)。用冰浴将所得溶液冷却至0℃，并滴加1b(63mg,1.05mmol)。完成加入后，在室温下搅拌反应1h。然后，过滤所得悬浮液并用冷甲醇(2×5mL)洗涤滤饼。将滤饼在烘箱中于50℃真空干燥过夜，得到104a，收率89％(196mg)，为白色固体：mp 191–192℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.63(bs,1H),8.26(d,2H,J＝8.0Hz),8.09(d,2H,J＝8.0Hz),3.88(t,2H,J＝6.5Hz),3.37(m,2H)；MS(ESI+)m/z 220(M+H)。
实施例104b 4-甲基-3-(4-硝基苯基)哌嗪-2-酮104b
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的10-mL单颈圆底烧瓶，装入104a(196mg,0.89mmol)、37％甲醛水溶液(35mg,1.16mmol)和无水甲醇(3mL)。加入氰基硼氢化钠(169mg,2.68mmol)和无水氯化锌(183mg,1.34mmol)在无水甲醇(3mL)中的溶液，并在室温下搅拌反应1h。然后，加入1N氢氧化钠水溶液(2mL)，并减压蒸发甲醇。用乙酸乙酯(3×25mL)萃取剩余的水溶液。合并有机层，用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂并减压浓缩滤液，得到104b，收率100％(210mg)，为黄色固体：mp 185–186℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.18(d,2H,J＝8.1Hz),8.05(d,1H,J＝3.6Hz),7.63(d,2H,J＝7.8Hz),3.82(s,1H),3.45(m,1H),3.17(m,1H),2.95(m,1H),2.56(m,1H),2.06(s,3H)；MS(ESI+)m/z 236(M+H)。
实施例104c 3-(4-氨基苯基)-4-甲基哌嗪-2-酮104c
用氮气吹扫安装了回流冷凝器和磁搅拌器的25-mL单颈圆底烧瓶并装入104b(210mg,0.89mmol)、乙醇(6mL)、铁粉(-325目,491mg,8.93mmol)和2N盐酸(0.70mL,1.40mmol)，并在回流下加入混合物30min。然后，将反应冷却至室温，并加入粉末化的碳酸钾(3.03g,22.0mmol)。过滤所得悬浮液，并用乙醇(4×10mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到104c，收率100％(185mg)，为白色固体：mp 153–154℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.74(d,1H,J＝2.7Hz),6.90(d,2H,J＝8.4Hz),6.47(d,2H,J＝8.4Hz),4.95(bs,2H),3.45(m,1H),3.42(s,1H),3.14(m,1H),2.89(m,1H),2.44(m,1H),2.02(s,3H)；MS(ESI+)m/z 206(M+H)。
实施例104d 2-(4-(6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基氨基)苯基)-1-甲基-3-氧代哌嗪104d
向安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的50-mL单颈圆底烧瓶中装入3-(4-氨基苯基)-4-甲基哌嗪-2-酮104c(590mg,2.88mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(770mg,2.88mmol)、碳酸铯(2.06g,6.34mmol)和1,4-二噁烷(20mL)向所得溶液通入氮气30分钟，然后加入Xantphos(166mg,0.288mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(47mg,0.144mmol)，并在回流下加热反应混合物18h。然后，将反应冷却至室温，在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之间分配，过滤，并用乙酸乙酯(2×25mL)洗涤滤饼。分离有机层，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。通过柱色谱纯化残余物，得到104d(850mg,60％)，为橙色泡沫：MS(ESI+)m/z 492.1(M+H)。
实施例104 N-(2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(1-甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-2-甲酰胺104
实施例104 2-叔丁基-5-(2-甲基-3-(4-甲基-6-(4-(1-甲基-3-氧代哌嗪-2-基)苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6(5H)-酮104
向安装了磁搅拌器的5-mL反应管中装入104d(65mg,0.166mmol)、102g(68mg,0.166mmol)、碳酸钠(53mg,0.498mmol)、二噁烷(1.0mL)和水(0.2mL)。用氮气将混合物脱气30min。加入四(三苯基膦)钯(19mg,0.017mmol)，并将管密封。于110℃(浴温)加热16h，然后将反应混合物冷却至室温并浓缩成残余物。通过硅胶柱色谱纯化所得残余物。使用制备型HPLC进一步纯化该物质，得到13％收率(12.5mg)的104，为黄色固体：mp 174–176℃dec；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H),7.91(d,2H,J＝8.5Hz),7.82(d,1H,J＝4.5Hz),7.43(t,2H,J＝8.0Hz),7.34(t,1H,J＝7.8Hz),7.22(s,1H),7.19(d,2H,J＝8.5Hz),7.14(s,1H),4.78(s,2H),3.55(s,3H),3.52(s,1H),3.40(td,1H,J＝11.0,3.5Hz),3.13(m,1H),2.90(dd,1H,J＝6.0,3.0Hz),2.47(m,1H),2.24(s,3H),2.05(s,3H),1.42(s,9H)；MS(ESI+)m/z 597.7(M+H)。
实施例105
实施例105a 5-溴-3-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮105a
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶装入3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.50g,5.62mmol)、1,5-二甲基-3-氨基-1H-吡唑(625mg,5.62mmol)、碳酸铯(5.48g,16.8mmol)和1,4-二噁烷(36mL)。鼓入氮气通过所得溶液30min，然后加入Xantphos(553mg,0.955mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(625mg,0.562mmol)，并在回流下加热反应混合物16h。将反应混合物冷却至室温并滤出所得沉淀。用二氯甲烷(约20mL)洗涤滤饼。加压浓缩所得滤液并通过柱色谱纯化，得到105a(935mg,56％)，为黄色固体：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.84(s,1H),7.31(s,1H),6.86(s,1H),5.65(s,1H),3.71(s,3H),3.57(s,3H),2.23(s,3H)；MS(ESI+)m/z 297.0(M+H)。
实施例105 5-叔丁基-2-(3-(5-(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮105
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL三颈圆底烧瓶中装入103f(556mg,1.20mmol)、105a(300mg,1.00mmol)、碳酸钠(424mg,4.00mmol)、水(4mL)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得悬浮液通入氮气20min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(115mg,0.100mmol)，并在100℃下加热反应混合物4h。然后，将反应混合物冷却至室温并过滤，用甲醇和二氯甲烷的1:10混合物(30mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到棕色残余物。向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的另一100-mL单颈圆底烧瓶中装入以上所得残余物、THF(5mL)、甲醇(5mL)、水(5mL)和氢氧化锂(86.4mg,3.60mmol)。在50℃搅拌混合物2h。然后，减压浓缩反应混合物。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到35％收率(190mg)的105，为白色固体：mp 225–227℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.94(s,2H),7.72(d,1H,J＝7.5Hz),7.71(s,1H),7.61(d,1H,J＝7.5Hz),7.48(t,1H,J＝7.5Hz),7.42(d,1H,J＝7.5Hz),7.36(d,1H,J＝7.5Hz),7.22(s,1H),5.88(s,1H),4.89(s,2H),4.88(t,1H,J＝4.5Hz),4.35(d,2H,J＝4.5Hz),3.57(s,3H),3.56(s,3H),2.17(s,3H),1.36(s,9H)；MS(ESI+)m/z 512.3(M+H)。
实施例106
实施例106a 5-溴-3-(1-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮106a
按照与关于102k所述相同的一般操作，3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.20g,4.50mmol)和1-乙基-3-氨基-1H-吡唑111b(500mg,4.50mmol)的反应得到23％(300mg)收率的106a，为白色固体：mp 165–167℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),8.00(d,1H,J＝2.7Hz),7.54(d,1H,J＝2.4Hz),7.37(d,1H,J＝2.4Hz),6.05(d,1H,J＝2.4Hz),4.03(t,2H,J＝7.2Hz),3.49(s,3H),1.36(t,3H,J＝7.2Hz)；MS(ESI+)m/z 298.1(M+H)。
实施例106 5-叔丁基-2-(3-(5-(1-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮106
按照与关于105所述相同的一般操作，103f(556mg,1.20mmol)和106a(300mg,1.00mmol)的反应得到20％(101mg)收率的106，为白色固体：mp 175–177℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07(s,1H),8.01(d,1H,J＝2.0Hz),7.73(d,1H,J＝7.5Hz),7.71(s,1H),7.62(dd,1H,J＝8.0,1.0Hz),7.52(d,1H,J＝2.5Hz),7.49(t,1H,J＝7.5Hz),7.42(dd,1H,J＝7.5,1.0Hz),7.36(dd,1H,J＝7.5,1.0Hz),7.25(d,1H,J＝2.0Hz),6.06(d,1H,J＝2.0Hz),4.94(s,2H),4.89(t,1H,J＝5.0Hz),4.35(d,2H,J＝5.0Hz),3.98(q,2H,J＝7.5Hz),3.58(s,3H),1.37(s,9H),1.31(t,3H,J＝7.5Hz)；MS(ESI+)m/z 512.3(M+H)。
实施例107
实施例107a 5-溴-1-甲基-3-(嘧啶-4-基氨基)吡啶-2(1H)-酮107a
向安装了磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶装入3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.00g,21.0mmol)、2-氨基嘧啶(5.61g,21.0mmol)、碳酸铯(13.7g,42.1mmol)、DMF(5mL)和1,4-二噁烷(70mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入Xantphos(1.10g,1.89mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(963mg,1.05mmol)。将回流冷凝器连接烧瓶，并于100℃加热反应混合物4h。然后，将混合物冷却至室温并用90:10二氯甲烷/甲醇(150mL)和水(100mL)稀释混合物，并分离各层。用90:10二氯甲烷/甲醇(50mL)萃取水层，并用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，并将所得残余物通过快速柱色谱(硅胶,90:10二氯甲烷/甲醇)纯化，得到107a，收率58％(3.42g)，为无定形的浅绿色固体：mp 217–219℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.29(s,1H),8.77(s,1H),8.72(d,J＝2.5Hz,1H),8.36(d,J＝6.0Hz,1H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),7.37(dd,J＝5.5,1.0Hz,1H),3.53(s,3H)；δMS(ESI+)m/z 281.0(M+H)。
实施例107 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮107
使用与实施例105相同的一般操作，107a(250mg,0.889mmol)和103f(495mg,1.07mmol)的反应得到107，收率38％(166mg)，为无定形的灰白色固体：mp 216–218℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.65(s,1H),8.30(d,J＝5.5Hz,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,2H),7.62(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.54(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(t,J＝7.5Hz,1H),7.46(dd,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.40(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),7.32(dd,J＝6.0,1.0Hz,1H),4.95(s,2H),4.92(t,J＝4.5Hz,1H),4.34(d,J＝5.0Hz,2H),3.61(s,3H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 496.2(M+H)。
实施例108
实施例108a 5-溴-1-甲基-3-(4-吗啉代苯基氨基)吡嗪-2(1H)-酮108a
使用与实施例107a相同的一般操作，使3,5-二溴-1-甲基哌嗪-2(1H)-酮(2.21g)与4-吗啉代苯胺(1.48g)反应，从而得到108a，为灰色固体，粗品收率115％(3.46g)：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),7.87(d,2H,J＝8.0Hz),7.31(s,1H),7.21(m,2H),3.83(m,4H),3.43(s,3H),3.27(m,4H)；MS(ESI+)m/z 365(M+H)。该物质包含18wt％的DL-10-樟脑磺酸。校正收率2.83g(94％)。
实施例108 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(4-甲基-6-(4-吗啉代苯基氨基)-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)异吲哚啉-1-酮108
使用与实施例105相同的一般操作，108a(296mg,0.810mmol)和103f(413mg,0.891mmol)的反应得到108，收率47％(205mg)，为无定形的黄色固体：mp 225–227℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.08(s,1H),7.83(d,J＝9.0Hz,2H),7.73(d,J＝8.5Hz,2H),7.62(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.58(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.50(t,J＝7.5Hz,1H),7.42(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.34(s,1H),6.89(d,J＝9.0Hz,2H),4.92(s,2H),4.83(t,J＝5.0Hz,1H),4.43(d,J＝5.0Hz,2H),3.72(t,J＝5.5Hz,4H),3.54(s,3H),3.03(t,J＝5.5Hz,4H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 580.3(M+H)。
实施例109
实施例109a 1-环丙基-4-硝基-1H-吡唑109a
用氮气吹扫安装了回流冷凝器和磁搅拌器的100-mL三颈圆底烧瓶并装入4-硝基吡唑(500mg,4.42mmol)、环丙基硼酸(760mg,8.84mmol)、碳酸钠(937mg,8.84mmol)、2,2’-联吡啶(690mg,4.42mmol)和二氯乙烷(45mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入乙酸铜(II)(802mg,4.42mmol)，并于70℃(油浴温度)加热反应混合物6h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释滤液。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到37％收率(185mg)的109a，为灰白色固体：mp 44–45℃；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ8.18(s,1H),8.03(s,1H),3.67(s,1H),1.16(m,4H)；MS(APCI+)m/z154.1(M+H)。
实施例109b 1-环丙基-1H-吡唑-4-胺109b
用氮气吹扫250-mL Parr反应器瓶并装入10％炭载钯(含水50％,117mg干重)和109a(500mg,6.73mmol)在乙醇(36mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽空，充入氢气至50psi的压力并摇晃2h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite 521(1.00g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×25mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液至干燥，得到94％收率的109b(378mg)，为紫色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.13(s,1H),7.07(s,1H),3.47(m,1H),2.87(br s,2H),0.96(m,4H)；MS(ESI+)m/z 124.1(M+H)。
实施例109c 5-溴-3-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮109c
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL三颈圆底烧瓶中装入109b(378mg,3.07mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(906mg,3.38mmol)、碳酸铯(3.00g,9.21mmol)和1,4-二噁烷(45mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入Xantphos(151mg,0.261)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(141mg,0.154mmol)，并在回流下加热反应混合物3h。此后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×45mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到28％收率(266mg)的109c，为灰白色固体：mp228–230℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.06(s,1H),7.69(s,1H),7.21(s,1H),3.70(m,1H),3.41(s,3H),0.96(m,4H)；MS(ESI+)m/z 310.0(M+H)。
实施例109 5-叔丁基-2-(3-(6-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮109
使用与实施例105相同的一般操作，109c(310mg,1.00mmol)和103f(536mg,1.20mmol)的反应得到35％收率(184mg)的109，为灰白色固体：mp 218–219℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.58(s,1H),8.20(s,1H),7.73(m,3H),7.61(m,2H),7.51(t,1H,J＝7.9Hz),7.43(m,1H),7.31(s,1H),4.95(s,2H),4.90(t,1H,J＝5.0Hz),4.48(d,2H,J＝5.0Hz),3.64(m,1H),3.52(s,3H),1.37(s,9H),0.93(m,4H)；MS(ESI+)m/z 525.2(M+H)。
实施例110
实施例110a 5-溴-3-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮110a
使用与实施例109c相同的一般操作，3-环丙基-5-氨基-1H-吡唑(500mg,4.06mmol)和3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.08g,4.06mmol)的反应得到21％收率(260mg)的110a，为灰白色固体：mp 203–204℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.20(s,1H),8.02(d,1H,J＝2.5Hz),7.34(d,1H,J＝2.5Hz),5.77(d,1H,J＝2.1Hz),3.48(s,3H),1.84(m,1H),0.90(m,4H),0.63(m,4H)；MS(ESI+)m/z 309.0(M+H)。
实施例110 5-叔丁基-2-(3-(5-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮110
使用与实施例105相同的一般操作，110a(260mg,0.841mmol)和103f(429mg,0.926mmol)的反应得到33％收率(144mg)的110，为灰白色固体：mp 178–180℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.76(d,1H,J＝2.0Hz),7.98(d,1H,J＝2.0Hz),7.92(s,1H),7.71(m,2H),7.61(dd,1H,J＝7.9,1.6Hz),7.48(m,1H),7.42(dd,1H,J＝7.6,1.1Hz),7.35(dd,1H,J＝7.6,1.1Hz),7.23(d,1H,J＝2.1Hz),5.79(d,1H,J＝2.2Hz),4.93(s,2H),4.90(t,1H,J＝4.9Hz),4.35(d,2H,J＝4.6Hz),3.57(s,3H),1.81(m,1H),1.37(s,9H),0.89(m,2H),0.64(m,2H)；MS(ESI+)m/z 524.2(M+H)。
实施例111
实施例111a 1-乙基-4-硝基-1H-吡唑111a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入4-硝基吡唑(3.00g,26.5mmol)和DMF(50mL)。使用冰浴将混合物冷却至0℃。分批加入氢化钠(在矿物油中的60重量％分散体,1.17g,29.2mmol)。完成加入后，在0℃搅拌混合物30min。然后，在15min内加入碘乙烷(6.21g,39.8mmol)。完成加入后，在0℃搅拌混合物30min，然后在室温下搅拌3h。此后，真空浓缩混合物。用水(200mL)稀释残余物。过滤所得固体，并在烘箱中干燥滤饼，得到51％(1.90g)的111a，为灰白色固体。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至50％己烷/乙酸乙酯)纯化，得到额外的49％收率(1.84g)，总定量收率(3.74g)的111a，为灰白色固体：mp 54–55℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.14(s,1H),8.07(s,1H),4.22(q,2H,J＝7.2Hz),3.41(s,3H),1.56(s,3H,J＝7.2Hz)；MS(ESI+)m/z 142.0(M+H)。
实施例111b 1-乙基-1H-吡唑-4-胺111b
用氮气吹扫250-mL Parr反应器瓶并装入10％炭载钯(含水50％,468mg干重)和111a(1.90g,13.5mmol)在乙醇(100mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽空，充入氢气至50psi的压力并摇晃3h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite 521(1.00g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×25mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液至干燥，得到定量收率的111b(1.50g)，为紫色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.15(s,1H),7.02(s,1H),4.05(q,2H,J＝7.2Hz),2.88(br s,2H),1.43(t,3H,J＝7.2Hz)；MS(ESI+)m/z 112.1(M+H)。
实施例111c 5-溴-3-(1-乙基-1H-吡唑-4-基氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮111c
使用与实施例102k相同的一般操作，111b(500mg,4.50mmol)和3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(1.33g,4.95mmol)的反应得到75％收率(1.01g)的111c，为灰白色固体：mp237–239℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.02(s,1H),7.73(s,1H),7.20(s,1H),4.11(q,2H,J＝7.5Hz),3.41(s,3H),1.34(t,3H,J＝7.3Hz)；MS(ESI+)m/z 298.0(M+H)。
实施例111 5-叔丁基-2-(3-(6-(1-乙基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮111
使用与实施例105相同的一般操作，111c(253mg,0.85mmol)和103f(473mg,1.02mmol)的反应得到48％收率(210mg)的111，为灰白色固体：mp 138–140℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),8.17(s,1H),7.72(m,3H),7.61(m,2H),7.51(t,1H,J＝7.6Hz),7.43(m,1H),7.31(s,1H),4.94(s,2H),4.88(t,1H,J＝5.0Hz),4.49(d,2H,J＝5.0Hz),4.06(q,2H,J＝7.1Hz),3.52(s,3H),1.37(s,9H),1.33(t,3H,J＝7.2Hz)；MS(ESI+)m/z513.2(M+H)。
实施例112
实施例112a 5-溴-1-甲基-3-(吡啶-3-基氨基)吡嗪-2(1H)-酮112a
向安装了磁搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入THF(15mL)、3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(1.00g,3.73mmol)、3-氨基吡啶(351mg,3.73mmol)和叔丁醇钠(789mg,8.21mmol)。向所得溶液通入氮气30min，然后加入Pd2Br2(t-Bu3P)2(29mg,0.037mmol)，并在室温下搅拌反应混合物2.5h。然后，将反应在乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)之间分配并过滤。分离水层并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。将所得残余物通过柱色谱纯化，得到35％收率(370mg)的112a，为棕色固体：mp>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),9.08(d,1H,J＝2.5Hz),8.32(m,1H),8.24(dd,1H,J＝5.0,1.5Hz),7.40(s,1H),7.36(dd,1H,J＝8.5,4.5Hz),3.45(s,3H)；MS(APCI+)m/z 281.0(M+H)。
实施例112 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(4-甲基-5-氧代-6-(吡啶-3-基氨基)-4,5-二氢吡嗪-2-基)苯基)异吲哚啉-1-酮112
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入103f(298mg,0.643mmol)、112a(150mg,0.536mmol)、碳酸钠(170mg,1.61mmol)、1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)。用氮气将混合物脱气30min。加入四(三苯基膦)钯(62mg,0.054mmol)。于100℃加热3h，然后将反应混合物冷却至室温并在水(40mL)和二氯甲烷(100mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×50mL)萃取水层。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物溶于甲醇(5mL)的混合物并加入碳酸钾(500mg,3.62mmol)。在室温下搅拌2h，然后将反应混合物在水(20mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×20mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到112，收率27％(70mg)，为灰白色固体：mp 149–150℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),9.14(d,1H,J＝2.0Hz),8.44(m,1H),8.18(dd,1H,J＝5.0,1.5Hz),7.73–7.71(m,2H),7.63–7.59(m,2H),7.52(t,1H,J＝8.0Hz),7.48(s,1H),7.44(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.30(dd,1H,J＝7.5,4.5Hz),4.93(s,2H),4.88(t,1H,J＝5.0Hz),4.44(d,2H,J＝5.0Hz),3.56(s,3H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 496.2(M+H)。
实施例113
实施例113a 5-溴-1-甲基-3-(吡啶-2-基氨基)吡啶-2(1H)-酮113a
向安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的100-mL单颈圆底烧瓶中装入3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(936mg,3.51mmol)、2-氨基嘧啶(300mg,3.19mmol)、碳酸铯(3.11g,9.57mmol)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得溶液通入氮气20分钟，然后加入Xantphos(184mg,0.319mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(146mg,0.160mmol)，并在100℃下加热反应混合物3h。然后，将反应冷却到室温，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到42％收率(376mg)的1113a，为灰白色固体：mp 153–154℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),8.69(d,1H,J＝2.4Hz),8.26(dd,1H,J＝5.4,1.5Hz),7.61(m,1H),7.54(d,1H,J＝2.4Hz),7.33(d,1H,J＝5.4Hz),6.86(m,1H),3.45(s,3H)。
实施例113 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(吡啶-2-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮113
按照与关于105的制备所述相同的一般操作，103f(298mg,0.643mmol)和113a(150mg,0.536mmol)的反应得到34％收率(90mg)的113，为白色固体：mp 138–139℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.68(d,1H,J＝2.0Hz),8.58(s,1H),8.17(m,1H),7.73–7.71(m,2H),7.62–7.56(m,2H),7.50(t,1H,J＝7.5Hz),7.44(d,1H,J＝7.5Hz),7.39–7.37(m,2H),7.28(d,1H,J＝7.5Hz),6.78(dd,1H,J＝6.5,5.0Hz),4.94(s,2H),4.89(t,1H,J＝4.5Hz),4.34(d,2H,J＝4.5Hz),3.60(s,3H),1.65(s,9H)；MS(ESI+)m/z 495.2(M+H)。
实施例114
实施例114a 1-溴-2-(溴甲基)-3-硝基苯114a
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶中装入1-溴-2-甲基-3-硝基苯(6.86g,31.8mmol)和四氯化碳(40mL)，并加热至80℃。加入N-溴代琥珀酰亚胺(6.96g,39.1mmol)和2,2’-偶氮二(2-甲基丙腈)(522mg,3.18mmol)，并于80℃搅拌反应混合物16h。然后，将反应混合物冷却至室温并过滤，用二氯甲烷(20mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到粗品114a(9.64g,103％粗品收率)，为黄色油，将其直接用于下一步骤：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.89–7.86(m,2H),7.35(t,1H,J＝8.0Hz),4.89(s,2H)。
实施例114b 2-溴-6-硝基苄基乙酸酯114b
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入以上制备的粗品114a(9.64g,31.8mmol,假设定量收率)、乙酸钾(12.9g,131mmol)和DMF(75mL)。于70℃加热30min，然后将反应混合物冷却至室温并在水(200mL)和乙酸乙酯(400mL)之间分配。分离各层，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到114b，收率62％(5.54g)，为黄色固体：mp 36–37℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(dd,1H,J＝8.0,1.0Hz),7.77(dd,1H,J＝8.0,1.0Hz),7.38(t,1H,J＝8.0Hz),5.46(s,2H),2.06(s,3H)。
实施例114c(2-溴-6-硝基苄氧基)(叔丁基)二甲基甲硅烷114c
向安装了磁搅拌器和氮气入口的150-mL单颈圆底烧瓶中装入114b(11.6g,42.3mmol)在THF(20mL)、乙醇(20mL)和水(20mL)的混合物中的溶液。加入氢氧化锂一水合物(7.00g,167.0mmol)并在室温下搅拌反应1h。然后，将反应混合物在水(200mL)和乙酸乙酯(400mL)之间分配。分离各层，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物溶于无水二氯甲烷(50mL)。加入咪唑(14.4g,68.0mmol)，然后滴加叔丁基二甲基氯甲硅烷(16.0g,106mmol)。室温下搅拌此混合物14h。然后，加入水(200mL)并分离各层。用二氯甲烷(2×200mL)萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到89％收率(13.1g)的114c，为白色半固体：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.67(d,1H,J＝8.5Hz),7.54(d,1H,J＝8.5Hz),7.18(t,1H,J＝8.0Hz),4.96(s,2H),0.80(s,9H),0.007(s,6H)。
实施例114d 3-溴-2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)苯胺114d
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL三颈圆底烧瓶中装入114c(1.00g,2.89mmol)、乙醇(20mL)、铁粉(-325目,1.62g,28.9mmol)、氯化铵(3.09g,57.8mmol)和水(4mL)，并在80℃下加热反应混合物1h。然后，将反应混合物冷却至室温并通过Celite 521垫过滤。用乙醇(3×50mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液。用水(10mL)研磨所得残余物，然后在真空下于45℃干燥至恒重，以定量收率(949mg)得到114d，为黄色固体：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.82(m,2H),6.53(m,1H),4.86(s,2H),4.68(br s,2H),0.79(s,9H),0.00(s,6H)。
实施例114e 3-((3-溴-2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)苯基氨基)甲基)-5-叔丁基噻吩-2-羧酸甲酯114e
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入114d(875mg,3.00mmol)、2-溴甲基-5-叔丁基噻吩-1-羧酸甲酯(949mg,3.00mmol)和乙腈(10mL)。加入碳酸铯(1.95g,6.00mmol)并在40℃下搅拌混合物16h。然后将反应混合物减压浓缩。通过柱色谱纯化所得残余物，得到70％收率(1.10g)的114e，为无色油：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.86(t,1H,J＝8.0Hz),6.82–6.78(m,2H),6.48(d,1H,J＝8.0Hz),4.90(s,2H),4.58(s,2H),3.77(s,3H),1.24(s,9H),0.76(s,9H),0.09(s,6H)。
实施例114f 3-((3-溴-2-(羟基甲基)苯基氨基)甲基)-5-叔丁基噻吩-2-羧酸114f
在安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶中装入114e(1.10g,2.09mmol)、氢氧化锂(201mg,8.36mmol)、THF(10mL)、乙醇(10mL)和水(10mL)。在室温下搅拌2h，然后减压除去溶剂，并用2N盐酸将所得残余物酸化至pH 4。用乙酸乙酯(3×30mL)萃取所得水溶液，合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到114f，收率65％(540mg)，为白色固体：mp 68–69℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.03–6.97(m,2H),6.86(s,1H),6.71(d,1H,J＝8.0Hz),4.94(s,2H),4.60(s,2H),1.35(s,9H)；MS(ESI+)m/z398.0(M+H)。
实施例114g 5-(3-溴-2-(羟基甲基)苯基)-2-叔丁基-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-6(5H)-酮114g
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶并装入114f(540mg,1.36mmol)、三乙胺(275mg,2.72mmol)和无水DMF(10mL)。加入苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP,782mg,1.77mmol)，并在室温下搅拌混合物16h。然后，用水(20mL)稀释反应，并过滤所得悬浮液。将滤饼溶于二氯甲烷(40mL)，用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)和水(10mL)洗涤溶液，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压蒸发溶剂。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到60％收率的114g(305mg)，为白色固体：mp 55–56℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.65(d,1H,J＝8.0Hz),7.25(m,1H),7.20(d,1H,J＝8.0Hz),6.89(s,1H),4.68(s,2H),4.66(s,2H),1.46(s,9H)。
实施例114h 2-溴-6-(2-叔丁基-6-氧代-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-5(6H)-基)苄基乙酸酯114h
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入114g(240mg,0.633mmol)、吡啶(150mg,1.90mmol)和二氯甲烷(10mL)。将溶液冷却至0℃，并加入乙酰氯(75mg,0.950mmol)。然后除去冷却浴，并在室温下搅拌反应混合物1h。然后，将反应混合物在水(5mL)和二氯甲烷(5mL)之间分配，并分离各层。用二氯甲烷(2×10mL)萃取水相，用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)、水(10mL)和盐水(10mL)洗涤合并的有机萃取液。用硫酸钠干燥有机萃取液，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到114h，收率86％(231mg)，为白色固体：mp 172–173℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.63(d,1H,J＝8.0Hz),7.34–7.21(m,2H),6.87(s,1H),5.21(s,2H),4.64(s,2H),2.05(s,3H),1.42(s,9H)。
实施例114i 2-(2-叔丁基-6-氧代-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-5(6H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基乙酸酯114i
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和温度调节器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入114h(310mg,0.735mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(551mg,2.20mmol)、乙酸钾(216mg,2.21mmol)和1,4-二噁烷(5mL)。向所得悬浮液通入氮气流30min。然后加入PddppfCl2·CH2Cl2(54mg,0.074mmol)，并在回流下搅拌反应5h。然后，将混合物冷却至环境温度，在水(25mL)和叔丁基甲基醚(50mL)之间分配并通过Celite 521短柱过滤。分离有机相，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，通过快速色谱法纯化所得残余物，得到77％收率(265mg)的114i，为黄色固体：mp 62–63℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(d,1H,J＝8.0Hz),7.44(t,1H,J＝8.0Hz),7.37(d,1H,J＝8.0Hz),6.86(s,1H),5.33(s,2H),4.62(s,2H),1.96(s,3H),1.45(s,9H),1.33(s,12H)。
实施例114 2-叔丁基-5-(2-(羟基)-3-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-6(5H)-酮114
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入114i(264mg,0.563mmol)、103l(190mg,0.563mmol)、碳酸钠(179mg,1.69mmol)、1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)。用氮气将混合物脱气30min。加入四(三苯基膦)钯(65mg,0.056mmol)。在回流下加热3h，然后将反应混合物冷却至室温并在水(40mL)和二氯甲烷(100mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×50mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物溶于甲醇(5mL)的混合物并加入碳酸钾(500mg,3.62mmol)。在室温下搅拌2h，然后将反应混合物在水(20mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×20mL)萃取水层。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到114，收率18％(57mg)，为灰白色固体：mp 164–165℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),7.97(d,1H,J＝2.5Hz),7.46(t,1H,J＝8.0Hz),7.39(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.34(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.22(d,1H,J＝2.5Hz),7.15(s,1H),5.87(s,1H),4.89(t,1H,J＝4.5Hz),4.84(s,2H),4.34(d,2H,J＝4.5Hz),3.91(t,2H,J＝5.0Hz),3.57(s,3H),3.48(s,2H),2.77(t,2H,J＝5.0Hz),2.36(s,3H),1.42(s,9H)；MS(APCI+)m/z559.4(M+H)。
实施例115
实施例115a 5-溴-3-(1-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮115a
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的250-mL三颈圆底烧瓶中装入109b(444mg,3.61mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1.06g,3.97mmol)、碳酸铯(3.52g,1.08mmol)和1,4-二噁烷(45mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入Xantphos(177mg,0.306)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(165mg,0.180mmol)，并在回流下加热反应混合物3h。此后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。用甲醇(20mL)研磨残余物，得到63％收率(700mg)的115a，为灰白色固体：mp 161–163℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),8.00(d,1H,J＝2.5Hz),7.57(d,1H,J＝2.4Hz),7.38(d,1H,J＝2.5Hz),6.05(d,1H,J＝2.4Hz),3.61(m,1H),3.49(s,1H),0.95(m,4H)；MS(ESI+)m/z309.0(M+H)。
实施例115 5-叔丁基-2-(3-(5-(1-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮115
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的50-mL三颈圆底烧瓶中装入115a(263mg,0.850mmol)、103f(473mg,1.02mmol)、碳酸钠(270mg,2.55mmol)、DMF(5mL)、水(2.5mL)和1,4-二噁烷(8mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(98mg,0.085mmol)，并在回流下加热反应混合物14h。此后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物溶于THF(8mL)、甲醇(4mL)和水(4mL)的混合物中。向所得溶液加入氢氧化锂一水合物(420mg,10.0mmol)。将混合物在室温下搅拌4h，然后真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)之间分配。分离有机层，并用甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到39％收率(175mg)的115，为灰白色固体：mp 173–175℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.10(s,1H),8.08(d,1H,J＝2.5Hz),7.71(m,2H),7.61(dd,1H,J＝7.9,1.5Hz),7.55(d,1H,J＝2.5Hz),7.50(m,1H),7.43(dd,1H,J＝7.9,1.5Hz),7.38(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.25(d,1H,J＝2.1Hz),6.06(d,1H,J＝2.4Hz),4.94(s,2H),4.89(t,1H,J＝4.5Hz),4.35(d,2H,J＝4.5Hz),3.58(s,3H),3.54(m,1H),1.37(s,9H),0.96(m,2H),0.87(m,2H)；MS(ESI+)m/z 524.2(M+H)。
实施例116
实施例116a 1-甲基-3-(嘧啶-4-基氨基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮116a
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入107a(300mg,1.07mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(543mg,2.14mmol)、乙酸钾(315mg,3.21mmol)和1,4-二噁烷(7mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(78mg,0.107mmol)，并在回流下加热反应混合物1h。此后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。用80％(v/v)己烷/乙酸乙酯溶液(20mL)研磨残余物，得到71％收率(250mg)的116a，为灰白色固体：mp 161–163℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),8.70(s,1H),8.58(d,1H,J＝2.4Hz),8.28(d,1H,J＝5.9Hz),7.69(d,1H,J＝1.5Hz),7.26(d,1H,J＝5.9Hz)3.57(s,3H),1.29(s,12H)；MS(ESI+)m/z 329.2(M+H)。
实施例116b 3-甲基噻吩-2-羧酸甲酯116b
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的500-mL单颈圆底烧瓶并装入2-甲基噻吩-1-羧酸(15.0g,105mmol)和甲醇(250mL)。使用冰浴将混合物冷却至0℃。滴加亚硫酰氯(15.5ml,25.1g,211mmol)。完成加入后，除去冰浴并于90℃(油浴温度)下加热反应混合物14h。然后，将混合物冷却到室温，并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(250ml)并用10％碳酸钾水溶液(200mL)洗涤。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至50％己烷/乙酸乙酯)纯化，得到91％收率(15.0g)的116b，为无色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.38(d,1H,J＝5.0Hz),6.91(d,1H,J＝5.1Hz),3.86(s,3H),2.56(s,3H)；MS(ESI+)m/z 156.0(M+H)。
实施例116c 3-(溴甲基)噻吩-2-羧酸甲酯116c
用氮气吹扫安装了磁搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的1-L单颈圆底烧瓶并装入116b(5.00g,32.0mmol)、N-溴代琥珀酰亚胺(5.70g,32.0mmol)和四氯化碳(300mL)。将溶液加热至70℃(油浴温度)，并加入2,2’-偶氮二异丁腈(526mg,3.20mmol)。将所得混合物回流3h。然后，将混合物冷却至室温并过滤。用四氯化碳(2×50mL)洗涤滤饼。用乙酸乙酯(300mL)稀释滤液并用水(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和盐水(40mL)洗涤。用硫酸钠干燥有机层，并减压浓缩，得到定量收率(7.50g)的116c，为无色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.39(d,1H,J＝5.0Hz),7.11(d,1H,J＝5.1Hz),4.85(s,2H),3.83(s,3H)。
实施例116d 3-(氨基甲基)噻吩-2-羧酸甲酯116d
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和氮气入口的2-L单颈圆底烧瓶并装入116c(7.50g,32.0mmol)和7M的氨甲醇溶液(915mL,6.40mol)。在室温下搅拌溶液14h。然后，减压浓缩反应混合物。将残余物溶于水(150mL)并用甲基叔丁基醚(2×25mL)萃取。用氢氧化钠(5.00g)碱化水层并用甲基叔丁基醚(3×150mL)萃取。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩，得到57％收率(3.14g)的116d，为无色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.45(d,1H,J＝5.1Hz),7.14(d,1H,J＝5.1Hz),4.11(s,2H),3.88(s,3H),1.72(br s,2H)；MS(ESI+)m/z 172.0(M+H)。该物质不经进一步纯化加以使用。
实施例116e 4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6(5H)-酮116e
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入116d(5.00g,29.2mmol)和THF(150mL)。滴加二(三甲基铝)-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷络合物(10.0g,39.1mmol)。将混合物于60℃加热14h。然后，将混合物冷却至0℃。滴加4M盐酸(60mL)，并过滤混合物。分离有机层，并用甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(3×150mL)萃取水层。用甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(3×150mL)洗涤滤饼。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到45％收率(1.87g)的116e，为灰白色固体：mp 104–105℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.08(s,1H),6.42(br s,1H),4.37(s,2H)；MS(ESI+)m/z 140.0(M+H)。
实施例116f 2-溴-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6(5H)-酮116f
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的250-mL单颈圆底烧瓶并装入116e(1.87g,13.5mmol)、二氯甲烷(10mL)、乙酸(30mL)。将混合物冷却至0℃。滴加溴(2.30g,14.8mmol)。完成加入后，在0℃搅拌混合物3h，然后在室温下搅拌48h。然后，将混合物在饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(100mL)之间分配。分离各层，并用甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(3×100mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到34％收率(1.01g)的116f，为灰白色固体：mp 96–97℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.09(s,1H),6.57(brs,1H),4.37(s,2H)；MS(ESI+)m/z 217.9(M+H)。
实施例116g 2-环丙基-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-6(5H)-酮116g
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入116f(900mg,4.12mmol)、环丙基三氟硼酸钾(733mg,4.95mmol)、碳酸铯(4.03g,12.4mmol)、甲苯(18mL)、水(1mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入乙酸钯(II)(279mg,0.412mmol)和正丁基二-1-金刚烷基膦(222mg,0.618mmol)，并在100℃下加热反应混合物14h。此后，将混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至5％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到35％收率(254mg)的116g，为灰白色固体：mp 109–110℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.72(s,1H),6.08(br s,1H),4.28(s,2H),2.16(m,1H),1.09(m,2H),0.84(m,1H)；MS(ESI+)m/z 180.1(M+H)。
实施例116h 2-溴-6-(2-环丙基-6-氧代-4H-噻吩并[2,3-c]吡咯-5(6H)-基)苄基乙酸酯116h
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入116h(254mg,1.42mmol)、2l(1.75g,2.84mmol)、碳酸铯(1.16g,3.55mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(187mg,4.59mmol)和1,4-二噁烷(10mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入碘化铜(I)(135mg,0.710mmol)，并于105℃(油浴温度)加热反应混合物14h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯(100mL)和水(20mL)稀释滤液。分离有机层，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，得到22％收率(124mg)的116h，为无色油：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.62(m,1H),7.27(m,2H),6.77(s,1H),5.21(s,2H),4.62(s,2H),2.18(m,1H),2.00(s,3H),1.12(m,2H),0.85(m,2H)；MS(ESI+)m/z 406.0(M+H)。
实施例116 2-环丙基-5-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)-4H-噻吩并[3,2-c]吡咯-6(5H)-酮116
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的50-mL三颈圆底烧瓶中装入116h(124mg,0.300mmol)、116a(100mg,0.300mmol)、碳酸钠(95mg,0.900mmol)、DMF(2.5mL)、水(1.2mL)和1,4-二噁烷(4mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(35mg,0.003mmol)，并在回流下加热反应混合物14h。然后，将混合物冷却至室温，并加入甲醇(2mL)、水(2mL)和氢氧化锂一水合物(42mg,1.00mmol)。将混合物在室温下搅拌4h，然后真空浓缩。将残余物在乙酸乙酯(150mL)和水(30mL)之间分配。分离有机层，并用甲醇在二氯甲烷中的20％(v/v)溶液(3×150mL)萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱(硅胶,0％至10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到22％收率(32mg)的116，为灰白色固体：mp 140–141℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),8.70(d,1H,J＝1.1Hz),8.64(s,1H),8.29(d,1H,J＝5.8Hz),7.52(d,1H,J＝2.5Hz),7.48(m,1H),7.43(m,1H),7.38(m,1H),7.31(dd,1H,J＝5.9,1.1Hz),7.04(s,1H),4.91(t,1H,J＝5.0Hz),4.83(s,2H),4.34(d,2H,J＝5.0Hz),3.60(s,3H),2.29(m,1H),1.12(m,2H),0.82(m,2H)；MS(ESI+)m/z 486.2(M+H)。
实施例117
实施例117a 3-(6-氯吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯117a
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL圆底烧瓶中装入锌(2.54g,38.9mmol)、DMF(32mL)和二溴甲烷(736mg,4.24mmol)。在70℃下搅拌10min，然后将反应混合物冷却至室温，并加入氯三甲基甲硅烷(423mg,3.89mmol)。在室温下搅拌所得混合物30min，并加入1-(叔丁氧羰基)-3-碘氮杂环丁烷(9.31g,38.9mmol)在DMF(32mL)中的溶液。在40℃下搅拌1h，然后加入2-氯-4-碘吡啶(10.0g,35.3mmol)在DMF(16mL)中的溶液，然后加入(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.62g,1.77mmol)和三(2-呋喃基)膦(820mg,3.53mmol)在DMF(16mL)中的溶液。在70℃下搅拌16，然后将反应混合物在饱和氯化铵水溶液(200mL)和乙醚(200mL)之间分配。分离各层，并用乙醚(200mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，并过滤。减压浓缩滤液。将所得残余物通过柱色谱纯化，得到54％收率(5.42g)的117a，为黄色油：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.29(d,1H,J＝2.5Hz),7.70(dd,1H,J＝8.5,2.5Hz),7.35(d,1H,J＝8.5Hz),4.37(t,2H,J＝8.5Hz),3.91(dd,2H,J＝8.5,4.5Hz),3.73(m,1H),1.46(s,9H)；MS(ESI+)m/z 269.0(M+H)。
实施例117b 3-(6-(二苯基亚甲基氨基)吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯117b
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的500-mL圆底烧瓶中装入117a(2.00g,7.46mmol)、二苯甲酮亚胺(1.62g,8.96mmol)、叔丁醇钠(1.00g,10.4mmol)、(二亚苄基丙酮)二钯(0)(340mg,0.373mmol)和rac-2,2’-二(二苯基膦基)-1,1’-联萘(700mg,1.12mmol)，并在100℃下加热反应3h。然后，将反应冷却到室温并减压浓缩。将所得油通过柱色谱纯化，得到79％收率(2.44g)的117b，为棕色固体：mp 104–105℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.20(d,1H,J＝2.0Hz),7.85(br s,2H),7.52(br s,1H),7.44(br s,2H),7.47(dd,1H,J＝8.5,2.0Hz),7.17(br s,5H),6.61(d,1H,J＝8.5Hz),4.30(t,2H,J＝8.5Hz),3.86(dd,2H,J＝8.5,4.5Hz),3.62(m,1H),1.45(s,9H)；MS(ESI+)m/z 413.8(M+H)。
实施例117c 3-(6-氨基吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯117c
向安装了磁搅拌器的250-mL圆底烧瓶中装入117b(2.44g,5.91mmol)、甲醇(80mL)、在水中的50％羟基胺(390mg,11.8mmol)，并在室温下搅拌反应4h。然后，浓缩反应混合物，并将所得残余物通过柱色谱纯化，得到86％收率(1.27g)的117c，为黄色固体：mp103–104℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.94(d,1H,J＝2.0Hz),7.49(dd,1H,J＝8.5,2.5Hz),6.53(d,1H,J＝8.5Hz),4.48(br s,2H),4.30(t,2H,J＝8.5Hz),3.88(dd,2H,J＝8.5,4.5Hz),3.62(m,1H),1.44(s,9H)；MS(ESI+)m/z 249.9(M+H)。
实施例117d 3-(6-(5-溴-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基氨基)吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯117d
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶中装入117c(333mg,1.33mmol),、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(350mg,1.33mmol)、碳酸铯(870mg,2.70mmol)和1,4-二噁烷(10mL)。向所得溶液通入氮气30min，然后加入Xantphos(66mg,0.114)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(61mg,0.066mmol)，并在105℃下加热反应混合物3h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用二氯甲烷(2×10mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液。将所得残余物通过柱色谱纯化，得到79％收率(460mg)的117d，为绿色固体：mp 134–136℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.75(s,1H),8.65(s,1H),8.19(s,1H),7.66(dd,1H,J＝8.5,2.0Hz),7.51(s,1H),7.35(d,1H,J＝8.5Hz),4.21(t,2H,J＝8.0Hz),3.81(m,2H),3.51(s,3H),1.40(s,9H)；MS(ESI+)m/z 436.1(M+H)。
实施例117e 3-(6-(5-(3-(5-叔丁基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-(羟基甲基)苯基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基氨基)吡啶-3-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯117e
向安装了磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入117d(455mg,1.04mmol)、103f(680mg,1.50mmol)、碳酸钠(332mg,3.13mmol)、DMF(5mL)、水(2.5mL)和1,4-二噁烷(8mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(121mg,0.104mmol)。将回流冷凝器连接烧瓶，并于120℃(油浴温度)加热反应混合物14h。然后，用90:10二氯甲烷/甲醇(100mL)和水(75mL)稀释混合物，并分离各层。用90:10二氯甲烷/甲醇(2×30mL)萃取水层，并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，并将所得残余物溶于THF(5mL)、水(5mL)和甲醇(5mL)的混合物。加入氢氧化锂一水合物(606mg,14.4mmol)并在室温下搅拌混合物1h。然后，用90:10二氯甲烷/甲醇(150mL)和水(100mL)稀释混合物，并分离各层。用90:10二氯甲烷/甲醇(2×100mL)萃取水层，并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，并通过快速柱色谱纯化所得残余物，得到117e，收率73％(230mg)，为无定形的黄色固体：mp151–152℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H),8.12(s,1H),7.92(s,1H),1.90(d,1H,J＝8.0Hz),7.61(d,1H,J＝8.5Hz),7.55–7.46(m,5H),6.86(d,1H,J＝8.5Hz),4.86(s,2H),4.69(t,1H,J＝6.5Hz),4.42(d,2H,J＝6.5Hz),4.30(t,2H,J＝8.5Hz),3.90(t,2H,J＝8.5Hz),3.71(s,3H),3.48(s,3H),1.46(s,9H),1.41(s,9H)；MS(ESI+)m/z 650.2(M+H)。
实施例117 2-(3-(5-(5-(氮杂环丁烷-3-基)吡啶-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)-5-叔丁基异吲哚啉-1-酮117
向安装了磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶中装入117e(495mg,0.761mmol)、二氯甲烷(3mL)和三氟乙酸(3mL)，并在室温下搅拌混合物3h。然后，浓缩反应混合物，并将所得残余物在10％碳酸氢钾水溶液(10mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(20mL)萃取水相。The organic extracts were combined,dried over sodium sulfateand filtered,and the solvent was removed under reduced pressure.The resultingresidue was purified by column chromatography to afford a 25％yield(104mg)of117as a white solid:mp 185–186℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.54(s,1H),8.10(s,1H),7.71(d,2H,J＝8.5Hz),7.66(d,1H,J＝8.5Hz),7.61(d,1H,J＝8.0Hz),7.49(t,1H,J＝8.0Hz),7.44(d,1H,J＝6.5Hz),7.37(m,2H),7.28(d,1H,J＝8.5Hz),4.94(s,2H),4.88(t,1H,J＝4.5Hz),4.34(d,2H,J＝4.5Hz),3.71(m,3H),3.59(s,3H),3.54(m,2H),1.33(s,9H)；MS(ESI+)m/z 550.2(M+H).
实施例118
实施例118 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)吡啶-2-基氨基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮118
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的150-mL单颈圆底烧瓶，装入117(72mg,0.130mmol)、37％甲醛水溶液(5mg,0.170mmol)和无水甲醇(5mL)。加入氰基硼氢化钠(25mg,0.400mmol)和无水氯化锌(27mg,0.200mmol)在无水甲醇(2.5mL)中的悬浮液，并在室温下搅拌反应5h。然后，浓缩反应混合物，并加入10％碳酸钾水溶液(5mL)。过滤所得悬浮液，并用水(2mL)洗涤滤饼。将滤饼通过柱色谱纯化，得到64％收率(56mg)的118，为白色固体：mp 201–202℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.54(s,1H),8.11(s,1H),7.72(d,2H,J＝8.5Hz),7.64(m,2H),7.49(t,1H,J＝8.0Hz),7.44(d,1H,J＝6.5Hz),7.37(m,2H),7.27(d,1H,J＝8.5Hz),4.94(s,2H),4.88(t,1H,J＝4.5Hz),4.34(d,2H,J＝4.5Hz),3.59(s,3H),3.54(t,2H,J＝7.0Hz),3.45(m,1H),3.01(t,2H,J＝6.5Hz),2.24(s,3H),1.36(s,9H)；MS(ESI+)m/z564.3(M+H)。
实施例119
实施例119a 1-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)-3-硝基-1H-吡唑119a
用氮气吹扫安装了回流冷凝器和磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入3-硝基-1H-吡唑(500mg,4.42mmol)、2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-1-溴乙烷(2.12g,8.85mmol)、碳酸铯(5.76g,17.7mmol)和无水DMF(5mL)。在70℃下加热1h，然后将混合物冷却至室温并用二氯甲烷(50mL)和水(30mL)稀释。分离有机层，并用二氯甲烷(2×30mL)萃取水相。用硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，得到85％收率(1.02g)的119a，为白色固体：mp 76–77℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.52(d,1H,J＝2.5Hz),6.87(d,1H,J＝2.5Hz),4.29(t,2H,J＝5.0Hz),3.98(t,2H,J＝5.0Hz),0.84(s,9H),-0.44(s,6H)。
实施例119b 1-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)-1H-吡唑-3-胺119b
用氮气吹扫250-mL Parr反应器瓶并装入10％炭载钯(含水50％,150mg干重)和119a(1.02g,3.76mmol)在乙醇(20mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽空，充入氢气至50psi的压力并摇晃3h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite 521(1.00g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×25mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液至干燥，得到100％收率(928mg)的119b，为白色固体：mp 54–55℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.25(d,1H,J＝2.0Hz),5.36(d,1H,J＝2.0Hz),4.54(br s,2H),3.90(t,2H,J＝5.5Hz),3.81(t,2H,J＝5.5Hz),0.84(s,9H),-0.35(s,6H)。MS(APCI+)m/z 242.6(M+H)。
实施例119c 5-溴-3-(1-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮119c
使用与关于103l的制备所述相同的一般操作，119b(400mg,1.66mmol)和3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(441mg,1.66mmol)的反应得到76％收率(521mg)的119c，为黄色固体：mp 96–97℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(d,1H,J＝2.5Hz),7.42(s,1H),5.31(d,1H,J＝2.5Hz),6.87(d,1H,J＝2.5Hz),5.84(d,1H,J＝2.5Hz),4.16(t,2H,J＝5.0Hz),3.96(t,2H,J＝5.5Hz),3.58(s,3H),0.85(s,9H),-0.04(s,6H)。MS(APCI+)m/z 427.4(M+H)。
实施例119 2-(3-(6-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲基-5-氧代-4,5-二氢吡嗪-2-基)-2-(羟基甲基)苯基)-3,4,5,6,7,8-六氢苯并噻吩并[2,3-c]吡啶-1(2H)-酮119
使用与关于114的制备所述相同的一般操作，119c(200mg,0.469mmol)和103f(261mg,0.563mmol)的反应得到34％收率(83mg)的119，为灰白色固体：mp 198–199℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07(s,1H),8.00(d,1H,J＝2.5Hz),7.73–7.71(m,2H),7.61(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.50–7.47(m,2H),7.42(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.37(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.24(d,1H,J＝2.5Hz),6.06(d,1H,J＝2.5Hz),4.94(s,2H),4.89(t,1H,J＝5.0Hz),4.78(t,1H,J＝5.0Hz),4.35(d,2H,J＝9.5Hz),3.99(t,2H,J＝5.5Hz),3.67(q,2H,J＝5.5Hz),3.58(s,3H),1.37(s,9H)；MS(ESI+)m/z 528.3(M+H)。
实施例120
实施例120a 1-(6-硝基吡啶-3-基)氮杂环丁烷-3-醇120a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和回流冷凝器的500-mL单晶圆底烧瓶并装入2-硝基-5-溴吡啶(3.00g,14.8mmol)、3-羟基氮杂环丁烷盐酸盐(2.91g,26.56mmol)、N,N-二异丙基乙胺(5.67g,43.91mmol)、四丁基碘化铵(8.17g,22.1mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(15mL)。将该混合物在120℃(浴温)下加热14h。然后，将反应混合物冷却至室温，用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。用盐水(250mL)洗涤合并的有机层，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。使用硅胶柱纯化所得残余物，用在己烷中的80％乙酸乙酯洗脱期望的产物，得到49％收率(1.43g)的120a，为黄色半固体：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.13(d,1H,J＝9.0Hz),7.70(d,1H,J＝2.5Hz),6.91(m,1H),5.83(d,1H,J＝6.0Hz),4.65(m,1H),4.31(m,2H),3.83(m,2H)；MS(ESI+)m/z 196.2(M+H)。
实施例120b 1-(6-氨基吡啶-3-基)氮杂环丁烷-3-醇120b
使用与119b的制备相同的一般操作，还原120a(1.43g,7.32mmol)，得到95％收率(1.15g)的120b，为黄色半固体：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.22(d,1H,J＝2.5Hz),6.69(m,1H),6.35(d,1H,J＝8.0Hz),5.16(s,1H),4.48(m,1H),3.96(m,2H),3.34(m,2H)；MS(ESI+)m/z 166.2(M+H)。
实施例120c 5-溴-3-(5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-2-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮120c
向安装了回流冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的100-mL三颈圆底烧瓶中装入120b(270mg,1.64mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(435mg,1.64mmol)、碳酸铯(1.18g,3.61mmol)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得悬浮液通入氮气30min，然后加入Xantphos(142mg,0.246)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(150mg,0.164mmol)，并在回流下加热反应混合物3h。然后，将混合物冷却至室温并过滤，用二氯甲烷(2×20mL)洗涤滤饼。合并滤液并减压浓缩，并通过柱色谱纯化所得残余物，得到40％收率(217mg)的102c，为黄色油：210℃dec；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,1H,J＝4.0Hz),8.44(s,1H),7.54(d,1H,J＝5.0Hz),7.42(d,1H,J＝5.0Hz),7.20(d,1H,J＝14.5Hz),6.89(dd,1H,J＝14.5,4.0Hz),5.59(d,1H,J＝11.0Hz),4.54(m,1H),4.05(dd,2H,J＝13.0,11.0Hz),3.50–3.44(m,5H)；MS(APCI+)m/z351.6(M+H)。
实施例120 5-叔丁基-2-(3-(5-(5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)吡啶-2-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)异吲哚啉-1-酮120
用氮气吹扫安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入120c(215mg,0.613mmol)、103f(340mg,0.735mmol)、碳酸钠(195mg,1.84mmol)、1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)。用氮气将混合物脱气30min。加入四(三苯基膦)钯(71mg,0.061mmol)。于100℃加热3h，然后将反应混合物冷却至室温并在水(40mL)和二氯甲烷(100mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×50mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物溶于甲醇(5mL)并加入碳酸钾(500mg,3.62mmol)。在室温下搅拌2h，然后将反应混合物在水(20mL)和二氯甲烷(20mL)之间分配。分离各层，并用二氯甲烷(2×20mL)萃取水相。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到120，收率21％(72mg)，为灰白色固体：>250℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),8.25(d,1H,J＝2.0Hz),7.73–7.71(m,2H),7.62(d,1H,J＝8.5Hz),7.51–7.42(m,3H),7.36(d,1H,J＝7.5Hz),7.28(d,1H,J＝2.0Hz),7.17(d,1H,J＝9.0Hz),6.87(dd,1H,J＝9.0,3.0Hz),5.56(d,1H,J＝6.5Hz),4.94(s,2H),4.88(t,1H,J＝5.0Hz),4.54(m,1H),4.33(d,2H,J＝5.0Hz),4.02(t,2H,J＝7.0Hz),3.58(s,3H),3.43(t,2H,J＝7.0Hz),1.36(s,9H)；MS(ESI+)m/z 566.3(M+H)。
实施例121
实施例121a 4-(6-硝基吡啶-3-基)-3-氧杂哌嗪-1-羧酸叔丁酯121a
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的250-mL单颈圆底烧瓶装入2-硝基-5-溴吡啶(1.00g,5.00mmol)、2-氧代-4-(叔丁氧羰基)哌嗪(1.01g,5.00mmol)、碳酸铯(3.58g,11.0mmol)和1,4-二噁烷(40mL)。向所得溶液通入氮气30min，然后加入Xantphos(246mg,0.425)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(230mg,0.250mmol)，并在回流下加热反应混合物6h。将反应混合物冷却至室温，然后加入水(30mL)和乙酸乙酯(150mL)。通过Celite 521床过滤所得混合物。分离滤液的有机层，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥并通过柱色谱纯化，得到96％收率(1.55g)的121a，为琥珀色油：1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.67(d,1H,J＝2.4Hz),8.32(d,1H,J＝8.7Hz),8.15(dd,1H,J＝8.7,2.4Hz),4.33(s,1H),3.89(m,4H),1.48(s,9H)；MS(ESI+)m/z 323.1(M+H)。
实施例121b 4-(6-氨基吡啶-3-基)-3-氧杂哌嗪-1-羧酸叔丁酯121b
用氮气吹扫250-mL Parr反应器瓶并装入10％炭载钯(含水50％,100mg干重)和121a(500mg,1.55mmol)在乙醇(20mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽真空，充入氢气至45psi的压力并摇晃4h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite 521(1.0g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×30mL)洗涤滤饼，并减压浓缩滤液，得到95％收率的121b(430mg)，为琥珀色膜：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.98(d,1H,J＝2.5Hz),7.38(dd,1H,J＝8.5,2.0Hz),6.52(d,1H,J＝8.5Hz),4.54(s,1H),4.26(s,2H),3.78(t,2H,J＝5.5Hz),3.67(t,2H,J＝5.0Hz),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 293.1(M+H)。
实施例121c 4-(6-(5-溴-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基氨基)吡啶-3-基)-3-氧杂哌嗪-1-羧酸叔丁酯121c
向安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的100-mL三颈圆底烧瓶中装入3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(530mg,1.99mmol)、121b(580mg,1.99mmol)、碳酸铯(1.43g,4.40mmol)和1,4-二噁烷(30mL)。向所得混合物通入氮气20分钟，然后加入Xantphos(98.4mg,0.170mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(91.6mg,0.100mmol)，并在回流下加热反应混合物4h。然后，将反应冷却到室温，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到84％收率(802mg)的121c，为黄色固体：mp 130–132℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.68(d,1H,J＝2.5Hz),8.24(d,1H,J＝2.5Hz),7.98(s,1H),7.52(dd,1H,J＝9.0,2.5Hz),7.00(d,1H,J＝2.5Hz),6.82(d,1H,J＝8.5Hz),4.26(s,2H),3.81(m,2H),3.73(m,2H),3.60(s,3H),1.50(s,9H)；MS(ESI+)m/z 478.2(M+H)。
实施例121 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(5-(2-氧代哌嗪-1-基)吡啶-2-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮121
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL三颈圆底烧瓶中装入121c(477mg,1.00mmol)、103f(463mg,1.00mmol)、碳酸钠(424mg,4.00mmol)、水(4mL)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得悬浮液通入氮气20min，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(115mg,0.100mmol)，并在100℃下加热反应混合物4h。然后，将反应混合物冷却至室温并过滤，用甲醇和二氯甲烷的1:10混合物(30mL)洗涤滤饼。减压浓缩滤液，得到棕色残余物。
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶并装入棕色残余物(以上制备的,1.00mmol,假设定量收率)和二氯甲烷(8mL)。加入三氟乙酸(5mL)。在室温下搅拌反应2h。然后，减压蒸发反应混合物。将残余物直接用于下一步骤。
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的另一100-mL单颈圆底烧瓶中装入以上所得残余物、THF(10mL)、乙醇(10mL)、水(10mL)和氢氧化锂(96.0mg,4.00mmol)。在50℃搅拌混合物2h。然后，减压浓缩反应混合物。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到15％收率(80mg)的121，为白色固体：mp 218–220℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.71(s,1H),8.67(d,1H,J＝2.0Hz),8.12(d,1H,J＝3.0Hz),7.71(m,2H),7.60(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.55(dd,1H,J＝9.0,2.5Hz),7.49(t,1H,J＝8.0Hz),7.43(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.41-7.38(m,2H),7.32(d,1H,J＝9.0Hz),4.94(s,2H),4.89(t,1H,J＝5.0Hz),4.35(d,2H,J＝5.0Hz),3.60(s,3H),3.56(t,2H,J＝5.5Hz),3.37(s,2H),2.99(t,2H,J＝5.5Hz),2.76(s,1H),1.36(s,9H)；MS(ESI+)m/z593.3(M+H)。
实施例122
实施例122a 5-溴-1-甲基-3-硝基吡啶-2(1H)-酮122a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的1-L圆底烧瓶并装入5-溴-3-硝基吡啶-2(1H)-酮(25.0g,114mmol)、无水DMF(500mL)和碳酸钾(34.7g,251mmol)，并在环境温度下搅拌悬浮液15min。然后，加入碘甲烷(17.8g,126mmol)，并在室温下搅拌混合物16h。然后用水(500mL)稀释反应混合物并用二氯甲烷(3×500mL)萃取。合并有机层，用10％氯化锂水溶液(300mL)和水(300mL)洗涤并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，然后减压蒸发滤液至干燥。对所得残余物进行快速色谱，用在己烷中的50％至100％乙酸乙酯梯度洗脱，收集包含122a的级分，减压浓缩后得到89％收率(23.6g)的122a，为黄色固体：mp 122–123℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.37(d,1H,J＝2.7Hz),7.26(s,1H),3.68(s,3H)；MS(ESI+)m/z 234(M+H)。
实施例122b 1-甲基-3-硝基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮122b
用氮气吹扫安装了磁搅拌器、回流冷凝器和温度调节器的3-L三颈圆底烧瓶并装入122a(23.6g,102mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(32.2g,127mmol)、乙酸钾(30.0g,306mmol)和1,4-二噁烷(800mL)。向所得悬浮液通入氮气流30min。然后加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(4.17g,5.10mmol)，并于80℃搅拌反应2h。然后，将混合物冷却至环境温度并在40℃下减压蒸发至干燥。将所得黑色固体装入安装了机械搅拌器和回流冷凝器的3-L三颈圆底烧瓶中。加入甲苯(640mL)和硫酸镁(20g)，并在氮气下于90℃加热所得悬浮液15min。通过Cellpure P65热过滤混合物，并用热甲苯(3×45mL)洗涤滤饼。在旋转蒸发器上于40℃蒸发滤液，直至形成稠悬浮液(残余物重97g)。过滤该悬浮液，用滤液从烧瓶壁转移残余物质。用甲苯(15mL)洗涤滤饼并于40℃真空干燥2h，得到73％收率(20.8g)的122b，为黄色固体：1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,1H,J＝2.0Hz),8.34(d,1H,J＝2.0Hz),3.60(s,3H),1.30(s,12H)。
实施例122c 2-(5-叔丁基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-6-(1-甲基-5-硝基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苄基乙酸酯122c
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的100-mL三颈圆底烧瓶并装入560mg,2.00mmol)、103f(830mg,2.00mmol)、碳酸钠(848mg,8.00mmol)、二噁烷(30mL)和水(6mL)。用氮气将该混合物脱气15min。加入四(三苯基膦)钯(231mg,0.200mmol)。于100℃加热5h，然后将反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯(200mL)稀释。用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤所得混合物，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过硅胶快速色谱纯化，得到81％收率(800mg)的粗品122c，其不经进一步纯化用于下一步骤。
实施例122d 2-(5-氨基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-6-(5-叔丁基-1-氧代异吲哚啉-2-基)苄基乙酸酯122d
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的50-mL单颈圆底烧瓶并装入122c(600mg,1.23mmol)、乙酸(10mL)和THF(5mL)。分批加入锌粉(1.56g,20.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。然后，过滤反应混合物，并减压蒸发滤液。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到81％收率(460mg)的122d，为黄色油：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(d,1H,J＝8.0Hz),7.58(d,1H,J＝8.0Hz),7.52(s,1H),7.45(t,1H,J＝8.0Hz),7.28(d,2H,J＝8.0Hz),6.74(d,1H,J＝2.0Hz),6.57(d,1H,J＝2.0Hz),5.08(s,2H),4.78(s,2H),4.37(s,2H),3.60(s,3H),1.85(s,3H),1.40(s,9H)；MS(ESI+)m/z 460.3(M+H)。
实施例122e 3-氯-6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪122e
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的25-mL单颈圆底烧瓶并装入3,6-二氯哒嗪(1.49g,10.0mmol)和N-甲基哌嗪(1.17g,11.7mmol)，并将烧瓶置于加热到100℃油浴中。1.5h后，将烧瓶冷却至室温，压碎滤饼并用乙腈(10mL)研磨。过滤悬浮液，并将滤液与10％碳酸钾水溶液(15mL)混合。用MtBE(2×35mL)萃取所得混合物。合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，并过滤。减压蒸发滤液，得到收率60％(1.27g)的122e，为白色固体：mp 106–107℃；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.20(d,1H,J＝9.5Hz),6.89(d,1H,J＝9.6Hz),3.65(t,4H,J＝5.1Hz),2.53(t,4H,J＝5.1Hz),2.35(s,3H)；MS(ESI+)m/z 213.1(M+H)。
实施例122 5-叔丁基-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-5-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-基氨基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮122
向安装了磁搅拌器、氮气入口和回流冷凝器的100-mL三颈圆底烧瓶中装入122d(550mg,1.19mmol)、122e(255mg,1.19mmol)、碳酸铯(860mg,2.64mmol)和1,4-二噁烷(20mL)。向所得混合物通入氮气20分钟，然后加入Xantphos(59.0mg,0.102mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(55.0mg,0.06mmol)，并在回流下加热反应混合物5h。然后，将反应冷却到室温，过滤并减压浓缩，得到棕色残余物。向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的另一100-mL单颈圆底烧瓶中装入以上所得残余物、THF(10mL)、乙醇(10mL)、水(10mL)和氢氧化锂(115mg,4.80mmol)。在50℃搅拌混合物2h。然后，减压浓缩反应混合物。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到23％收率(165mg)的122，为白色固体：mp 171–172℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.66(d,1H,J＝2.0Hz),8.57(s,1H),7.72(d,1H,J＝8.5Hz),7.71(s,1H),7.61(d,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.54(d,1H,J＝9.5Hz),7.50(t,1H,J＝8.0Hz),7.45(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.38-7.36(m,2H),7.30(d,1H,J＝9.5Hz),4.94(s,2H),4.84(t,1H,J＝5.0Hz),4.34(d,2H,J＝5.0Hz),3.60(s,3H),3.41(t,4H,J＝5.0Hz),2.39(t,4H,J＝5.0Hz),2.20(s,3H),1.36(s,9H)；MS(ESI+)m/z 594.3(M+H)。
实施例123
实施例123a 2-氰基-4-氟苯甲酸甲酯123a
用氮气吹扫安装了磁搅拌器的100-mL单颈圆底烧瓶并装入2-氯-4-氟苯甲酸甲酯(10.0g,53.0mmol)、氰化铜(I)(5.22g,58.3mmol)和2-甲基吡咯烷酮(30mL)。于195℃加热1.5h，然后将反应混合物冷却至室温并倒入水(600mL)中。过滤所得悬浮液，并用水(100mL)洗涤滤饼。然后，向所得固体添加氰化钠(3.00g,61.2mmol)在水(110mL)中的溶液，并在室温下搅拌反应混合物50min。此后，加入乙酸乙酯(500mL)并分离各层。用乙酸乙酯(2×10mL)萃取水相，合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将所得残余物通过快速色谱纯化，得到123a，收率73％(6.99g)，为白色固体。mp 92–93℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.18(dd,1H,J＝9.0,5.5Hz),7.50(dd,1H,J＝8.0,2.5Hz),7.38(m,1H),4.01(s,3H)。
实施例123b 5-氟异吲哚啉-1-酮123b
用氮气吹扫250-mL Parr反应器瓶并装入拉尼镍(4.00g)和123a(2.00g,11.2mmol)在乙醇(20mL)中的溶液。将瓶连接Parr氢化器，抽空，充入氢气至50psi的压力并摇晃16h。此后，抽空氢气，并向瓶中冲入氮气。加入Celite 521(5.00g)，并通过Celite 521垫过滤混合物。用乙醇(2×75mL)洗涤滤饼，并减压浓缩合并的滤液至干燥，得到76％收率的123b(1.29g)，为无色油：1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(dd,1H,J＝8.5,5.5Hz),7.21–7.16(m,2H),7.05(br s,1H),4.56(s,2H)。
实施例123c 5-(二甲基氨基)异吲哚啉-1-酮123c
向500-mL高压弹式反应器中装入123b(2.20g,14.5mmol)、乙醇(30mL)和过量二甲胺(50mL)。将混合物于165℃加热36h。然后，浓缩混合物并将所得残余物通过快速柱色谱(硅胶,98:2乙酸乙酯/三乙胺)纯化，得到81％收率(2.40g)的123c，为黄色固体：
mp 122–124℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.44(d,1H,J＝9.3Hz),6.77(m,2H),4.24(s,2H),2.99(s,6H)。
实施例123d 2-溴-6-(5-(二甲基氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)苄基乙酸酯123d
向安装了磁搅拌器和氮气入口的100-mL单颈圆底烧瓶中装入123c(2.40g,13.6mmol)、102d(8.34g,27.3mmol)、碳酸铯(1.34g,4.10mmol)、N,N’-二甲基乙二胺(181mg,2.05mmol)和1,4-二噁烷(12mL)。鼓入氮气通过所得悬浮液30min，然后加入碘化铜(195mg,1.03mmol)。将回流冷凝器连接烧瓶，并在105℃下加热反应混合物16h。此后，将混合物冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯(150mL)和水(75mL)稀释滤液，并分离各层。用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层，并用盐水(100mL)洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂。减压浓缩滤液，并将所得残余物通过快速柱色谱(硅胶,70:30己烷/乙酸乙酯)纯化，得到48％收率(2.65g)的123d，为白色固体：mp 93–95℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,1H,J＝8.5Hz),7.62(dd,1H,J＝7.5,1.0Hz),7.27(m,2H),6.81(t,1H,J＝6.5Hz),6.68(s,1H),5.21(s,2H),4.69(s,2H),3.09(s,6H),2.00(s,3H)；(ESI+)m/z403.6(M+H)。
实施例123e 2-(5-(二甲基氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苄基乙酸酯123e
使用与关于102g的制备所述相同的一般操作，123d(2.65g,6.59mmol)和双(戊酰)二硼(5.02g,19.8mmol)的反应得到100％收率(3.00g)的123e，为棕色固体：mp 75–76℃；1HNMR(300MHz,CDCl3)δ7.85(dd,1H,J＝4.2,1.8Hz),7.76(d,1H,J＝8.7Hz),7.45(m,2H),6.80(dd,1H,J＝8.7,2.1Hz),6.69(s,1H),5.13(s,2H),4.69(s,2H),3.08(s,6H),1.93(s,3H),1.34(s,12H)。
实施例123 5-(二甲基氨基)-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-5-(5-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基氨基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮123
使用与关于103的制备所述相同的一般操作，123e(450mg,1.00mmol)和103l(260mg,0.800mmol)的反应得到24％收率(130mg)的123，为白色固体：mp 148–150℃；1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.09(s,1H),7.98(d,1H,J＝2.0Hz),7.56(d,1H,J＝8.0Hz),7.47(t,1H,J＝8.0Hz),7.39(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.33(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.24(d,1H,J＝2.0Hz),6.88-6.85(m,2H),5.88(s,1H),4.89(t,1H,J＝5.0Hz),4.85(s,2H),4.31(d,2H,J＝5.0Hz),3.91(t,2H,J＝5.5Hz),3.59(s,3H),3.48(s,2H),3.04(s,6H),2.77(t,2H,J＝5.5Hz),2.34(s,3H)；MS(ESI+)m/z 540.3(M+H)。
实施例124
实施例124 5-(二甲基氨基)-2-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)异吲哚啉-1-酮124
使用与关于104的制备所述相同的一般操作，123e(400mg,0.890mmol)和107a(207mg,0.740mmol)反应，然后水解，得到28％收率(120mg)的124，为白色固体：mp 206–208℃；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),8.73(d,1H,J＝2.0Hz),8.65(s,1H),8.30(d,1H,J＝6.0Hz),7.57(d,1H,J＝8.5Hz),7.55(d,1H,J＝2.5Hz),7.49(t,1H,J＝2.5Hz),7.43(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.37(dd,1H,J＝8.0,1.5Hz),7.31(dd,1H,J＝6.0,1.5Hz),6.88–6.85(m,2H),4.94(t,1H,J＝4.5Hz),4.86(s,2H),4.32(d,2H,J＝4.5Hz),3.61(s,3H),3.04(s,6H)；MS(ESI+)m/z 483.2(M+H)。
实施例125
实施例125a 4-(溴甲基)-2-叔丁基噻唑-5-羧酸甲酯125a
使用与关于102e的制备所述相同的一般操作，4-甲基-2-叔丁基噻唑-5-羧酸甲酯和N-溴代琥珀酰亚胺在四氯化碳中反应得到125a。
实施例125b 2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺125b
使用与关于101f的制备所述相同的一般操作，125a与4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)反应得到125b。
实施例125c 2-叔丁基-4-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基)甲基)噻唑-5-羧酸甲酯125c
将125a(1g,3.4mmol)、2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(125b)(1.1g,3.1mmol)和碳酸铯(1.3g,4.1mmol)在乙腈(30mL)中的悬浮液在45℃下搅拌过夜。过滤反应混合物并减压浓缩滤液。将残余物在硅胶上纯化，用在石油醚中的0-1％EtOAc洗脱，得到为黄色油的125c(1.1g,56％)。LCMS:(M+H)+575。
实施例125d 2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯125d
向烧瓶中装入107a(379mg,1.3mmol)、2-叔丁基-4-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基)甲基)噻唑-5-羧酸甲酯(125c)(775mg,1.3mmol)、PdCl2(dppf)(266mg,0.32mmol)、1.0M K3PO4·3H2O(2.6ml)、1.0M NaOAc(2.6mL)和40mLMeCN。在氮气下于110℃搅拌混合物16h。用石油醚/乙酸乙酯(6:1)作为洗脱剂进行闪蒸柱纯化之后，得到为白色固体的125d(0.6g,69％)。LCMS:(M+H)+649。
实施例125e 2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸125e
将2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯(125d)(590mg,0.95mmol)和氢氧化锂(1090mg,45mmol)在异丙醇(20mL)和水(20mL)中的混合物于25℃搅拌5h。将反应混合物浓缩至原体积的约50％并用1M HCl(aq.)酸化至pH～4。然后用CH2Cl2:MeOH(～7:1)萃取。合并有机层，用无水MgSO4干燥，并浓缩得到125e，将其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS:(M+H)+635。
实施例125 2-叔丁基-5-(2-(羟基甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基)-4,5-二氢吡咯并[3,4-d]噻唑-6-酮125
向2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸(125e)(500mg,0.78mmol)在二氯甲烷(40mL)中的溶液加入N,N-二异丙基乙胺(503mg,3.9mmol)和N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(900mg,2.37mmol)。将混合物于25℃搅拌2h。用PE:EA(1:3-1:6)作为洗脱剂进行闪蒸柱纯化之后，得到为白色固体的125(32mg,10％)。LCMS:(M+H)+503。1H NMR(500MHz,MeOD)ppm 8.84(d,J＝2Hz,1H),8.66(s,1H),8.29(d,J＝5.5Hz,1H),7.49-7.56(m,4H),7.09(d,J＝5.5Hz,2H),5.04(s,2H),4.57(s,2H),3.73(s,3H),1.54(s,9H)。
实施例126
实施例126a 5-氨基-3-环丙基-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯126a
向3-环丙基-1H-吡唑-5-胺(0.25g,2mmol)和K2CO3(0.828g,6mmol)在THF(5mL)中的混合物加入在THF(5mL)中的(Boc)2O(0.436g,2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌15h。然后过滤并浓缩。将残余物通过闪蒸柱纯化，用6:1石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到为白色固体的126a(240mg,54％)。
LCMS:(M-Boc)+124。
实施例126b 5-溴-3-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮126b
向安装了磁搅拌器和回流冷凝器的100-mL单颈圆底烧瓶中装入1,4-二噁烷(15mL)、5-氨基-3-环丙基-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(126a)(455mg,1.95mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(0.40g,1.5mmol)和碳酸铯(1.22g,3.75mmol)。向所得混合物通入氮气30分钟，然后加入Xantphos(87mg,0.15mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(70mg,0.075mmol)，并在回流下加热反应混合物15h。然后，将反应冷却至室温，并在乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)之间分配。分离水层并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，并减压浓缩滤液。将残余物在闪蒸柱上纯化，用50:1DCM/MeOH洗脱，得到为黄色固体的126b(320mg,50％)。LCMS:(M+H)+309。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.85(s,1H),8.23(s,1H),8.02(d,J＝2.5,1H),7.35(d,J＝2.5,1H),5.77(d,J＝2,1H),3.46(s,3H),1.83(m,1H),0.90(m,2H),0.64(m,2H)
实施例126c 2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(5-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯126c
按照如关于化合物125d所述的操作并由1.7g 2-叔丁基-4-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基)甲基)噻唑-5-羧酸甲酯(125c)和0.9g 5-溴-3-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(126b)起始，得到为黄色固体的126c(0.8g,40％)。
LCMS:(M+H)+677。
实施例126d 2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(5-(3-环丙基-1H-吡唑-5-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸126d
按照如关于化合物125e所述的操作并由2-叔丁基-5-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-3-(1-甲基-6-氧代-5-(嘧啶-4-基氨基)-1,6-二氢吡啶-3-基)苯基氨基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯起始，得到为黄色固体的126d(粗品)。LCMS:(M+H)+663。
实施例126 2-叔丁基-5-(3-(5-(5-环丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)-2-(羟基甲基)苯基)-4H-吡咯并[3,4-d]噻唑-6(5H)-酮126
按照实施例125的操作并由125d起始，得到为白色固体的126(30mg,5％,三个步骤)。LCMS:(M+H)+531。1H NMR(500MHz,MeOD)ppm 7.75(d,J＝1.5Hz,1H),7.51(m,3H),7.21(s,1H),5.80(s,1H),5.03(d,J＝10Hz,2H),4.54(s,1H),4.57(s,2H),3.70(s,3H),1.88(m,1H),1.55(s,3H),0.97(d,J＝7.5Hz,2H),0.73(m,2H)。
实施例901 Btk生化测定
可用来测试式I化合物的Btk激酶标准生化测定的一般方法如下。制备无Btk酶的含有1X细胞信号转导激酶缓冲液(25mM Tris-HCl,pH 7.5、5mMβ-甘油磷酸、2mM二硫苏糖醇、0.1mM Na3VO4、10mM MgCl2)、0.5μM Promega PTK生物素化的肽底物2和0.01％BSA的预混试剂(master mix)。制备加Btk酶的含有1X细胞信号转导激酶缓冲液、0.5μM PTK生物素化的肽底物2、0.01％BSA和100ng/孔(0.06mU/孔)Btk酶的预混试剂。Btk酶的制备如下：使具有C-末端V5和6x His标记的全长人野生型Btk(登记号NM-000061)亚克隆到pFastBac载体中，用于制备携带该表位标记的Btk的杆状病毒。根据Invitrogen在其出版的实验方案“Bac-toBac Baculovirus Expression Systems”(Cat.Nos.10359-016和10608-016)中详述的使用说明制备杆状病毒。传代3病毒用于感染Sf9细胞以过量表达重组Btk蛋白。然后使用Ni-NTA柱将Btk蛋白纯化至同质。根据敏感的Sypro-Ruby染色法，最终蛋白制备品的纯度大于95％。在水中制备200μM ATP溶液并且用1N NaOH调节至pH 7.4。将量为1.25μL的化合物的5％DMSO溶液转移至96孔半区Costar聚苯乙烯板。逐一地并用11点剂量反应曲线(起始浓度是10μM；1:2稀释度)来测试化合物。将量为18.75μL的无酶预混试剂(作为阴性对照)和加酶预混试剂转移至96孔半区Costar聚苯乙烯板中的合适孔。将5μL 200μM ATP加入96孔半区Costar聚苯乙烯板中的混合物中，使最终ATP浓度是40μM。使反应物在室温培养1小时。用含有30mM EDTA、20nM SA-APC和1nM PT66Ab的Perkin Elmer 1X检测缓冲液使反应停止。用使用激发滤光片330nm、发射滤光片665nm和第二发射滤光片615nm的Perkin ElmerEnvision，使用时间分辨荧光读板。然后计算IC50值。或者，可以使用Lanthascreen测定，通过定量其磷酸化的肽产物来评价Btk活性。在肽产物上的荧光素和在检测抗体上的铽之间发生的FRET(荧光共振能量跃迁)随着添加降低肽的磷酸化的Btk抑制剂而下降。在25uL的最终反应体积中，使Btk(h)(0.1ng/25ul反应)与50mM Hepes pH 7.5、10mM MgCl2、2mMMnCl2、2mM DTT、0.2mM NaVO4、0.01％BSA和0.4uM荧光素poly-GAT一起温育。通过添加ATP至25uM(ATP的Km)引发反应。在室温下温育60分钟后，通过在室温下添加在60mM EDTA中终浓度为2nMTb-PY20的检测抗体，持续30分钟，来终止反应。在Perkin Elmer Envision上，使用在340nm激发以及在495nm和520nm发射进行检测。示例Btk抑制IC50值示于表和2中。
实施例902 Ramos细胞Btk测定
可用于测试式I化合物的标准细胞Btk激酶测定的另一种一般方法如下。以0.5×107细胞/ml的密度在供试化合物存在下在37℃培养Ramos细胞1hr。然后通过用10μg/ml抗人IgM F(ab)2在37℃培养5分钟来刺激细胞。使细胞成丸(pelleted)、溶解，并且对澄清溶解液进行蛋白测定。对等蛋白量的各样品进行SDS-PAGE并且用抗磷酸Btk(Tyr223)抗体(Cell Signaling Technology#3531；Epitomics,cat.#2207-1)或磷酸Btk(Tyr551)抗体(BD Transduction Labs#558034)进行蛋白质印迹，以评估Btk自磷酸化或者用抗Btk抗体(BD Transduction Labs#611116)来控制各溶解液中Btk的总量。
实施例903 B细胞增殖测定
可用于测试式I化合物的标准细胞B细胞增殖测定的一般方法如下。使用B细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotech,Cat#130-090-862)从8-16周龄Balb/c小鼠的脾纯化B细胞。将供试化合物稀释在0.25％DMSO中，与2.5×105纯化的小鼠脾B细胞培养30分钟，然后加入10μg/ml抗小鼠IgM抗体(Southern Biotechnology Associates Cat#1022-01)，最终体积是100μl。培养24hr后，加入1μCi 3H-胸苷，将板培养另外36hr，然后使用生产商的关于SPA[3H]胸苷吸收测定系统(Amersham Biosciences#RPNQ 0130)的实验方案收集。在microbeta计数器(Wallace Triplex 1450,Perkin Elmer)中计数基于SPA珠的荧光。
实施例904 T细胞增殖测定
可用于测试式I化合物的标准T细胞增殖测定的一般方法如下。使用全T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotech,Cat#130-090-861)从8-16周龄Balb/c小鼠的脾纯化T细胞。将供试化合物稀释在0.25％DMSO中并且与2.5×105纯化的小鼠脾T细胞以100μl最终体积在透明平底板中一起培养，所述板用各为10μg/ml的抗CD3(BD#553057)和抗CD28(BD#553294)抗体在37℃预涂90min。培养24hr后，加入1μCi 3H-胸苷，将板培养另外36hr，然后使用生产商的关于SPA[3H]胸苷吸收测定系统(Amersham Biosciences#RPNQ 0130)的实验方案收集。在microbeta计数器(Wallace Triplex 1450,Perkin Elmer)中计数基于SPA珠的荧光。
实施例905 CD86抑制测定
可用于测试式I化合物的抑制B细胞活性的标准测定的一般方法如下。通过红细胞裂解(BD Pharmingen#555899)，从8-16周龄Balb/c小鼠的脾纯化总小鼠脾细胞。在透明平底板(Falcon 353072)中，使供试化合物稀释在0.5％DMSO中并且与1.25×106脾细胞在200μl最终体积中于37℃培养60分钟。然后加入15μg/ml IgM(Jackson ImmunoResearch 115-006-020)来刺激细胞，并且细胞在37℃、5％CO2中培养24hr。培养24hr后，使细胞转移至锥形底透明96孔板并且通过以1200x g x 5min离心使细胞成丸。用CD16/CD32(BDPharmingen#553142)将细胞预封闭(preblock)，随后用CD19-FITC(BD Pharmingen#553785)、CD86-PE(BD Pharmingen#553692)和7AAD(BD Pharmingen#51-68981E)进行三重染色。在BDFACSCalibur上将细胞分类并且对CD19+/7AAD-群设门(gated)。测量对应于供试化合物的浓度，设门的群上的CD86表面表达的水平。示例性结果示于表3中。
实施例906 B-ALL细胞存活测定
以下是标准B-ALL(急性淋巴细胞性白血病)细胞存活研究的方法，其使用XTT读数器来测量活细胞的数量。该测定可以用于测试式I化合物抑制培养物中B-ALL细胞的存活的能力。可以使用的一种人急性B细胞型淋巴细胞性白血病系是SUP-B15，其为一种可从ATCC获得的人前B细胞ALL系。
以5×105细胞/ml的浓度将SUP-B15前B-ALL细胞接种在多个96孔微量滴定板的100μl Iscove培养基+20％FBS中。然后加入供试化合物，使最终浓度是0.4％DMSO。细胞在37℃和5％CO2下培养至多3天。三天后，将细胞按1:3分到含有供试化合物的新鲜96孔板中并允许生长另外3天。每24h的时间段后，向一个复制96孔板加入50ul XTT溶液，并且按照生产商的指示在2、4和20小时采集吸光度读数。然后采集仅用DMSO处理的细胞在本测定的线性范围(0.5-1.5)内的OD读数，并且测量化合物处理的孔中的活细胞相对于仅DMSO处理的细胞的百分率。
实施例907 CD69全血测定
从具有以下限制的健康志愿者获得人血：1周未药物、不抽烟。通过静脉穿刺入含有肝素钠的(Becton,Dickinson and Co.)管收集血液(约20ml测试8种化合物)。
将式I化合物在DMSO中的10mM溶液以1:10在100％DMSO中稀释，然后为了10点剂量-反应曲线，在100％DMSO中以三倍系列稀释比进行稀释。将化合物以1:10在PBS中进一步稀释，然后将5.5μl等分量的各化合物一式两份地加入到2ml 96孔板；加入5.5μl的10％DMSO/PBS作为对照和无刺激孔。将人全血–HWB(100μl)加入到各孔。在混合后，将板在37℃、5％CO2、100％湿度下培养30分钟。将山羊F(ab’)2抗人IgM(10μl 500μg/ml溶液,50μg/ml最终)加入到各孔(除了无刺激孔之外)并且混合，将板再培养20小时。在20小时培养结束时，使样品与荧光标记的抗体在37℃、5％CO2、100％湿度下一起培养30分钟。包括诱导的对照、用于补偿调节的未染色的和单染色的、以及初始电压设定。然后按照生产商的说明书用PharM LyseTM(BD Biosciences Pharmingen)溶解样品。而后将样品转移至适合于在LSRII仪上的BD Biosciences HTS 96孔系统上工作的96孔板。利用BD Biosciences DIVA软件获得采集的数据和平均荧光强度。通过FACS分析软件(Flow Jo)初步分析结果。供试化合物的IC50定义为使经抗-IgM刺激也呈CD20阳性的CD69阳性细胞降低50％时的浓度(在减去无刺激背景的8个孔的平均值后，8个对照孔的平均值)。利用非线性回归曲线拟合，通过Prism第5版计算IC50值。
在CD69全血测定中，选自表1和2中的化合物的示例性IC50值包括：
表4.

Claims (18)

1.化合物，其选自式I：
及其立体异构体、互变异构体或药学可接受的盐，
其中：
R1选自：
其中波浪线指示连接点；
R4选自NRbRc、C3-C6环烷基以及C1-C6烷基；
R2是CH3；
环B选自苯基、具有至少一个氮环原子的5-6元杂芳基和具有至少一个氮环原子的8-11元杂环基；
R3独立地选自H、-Ra、-NRbRc、-CORb和-CONRbRc；或者两个相邻的R3基团任选地一起形成具有0-2个选自O、S或N的杂原子的5-6元环，其中所述5-6元环与环B稠合；
Ra是C1-C6烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、或者含有选自氮、氧和硫的一个或多个杂原子的3至7元单环杂环烷基，其中Ra的每个成员任选地被1-3个R11基团取代；
Rb是C1-C6烷基、或者含有选自氮、氧和硫的一个或多个杂原子的3至7元单环杂环烷基；
Rc是H或C1-C4烷基；或者
Rb和Rc以及它们所连接的氮形成任选地取代的3至7元单环杂环烷基；
R11各自独立地选自C1-C4烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、-OH、-NH2、氰基、硝基、氧代和-C(O)C1-C4烷基；
R6是H、CH3、F、Cl、或者被OH或者一个或多个卤素基团取代的甲基；
R7是H、F或Cl；
R8是H、F或Cl；并且
V是CH或N。
2.权利要求1的化合物，其中R3是H、-Ra、-NRbRc或-C(O)Rb。
3.权利要求1的化合物，其中R3选自任选地被OH或CH3取代的环丙基、氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、氧代哌啶基、哌嗪基和氧代哌嗪基。
4.权利要求1的化合物，其中R3是：
其中波浪线指示连接点。
5.权利要求1的化合物，其中R4是哌啶基。
6.权利要求1的化合物，其中R4是叔丁基、N-吡咯烷基、N-哌啶基、N-氮杂环庚烷基、-N(CH3)Et、异丙基、环戊基、环己基、3-甲基丁-2-基或-N(CH3)(i-Pr)。
7.权利要求1的化合物，其中R6是H、CH3、F或CH2OH。
8.权利要求1的化合物，其中R7是H或F。
9.权利要求1的化合物，其中环B是吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、吡唑-3-基、嘧啶-4-基或吡啶-2-基。
10.权利要求1的化合物，其中：
选自以下结构：
其中波浪线指示连接点。
11.权利要求1的化合物，其具有式Ia的结构：
12.权利要求1的化合物，其具有式Ib的结构：
13.权利要求1的化合物，其具有式Ic的结构：
14.权利要求1的化合物，其为：
15.权利要求1的化合物，其选自：
16.药物组合物，其包含权利要求1的化合物以及药学可接受的载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。
17.权利要求16的药物组合物，其还包含另一治疗剂。
18.制备药物组合物的方法，其包括将权利要求1的化合物与药学可接受的载体混合。
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