CN106085968B - 一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途。本发明的一种水貂伪狂犬灭活疫苗中含有的灭活后的保藏号为CGMCC No.12340的伪狂犬病毒株PRV‑DL14/08株，本发明还公开了所述水貂伪狂犬疫苗的制备方法。实验证明本发明制备的水貂伪狂犬灭活疫苗具有良好的安全性，免疫水貂后可并产生理想的免疫保护效果，因此可作为防控水貂等鼬科动物伪狂犬的候选疫苗株。

Description

一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种伪狂犬灭活疫苗及其制备方法和用途，特别涉及一种由伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株制备的用于水貂伪狂犬防控的灭活疫苗及制备方法，本发明属于生物技术领域。
背景技术
伪狂犬病(Pseudorabies,PR)，是由伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的经济动物和家畜的一种急性传染病。其特征是发热、奇痒、内脏出血、脑脊髓炎等。猪的伪狂犬已有报道，近年来水貂临床病例也持续增加。该病早在1813年流行于美国的牛群中，1902年匈牙利学者奥叶兹基(Aujeszky)第一次较为详细的描述了该病，故命名为奥叶兹基病(又称Aujeszky氏病，Aujeszky’s disease,AD),1910年，Schmiedhofer通过过滤试验证实本病原为病毒且首先分离出病毒。
刘永纯1984年报道了第一例猫感染伪狂犬以后，1956年周圣文又首次报道了哺乳仔猪感染伪狂犬的病例。伪狂犬在我国一直未得到彻底净化，而且在2011年以来，该病已经波及我国30多个省市和地区(包括香港和台湾地区)。目前，在我国的华北、东北地区以及河南、河北、山东、湖北、湖南、江西、江苏等地PR呈爆发流行。
随着我国经济动物及毛皮动物养殖规模的逐年扩大，近年来水貂、狐、貉等毛皮动物通过食源的渠道感染伪狂犬病毒的情况也日益凸显，特别是PR造成的死亡率几乎高达100％，对养殖业危害巨大，因此，切实做好PR防控工作已迫在眉睫。疫苗是防控病毒性传染病的有效手段，因而研发一种拥有我国自主知识产权、保护性良好的新型高效疫苗具有重要意义。
目前，我国的疫苗用毒株就有Bartha,Bartha-K61,Bucharest,BUK,HB-98,和SA215等，但我国近两年猪伪狂犬的爆发呈上升趋势，达到了前所未有的规模，且有的感病猪群曾接种过商品化疫苗。这表明我们所使用的疫苗株有的已经不能完全保护住伪狂犬野毒株的感染。而且目前还没有针对水貂的伪狂犬疫苗研制成功，鉴于此本发明开展了相关疫苗的研究工作。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种水貂伪狂犬灭活疫苗及其制备方法。使用该疫苗免疫水貂后可产生理想的保护效果，且具有良好的安全性。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
伪狂犬病毒株的分离与鉴定：2014年，病料采集自辽宁省某经济动物养殖场发病水貂脑、肝脏，病料经过研磨后，接种已长成单层的猪肾上皮细胞(PK15细胞)，对组织培养物用伪狂犬病毒(PRV)特异性引物进行PCR扩展鉴定gE和gD基因，扩增gE基因引物分别为gE-F和gE-R，扩增gD基因引物分别为gD-F和gD-R，如表1所示。并进行兔体致病性试验，证明分离的病毒为伪狂犬病毒株，命名为PRV-DL14/08，分类命名为伪狂犬病病毒，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其微生物保藏号是：CGMCC No.12340；保藏时间：2016年05月31日；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
进一步的，本发明还提出了以上所述伪狂犬病毒株在制备防治伪狂犬疫苗中的用途。
在本发明中，优选的，所述的伪狂犬病疫苗为水貂伪狂犬灭活疫苗。
更进一步的，本发明还提出了一种水貂伪狂犬病灭活疫苗及其制备防治水貂伪狂犬病药物中的用途，所述疫苗中含有灭活后的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株。
在本发明中，优选的，所述伪狂犬疫苗中含有的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株≥106TCID50/头份。
再进一步的，本发明提出了一种制备以上所述的水貂伪狂犬灭活疫苗的方法，包括以下步骤：
将所述的伪狂犬病毒PRV-DL14/08株增殖后进行病毒滴度测定，依所含免疫剂量，加入灭活剂及佐剂后制备而成，所述伪狂犬疫苗中含有的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株≥106TCID50/头份。
在本发明中，优选的，所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株的增殖包括以下步骤：
在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获，至-80℃保存，应不超过1年。
在本发明中，优选的，所述的灭活剂为甲醛溶液，所述的佐剂为铝胶。
在本发明中，优选的，所述的水貂伪狂犬灭活疫苗是通过以下步骤制备得到的：
在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获病毒上清液，按2份体积的病毒上清液加5份体积的pH7.2-7.4 2％(w/w)氢氧化铝磷酸盐缓冲液的比例加入氢氧化铝磷酸盐缓冲液，然后用20％(w/w)氢氧化钠将pH值调至7.2-7.4，按总体积的0.15％加入甲醛溶液，振摇30分钟，然后放2-8℃灭活7日，期间每日上、下午各振摇1次，每次15-20分钟，加入25％(w/w)铝胶，每隔12小时震动30min，制备得到所述的水貂伪狂犬灭活疫苗。
安全性和免疫原性实验结果表明，本发明制备得到的水貂伪狂犬毒灭活疫苗对水貂具有良好的安全性，免疫水貂后可产生理想的保护效果，可作为防控水貂伪狂犬的候选疫苗株。
附图说明
图1为PRV-DL14/08株gE和gD基因扩增结果图。
其中，M为DL2000DNA Marker，1为gE基因片段扩增产物，2为gD基因片段扩增产物。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述发明，本发明的优点和特点交回随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或者替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1本发明PRV-DL14/08株的分离鉴定
材料与方法
1、病料和细胞
病料采集自大连某经济动物养殖场发病死亡水貂脑、肝脏组织，PK15细胞有中国农科院特产研究所提供。
2、病毒增殖
发病死亡水貂及肝脏组织，用组织匀浆研磨后，用无血清DMEM培养液1:5稀释成悬液，加入青/链霉素至10000U/mL，反复冻融3次，经12000rmp离心15min取上清，接种已长成单层的PK细胞，于37℃，5％CO2，培养箱培养72小时，反复冻融3次，离心取上清，-80℃保存备用。
3、分子生物学试剂
DNA提取试剂盒购自Qiagen公司；PCR扩增所用的EX Taq DNA聚合酶购自宝生物公司；胶回收试剂盒购自AXYGEN公司。
4、引物设计
利用Oligo 6.0软件设计合成扩增PRV中gE和gD基因的特异性引物，扩增gE引物分别为gE-F和gE-R，扩增gD基因引物分别为gD-F和gD-R，如表1所示：
表1
5、gE和gD基因的PCR扩增程序：
94℃预变性5min
94℃变性30秒
55℃退火30秒
72℃延伸30秒
循环过程30次
72℃延伸10分钟
PCR产物用AXYGEN胶回收试剂盒回收片段。
6、连接与转化
将胶回收的PCR产物于pMD18-T载体连接后，转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，然后取出100μL菌液涂于含有氨苄青霉素(50μg/mL)的LB平板上，37℃培养18h。挑取白色单独菌落，接种于5mL含有氨苄青霉素(50μg/mL)的液体LB培养基中，37℃培养18h。
7、兔体致病性试验
取8只3月龄家兔(由长春亿斯公司提供)份2组，攻毒组4只，每只兔颈部皮下注射1mL含PRV细胞培养上清(2×106TCID50/只)，对照组4只接种PBS，病毒接种后，每日观察家兔发病情况。
试验结果
1、PCR结果
gD和gE基因片段大小分别约为634bp和493bp，与预期大小相符，电泳结果见图1所示。
2兔体致病性试验结果
攻毒48h后，攻毒组家兔舔咬后肢直至掉毛、破损和出血，继而出现体温升高、四肢麻痹，抽搐、角弓反张乃至瘫痪，最后4只兔子全部因器官衰竭死亡；对照组未见可见临床症状。具体结果见表2。
表2伪狂犬病毒强毒PRV-DL14/08株对兔子的致病性
通过以上实验证明分离的病毒为伪狂犬病毒株，命名为PRV-DL14/08株，分类命名为伪狂犬病病毒，并将其保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其微生物保藏号是：CGMCC No.12340；保藏时间：2016年05月31日；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
实施例2本发明水貂动物PR灭活疫苗的制备及其免疫效力评价
1材料与方法
1.1病毒增殖及滴定：
在已长成单层的PK15细胞中，以1％(v/v)比例接种PRV-DL14/08种毒(CGMCCNo.12340)，置于于37℃，5％CO2培养基中，培养72h，反复冻融3次后收获，12000rpm离心15min，取上清，滴定后置-80℃保存，应不超过12个月。
1.2水貂动物PR灭活疫苗的制备：
将细胞培养制得的上清按2份体积细胞毒液加5份体积2％(w/w)氢氧化铝磷酸盐缓冲液(pH7.2-7.4)的比例混匀，用20％(w/w/)氢氧化钠将pH值调至7.2-7.4，按总量的0.15％(v/v)加入甲醛溶液，振摇30分钟。然后放2-8℃灭活7日，期间每日上、下午各振摇1次，每次15-20分钟，然后加入25％(w/w)铝胶，每隔12小时震动30min，制备得到水貂动物PR灭活疫苗，其中含有的伪狂犬病毒PRV-DL14/08株为106TCID50/ml。
1.3水貂免疫效力评价
1.3.1免疫与攻毒
将16只10周龄PRV抗体检测阴性水貂(中国农业科学院特产研究所动物实验中心)随机分成4组，4只/组。第一组(4只)按照表3注射1.2节制备得到的水貂伪狂犬灭活疫苗1ml/只，第二组和第三组对照疫苗分别采用HB-98灭活疫苗和伪狂犬活疫苗Bartha-K61为疫苗免疫组，肌肉注射单剂量佐剂疫苗，免疫1次；第四组(4只)为对照组皮下注射1mL PBS。(结果见表3)。第一次免疫后21天，通过肌肉注射1ml(106TCID50/只)PRV-DL14/08，攻毒后每日测定水貂体温，观察临床症状和死亡情况。
表3免疫原性实验动物分组
组别 注射疫苗 免疫剂量
第一组 本实施例1.2节制备的PRV灭活疫苗 1ml/只
第二组 商品伪狂犬病毒灭活疫苗HB-98 1ml/只
第三组 商品伪狂犬病毒活疫苗Bartha-K61 10<sup>6</sup>TCID50/只
对照组 1mL PBS 1ml/只
1.3.2临床症状
攻毒后1-10d，每日定时观察各组水貂的临床症状。
1.3.3病毒排毒检测
攻毒后1d-10d，每天采集各种水貂的鼻拭子，通过PCR方法检测水貂的排毒情况。
1.3.4抗体检测
各组水貂在免疫前0d，及免疫后1W(1周)、2W、3W、4W采血，分离血清，检测中和抗体水平。
2实验结果
2.1疫苗免疫后水貂抗体水平
疫苗免疫组在免疫后较高中和抗体，且随免疫时间逐步升高。对照组水貂未产生抗体，见表4所示。
表4水貂伪狂犬灭活疫苗免疫水貂后不同时间的抗体情况
2.2攻毒后水貂的临床症状
整个攻毒阶段，灭活疫苗免疫水貂未出现表现可视临床症状。对照水貂在攻毒后第2d开始表现精神沉郁，食欲下降、流涎、啃咬注射部位等症状，第3d出现水貂死亡，攻毒第4d对照组全部死亡。见表5所示结果，水貂伪狂犬灭活疫苗免疫水貂后可有效阻断病毒感染(出现临床症状)，保护率可到达100％，而对照组水貂攻毒后4日后全部死亡。因此说明，本发明的水貂伪狂犬灭活疫苗具有很好的保护力。另外相对于对照组商品化灭活疫苗和活疫苗，注射本发明的水貂伪狂犬病毒灭活疫苗的水貂体温上升时间更短，食欲正常，并且没有临床症状，显示出更好的免疫保护效果。
表5水貂伪狂犬灭活疫苗免疫水貂后的攻毒情况
组别 临床症状及死亡情况 保护率
第一组 体温升高2-3天，食欲正常，没有神经症状，健康存活 100％(4/4)
第二组 体温升高5-6天，食欲减退，没有神经症状，部分存活 75％(3/4)
第三组 体温升高7-10天，食欲减退，有明显神经症状，部分存活 50％(2/4)
对照组 有明显的症状，攻毒后3天死亡1只，4天全部死亡 0％(0/4)
2.3攻毒后的排毒情况
疫苗免疫所有水貂未检测到病毒排出；阴性对照组在攻毒后第2d开始出现排毒，持续到攻毒后第4d至所有水貂死亡。

Claims (9)

1.一种伪狂犬病毒株，其特征在于，所述的伪狂犬病毒株命名为PRV-DL14/08，其保藏号为CGMCC No.12340，保藏日期为2016年5月31日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.权利要求1所述的伪狂犬病毒株在制备防治伪狂犬疫苗中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的伪狂犬疫苗为水貂伪狂犬灭活疫苗。
4.一种水貂伪狂犬灭活疫苗，其特征在于，含有灭活后的权利要求1所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株。
5.根据权利要求4所述的水貂伪狂犬灭活疫苗，其特征在于，所述伪狂犬灭活疫苗中含有的灭活后的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株≥106TCID50/头份。
6.一种制备权利要求4或5所述的水貂伪狂犬灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株增殖后进行病毒滴度测定，依所含免疫剂量，加入灭活剂及佐剂后制备而成，所述伪狂犬疫苗中含有伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株≥106TCID50/头份。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株的增殖包括以下步骤：
在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获，至-80℃保存，应不超过1年。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的灭活剂为甲醛溶液，所述的佐剂为铝胶。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
在已长成单层PK15细胞中，按体积百分比1％的比例接种伪狂犬病毒株PRV-DL14/08株，置于37℃，5％CO2培养箱中，培养72h，反复冻融3次后收获病毒上清液，按2份体积的病毒上清液加5份体积的pH7.2-7.4 2％w/w氢氧化铝磷酸盐缓冲液的比例加入氢氧化铝磷酸盐缓冲液，然后用20％w/w氢氧化钠将pH值调至7.2-7.4，按总体积的0.15％加入甲醛溶液，振摇30分钟，然后放2-8℃灭活7日，期间每日上、下午各振摇1次，每次15-20分钟，加入25％w/w铝胶，每隔12小时震动30min，制备得到所述的水貂伪狂犬灭活疫苗。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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