CN106176609A - 一种nk细胞膜仿生脂质体药物载体、制作方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种靶向性的、个性化的NK细胞膜仿生脂质体药物载体及其制备方法和应用。所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于，(1)该脂质体药物载体具有细胞膜蛋白组分；(2)该脂质体药物载体能够体外装载药物，用于细胞靶向融合释放；(3)该脂质体所具有的细胞膜蛋白组分来自于永生化的人源NK细胞系。本发明的优点：可用于药物或者抗原的体内靶向NK细胞。

Description

一种NK细胞膜仿生脂质体药物载体、制作方法及其应用

技术领域

本发明属于细胞治疗和脂质体药物精准输送技术领域，涉及一种NK细胞膜仿生脂质体药物载体，还涉及一种上述细胞膜仿生脂质体药物载体的制备方法，还涉及一种上述细胞膜仿生脂质体药物载体的应用，可用于精确靶向NK细胞。

背景技术

当前药物的靶向给药系统包括脂质体、乳剂、微球、纳米粒等，其中脂质体给药系统是将药物装载在由脂类分子包裹(脂质体)的超微球状囊泡中，内部为水性空间，可以装载亲水性药物，外层脂质分子为亲脂性药物装载的空间，大小一般在几个nm到几个μm，分为被动和主动靶向脂质体两种。目前人们已经发明的各类脂质体对靶细胞的融合随机性比较大，特异性相对较低，限于脂质体膜上的有限蛋白的介导，脂质体的融合概率相对较低，由于脂质体脂质种类和修饰以及缺乏蛋白因子的介导，造成其表面成分与靶细胞表面成分之间存在较大的差异，造成了这种人工脂质体与靶细胞间的融合概率相对较低，与非靶细胞的非特异性融合增大，另外，传统脂质体易被体内的网状内皮系统所吞噬而被清理，导致药物的半衰期和有效性大大降低。设计针对特定细胞类型的脂质体是该领域的一个重要发展目标。

细胞的膜融合存在同型融合和异型融合方式，均需要细胞膜上的特殊蛋白介导，其中同型细胞膜间的融合较容易发生，如果这些细胞膜蛋白用于制作脂质体，在理论上将会模拟同类型细胞间的融合，而具有特定细胞的靶向作用，而且可以降低被视为外援物质而被网状内皮系统吞噬的可能性。而传统脂质体的制作并未对细胞膜蛋白仿生脂质体作充分的重视，首先，不同类型的细胞表面存在的膜受体及膜融合相关的蛋白种类有差异，通用化运用较难，尤其是一些细胞特异的膜融合蛋白；再者，参与细胞膜融合的蛋白种类较多，不易做相关蛋白的分离和脂质体膜的整合操作；由于大部分膜蛋白是经过内质网、高尔基体的糖基化修饰，重组蛋白一般缺失这些糖基化修饰，酵母表达的蛋白存在过度糖基化，使用酵母源的重组蛋白存在产生抗体的风险，而且多种细胞膜蛋白的重组表达也将是一个较大的工作量，上述种种困难，阻碍了人们开发仿细胞膜脂质体的开发。

NK细胞的过继疗法对于肿瘤的治疗在过去很长时间内获得了一定的临床认可，NK细胞杀伤肿瘤细胞的作用为抗原非依赖性的，更加广谱和高效，在体内承担肿瘤细胞杀灭的一线任务，而且随着年龄的增加人体NK细胞的总体功能会逐渐下降，而肿瘤病人到晚期，NK系统的功能受到严重的损害和抑制，提高这些人群的NK细胞的功能是延长病患者生命的一个重要方面。传统的过激免疫疗法需要分离病人的血液或者健康人的血液中的NK细胞，体外培养和诱导使之具有更强的免疫能力，然后回输给病人，这个方法较为昂贵和繁琐，而且NK细胞在血液中的比例低，仅占周围淋巴细胞总数的3％～20％，而且体外增殖能力远逊于T淋巴细胞，这些缺点严重妨碍了NK细胞疗法的可操作性和效果的持久性。由于NK细胞现已经开发了多种NK细胞的细胞系，而且NK细胞由于免疫原性很低，不存在MHC限制性，避免了移植物抗宿主反应，因而同种异体的NK细胞可用于输注和治疗肿瘤；NK细胞的永生化可以采用EB病毒诱导，目前已经建立了NK-92、HANK1、KHYG-1、NKL、NK-Y、PLT-2、MOTN、IMC-1、SNK-6、SNT-8-1、YT和NK3.3等NK细胞系。但是上述细胞系均为肿瘤化的细胞，直接用于临床治疗的时候存在安全性等问题，但是用这些细胞的膜制作NK细胞的仿生脂质体，用于体内NK细胞的靶向性治疗，从NK细胞的来源上来说将是应用的一个巨大优势，也大大减少了用活NK细胞系治疗的安全性问题；相比CAR-T细胞等疗法，NK间接体内疗法存在效应期较短的缺陷，NK仿生脂质体的便捷注射用药，可以定期的给病人注射，不断增强体内NK细胞的免疫活性或者抑制其免疫活性。

肿瘤微环境具有较强的免疫抑制作用，NK细胞浸润肿瘤后常发生免疫抑制而失去细胞毒性，包括下调激活受体DNAM1，NKG2D and NKp30的表达，降低穿孔素和颗粒酶B(granzyme B)的表达，而TGF-β信号是促成NK细胞免疫活性下调的关键，因此抑制TGF-β信号，是提高NK细胞免疫活性，抑制肿瘤微环境的免疫耐受的一个重要环节；TGF-β的抑制剂(Ki26894、TEW-7197、LY580276、LY364947,LY2109761、LY2157299、SB525334、SB505124、GW788388、Pirfenidone和PepSox)多数存在心脏毒性，表现为心脏瓣膜出血、退化和炎症，该类抑制剂通过抑制TGF-βRI或者ALK5)和/或type II(TGF-βRII)的丝/苏氨酸蛋白激酶活性而抑制SMAD2的磷酸化水平。但其细胞毒性大大限制了该类药物的进一步临床实验，增大了病人长期服药的危险性。细胞膜仿生脂质体包裹的TGF-β药物将大大降低药物与心脏接触的概率和浓度，降低或者消除TGF-β抑制剂对心脏的毒副作用；另外嵌合受体抗原CAR在T细胞中显示了较强效果，而在NK细胞中的应用逐渐引起了人们的关注和兴趣，限于NK细胞的增殖能力有限和体内的半衰期较短，CAR-NK的制作目前也遇到了一定的技术障碍；开发一种新的质粒DNA的NK细胞的靶向方法，提高体内NK细胞的特异性细胞毒性作用，将可以部分克服当前ex-vivo方法制作的CAR-NK的缺陷。

发明内容

本发明的目的解决上述技术问题，基于同型细胞膜融合的脂质体药物载体的设计，提供一种靶向性的、个性化的NK细胞膜仿生脂质体药物载体及其制备方法和应用，用于药物或者抗原的体内靶向NK细胞。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于，(1)该脂质体药物载体具有细胞膜蛋白组分；(2)该脂质体药物载体能够体外装载药物，用于细胞靶向融合释放；(3)该脂质体所具有的细胞膜蛋白组分来自于永生化的自体NK细胞系。

进一步地，装载的药物可以为普通化学药物、siRNA药物、mRNA药物、DNA药物、蛋白药物、多肽类药物、免疫增强剂、免疫抑制剂、免疫佐剂中的一种或多种的混合，其中的普通化学药物可以为亲水、疏水性药物或双亲性化学药物；也可以装载磁纳米颗粒。

一种上述NK细胞膜仿生脂质体药物载体的制备方法，包括以下步骤：(1)NK细胞系的培养；(2)NK细胞系经过免疫激活或免疫抑制，提取免疫激活型细胞膜或免疫抑制型细胞膜；(3)NK细胞仿生脂质体的制作和药物装载。

所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体可包封多种单一药物或多种药物的组合。

进一步地，所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体是免疫抑制性药物载体，如装载免疫抑制剂环孢素A等免疫抑制剂的仿生脂质体。

进一步地，所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体是免疫增强性的药物载体，如装载TGF-β抑制剂的仿生脂质体，装载黄芪多糖的仿生脂质体。

进一步地，所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体是包封特异性靶向DNA的嵌合抗原受体(CAR)，用于增强NK细胞的特异性细胞毒性。进一步地，所制得的CAR含有靶向肿瘤相关抗原或者肿瘤特异性抗原的抗体序列或scFV序列，如抗非糖基化的MUC1鼠源抗体的人源化scFV序列。该CAR还含有CD244的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列和TYROBP的胞内信号区序列。该CAR还含有TYROBP的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列和CD247的胞内信号区序列。该CAR还含有TYROBP的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列、KLRK1和HCST的编码序列。该CAR所用的质粒，除含有TYROBP的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列外，还含有S/MAR等基因组非整合性DNA元件。该CAR所用的质粒，除含有CD244的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列外，还含有S/MAR等基因组非整合性DNA元件。该CAR除含有TYROBP的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列和CD247的胞内信号区序列外，还含有S/MAR等基因组非整合性DNA元件。

进一步地，所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体是包封CAR元件的质粒和TGF-β抑制剂等免疫调节剂。

使用NK仿生脂质体包封编码CAR-NK的质粒(非病毒载体)，定期给病人注射这种类型的脂质体，大大节省了成本和费用，而且更加灵活多样，定期的加强NK细胞的免疫能力，体内吞噬质粒的NK细胞将时刻处于较高的CAR表达水平。

一种上述NK细胞膜仿生脂质体药物载体在治疗癌症、炎症、器官移植引起的免疫排斥等自身免疫性疾病的应用。

NK细胞系的培养、细胞膜提取和NK细胞仿生脂质体的制作如下：

IL-2、IL-12、IL-15、IFN-α、TNF-α和白细胞调节素(leukoregulin,LR)对NK细胞的活化和分化有正调节作用，体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK细胞的杀伤活性。前列腺素(PG)E1、E2、D2和肾上腺皮质激素等对NK细胞的活性有抑制作用。激活型NK细胞的表面标志和抑制型NK细胞的表面标志有一定的差异。在制作NK细胞的仿生脂质体的时候，针对使用目标可以选择抑制型和激活型的NK细胞作为供膜来源。

对于治疗免疫功能低下的NK仿生脂质体药物载体，可以使用抑制型的NK细胞膜制作脂质体，包封的药物多用于提高和激活NK细胞的增殖、病灶内的归巢(homing)、细胞毒性效应和抑制肿瘤耐受等药物，药物可以是小分子免疫激活剂、蛋白或多肽免疫激活剂、编码免疫激活功能的基因质粒、抑制免疫耐受相关基因的siRNA等分子。而对于免疫耐受有关的分子，主要是TGF-β、KIR2DL4、IL-2、IL-10、indoleamine 2,3-dioxygenase(IDO)、前列腺素E2等。其中对TGF-β的抑制是提高NK细胞活性的一个重要举措，比如包封其抑制剂，还可以同时包封其他起协同作用的免疫激活或者调节剂，如芍药苷、熊果酸、山奈酚、丹皮素、丹皮酚、淫羊藿苷、人参皂苷、黄芪多糖、茯苓多糖、灵芝多糖等成分。所用NK细胞膜为激活型NK细胞来源的细胞膜；另外激活NK细胞的分子主要来自于NCR(natural cytotoxicityreceptor)家族的成员，如NCR1、NCR2,、NCR3等，来自NKG2家族的个别成员，如KLRK1(NKG2D)；来自2B4家族的成员，如CD244；以及TYROBP、HCST、CD3zeta等分子。这些分子可用于过表达或者用于构建嵌合抗原受体CAR，将NK的广谱杀伤性作用变为特异杀伤性功能，提高针对肿瘤的特异性细胞毒性作用。

主要用于癌症病人的抗肿瘤的治疗、HIV病人的免疫力低下引起的病原微生物的感染以及其他免疫力低下的治疗，临床上该类型脂质体药物可与免疫球蛋白合用或者替代免疫球蛋白治疗。

对于治疗免疫排异等免疫反应过强的NK仿生脂质体，可以使用激活型的NK细胞膜作为膜供体。包封的药物多用于免疫抑制类的小分子、蛋白、多肽、编码抑制型分子的质粒、免疫激活或者免疫效应分子的siRNA分子等药物。主要用于器官移植后的排斥反应、骨髓移植后的排斥的预防和治疗，由于具有较好的靶向性，可以减少因长期使用抗免疫排斥类化学小分子药物而引起的毒副作用。免疫抑制型NK细胞膜脂质体药物：TGF-β抑制剂的NK仿生脂质体的制作，需要添加TGF-β的抑制剂Ki26894、TEW-7197、LY580276、LY364947,LY2109761、LY2157299、SB525334、SB505124、GW788388、Pirfenidone和PepSox，进一步优选LY2109761，浓度400nM-10μM。还可以同时包封其他起协同作用的免疫激活或者调节剂，如芍药苷、丹皮素、丹皮酚、淫羊藿苷、人参皂苷、黄芪多糖、茯苓多糖、灵芝多糖等成分。也可以使用免疫抑制剂环孢素A、吗替麦考酚酯、他克莫司、西罗莫司和硫唑嘌呤，以及这几种免疫抑制药物的混合物。

NK细胞系可以使用NK-92、HANK1、KHYG-1、NKL、NK-Y、PLT-2、MOTN、IMC-1、SNK-6、SNT-8-1、YT和NK3.3等，进一步优选地，使用NK-92(ATCC)细胞系。细胞膜的提取可使用植物凝集素磁珠法提取。NK细胞膜仿生脂质体的制作可以采用逆向蒸发法、薄膜法、梯度反向装载法、超声法和双乳化法等，本专利优先采用薄膜法进行制备细胞膜脂质体，由于该法具有相对较小的脂质体粒径和较高的药物包封率。另外为了除去较大粒径的脂质体，制作的脂质体还要经过高分子膜过滤、挤压等方法，获得粒径更小的脂质体。

附图说明

图1为NK仿生脂质体包封质粒的读码框模式图；

图2为NK仿生脂质体药物的包封率测定；

图3为包封CAR-Muc质粒的NK仿生脂质体孵育的NK-92细胞对靶细胞PANC1的细胞毒性分析(IFN-γ的分泌测定)；

图4为包封CAR-Muc质粒的NK仿生脂质体孵育的NK-92细胞对靶细胞PANC1的细胞毒性分析(上清TNF-α的浓度测定)；

图5为含S/MAR元件的CAR-Muc激活NK5天后对PANC1细胞毒性的分析(上清IFN-γ的浓度)；

图6为含S/MAR元件的CAR-Muc激活NK5天后对PANC1细胞毒性的分析(上清TNF-α的浓度)。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

(1)NK细胞的培养和细胞膜的提取

NK-92细胞培养于RPMI 1640培养基中，含10％胎牛血清和/或10％马血清、0.2mM的肌醇，0.1mM的β巯基乙醇、0.02mM的叶酸、100-200u/ml的重组IL-2、2mM L-谷氨酰胺和1.5g/L碳酸氢钠和青霉素、链霉素双抗。

NK-92细胞培养3天后，开始用前列腺素E21-10μM、1-100nM地塞米松、40U/ML IL-2和/或重组TGF-β1(10ng/ml)处理2-3天，获得抑制型的NK-92细胞。

NK-92细胞培养3天后，开始用10ng/ml IL-12、200-800U/ml IL-2处理2天，获得激活型的NK-92细胞。

(2)CAR质粒制作：

PUC系列载体，均可以用于NK细胞的非病毒型CAR质粒的构建，编码框带有一个强的真核启动子，如EF-1、α-actin、β-actin、UBC、PGK、CMV、SV40等启动子，优选EF-1和CMV启动子，进一步优选CMV启动子，该序列在多种常见的哺乳动物表达载体中存在。该CAR序列包含一个信号肽，优先选用TYROBP(GenBank：NM_003332；Uniprot：O43914-1)的信号肽(aa1-21)、CD244(GenBank：NM_016382；Uniprot：Q9BZW8-1)的信号肽(aa1-21)和CD247的信号肽；紧邻信号肽之后是scFV序列，任何抗肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原的抗体及其他抗免疫分子靶标抗体的scFV片段均可使用，进一步优选地，使用抗Mucin非糖基化鼠源单抗的人源化改造的scFV分子，该分子对鼠源可变区的框架区作了部分人源化修饰，重链和轻链间用(G4S)₃柔性肽连接。ScFV分子之后是跨膜区和胞内信号区，使用TYROBP(GenBank：NM_003332)的跨膜区和胞内信号区(aa37-113)；或者CD244(GenBank：NM_016382)的跨膜区和胞内信号区(aa227-370)，或者使用CD247(GenBank：NM_198053)的跨膜区(aa27-51)和胞内信号区(aa52-164)。因此，在构建TYROBP的时候，只需用scFV序列替代编码aa22-36的序列，如P7，构建CD244的CAR的时候，只需将scFV序列替代编码aa22-226的序列，如P8，在构建CD247来源的CAR的时候，只需用CAR替代其aa22-26，如P9。另外使用真核哺乳动物polyA信号序列，优选牛生长素polyA信号序列BGH-PA，该序列在多种常见的哺乳动物表达载体中均存在，可直接将编码序列直接克隆进入其多克隆位点。进一步优选地，含TYROBP跨膜区和胞内效应区的CAR，还可以添加P2A自切肽，共同表达KLRK1(GenBank：NM_007360)和HCST基因(GenBank：NM_014266)，增加NK细胞毒性杀伤信号，如质粒P10,本序列优选P2A自切肽编码序列Seq ID No.1。

来源CD244的CAR分子C末端可以连接TYROBP的胞内信号区(aa38-113)，如P11。

含TYROBP跨膜区和胞内效应区的CAR的C末端可以连接CD247的胞内信号区(aa52-164)，如P12。

为了增强转入NK细胞内的TYROBP或CD244CAR的表达持久性，减少脂质体注射频率，可以在质粒中增加S/MAR序列元件，该序列元件能够帮助质粒非整合性地存在于细胞核的核质中，而且能够较稳定的随细胞有丝分裂而传代，如质粒P13、P14和P15。

上所述质粒图见图1。

(3)NK细胞膜仿生脂质体的制作和药物包封

薄膜法：二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、胆固醇(Avanti Polar Lipids)，按一定比例(6:1:2:3)溶于氯仿：甲醇(3:1或者2:1或者1:1，V/V)，脂溶性的药物可在此步骤中加入，然后在旋转蒸发器中蒸发溶剂，形成薄层。然后脂质薄层复水，从细胞中提取的膜蛋白(溶于PBS)以1:100-1:800比例(蛋白：膜脂)加入到薄层中，复水过程中加入亲水性的小分子药物、mRNA、siRNA、质粒等。40-65℃加热涡旋处理2-6分钟，重复2-5次。蛋白在40-65℃下挤过200nm孔径的醋酸纤维素滤膜或者聚碳酸酯膜，反复进行10-20次，以降低脂质体的孔径和提高脂质体的粒径均匀度，所获的单层脂质体膜泡经过半透膜透析过夜纯化，或者经过SephadexG-50柱或者类似凝胶柱纯化，以除去游离的未整合蛋白和杂质。对照脂质体的制作，除不添加细胞膜提取物外，其他步骤、工艺和内容物均相同。

免疫抑制型NK细胞膜脂质体药物：TGF-β抑制剂的NK仿生脂质体的制作，需要添加TGF-β的抑制剂Ki26894、TEW-7197、LY580276、LY364947,LY2109761、LY2157299、SB525334、SB505124、GW788388、Pirfenidone和PepSox，进一步优选LY2109761，浓度400nM-10μM。还可以同时包封其他起协同作用的免疫激活或者调节剂，如芍药苷、丹皮素、丹皮酚、淫羊藿苷、人参皂苷、黄芪多糖、茯苓多糖、灵芝多糖等成分，也可以使用免疫抑制剂环孢素A、吗替麦考酚酯、他克莫司、西罗莫司和硫唑嘌呤，以及这几种药物的混合物。所用细胞膜为免疫激活型NK细胞来源的细胞膜。

CAR质粒药物的NK仿生脂质体的制作，分别制作含有质粒P7、P8、P9、P10、P11、P12以及对照为空载的NK仿生脂质体，质粒装载抗MUC1抗体的scFV分子，质粒浓度为0.3μg/μl-3μg/μl，优选1μg/μl质粒。所用NK细胞膜为抑制型或者激活型NK细胞来源的细胞膜。

上述药物可以进行组合包封，质粒和TGF-β抑制剂混合包装，或者质粒/TGF-β抑制剂/免疫激活-调节剂混合包装，也可以将包封好的单体药物脂质体进行组合搭配使用。

(4)NK细胞仿生脂质体的粒径、电位和包封率

激光粒度分析仪检测未包封药物的NK细胞膜脂质体、包封TGF-β抑制剂LY2109761、包封质粒和包封质粒/LY2109761很合物的脂质体的粒径和zeta电位，结果见表1。包封率的检测，脂质体和药物混合物进过18000g离心20-30分钟，收集非脂质体部分，TGF-β的抑制剂和环孢素A的测定，则进行HPLC测定非脂质体部分上清的药物含量，黄芪多糖可以采用HPLC或蒽酮法测定上清的浓度，总药物减去非包封部分的量除以总量的百分率即为包封率，结果见图2，显示了NK仿生脂质体的较好的包封能力。

表1NK仿生脂质体的粒径和zeta电位

(5)包封CAR-Muc的NK仿生脂质体孵育的NK-92对靶细胞PANC1的细胞毒性分析

1×10⁵个NK-92细胞接种96孔板中，转染对照空载仿生脂质体、P7、P8、P9、P10、P11、P12的包封的NK细胞仿生脂质体1-10μl，脂质体事先用无血清、无抗生素RPMI-1640或Hanks也稀释至20-50μl，静置10-20分钟，然后滴加每孔NK-92细胞中，37℃培养20-28小时，然后进行细胞因子释放实验。Muscin脱糖基化的PanC1细胞，用作靶细胞，1×10⁴细胞在进行细胞毒性和细胞因子释放实验前4小时接种96孔板，收获事先转染质粒的NK-92效应细胞，加入到PanC1细胞中进行培养6-24小时，本实施例选用12小时，效应：靶细胞(E:T)为10:1。收集上清液，ELISA法测定IFN-γ(PeproTech试剂盒)、TNF-αELISA(PeproTech试剂盒)，结果见图3-图4，结果显示，几种CAR均具有较好的细胞毒性激活能力，细胞质信号嵌合型的质粒显示了一定的增效作用，而过表达KLRK1和HCST的CAR具有一定的增效作用。

(6)用S/MAR元件质粒包封的仿生脂质体的细胞因子释放实验

P7、P8、P13、P14、P15质粒和对照空载仿生脂质体转染NK-92细胞37℃培养24小时后，更换培养，继续培养5天，然后测定细胞因子释放。1×10⁴PanC1靶细胞与上述处理的NK-92细胞(1:10)共孵育12小时，然后ELISA法测定培养液上清中的IFN-γ和TNF-α含量，结果见图5-图6。结果显示S/MAR序列对细胞传代后依然具有较好的NK细胞激活作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于，(1)该脂质体药物载体具有细胞膜蛋白组分；(2)该脂质体药物载体能够体外装载药物，用于细胞靶向融合释放；(3)该脂质体所具有的细胞膜蛋白组分来自于永生化的人源NK细胞系。

2.根据权利要求1所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：装载的药物为普通化学药物，或siRNA药物，或mRNA药物，或DNA药物，或蛋白药物，或多肽类药物，或免疫增强剂，或免疫抑制剂，或上述药物中的一种或多种的混合；所述普通化学药物为亲水、疏水性药物或双亲性化学药物。

3.根据权利要求1所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：所述NK细胞膜仿生脂质体药物载体是包封特异性靶向DNA的嵌合抗原受体CAR。

4.根据权利要求3所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：所述CAR含有靶向肿瘤相关抗原或者肿瘤特异性抗原的抗体序列或scFV序列。

5.根据权利要求3所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：所述CAR还含有CD244的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列，还含有TYROBP的胞内信号区序列或CD247的胞内信号区序列。

6.根据权利要求3所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：该CAR还含有TYROBP的信号肽、跨膜区、细胞内信号区序列、KLRK1和HCST的编码序列。

7.根据权利要求3所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：该CAR所用的质粒，除含有TYROBP的信号肽或CD244的信号肽和/或CD247的胞内信号区序列外，还含有跨膜区、细胞内信号区序列，还含有基因组非整合性DNA元件S/MAR。

8.根据权利要求1所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体，其特征在于：所述NK仿生脂质体药物载体包封有CAR元件的质粒和免疫调节剂。

9.一种权利要求1所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)NK细胞系的体外培养和经过体外免疫激活或免疫抑制处理，提取免疫激活型细胞膜或免疫抑制型细胞膜；(2)NK细胞仿生脂质体的制作和药物装载，根据NK细胞膜类型，可分为免疫抑制型仿生脂质体和免疫激活型仿生脂质体。

10.一种权利要求1所述的NK细胞膜仿生脂质体药物载体在治疗癌症、免疫力低下、器官移植排斥以及自身免疫性疾病的治疗应用。