CN106069750A - 一种无病毒草莓的培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种无病毒草莓的培养方法，涉及草莓种植技术领域，根据病毒在植物体内分布不均匀的理论，植物茎尖分生组织一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1‑2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖；本发明具有如下优点：其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响；其二是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律；其三是取材量小，培养材料经济；其四是生长周期短，繁殖系数大；其五是管理方便，可采用自动化生产；其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源；其七是产量高、品质好、耐储运，为草莓的进一步研究提供了科技支撑。

Description

一种无病毒草莓的培养方法

技术领域

本发明涉及草莓种植技术领域，更具体的说是涉及一种无病毒草莓的培养方法。

背景技术

草莓为重要的浆果植物，栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。草莓繁殖容易，结果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从11月份到次年的6月份，都有新鲜的草莓上市，填补了水果的淡季市场。

作为多年生草本的草莓，过去常规的栽培方法是：(1)用分枝进行繁殖，育苗率较低，发展迟缓；(2)以种子繁育幼苗。利用种子繁殖，后代出现严重的分离现象，其外部形状、品质、营养含量以及生长速度等都存在着不一致性。草莓在我国的种植面积居世界之首。但产量和总体生产水平与发达国家相比还存在着一定差距，表现为：(1)无病毒苗繁殖体系建立不完善，农民自繁自育，反复留种，致使种苗退化，病害滋生蔓延；(2)生产和流通渠道缺乏组织管理，产业化水平低，新技术、新品种推广应用慢，保鲜滞后，商品果率低；(3)品种杂乱，盲目引种，给农户造成损失，草莓研究和育种工作跟不上生产发展；(4)平均产量不高，农药残留超标，栽培方式落后，缺乏配套设施，草莓深加工发展慢。总之我国与发达国家的差距是反映在产量和品质上。

发明内容

本发明提供一种无病毒草莓的培养方法，采用无病毒培育法，以提高我国草莓的产量和品质。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)热处理脱毒：将草莓植株在40～41℃温度下热处理4～6周，然后取微茎尖培养；

(2)微茎尖脱毒：a.初代培养,取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5％次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透,在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度,茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的培养基中直至培养出含20～30个小芽的芽丛,培养条件为22～25℃，日照16～18h光强3000lx；b.继代培养,把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1～2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖；c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根；d.驯化,用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；

(3)花药培养,包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3～4℃冰箱中低温保存3～4天，经低温保存处理后的花蕾先在70％酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24～26℃，日照10h，光强1500lx,20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。

更优的，所述MS培养基的重量百分比组分为：30-35％的硝酸铵、40-42％的硝酸钾、7-8％的硫酸镁、8-10％的二水氯化钙、3.5-4％的磷酸二氢钾、1.2-1.5％的铁盐、0.05-0.1％的微量元素，余量为有机物，所述铁盐为质量比为55:45的EDTA二钠、硫酸亚铁，所述微量元素由碘化钾、硼酸、一水硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴的一种或多种组成，所述有机物由肌醇、烟酸、VB6、VB1、甘氨酸的一种或多种组成。

更优的，所述MS培养基所有溶质的总浓度为4.5g/L-5.0g/L。

更优的，所述MS培养基的PH值为5.8，采用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH值。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明根据病毒在植物体内分布不均匀的理论，植物茎尖分生组织(生长点)一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1-2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖；

2、草莓的组织培养是在预知的控制条件下，放在含有植物营养物质和生长调节物质的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程培养，故而具有如下优点：其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响；其二是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律；其三是取材量小，培养材料经济；其四是生长周期短，繁殖系数大；其五是管理方便，可采用自动化生产；其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源；其七是产量高、品质好、耐储运；

3、为草莓的进一步研究提供了科技支撑。

具体实施方式

本发明的应用原理、作用与功效，通过如下实施方式予以说明。

实施例1

一种无病毒草莓的培养方法，具体操作如下：

(1)准备培养基

MS培养基，包括8种等体积的母液，其配制方法为：分别称取硝酸铵165g、硝酸钾190g、硫酸镁37g、二水氯化钙40g、磷酸二氢钾17g,分别配成5种1L的母液，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；各称取EDTA二钠3.73g、硫酸亚铁2.78g，配成1L铁盐母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；各称取碘化钾83mg、硼酸620mg、一水硫酸锰1690mg、硫酸锌860mg、钼酸钠25mg、硫酸铜2.5mg、氯化钴2.5mg,配成1L微量元素母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；各称取肌醇10g、烟酸50mg、VB6 50mg、VB1 10mg、甘氨酸200mg,配成1L有机物母液，用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等；

植物生长调节物质的配制：萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)，分别配成1mg/mL的母液，分别称取这2种物质各100mg，NAA用少量乙醇溶解，6-BA用少量的NaOH溶液，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL，即得1mg/mL的母液；

用酸度计或PH试纸测溶液PH值(用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH值直到培养基的pH为5.8为止)，培养基的pH必须严格控制在5.8。

(2)草莓植株的热处理脱毒：将草莓植株在40～41℃温度下热处理4～6周，然后取微茎尖培养；

(3)微茎尖脱毒：a.初代培养,取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5％次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透,在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以0.1毫米左右、带有一个叶原基的茎尖为度,茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的培养基中直至培养出含20～30个小芽的芽丛,培养条件为22～25℃，日照16～18h光强3000lx；b.继代培养,把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1～2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖；c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根；d.驯化,用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；

(4)花药培养,包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3～4℃冰箱中低温保存3～4天，经低温保存处理后的花蕾先在70％酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24～26℃，日照10h，光强1500lx,20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。

如上所述即为本发明的实施例。本发明不局限于上述实施方式，任何人应该得知在本发明的启示下做出的结构变化，凡是与本发明具有相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)热处理脱毒：将草莓植株在40～41℃温度下热处理4～6周，然后取微茎尖培养；

(2)微茎尖脱毒：a.初代培养,取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5％次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透,在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度,茎尖分离后，迅速接入MS+6-苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的培养基中直至培养出含20～30个小芽的芽丛,培养条件为22～25℃，日照16～18h光强3000lx；b.继代培养,把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1～2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖；c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根；d.驯化,用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；

(3)花药培养,包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3～4℃冰箱中低温保存3～4天，经低温保存处理后的花蕾先在70％酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24～26℃，日照10h，光强1500lx,20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。

2.如权利要求1所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基的重量百分比组分为：30-35％的硝酸铵、40-42％的硝酸钾、7-8％的硫酸镁、8-10％的二水氯化钙、3.5-4％的磷酸二氢钾、1.2-1.5％的铁盐、0.05-0.1％的微量元素，余量为有机物，所述铁盐为质量比为55:45的EDTA二钠、硫酸亚铁，所述微量元素由碘化钾、硼酸、一水硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴的一种或多种组成，所述有机物由肌醇、烟酸、VB6、VB1、甘氨酸的一种或多种组成。

3.如权利要求2所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基所有溶质的总浓度为4.5g/L-5.0g/L。

4.如权利要求1或2或3所述的一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，所述MS培养基的PH值为5.8，采用1当量的氢氧化钠和1当量的盐酸调节PH值。