CN106086201B - 一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 - Google Patents
一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106086201B CN106086201B CN201610534032.9A CN201610534032A CN106086201B CN 106086201 B CN106086201 B CN 106086201B CN 201610534032 A CN201610534032 A CN 201610534032A CN 106086201 B CN106086201 B CN 106086201B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- heart failure
- patients
- chronic heart
- coding rna
- chain non
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 75
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 title claims abstract description 59
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 title claims abstract description 40
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108091026822 U6 spliceosomal RNA Proteins 0.000 claims description 20
- 108020005198 Long Noncoding RNA Proteins 0.000 abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 abstract description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 9
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 9
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010052337 Diastolic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004688 Small Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000035850 clinical syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000010247 heart contraction Effects 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L magnesium chloride Substances [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂，属于心血管分子生物学领域。该制剂包括序列结构如SEQ NO.1所示的血清长链非编码RNA H19和实时荧光定量PCR检测试剂。本发明制剂只需从人群外周血血清中提取RNA即可检测lncRNA H19表达水平，从而对慢性心力衰竭患者做出早期、快速的无创性诊断，操作简单，稳定性好。本方法不仅可用于慢性心力衰竭患者的早期诊断，而且可以用于慢性心力衰竭患者的患病风险的预测，为慢性心力衰竭患者的早期诊断和预测提供了强有力的技术支持，具有深远的临床意义和推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂，尤其涉及一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂，属于心血管分子生物学领域。
背景技术
慢性心力衰竭是各种心血管疾病发展到严重阶段的临床综合征，主要病理生理特征为心脏收缩和/或舒张功能障碍，导致心脏泵血功能低下，是威胁人类健康最重要的疾病之一。目前为止，尽管针对心力衰竭的防治措施已经取得了一定的进展，但其发病率和死亡率仍居高不下，因此，需要寻找新的、更为有效的诊断及预后评估方法。
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类新发现的在多种生物进程中起重要调控作用的非编码RNA，可以在转录、转录后及表观遗传学水平等多个层面上发挥基因调控作用。近年来研究表明，lncRNAs在高血压、冠心病、动脉粥样硬化等心血管疾病中都能起到重要的调控作用。最近我们发现，lncRNA H19在心力衰竭大鼠心肌组织和血清中表达均有明显上调；通过构建H19过表达腺相关病毒载体，在心肌细胞肥大模型和病理性心肌肥厚大鼠模型中均证实，lncRNA H19表达升高具有抑制心肌肥厚、改善心功能的作用。进一步通过检测心力衰竭患者发现，lncRNA H19水平在心力衰竭患者有明显升高，并且与左室射血分数呈反比；ROC诊断曲线显示，lncRNA H19作为心力衰竭诊断标志物具有较高的诊断敏感性和特异性。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种具有较高的诊断敏感性和特异性的包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂。
本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂，所述制剂包括血清长链非编码RNA H19，其序列结构如SEQ NO.1所示。
本发明利用血清长链非编码RNA H19(定位于染色体11p15.5，GeneBank登陆号NR_002196)作为心力衰竭早期诊断的标志物，该血清长链非编码RNA H19全长2.3kb，序列结构如SEQ NO.1所示，表达上调与心肌组织验证结果具有一致性，且检验结果的敏感性高，特异性好。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述制剂还包括实时荧光定量PCR检测试剂。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述实时荧光定量PCR检测试剂包括血清长链非编码RNA H19的特异性引物和内参照U6snRNA的特异性引物。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述血清长链非编码RNA H19的特异性引物包括血清长链非编码RNA H19正向引物和血清长链非编码RNA H19反向引物。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述血清长链非编码RNA H19正向引物的序列如SEQ NO.2所示。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所示血清长链非编码RNA H19反向引物的序列如SEQ NO.3所示。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述内参照U6 snRNA的特异性引物包括内参照U6 snRNA正向引物和内参照U6 snRNA反向引物。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述内参照U6 snRNA正向引物的序列如SEQ NO.4所示。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述内参照U6 snRNA反向引物的序列如SEQ NO.5所示。
在上述的一种包括血清长链非编码RNA H19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂中，所述的实时荧光定量PCR检测试剂中还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶、逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2等。
与现有技术相比，本发明制剂只需从人群外周血血清中提取RNA即可检测lncRNAH19表达水平，从而对慢性心力衰竭患者做出早期、快速的无创性诊断，操作简单，稳定性好。本方法不仅可用于慢性心力衰竭的早期诊断而且可以用于慢性心力衰竭患者的患病风险的预测，为慢性心力衰竭的早期诊断和预测提供了强有力的技术支持，具有深远的临床意义和推广价值。
附图说明
图1为实时荧光定量PCR分析血清lncRNA H19在慢性心力衰竭心肌组织与正常心肌组织中的表达差异；
图2为实时荧光定量PCR分析血清lncRNA H19在慢性心力衰竭患者与正常人中的表达差异；
图3为扩大样本量后，实时荧光定量PCR分析血清lncRNA H19在慢性心力衰竭患者与正常人中的表达差异；
图4为ROC分析血清lncRNA H19对慢性心力衰竭早期诊断的特异性和敏感性。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，并结合附图说明对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。下述实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得，或可常规方法制得。
实施例1：
实时荧光定量PCR法检测发现lncRNAH19在慢性心力衰竭患者心肌组织中表达升高。
1.材料与方法
从6例慢性心力衰竭患者和7例正常人心肌组织中抽提总RNA，1μg RNA经逆转录成cDNA后，进行实时荧光定量PCR检测。
血清lncRNA H19正向引物序列如SEQ NO.2所示：5’-TCCCAGAACCCACAACATGAAA-3’。
血清lncRNA H19反向引物序列如SEQ NO.3所示：5’-CACCTTCCAGAGCCGATTCC-3’。
用于内参照的U6 snRNA正向引物序列如SEQ NO.4所示：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’。
用于内参照的U6 snRNA反向引物序列如SEQ NO.5所示：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。
实时荧光定量PCR反应体系为(PCR检测方法是两个独立反应分别检测H19和内参照U6 snRNA的表达，因此下面的正向引物和反向引物分别为各自反应中所使用的特异性引物)：
实时荧光定量PCR反应程序
反应结束，确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和熔解曲线后，根据CT值用内参基因U6 snRNA标化后计算lncRNAH19的相对定量值，比较慢性心力衰竭患者与正常人心肌组织lncRNAH19表达的差异。结果为：如图1所示，慢性心力衰竭患者心肌组织中lncRNAH19表达水平较正常心肌组织有明显升高(P＝0.026)。
实施例2：
实时荧光定量PCR法检测发现血清lncRNAH19表达在慢性心力衰竭患者中明显升高。
1.材料与方法
将预先收集的上述6例慢性心力衰竭患者和7例正常人的外周血血清样本置于冰上备用。血清采集过程如下，使用BD真空采血管(肝素抗凝)收集慢性心力衰竭患者和正常人的空腹静脉血约5mL，室温静置30分钟后，于4℃、1600g离心10分钟。小心将上层血清转移分装至新的1.5mL离心管中，-80℃冻存备用。
利用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit(Qiagen,#55114)(此试剂盒为商品化的RNA提取试剂盒，产自Qiagen公司)试剂盒抽提血清中总RNA，具体步骤如下：
S1、吸取100μL蛋白酶K至50mL离心管中；
S2、吸取1mL血清溶液加入50mL离心管中；
S3、吸取800μL Buffer ACL加入50mL离心管中，涡旋震荡30s；
S4、将离心管置于60℃水浴中孵育30分钟；
S5、向离心管中加入1.8mL Buffer ACB，涡旋震荡30s；
S6、将离心管置于冰上孵育5分钟；
S7、将溶液转移至预先组装好的真空抽吸泵中，待全部液体通过mini柱后，关闭真空泵，将压力释放至0，弃去延长管；
S8、吸取600μL Buffer ACW1到mini柱，维持mini柱盖子打开状态，打开真空泵，待全部液体通过mini柱后，关闭真空泵，将压力释放至0；
S9、吸取750μL Buffer ACW2到mini柱，维持mini柱盖子打开状态，打开真空泵，待全部液体通过mini柱后，关闭真空泵，将压力释放至0；
S10、吸取750μL无水乙醇到mini柱，维持mini柱盖子打开状态，打开真空泵，待全部液体通过mini柱后，关闭真空泵，将压力释放至0；
S11、关闭mini柱的盖子，将mini柱卸下，弃去连接器，将mini柱放到干净的2mL收集管，20000g离心3分钟；
S12、将mini柱放到一个新的2mL收集管中，打开管盖，置于56℃水浴中孵育10分钟，直至mini膜完全干燥；
S13、将mini柱放到一个新的1.5mL洗脱管，加入20μL Buffer AVE至mini膜中央位置，关上管盖，室温孵育3分钟；
S14、20000g离心1分钟，收集的溶液即为总RNA。
将1μg RNA逆转录成cDNA后，进行实时荧光定量PCR检测。
血清lncRNA H19正向引物序列如SEQ NO.2所示：5’-TCCCAGAACCCACAACATGAAA-3’。
血清lncRNA H19反向引物序列如SEQ NO.3所示：5’-CACCTTCCAGAGCCGATTCC-3’。
用于内参照的U6 snRNA正向引物序列如SEQ NO.4所示：5’-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3’。
用于内参照的U6 snRNA反向引物序列如SEQ NO.5所示：5’-GGAACGCTTCACGAATTTG-3’。
实时荧光定量PCR反应体系为(PCR检测方法是两个独立反应分别检测H19和内参U6 snRNA的表达，因此下面的正向引物和负向引物分别为各自反应中所使用的特异性引物)：
实时荧光定量PCR反应程序
反应结束，确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和熔解曲线后，根据CT值用内参基因U6 snRNA标化后计算H19的相对定量值，比较慢性心力衰竭患者和正常人血清lncRNA H19表达的差异。结果为：如图2所示，血清lncRNA H19表达在慢性心力衰竭患者中较正常人有明显升高(P＝0.018)。该结果与实施例1心肌组织中的检测结果相一致，说明检测血清lncRNA H19的表达水平，即可判断该患者是否患有慢性心力衰竭。
实施例3：
通过扩大样本量，实时荧光定量PCR检测炎症血清lncRNA H19用于慢性心力衰竭诊断的特异性和敏感性。
1.材料与方法
使用BD真空采血管(肝素抗凝)收集100例慢性心力衰竭患者和100例正常人的空腹静脉血约5mL，室温静置30分钟后，于4℃、1600g离心10分钟。小心将上层血清转移分装至新的1.5mL离心管中，-80℃冻存备用。
采用实施例2中步骤，利用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit(Qiagen,#55114)(此试剂盒为商品化的RNA提取试剂盒，产自Qiagen公司)试剂盒抽提血清中总RNA。
采用实施例2中步骤进行逆转录及实时荧光定量的方法检测lncRNA H19的表达。
反应结束，确认实时荧光定量PCR的扩增曲线和熔解曲线后，根据CT值用内参基因U6 snRNA标化后计算H19的相对定量值，比较慢性心力衰竭患者和正常人血清lncRNA H19表达的差异。同时，通过ROC曲线分析利用血清lncRNA H19作为慢性心力衰竭诊断标志物的特异性和敏感性。
如图3所示，血清lncRNA H19表达在慢性心力衰竭患者中较正常人有明显升高(P＝0.026)。
如图4的ROC曲线分析显示，血清lncRNA H19用于慢性心力衰竭诊断ROC曲线下方的面积(Area under curve,AUC)可达0.95，特异性可高达86.1％，灵敏度可达96.7％。因此，血清lncRNA H19能较好地用于慢性心力衰竭的早期诊断。
本发明检测方法仅需要1mL血清便可用于lncRNA H19的表达水平检测，因而具备较好的操作性。
通过荧光定量分析发现lncRNA H19在6例慢性心力衰竭患者心肌组织和7例正常人心肌组织中存在差异性表达(P＝0.026)(图1)，进一步检测血清lncRNA H19发现，慢性心力衰竭患者血清lncRNA H19表达与正常人的表达存在明显差异(P＝0.018)(图2)，且与心肌组织中的检测结果一致。通过扩大样本量，在100例慢性心力衰竭患者和100例正常人中检测血清lncRNA H19表达进一步验证发现，血清lncRNA H19表达在慢性心力衰竭患者和正常人中有明显差异(P＝0.021)(图3)，在慢性心力衰竭患者中表达升高。血清lncRNA H19用于慢性心力衰竭诊断特异性可高达86.1％，灵敏度可达96.7％(图4)。因此，本发明方法只需从人群外周血血清中提取RNA即可检测lncRNA H19表达水平，从而对慢性心力衰竭患者做出早期、快速的无创性诊断，操作简单，稳定性好。本方法不仅可用于慢性心力衰竭的早期诊断而且可以用于慢性心力衰竭患者的患病风险的预测，为慢性心力衰竭的早期诊断和预测提供了强有力的技术支持，具有深远的临床意义和推广价值。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。
Claims (7)
1.一种检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述血清长链非编码RNA H19的序列结构如SEQ NO.1所示，所述实时荧光定量PCR检测试剂包括血清长链非编码RNA H19的特异性引物和内参照U6 snRNA的特异性引物。
2.根据权利要求1所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述血清长链非编码RNA H19的特异性引物包括血清长链非编码RNA H19正向引物和血清长链非编码RNA H19反向引物。
3.根据权利要求2所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述血清长链非编码RNA H19正向引物的序列如SEQ NO.2所示。
4.根据权利要求2所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所示血清长链非编码RNA H19反向引物的序列如SEQ NO.3所示。
5.根据权利要求1所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述内参照U6 snRNA的特异性引物包括内参照U6 snRNA正向引物和内参照U6 snRNA反向引物。
6.根据权利要求5所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述内参照U6 snRNA正向引物的序列如SEQ NO.4所示。
7.根据权利要求5所述的检测血清长链非编码RNA H19的实时荧光定量PCR检测试剂在制备慢性心力衰竭患者早期诊断制剂中的应用，其特征在于，所述内参照U6 snRNA反向引物的序列如SEQ NO.5所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610534032.9A CN106086201B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610534032.9A CN106086201B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106086201A CN106086201A (zh) | 2016-11-09 |
| CN106086201B true CN106086201B (zh) | 2019-11-19 |
Family
ID=57213197
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610534032.9A Expired - Fee Related CN106086201B (zh) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | 一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106086201B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106676109A (zh) * | 2016-12-08 | 2017-05-17 | 新疆医科大学第附属医院 | Enst00000418539.1及制剂或诊断剂或药物或试剂盒和应用 |
| CN108410874B (zh) * | 2018-03-14 | 2021-07-06 | 孙勇 | 严重烧伤后肠道组织标志物lncRNAH19及其应用 |
| CN110878348B (zh) * | 2019-11-19 | 2023-03-28 | 南京启医科技有限公司 | 一种具有较高特异性的心衰lnc RNA生物标志物及其检测方法和应用 |
| CN111662984A (zh) * | 2020-07-15 | 2020-09-15 | 南京凡亦达生物科技有限公司 | 一种血清长链非编码rna联合cea在宫颈癌早期诊断方面的应用 |
| CN114107450A (zh) * | 2021-11-29 | 2022-03-01 | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 | 肿瘤lncRNA标志物H19恒温数字化检测系统 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015140224A1 (en) * | 2014-03-18 | 2015-09-24 | Medizinische Hochschule Hannover | MITOCHONDRIAL NON-CODING RNAs FOR PREDICTING DISEASE PROGRESSION IN HEART FAILURE AND MYOCARDIAL INFARCTION PATIENTS |
-
2016
- 2016-07-07 CN CN201610534032.9A patent/CN106086201B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015140224A1 (en) * | 2014-03-18 | 2015-09-24 | Medizinische Hochschule Hannover | MITOCHONDRIAL NON-CODING RNAs FOR PREDICTING DISEASE PROGRESSION IN HEART FAILURE AND MYOCARDIAL INFARCTION PATIENTS |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Analysis of Transcriptome Complexity Through RNA Sequencing in Normal and Failing Murine Hearts;Jae-Hyung Lee等;《Circulation Research》;20121209;第109卷(第12期);第1332-1341页 * |
| Long noncoding RNA dysregulation in ischemic heart failure;Simona Greco等;《Journal of Translational Medicine》;20160618;第14卷;第1-14页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106086201A (zh) | 2016-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106086201B (zh) | 一种包括血清长链非编码rna h19的慢性心力衰竭患者早期诊断的制剂 | |
| CN105506115B (zh) | 一种检测诊断遗传性心肌病致病基因的dna文库及其应用 | |
| CN104372087A (zh) | 由血清microRNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒 | |
| CN105861672A (zh) | 一种人体外周血游离DNA中septin9基因甲基化检测试剂盒及检测方法 | |
| CN109777877A (zh) | 基于ptbp1甲基化辅助诊断脑动脉瘤的检测试剂盒及其应用 | |
| CN111500710A (zh) | circRNA730作为生物标志物在预测、诊断或预后脓毒症中的用途 | |
| CN110055322A (zh) | 用于急性心肌梗死诊断的循环miRNA标志物及其应用 | |
| CN111286536A (zh) | 一种用于诊断心肌梗死的基因标志物及其应用 | |
| CN107460241B (zh) | 外泌体小分子rna在急性心肌梗死风险评估中的应用 | |
| CN106676167A (zh) | miR‑192作为糖尿病肾病早期诊断特异性生物标志物及其应用 | |
| CN111411111A (zh) | 一种LncRNA标志物及其在急性心肌梗死诊断中的应用 | |
| CN114085902B (zh) | 检测人血清外泌体中miR-671-5p试剂的应用及骨质疏松检测试剂盒 | |
| CN106337051A (zh) | 乙型肝炎/肝硬化microRNA分子标志物组合及其用途 | |
| CN108424960B (zh) | 一种LncRNA作为深静脉血栓形成诊断标志物的应用 | |
| CN108588209A (zh) | 一种用于诊断心血管疾病的分子标志物Nlrp3及其应用 | |
| CN109182516A (zh) | 基于smim20基因的消化道癌辅助诊断试剂盒及其应用 | |
| CN107312836A (zh) | 小分子RNAmiRNA‑146a‑5p在相关疾病风险诊断中的应用 | |
| CN102134585A (zh) | 血浆miR-208a在急性心梗诊断早期标志物中的应用 | |
| CN110241207A (zh) | 一种不稳定性心绞痛生物标记物及其应用和试剂盒 | |
| CN107058474B (zh) | 一种通过血浆microRNA-3591-3p诊断急性高山病的诊断试剂盒 | |
| CN105671178B (zh) | 血清microRNA肝癌诊断标志物及试剂盒 | |
| CN108004316A (zh) | 用于预测急性心肌梗死风险的试剂盒 | |
| CN111286531B (zh) | 循环核酸作为高血压、糖尿病和高血脂标志物的应用 | |
| CN111378741B (zh) | 血液中环状rna的检测方法及其应用 | |
| CN107217055B (zh) | 一种癌症诊断芯片及其试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20191119 |