CN106109258B - 黑色素前体物质染发剂的制备方法及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黑色素前体物质制备染发剂的方法。本发明的黑色素前体物质染发剂是通过提取天然食用菌中的复合酶液，将氨基酸通过生物转化合成多巴色素、5,6‑二羟基吲哚及5,6‑二羟基吲哚‑2‑羧酸等黑色素前体物质，并将其制备成非氧化型生物染发剂。所述的黑色素前体物质染发剂包括：黑色素前体、染发剂常用助剂和水；黑色素前体包括多巴色素、5,6‑二羟基吲哚和5,6‑二羟基吲哚‑2‑羧酸；黑色素前体占染发剂的重量百分比为0.01％～5％；染发剂常用助剂为润湿渗透剂、增稠剂、表面活性剂、保湿剂、pH值调节剂中的一种或多种。本发明的黑色素前体物质染发剂，对皮肤无刺激无致敏作用，安全性高，并保持自然黑的染发效果，在染发剂制备领域具有巨大的推广应用价值。

Description

黑色素前体物质染发剂的制备方法及其使用方法

技术领域

本发明涉及一种酶处理制得的染发剂，特别是涉及一种提取食用菌酶复合酶液，将氨基酸底物转化成天然黑色素前体物质，并将其制备成非氧化型生物染发剂的方法。

背景技术

目前，随着人们对健康重视程度的不断提高，化学合成的染发剂中含有的致癌及强致敏化学染色成分(如苯二胺类、氨基酚等物质)和一些有害成分（如过氧化氢、氨水等），已越来越多地受到人们的关注。为此，人们试图寻求天然无害、更加安全的染发材料。比如植物色素染发剂，虽然取得了一定的成绩，但仍然存在很多问题，这类产品仍无法避免在染发剂中添加酚类及过氧化氢等有害物质，而且缺乏成熟的色素提炼技术。目前已知有利用植物色素儿茶酚制备天然染发剂的方法（专利文献CN101164528A），但其中使用的儿茶酚是从中药材儿茶中提取，其缺点是中药材的种植规模有限，色素提取成本相对较高；也有报道通过基因工程技术，利用表达霉菌属丝状菌细胞中的儿茶酚氧化酶，对多巴及其衍生物进行氧化，将其转变为黑色素前体的方法（专利文献CN101914585A），但霉菌本身会产生一些有毒有害物质，生产过程会造成环境的污染，同时存在成本高，耗时长，性能不稳定、无法大量应用等缺点。现有技术中也有使用芽孢杆菌发酵液中所提取酶液催化底物产生黑色素前体物质的方法，但仍无法保证其产品的安全无毒副作用，发酵过程中的污染也会影响产品品质。

人体头发的颜色是由毛发皮质中的黑色素颗粒的种类和数量所决定的，随着年龄的增长及快节奏的工作生活导致的压力，黑色素颗粒的产生会逐渐减少，黑发就会逐渐变白。而黑色素在人体中的合成过程(图1)，是由黑色素细胞通过酪氨酸酶将酪氨酸氧化成多巴色素，多巴色素脱去羧基生成5,6-二羟基吲哚，或利用互变异构酶生成5,6-二羟基吲哚-2-羧酸，之后经过聚合形成真黑素，从而使头发呈现黑色。

发明内容

本发明是为了解决上述技术问题，而根据人体毛发中黑色素的合成原理，提供了一种从食用菌里面提取酶液，通过与氨基酸底物反应生成黑色素前体物质，然后加入辅料制备得到生物染发剂，其工序包括：（a）食用菌复合酶液的提取、纯化、固定及保存工序；（b）将酪氨酸等底物进行生物转变成黑色素前体的工序；（c）对上述反应液进行处理，提高5,6-二羟基吲哚浓度的工序；（d）将黑色素前体物质和辅料混合制备得到染发剂的工序。

所述黑色素前体的制备包括以下步骤：

（1）准备反应底物；

（2）从食用菌中提取合成黑色素前体所需的复合酶；

（3）利用步骤二制得的复合酶对步骤一中的反应底物进行催化，获得目标产物；

（4）将步骤三中所得目标产物进行转化处理，获得黑色素前体；

所述反应底物为酪氨酸、多巴、多巴胺中的一种或多种；

所述食用菌为杏鲍菇、双孢菇、褐菇、草菇、平菇、香菇、黑木耳、茶树菇中的一种或多种；

优选的，所述目标产物转化处理进行以下操作中的一种或多种：沸水加热、加热同时减压蒸发、电解、添加脱羧酶。

优选的，所述底物为L-酪氨酸。

优选的，所述底物浓度为1mM~10mM。

优选的，所述步骤（2）中提取的复合酶进行纯化和固定化处理；所述纯化的方法为超滤和/或离子交换柱层析。

优选的，所述对复合酶进行固定化处理时，固定材质为分子筛、硅藻土、海藻酸钠等公知的固定化材质。

本发明提供一种黑色素前体物质染发剂，包括：黑色素前体、染发剂常用助剂和水；

所述黑色素前体包括多巴色素、5,6-二羟基吲哚和5,6-二羟基吲哚-2-羧酸；

所示黑色素前体占染发剂的重量百分比为0.01%～5%；

所述染发剂常用助剂为润湿渗透剂、增稠剂、表面活性剂、保湿剂、pH值调节剂中的一种或多种。

优选的，所述润湿渗透剂为L-半胱氨酸、谷胱甘肽中的一种或两种；

所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、淀粉、硅凝胶、明胶、海藻酸钠、瓜尔胶、琼脂、大豆蛋白胶、聚乙二醇、聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、聚γ-谷氨酸、玻璃质酸钠、聚丙烯酸、低分子聚乙烯蜡、黄原胶中的一种或几种；

所述表面活性剂为单硬脂酸甘油酯、十六烷基三甲基氯化铵、鲸蜡醇、月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、磺基琥珀酸单酯二钠、爱玛膏中的一种或几种；

所述保湿剂为甘油、山梨醇、甘露醇、乙二醇、丙三醇、食用油中的一种或几种；

所述pH值调节剂为赖氨酸、精氨酸、碳酸氢钠中的一种或几种。

优选的，所述润湿渗透剂占染发剂的重量百分比为1%~10%；

所述增稠剂占染发剂的重量百分比为0.2%~2%；

所述表面活性剂占染发剂的重量百分比为0.1%~2%；

所述保湿剂占染发剂的重量百分比为1%~15%；

所述pH值调节剂占染发剂的重量百分比为1%~10%。

本发明一种黑色素前体物质染发剂的使用方法，所述使用方法包括以下步骤：将待染头发清洗后，将本发明的黑色素前体物质染发剂均匀涂于头发表面，30~50 min后用清水冲洗擦干；每日一次，重复使用4日以上。

本发明黑色素前体物质染发剂的制备方法及其使用方法与现有技术不同之处在于：

1. 本发明通过提取天然食用菌中的复合酶液，将氨基酸通过生物转化合成多巴色素、5,6-二羟基吲哚及5,6-二羟基吲哚-2-羧酸等黑色素前体物质，以这些前体物质为主要染发成分，添加辅料制备成非氧化型的生物黑色素染发剂的生物技术。本产品避免使用了p-苯二胺、氢醌、间苯二酚等化学染发成分，这些物质被证明有一定的致癌作用，并且可以引起部分用户的过敏反应；本产品不包含铅、汞、砷等对人体有毒害作用的重金属成分；同时避免使用了其他化学染发剂中常用的强氧化剂过氧化氢、具有强刺激性气味的氨水等成分，减轻了对头发和皮肤的伤害，同时本产品还具有抗紫外线功能,并含有多种氨基酸，有利于头皮的健康及头发的保护。

本发明的染发剂中小分子的黑色素前体物质在润湿渗透剂的作用下进入到头发中，利用空气中的氧气将头发中的黑色素前体物质氧化，聚合成大分子黑色素颗粒，从而存留在头发中，使白头发呈现自然黑色。本发明产品对皮肤无刺激无致敏作用，安全性高，对环境无污染，并且黑色素前体成分也具有抗紫外线功能，对头皮和头发起到保护作用。

本发明的染发剂在生产及使用的过程中具有原料易得、工艺简单、使用效果可靠和安全无毒等优点，易于工厂化生产，利用食用菌中提取的酶液，经生物转化为黑色素前体物质，并配制成染发剂的方法及生产工艺在国内外未见报导。本发明的染发剂制备方法因具有上述优点而具有良好的开发前景。

下面结合附图对本发明的黑色素前体物质染发剂的制备方法及其使用方法作进一步说明。

附图说明

图1为真黑素合成反应图；

图2为黑色素前体薄层层析成分测定图；

图3为5,6-二羟基吲哚标准品的吸收光谱图；

图4为本发明制得黑色素前体物溶液的吸收光谱图；

图5为人的白头发的肉眼观察图；

图6为人的白头发的显微镜观察图；

图7为人的自然黑发的肉眼观察图；

图8为人的自然黑发的显微镜观察图；

图9为市售含对苯二胺染发剂所染头发的肉眼观察图；

图10为市售含对苯二胺染发剂所染头发的显微镜观察图；

图11为本发明染发剂所染头发的肉眼观察图；

图12为本发明染发剂所染头发的显微镜观察图；

图13为本发明染发剂用于白牦牛毛染色的效果图；

图14为本发明染发剂实际染发效果图。

具体实施方式

本发明的理念是模拟人体黑发中真黑素的生成过程（如图1所示），利用生物方法合成黑色素前体物质，并通过辅助材料使黑色素前体物质进入到头发中，再聚合成黑色素而留在头发中，形成永久型染发剂。

本发明是以酪氨酸或其衍生物为底物，利用提取的复合酶液进行酶促反应中得到的黑色素前体物质，包括多巴色素、5，6-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸等，吲哚-5,6醌、吲哚-5,6醌-2-羧酸等，其中优选5,6-二羟基吲哚。此外，本发明中的黑色素前体不局限于单体，也可以包括二倍体以上的低聚体。

发明是以酪氨酸或其衍生物为底物，利用提取的复合酶液进行酶促反应中得到的黑色素前体物质，包括多巴色素、5，6-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸等，吲哚-5,6醌、吲哚-5,6醌-2-羧酸等，其中优选5,6-二羟基吲哚。此外，本发明中的黑色素前体不局限于单体，也可以包括二倍体以上的低聚体。黑色素前体的制备方法如下。

生产工序

原料：作为底物，可以使用试剂级或食品级酪氨酸及其衍生物，例如D或L型酪氨酸、D或L型多巴、多巴胺等，可以是其中的一种或几种组合，也可以是上述物质的异构体。

酶液：利用粉碎方法从食用菌中提取复合酶液，在提取的过程当中可加入磷酸、柠檬酸、Tris-HCl缓冲液，pH值控制在6.0～8.0。提取之后通过离心等方式得到粗酶液。

上述提到的粗酶液可以直接用于产物的合成反应，也可进一步通过超滤和离子交换柱层析，硫酸铵沉淀和/或丹宁酸沉淀等处理得到纯化的酶，冻干脱水后低温保存，可长期保持酶活性。

酶在使用前，可以通过2价铜离子配位处理或酸性溶液处理等使酶的活性提高。

上述提到的酶液可以直接加入到反应液中进行酶促反应，此外，从提高酶的稳定性及重复使用效率、避免使用后易分解，及避免其它蛋白质混入反应体系等方面出发，也可采用固定化的酶。酶的固定化方法没有特别限定，可以通过分子筛、硅藻土、海藻酸钠等公知的固定化方法，也可采用食用菌粉末和毛发粉末等亲和吸附的方法进行固定。针对固定方法的不同对粗酶和纯化酶的要求不同。

反应步骤：

（1）酪氨酸底物溶液的预处理

以L-酪氨酸为底物时，底物浓度选择范围在1mM～10mM，酪氨酸底物溶解度较小，可采取调节pH等手段增加其溶解度。

（2）酪氨酸酶的生物转化反应

在生物反应器中，预先加入1mM～10mM的L-酪氨酸底物溶液，利用按照体积比为1/5～1/30的比例，加入上一步提取的复合酶液，然后通入空气，保持空气压力在0.05Mpa～0.2Mpa，空气流量为5LPM～20LPM，进行生物转化反应，并且定时取样检测。

（3）检测

取出样品离心，取上清液稀释10倍，在紫外分光光度计中测定300nm（5,6-二羟基吲哚的吸收峰）以及475nm（多巴色素的吸收峰）的吸光度。当300nm的吸光度大于2.0, 并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应，进行下一步处理。

后处理工序：

（1）黑色素前体物质的收集

在上述转化反应液中，除含有生成的黑色素前体物质外，还含有一些包括剩余的游离酶或固定酶，及黑色素前体聚合后的黑色素。为了收集该反应液中的黑色素前体物作为染发的染料，故需要将剩余的酶及聚合后的黑色素除去。对于酶可以通过离心、超滤等方法除去，聚合后的黑色素可以通过吸附、过滤等方法除去。去除的酶可以返回到反应工序再利用，去除的黑色素可以应用到其他产品。最终收集得到的溶液主要为含有黑色素前体物质溶液，包括多巴色素、5,6-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚满、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸等，其中多巴色素占比例较大。

（2）黑色素前体物组成的调整

在黑色素前体物溶液中，能够使白发染黑的最主要的染发有效成分为5,6-二羟基吲哚，其通过润湿渗透进入到头发内部，并利用空气中的氧气在头发里聚合成黑色素颗粒，留到头发皮质中，使头发呈现黑色。根据这一最终目的，需要对黑色素前体物质溶液的组成进行转化调整。可以通过（Ⅰ）沸水加热、（Ⅱ）加热同时减压、（Ⅲ）电解、（Ⅳ）利用脱羧酶中的一种或一种以上处理来调整组合比例，从而使得多巴色素为主的黑色素前体物向5,6-二羟基吲哚转化。得到的黑色素前体物溶液用于配制染发剂。

（3）黑色素前体物成分的测定

通过上述方法得到的黑色素前体物溶液，可以选用薄层层析来进行主要成分测定（图2），同时用紫外分光光度法在波长300nm进行检测5,6-二羟基吲哚的含量（图3，图4）。

（4）染发剂的配制方法

本发明的染发剂中的成分主要包括黑色素前体物质、润湿渗透剂、增稠剂、表面活性剂、pH值调节剂、助染剂、保湿剂，也可以加入一些营养成分，例如一些植物提取物、中药成分等。作为染发剂的主要成分黑色素前体物质，其含量优选1%～5%；润湿渗透剂(L-半胱氨酸、谷胱甘肽中的一种或两种)；助染剂（Cu2+、Mg2+、Ca2+、Fe2+、Fe3+等金属盐中的一种或一种以上）；增稠剂（羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、淀粉、硅凝胶、明胶、海藻酸钠、瓜尔胶、琼脂、大豆蛋白胶、聚乙二醇、聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、聚γ-基谷氨酸，玻璃质酸钠、低分子聚乙烯蜡、黄原胶等中的一种或一种以上）；表面活性剂（单硬脂酸甘油酯，十六烷基三甲基氯化铵，鲸蜡醇，月桂基磺化琥珀酸单酯二钠，磺基琥珀酸单酯二钠,爱玛膏中的一种或几种）；保湿剂（甘油、山梨醇、甘露醇、乙二醇、丙三醇、食用油中的一种或一种以上）； pH值调节剂（赖氨酸、精氨酸、碳酸氢钠中的至少一种）。

实施例1

本实施例黑色素前体的制备方法按以下步骤进行：

1. 酪氨酸酶的提取和测定

取杏鲍菇破碎后的材料500克加入1000ml的蒸馏水提取酪氨酸酶液或利用1000ml中性的磷酸盐缓冲液提取酪氨酸酶液。

酪氨酸酶活的测定方法如下：取0.1ml蘑菇复合酶液与3.9ml的底物溶液在317nm反应10min，酶活力单位U的定义为每1min引起吸光度0.01个单位的变化为1个酶活力单位。测定的结果大于1000U时，此酶液可用于以下的黑色素前体累积反应。

黑色素前体的积累反应

配制浓度为1mM-10mM的酪氨酸溶液2L，将酪氨酸底物溶液加入容量体积为10L生物反应器中，利用温度控制系统，将温度控制在30℃，按照底物体积的1/20的比例，加入上一步提取的复合酶液，然后通入空气，保持空气压力为0.10Mpa，空气流量为10LPM，进行生物转化反应，并且定时取样检测。

取出的液体样品离心，取上清液稀释10倍后，在紫外分光光度计中测定300nm以及475nm的吸光度。当300nm的吸光度大于2.0并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应，进行下一步处理。

黑色素前体物的收集

上述得到的黑色素前体物溶液，在8000rpm离心除去酪氨酸酶及杂蛋白；上清液加入5%的活性炭，吸附反应过程中聚合的黑色素颗粒，此时得到的黑色素前体物溶液中以多巴色素为主。

黑色素前体组成的调整

由多巴色素转化成5,6-二羟基吲哚，利用旋转蒸发仪通过操作将黑色素前体溶液调整收集。

实施例2

本实施例黑色素前体的制备方法按以下步骤进行：

1. 酪氨酸酶的提取

利用榨汁机将褐菇破碎，500g子实体碎渣加入1000ml用pH值为6.8的柠檬酸缓冲液提取酶液，利用5%活性炭吸附处理后离心备用。

酪氨酸酶的固定

将200目的硅藻土经过60℃加热处理30min，后经过磷酸盐缓冲液浸泡20min，离心除去上清液，将处理后得到的硅藻土加入到上述酶液中固定5h，得到固定化酶备用。

黑色素前体的积累反应

配制浓度为5mM的酪氨酸溶液2L，可采取加热溶解的方法使其完全溶解。

将酪氨酸底物溶液加入容量体积为１０L生物反应器中，利用温度控制系统，将温度控制在30℃，加入上一步固定化酶100克，然后通入空气，保持空气压力为0.1０Mpa，空气流量为10LPM，进行生物转化反应，并且定时取样检测。

取出的液体样品经过离心后，上清稀释10倍后，在紫外分光光度计中测定300nm以及475nm的吸光度。当300nm的吸光度大于2.0,并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应，进行下一步处理。

黑色素前体的收集

上述得到的黑色素前体溶液，在12000rpm、4℃离心5min除去固定化酶及杂蛋白；此时得到的黑色素前体溶液中以多巴色素为主。

黑色素前体组成的调整

调整过程同实施例1。

实施例3

本实施例黑色素前体的制备方法按以下步骤进行：

1. 酪氨酸酶的提取

利用榨汁机将双孢菇破碎，500g碎渣加入1000mlpH值为7.0的Tris-盐酸缓冲液提取酶液，离心提取上清液，利用10%大孔吸附树脂吸附酶液中的多糖与杂蛋白等，处理后的酶液放置4℃的条件下备用。

黑色素前体的积累反应

配制浓度为10mM的酪氨酸溶液2L，可采取加热溶解的方法使其完全溶解。

反应过程同实施例1。

取出的液体样品经过滤纸过滤，滤液稀释10倍后，在紫外分光光度计中测定300nm以及475nm的吸光度。当300nm的吸光度大于2.0,并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应，所得溶液含有染发的主要染料成分—5,6二羟吲哚。

实施例4

本实施例的黑色素前体物质染发剂按以下步骤制备：将实施例1-3中制得的黑色素前体物质与染发剂常用助剂和水，在减压充氮的条件下制成膏状或水状染发剂，其中具体原料的选择与配比如表1所示，其中所用原料均为市售。

表1 实施例4中各原料的种类和量

其中，黑色素前体物质为上述实施例1-3中制得的，上述百分数均为占染发剂的重量百分数，其余量为水。

实施例5

本实施例的黑色素前体物质染发剂的使用方法按以下步骤进行：

将待染头发清洗后，将本实施例4中所制得的黑色素前体物质染发剂均匀涂于头发表面，30 min后用清水冲洗擦干；每日一次，可以明显观察到白发部分逐渐变黑，使用第三天即可见发色显著变黑，第六天基本看不到白色头发，说明本发明的产品染发效果优秀，如图14所示。

实施例6

本实施例的黑色素前体物质染发剂的使用方法与实施例5的不同之处在于：染发剂在头发上的停留时间为50 min；可以明显观察到白发部分逐渐变黑，在第三天开始变黑，继续使用到满意的黑发颜色。

实施例7

本实施例的黑色素前体物质染发剂的使用方法与实施例5的不同之处在于：染发剂在头发上的停留时间为40 min；可以明显观察到白发部分逐渐变黑，在第三天开始变黑，继续使用到满意的黑发颜色。

对比验证试验

本发明染发剂与市售染发剂的比较

取等量的白发，经洗发水清洗后，将市售两剂型的染发剂A剂与B剂混合后均匀涂于头发上，40min后用清水洗去浮色。

取等量的白发，经洗发水与清水洗后，将本发明的染发剂按照实施例6中的步骤对头发进行染色。

然后，在显微镜下观察白发、人的自然黑发以及染过的黑发的效果（见图5-图12）。从结果中可看出，本产品对白发的染发效果理想，且对头发的损伤较小，染过之后的头发更接近于人体自然黑发。

本发明染发剂用于白色牦牛毛的染色

白色牦牛毛的结构和人头发类似，经常被用来作为染发效果检验的替代品。

用梳子将实施例4制得的产品涂至白色牦牛毛上，正反方向反复梳理，使膏体均匀分布在牦牛毛上，停留40min。之后用清水简单清洗，用毛巾擦至不滴水。

从染发前后的效果对比图（图13）中可以看出，经过本染发剂染发后的牦牛毛颜色均匀乌黑。

虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于，所述染发剂的制备包括以下工序：

（a）食用菌复合酶液的提取、纯化、固定及保存；

（b）将反应底物进行生物转变，得到黑色素前体；

（c）对上述得到的反应液进行处理，提高5,6-二羟基吲哚的浓度；

（d）将上述得到的黑色素前体物质与辅料进行混合，即可得到染发剂；

所述黑色素前体的制备包括以下步骤：

（1）准备反应底物；

（2）从食用菌中提取合成黑色素前体所需的复合酶；

（3）利用步骤（2）制得的复合酶对步骤（1）中的反应底物进行催化，获得目标产物；

（4）将步骤（3）中所得目标产物进行转化处理，获得黑色素前体；

所述反应底物为酪氨酸、多巴、多巴胺中的一种或多种；

所述食用菌为杏鲍菇、双孢菇、褐菇、草菇、平菇、香菇、黑木耳、茶树菇中的一种或多种；

所述染发剂包括：黑色素前体、染发剂常用助剂和水；

所述黑色素前体包括多巴色素、5,6-二羟基吲哚和5,6-二羟基吲哚-2-羧酸；

所述黑色素前体占染发剂的重量百分比为0.01%～5%；

所述染发剂常用助剂为润湿渗透剂、增稠剂、表面活性剂、保湿剂、pH值调节剂中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：

所述润湿渗透剂为L-半胱氨酸、谷胱甘肽中的一种或两种；

所述增稠剂为羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、淀粉、硅凝胶、明胶、海藻酸钠、瓜尔胶、琼脂、大豆蛋白胶、聚乙二醇、聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺、聚γ-谷氨酸、玻璃质酸钠、聚丙烯酸、低分子聚乙烯蜡、黄原胶中的一种或几种；

所述表面活性剂为单硬脂酸甘油酯、十六烷基三甲基氯化铵、鲸蜡醇、月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、磺基琥珀酸单酯二钠、爱玛膏中的一种或几种；

所述保湿剂为甘油、山梨醇、甘露醇、乙二醇、丙三醇、食用油中的一种或几种；

所述pH值调节剂为赖氨酸、精氨酸、碳酸氢钠中的一种或几种。

3.根据权利要求1或2所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：

所述润湿渗透剂占染发剂的重量百分比为1%~10%；

所述增稠剂占染发剂的重量百分比为0.2%~2%；

所述表面活性剂占染发剂的重量百分比为0.1%~2%；

所述保湿剂占染发剂的重量百分比为1%~15%；

所述pH值调节剂占染发剂的重量百分比为1%~10%。

4.根据权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：所述目标产物转化处理进行以下操作中的一种或多种：沸水加热、加热同时减压蒸发、电解、添加脱羧酶。

5.根据权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：所述底物为L-酪氨酸。

6.根据权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：所述底物浓度为1mM~10mM。

7.根据权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中提取的复合酶进行纯化和固定化处理；所述纯化的方法为超滤和/或离子交换柱层析。

8.一种黑色素前体物质染发剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：将待染头发清洗后，将权利要求1所述的黑色素前体物质染发剂均匀涂于头发表面，30~50min后用清水冲洗擦干；每日一次，重复使用4日以上。