CN106187710B

CN106187710B - 和厚朴酚二聚体及其制备分离方法和用途

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Publication number: CN106187710B
Application number: CN201510217376.2A
Authority: CN
Inventors: 陈俐娟; 魏于全; 叶昊宇; 彭爱华; 李为民
Original assignee: CHENGDU JINRUI JIYE BIO-TECHNOLOGY CO LTD
Current assignee: Chengdu Jinrui Jiye Bio-Technology Co.,Ltd.
Priority date: 2015-04-30
Filing date: 2015-04-30
Publication date: 2019-06-14
Anticipated expiration: 2035-04-30
Also published as: CN106187710A

Abstract

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及和厚朴酚二聚体及其制备分离方法和用途。本发明提供了一种和厚朴酚二聚体，其结构如式I所示。本发明还提供了上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法和用途。本发明提供的和厚朴酚二聚体具有很好的血管抑制作用和抗肿瘤作用，该化合物在治疗癌症和血管相关疾病的药物中具有广阔的应用前景。

Description

和厚朴酚二聚体及其制备分离方法和用途

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及和厚朴酚二聚体及其制备分离方法和用途。

背景技术

诱导血管的生成能力是恶性肿瘤的生长、浸润与转移的前提之一。肿瘤细胞本身和浸润到肿瘤组织内及其周围的炎细胞(主要是巨噬细胞)能产生一类血管生成因子，如血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)。这些血管生成因子促进血管内皮细胞分裂和毛细血管出芽生长。新生的毛细血管既为肿瘤生长提供营养，又为肿瘤转移提供了有利条件。因此血管生成抑制剂可以用于大多数肿瘤如肺癌、肝癌、结直肠癌和血管瘤等的预防与治疗。

和厚朴酚是从中药厚朴中提取分离出来的联苯二酚类活性化合物，具有抗炎、抗菌、抗病原微生物、抗溃疡、抗氧化、抗衰老、降低胆固醇以及抗肿瘤作用。

但目前还没有和厚朴酚二聚体化合物抗肿瘤和抑制血管生成活性的相关报道。

发明内容

本发明提供了一种和厚朴酚二聚体，其结构如式I所示：

上述的和厚朴酚二聚体是从敞口避光放置三年的和厚朴酚中分离得到的。

本发明还提供了上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法，包括以下步骤：

1)取纯度大于99％的和厚朴酚敞口避光放置1～3年，使用高速逆流色谱除去其中的和厚朴酚，溶剂为正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的混合溶剂；

2)将所有不含和厚朴酚的馏分合并，在30～60℃减压浓缩为浸膏；

3)浸膏用乙酸乙酯溶解，柱层析初分离；

4)初分离收集的馏分用甲醇或乙腈溶解，用半制备高效液相色谱纯化，分离得到二聚体化合物。

其中，上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法中，步骤1)所述正己烷、乙酸乙酯、乙醇或甲醇、水的体积比为5︰2︰5︰2、5︰3︰5︰3、5︰4︰5︰4或1︰1︰1︰1。

其中，上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法中，步骤3)所述的柱层析初分离包括：用不同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇来洗脱，收集馏分，用薄层色谱检测，合并相同的馏分；将其中的第一段馏分、第二段馏分或第三段馏分进一步用柱层析分离，同样用不同比例的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇来洗脱，收集馏分，用薄层色谱检测合并相同的馏分。

其中，上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法中，步骤4)所述的半制备高效液相色谱纯化的色谱柱填料为50～200μm的十八烷基键合硅胶、辛烷基键合硅胶、苯基键合硅胶或亲水色谱柱填料。

其中，上述和厚朴酚二聚体的制备分离方法中，步骤4)所述的半制备高效液相色谱纯化的流动相为甲醇-水或乙腈-水。所述流动相的体积比为甲醇︰水＝10～90︰90～10或乙腈︰水＝10～90︰90～10。

本发明还提供了和厚朴酚二聚体药学上可接受的盐或水合物。

一种药物组合物，是由式I所示的和厚朴酚二聚体及其盐或水合物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。

本发明还提供了式I所示的和厚朴酚二聚体及其盐或水合物在制备抗肿瘤药物和抑制血管生成药物中的应用。

本发明提供的和厚朴酚二聚体具有很好的血管抑制作用和抗肿瘤作用。

具体实施方式

和厚朴酚二聚体的制备分离方法，包括以下步骤：

3)浸膏用乙酸乙酯溶解，柱层析初分离；

实施例1 和厚朴酚二聚体：1,1′,1″,1″′-四烯丙基-[3,5′:5,5″:3″,5″′-四联苯]-4,2′,4″,2″′-四醇(式I化合物)的制备

取纯度99.16％的80g和厚朴酚敞口避光放置三年。

使用高速逆流色谱除去其中的和厚朴酚，溶剂体系为正己烷︰乙酸乙酯︰乙醇︰水＝5︰2︰5︰2(体积比)，进样量为7g，转速为1250rpm，流速为50mL/min，检测波长254nm，正相洗脱。

将所有不含和厚朴酚的馏分合并，在45℃减压浓缩为浸膏。

浸膏用乙酸乙酯溶解，加入硅胶拌匀，烘干，上200～300目硅胶柱。用不同比例的石油醚-乙酸乙酯来洗脱，收集馏分，用薄层色谱检测合并相同的馏分。

将第一段馏分进一步用硅胶柱细分，同样用不同比例的石油醚-乙酸乙酯来洗脱，收集馏分，用薄层色谱检测合并相同的馏分。

将馏分用甲醇溶解，用半制备高效液相色谱纯化，色谱柱填料为50μm的十八烷基键合硅胶。流动相为甲醇-水，流动相为甲醇-水(体积比85︰15)。分离得到和厚朴酚二聚体。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:7.30(4H,m,H-4′/4″′/6′/6″′),7.12(4H,d,J＝3.6Hz,H-2/2″/6/6″),6.86(2H,d,J＝8.8Hz,H-3′/3″′),6.03(2H,ddt,J＝16.8Hz,J＝10.0Hz,J＝6.4Hz,H-8′/8″′),5.99(2H,ddt,J＝16.8Hz,J＝10.4Hz,J＝6.8Hz,H-8/8″),5.17(4H,m,H-9′/9″′),5.08(4H,m,H-9/9″),3.44(4H,d,J＝6.4Hz,H-7′/7″′),3.40(4H,d,J＝6.4Hz,H-7/7″)。

¹³C NMR(400MHz,CDCl₃):δppm:153.78(C-2′/2″′),147.97(C-4/4″),137.54(C-8/8″),136.17(C-8′/8″′),132.82(C-1/1″),131.42(C-6′/6″′),130.57(C-2/2″),130.55(C-6/6″),130.11(C-5′/5″′),129.15(C-3/3″),128.89(C-4′/4″′),125.77(C-1′/1″′),125.05(C-5/5″),116.83(C-9′/9″′),116.18(C-3′/3″′),115.91(C-9/9″),39.49(C-7/7″),35.23(C-7′/7″′)。

HRESIMS m/z(高分辨质谱)：529.2381[M-H]^—。

本发明实施例中使用的人肝癌细胞HepG2、结直肠癌细胞HCT-116、非小细胞肺癌细胞H1975和脐静脉内皮细胞(HUVEC)均购自美国模式培养物集存库American TypeCulture Collection(ATCC)。

实施例2 和厚朴酚二聚体对癌细胞的抑制作用实验

将肝癌细胞(HepG2)、结直肠癌细胞(HCT-116)和非小细胞肺癌细胞(H1975)置于培养基中培养(37℃、5％CO₂、95％湿度)，取对数生长期细胞按密度4000个/孔接种于96孔培养板中，设定DMSO(二甲基亚砜)为溶剂对照组、各个浓度梯度的药物处理组及空白对照，每组均做3个复孔。待细胞生长密度达到60％，分别加入各浓度梯度的化合物溶液，使终浓度分别为40μM、20μM、10μM、5μM、2.5μM，1.25μM，继续培养72小时后，加入5mg/mL的四唑溴盐(MTT)20μL，37℃继续孵育4小时，终止培养，弃上清，每孔加入150μLDMSO，轻轻振荡后在492nm波长处用酶标仪测定各孔吸光值，分别计算IC₅₀。

表1和厚朴酚二聚体对癌细胞的抑制作用

实施例3 和厚朴酚二聚体对脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的抑制作用

将脐静脉内皮细胞(HUVEC)置于培养基中培养(37℃、5％CO₂、95％湿度)，取对数生长期细胞按密度4000个/孔接种于96孔培养板中，设定溶剂对照组(DMSO)、各个浓度梯度的药物处理组及空白对照，每组均做3个复孔。待细胞生长密度达到60％，分别加入5μL各浓度梯度的化合物溶液，使终浓度分别为80μM、40μM、20μM、10μM、5μM、2.5μM，继续培养72小时后，加入5mg/mL的四唑溴盐(MTT)20μL，37℃继续孵育4小时，终止培养，弃上清，每孔加入150μL DMSO，轻轻振荡后在492nm波长处用酶标仪测定各孔吸光值，计算IC₅₀。

表2和厚朴酚二聚体对HUVEC血管生成的抑制作用

	HUVEC(μM)
		和厚朴酚	52.448
和厚朴酚二聚体	7.59

由表1和表2可以看出，本发明提供的和厚朴酚二聚体化合物的抗肿瘤活性是和厚朴酚的5倍以上，抑制血管生成活性是和厚朴酚的7倍以上，因此，该化合物在治疗癌症和血管相关疾病的药物中具有广阔的应用前景。

Claims

1.和厚朴酚二聚体或其盐在制备抗肿瘤药物和抑制血管生成药物中的应用；所述和厚朴酚二聚体结构式为：