CN106038351A - 一种用于淡化皱纹的多肽组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一组用于淡化皱纹的多肽组合物，该组合物包括乙酰胆碱拮抗剂和阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放的多肽。本发明的多肽组合物可制成冻干粉和溶液，可以制备成各种美容护肤产品以及医用产品，用于淡化皱纹。

Description

一种用于淡化皱纹的多肽组合物

技术领域

本发明属于医药和化妆品领域，涉及一种用于淡化皱纹的多肽组合物，采用复合活性多肽的方法制备各种剂型包括霜剂、精华液、乳液、冻干粉、面膜等，用于淡化表情纹、抬头纹、眼角纹、妊娠纹以及身体其他部位如颈部、手部的皱纹。

背景技术

皮肤老化最显著的标志之一是增加了脸部皱纹。这种情况随着时间自然地出现，并且会由环境因素而增强其生化、病理和生理等改变。还有其他一些次要因素导致局部皮肤褶皱、皱纹和增加面部皱纹。其中包括严重挤压、频繁和持续不断地对面部皮肤位置的压力(如在睡眠中)，或由于面部表情肌收缩造成重复面部运动。但是不管是什么原因或是独立于最终生理通路，面部皮肤衰老的分子机制归于其胶原蛋白三股螺旋构象改变、弹性蛋白多肽类分解和填充于皮肤中的脂类排列紊乱等。已经证实这些构象的改变和填充的脂类紊乱都能通过调整肌肉收缩而避免。

肌肉收缩是由于接收到囊泡释放的神经递质而引起的。突触释放神经递质是由一种SNARE复合物(SNAP受体)诱导的(A.Ferrer Montiel et al，The Journal ofBiological Chemistry，1997，272，2634-2638)，它是一种由突触小泡缔合性膜蛋白(VAMP)、突触融合蛋白(Syntaxin)和突触小体相关蛋白(SNAP-25)形成的三元络合物。这种复合物如一种细胞钩以捕获小囊泡，然后促进囊泡与细胞膜融合，释放神经递质。

目前市场上注射肉毒毒素则是通过抑制肌肉收缩使面部表情肌麻痹松弛而达到迅速祛皱效果。A型肉毒毒素注入人体后，通过细胞钙和pH依赖易位过程进入细胞，以温度和锌离子依赖方式作用在SNARE位点，阻断神经递质——乙酰胆碱在神经-肌肉接头处的释放引起肌肉瘫痪。然而，注射类肉毒毒素不当出现的疼痛、面瘫、感染、肌肉僵硬等副作用显而易见，市场上迫切需要一种更安全的新材料。很多研究已经证实，小分子多肽可以通过调整神经递质的释放而达到调节肌肉收缩的效果，淡化皱纹。因多肽分子量小，活性高，通过涂抹即可到达皮肤真皮层发挥作用，可以替代注射肉毒毒素改善皱纹。

研究显示，多肽祛皱效果具有类肉毒作用，可通过阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放达到祛皱的效果。乙酰六肽-3(阿基瑞林)是SNAP-25N末端仿制肽，通过与SNAP-25竞争其位点使SNARE复合物不能形成，从而抑制囊泡与细胞膜的融合，阻止神经递质的释放，其祛皱效果已经被市场所熟识。类似功能还有乙酰谷氨酸酰七肽-1(商品名为SNAP-8)，是乙酰六肽-3的仿生延长肽。此外，有一类多肽则通过调整Ca²⁺通道，使囊泡不能与细胞膜融合而抑制神经递质的释放，例如五肽-18(商品名为Leuphasyl，来自Lipotec)，从而抑制肌肉的收缩。

还有另一类多肽，与上面作用于突触前膜的多肽不同，这类肽主要作用于突触后膜，通过调整乙酰胆碱达到祛皱效果。它们作为乙酰胆碱的拮抗剂，竞争乙酰胆碱与突触后膜受体的结合位点，最终导致受体封闭，在封闭状态钠离子不能释放，肌肉松弛。比较二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐(Dipeptide diaminobutyroyl benzylamide diacetate，来自彭特法姆股份公司)，已经申请专利保护，专利号为CN101061134A，后以SYN-AKE上市。类似功能还有五肽-3(来自彭特法姆股份公司)以及β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺(Beta-Alanyl Hydroxyprolyl diaminobutyroyl Benzylamide)，后者是根据二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的结构改造而成，其祛皱效果更佳。

现有技术CN104523449A提供了一种抗衰老多胜肽复合物，包含以下重量百分比组分：20-30％的二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、10-30％的棕榈酰三肽-5、5-10％的棕榈酰四肽-7、5-10％的五肽-3、5-10％的六肽-11、5-10％的七肽-6和20-30％的乙酰基八肽-3，上述所有组分的重量百分比之和为100％。该组分所含为各种小分子多肽，二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐和五肽-3主要作为乙酰胆碱拮抗剂，从而减少表情肌收缩而防止皱纹形成。虽然添加了降低皮肤上自由基和氧化反应如棕榈酰四肽-7，达到抗衰老目的，皱纹产生机制上其作用靶点还是较单一。

现有技术CN104622779A提供了一种多胜肽抗衰老修复面膜精华液，含有七种胜肽活性成分，分别是二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、棕榈酰三肽-5、棕榈酰四肽-7、五肽-3、六肽-11、七肽-6、乙酰基八肽-3。该组分所制备的面膜精华液除了以上所列多肽外，还含有其他的组分，制备过程复杂。

发明内容

基于现有技术存在的问题，本发明根据皱纹产生的机制以及多肽的作用靶点不同，提供一种用于淡化皱纹的多肽组合物。本发明的组合物包括乙酰胆碱拮抗剂和通过阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放的多肽。

本发明所提供的一种用于淡化皱纹的多肽组合物，包含：

1)选择至少一种或多种乙酰胆碱拮抗剂，包含但不限于二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺；

和

2)选择一种或多种阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放的多肽，包含但不限于五肽-18、乙酰六肽-3、乙酰谷氨酸酰七肽-1。

其中，制成溶液中各多肽的质量浓度为0.0001％-5％，或者制成冻干粉中各多肽的质量含量为0.01％～100％。

根据1)和2)多肽，所述一种具有淡化皱纹的多肽组合物可以是：

二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐和乙酰基六肽-3组合；

或者二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐和五肽-18、乙酰六肽-3组合；

或者二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3和乙酰六肽-3、五肽-18；

或者二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺和五肽-18、乙酰六肽-3、乙酰谷氨酸酰七肽-1组合。

上述多肽组合后，祛皱效果明显优于单独使用，已经有发表的文献：体内研究已经证实当五肽-18(商品名为Leuphasyl，来自Lipotec)与乙酰六肽-3(阿基瑞林)联合使用，其祛皱效果发挥了协同作用，优于单独使用乙酰六肽-3或是五肽-18。因此本发明创新提出，通过作用于不同靶点的多肽组合，协同发挥作用，使其祛皱效果更佳。

所述淡化皱纹的多肽组合物可制备成溶液或是冻干粉。

所述淡化皱纹多肽组合物进一步添加另外一种以上皮肤护理活性、和/或使皮肤恢复活力、和/或制剂稳定，和/或适合使用的物质，选自提取脂质和/或合成脂质；胶凝性的和粘稠的、表面活性的和乳化性的聚合物；水或脂溶性提取物，包括：植物提取物，组织提取物，海洋提取物；防晒物质，抗氧化剂，保湿剂和遮蔽剂等，质量浓度范围为0.001％-5％。

所述保湿剂选自一种或几种以下物质：甘油、芦荟胶、透明质酸钠；质量浓度范围为0.001％-5％。

所述防腐剂为多醇类防腐剂，质量浓度范围为0.001％-5％，优选辛甘醇。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，进一步添加抗菌类维持成分稳定的综合性试剂，质量浓度范围为0.001％-5％，优选1,2-己二醇。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，进一步添加维持皮肤水油平衡的脂类物质，质量浓度范围为0.001％-5％，优选神经酰胺3。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，若制备成冻干粉，可添加醇类物质，优选甘露醇；可添加糖类物质，优选乳糖，醇类或者糖类物质的质量浓度为0.01％-99.9％。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，还包括pH调节剂，选自：碱性物质如三乙醇胺、碳酸氢钠、碳酸氢钾，优选三乙醇胺；酸性物质为盐酸、醋酸、柠檬酸、乳酸，优选乳酸；pH值范围为3.0～8.0，优选5.0～7.0。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，所述组合物制备剂型包括精华液、粉剂(胶囊)、乳剂、霜剂、凝胶、面膜、敷料、抗皱抗衰面膜、祛皱补水精华、眼部或脸部祛皱精华、祛皱眼霜或面霜、医用敷料等。

所述一种用于淡化皱纹的多肽组合物，所述组合物主要是制备皮肤外用的护肤产品或者医用产品。

本发明中除非特别制定外，所述质量浓度是指相对于组合物总质量的百分含量。

本发明所述的一种用于淡化皱纹的多肽组合物，相对于现有技术的有益效果包括：

皱纹产生机制是非常复杂的，涉及的因素很多。本发明从不同的作用靶点，包括阻止囊泡与细胞膜融合释放乙酰胆碱和作为乙酰胆碱拮抗剂竞争乙酰胆碱与突触后膜受体的结合位点，多重功效抑制肌肉收缩，从根本上抑制皱纹的产生，从而达到祛皱的目的。优于已经公开发表的专利CN104523449A和CN104622779A中所提及的组合物。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合实施例对发明作详细的说明，但并不只限于以下的实施例。

注：以下个处方的含量总和为100％，所述含量优选为质量百分含量。

实施例1淡化皱纹精华液

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。

实施例2

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、五肽-3、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。

实施例3

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、五肽-18、五肽-3、苯乙基间苯二酚、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。

实施例4

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、五肽-18、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺、苯乙基间苯二酚、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。

实施例5

冻干粉(100mg)：

配置方法：

根据列表所示，称量二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、甘露醇、乳糖四种粉末，混合，加入注射用水溶解，调节pH为5.6，定容至1L，再用小瓶子分装成1000支，冻干。冻干后，每小瓶冻干粉为0.1mg。

实施例6

冻干粉(100mg)：

配置方法：

根据列表所示，称量二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、乙酰基六肽-3、五肽-18、五肽-3、甘露醇、乳糖四种粉末，混合，加入注射用水溶解，调节pH为5.6，定容至1L，再用小瓶子分装成1000支，冻干。冻干后，每小瓶冻干粉为0.1mg。

实施例7肌肉收缩试验

1)建立培养模型

为了测试、评估本发明化合物的效用，需建立人肌细胞和来自小鼠胚胎脊髓神经元的共培养模型。

2)材料：第三次传代中的正常的人肌细胞(成肌细胞)

具有“背根神经节”出生10天的小鼠胚胎脊髓外植体培养基：2/3MEM和1/3M199、2mML-谷胺酰胺、50UI/ml青霉素、50μg/ml链霉素、5％胎牛血清。

3)培养条件：37℃，5％CO₂

4)培养方法：

在用明胶包被的平板中培养正常的人肌(成肌细胞)直到形成单层的肌原纤维(来自融合的肌细胞)。然后将具有背根神经节的出生10天的小鼠胚胎脊髓外植体置于所述肌细胞单层上，共培养48小时后，观察到从外植体生长出的神经突与肌细胞接触，100小时后开始发生收缩。共培养4周后，神经和肌肉已经充分连接，形成了具有完全成熟的神经肌肉接头(相当于具有运动终板)的、充分分化的横纹肌纤维模型，在这一阶段，肌原纤维可以进行规律的收缩。然后将该模型用于以下测试。

5)测试方法

①材料

本发明的实施1、实施例2、实施例3、实施例4以及与0.02％的乙酰基六肽-3、0.01％的二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐，培养模型、培养基、与录像机连接的显微镜

②加入化合物前观察

用与录像机连接的显微镜观察培养模型的肌肉收缩频率30秒，观察5次，计数，取平5均值。

③加入化合物后测试

将实施1、实施例2、实施例3、实施例4以及乙酰基六肽-3、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐，分别加入培养模型中。另外再设一空白对照组。在1分钟、2小时、24小时和48小时时观察肌肉收缩频率各30秒，并计数。

6)测试结果

实施1、实施例2、实施例3、实施例4与其成分也相同的乙酰基六肽-3和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐在加入之前的肌肉收缩次数(5次测量平均值，每次测量30秒)相比较，测量加入样品后1分钟、2小时、48小时的肌肉收缩次数(5次测量平均值，每次测量30秒)的变化百分数△[％]。

表1 各组多肽组合物在不同时间的肌肉收缩次数变化百分数

根据上面表1，设立了对照组，排除其他因素的影响，实施例1、实施例2、实施例3、实施例4在1分钟的肌肉收缩次数(5次测量平均值)变化百分数对应值进行均值t检验分析，P＜0.05。结果显示，与相同浓度下乙酰基六肽-3、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的结果对比均有显著性差异。加入的肽种类越多，其效果更显著，推断不同多肽可从不同的作用靶点抑制了肌肉的收缩，从而达到祛皱效果，说明两种不同种类的多肽发生显著的协同作用。

实施例8抗衰老试验

受试者：75名30-50岁的健康女性，随机分为5组，平均每组15人。

样品与分组：选择实施5、实施例6所制备的小瓶冻干粉，分别加1ml注射用水溶解。另两组为浓度2％乙酰基六肽-3和浓度2％二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐。设置对照组。

试验操作：使用无创雾化仪将样品注射到受试者脸部，特别是皱纹严重部位，眉心正中间、额头区域、鼻尖与瞳孔交线处左右脸颊区域。一小时后测试其祛皱效果。

测试仪器：德国Courage+Khazaka公司(德国CK公司)制造的皮肤弹性CotometerMPA580主机，所使用的探头是Reviscometer RV600弹性纤维组织测试探头。

测试步骤：先测量测试区区域清洁后30min的空白值(R2、R5、R7，其中R2＝Ua/Uf，R5＝Ur/Ue，R7＝Ur/Uf)。

Uf——皮肤最大拉伸量；

Ua——从取消负压到下一次连续测试皮肤表面再加负压时皮肤的恢复值；

Ue——恒定负压加到皮肤上后，0.1秒时皮肤的拉伸量，定位弹性部分拉伸量；

Ur——取消负压后，皮肤就会迅速恢复原状态，同样分为弹性部分值Ur，即取消负压0.1秒后，皮肤的恢复值和粘弹性部分值，或称塑性部分值。

然后测试注射区域的皮肤的R2、R5、R7。同一个受试者的测试由同一个测量人员完成。通过测试注射多肽前后皮肤的R2、R5、R7值的变化来评估产品的皮肤抗衰老功效，R2、R5、R7变化如下：

表2 注射多肽1小时后R2、R5、R7值变化表

注：R2、R5、R7越接近1，皮肤弹性越好

从表2上数据可看出，使用实施例6多肽组合物R2、R5、R7值比使用相同浓度的乙酰基六肽-3或是二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐R2、R5、R7值高，说明前者具有更明显增加皮肤弹性的效果。

由表2也看出，实施例5中多肽的浓度较其他三组，浓度更低，可其效果也显著于单独使用乙酰基六肽-3或是二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的效果。

由表2可推断，这两种不同作用机制类别的多肽具有明显的协同效应，其淡化皱纹的效果更明显。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明，但是不表示本发明的具体实施是局限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或是替换，都应视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种用于淡化皱纹的多肽组合物，包括乙酰胆碱拮抗剂和阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放的多肽，其特征在于，包括：

1)选择至少一种或多种乙酰胆碱拮抗剂，包含但不限于二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺；

和

2)选择至少一种或多种阻止囊泡与细胞膜融合而抑制乙酰胆碱释放的多肽，包含但不限于五肽-18、乙酰六肽-3、乙酰谷氨酸酰七肽-1；

其中，制成溶液中各多肽成分质量浓度为0.0001％-5％，或者制成冻干粉中各多肽的质量含量为0.01％-100％。

2.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多肽组合物选自二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐和乙酰基六肽-3组合；二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3和乙酰基六肽-3组合；二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3和乙酰基六肽-3、五肽-18组合；二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、五肽-3、β-丙氨酰羟脯氨酰二氨基丁酰苄基酰胺和五肽-18、乙酰六肽-3、乙酰谷氨酸酰七肽-1的组合。

3.按权利要求1至2任一权利要求所述的组合物，其特征在于，还含有一种以上皮肤护理活性、和/或使皮肤恢复活力、和/或制剂稳定，和/或适合使用的物质，质量浓度范围为0.001％-5％，选自提取脂质和/或合成脂质；胶凝性的和粘稠的、表面活性的和乳化性的聚合物；水或脂溶性提取物，包括：植物提取物，组织提取物，海洋提取物；防晒物质，抗氧化剂，防腐剂，保湿剂和遮蔽剂。

4.按权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述保湿剂的质量浓度范围为0.001％-5％，选自甘油、芦荟胶、透明质酸，优选透明质酸；所述防腐剂为多醇类防腐剂，质量浓度范围为0.001％-5％，优选辛甘醇。

5.按权利要求1至2的任一权利要求所述的组合物，其特征在于，包括抗菌类维持成分稳定的综合性试剂，质量浓度范围为0.001％-5％，优选1,2-己二醇。

6.按权利要求1至2的任一权利要求所述的组合物，其特征在于，包括维持皮肤水油平衡的脂类物质，质量浓度范围为0.001％-5％，优选神经酰胺3。

7.按权利要求1至2的任一权利要求所述组合物，其特征在于，所述组合物的剂型为冻干粉，可添加醇类物质，优选甘露醇；也可添加糖类物质，优选乳糖；醇类或者糖类物质的质量浓度为0.01％-99.9％。

8.按权利要求1～7任一权利要求所述的组合物，其特征在于，还包括pH调节剂：选自碱性物质如三乙醇胺、碳酸氢钠、碳酸氢钾，优选三乙醇胺；也可选择酸性物质如盐酸、醋酸、柠檬酸、乳酸，优选醋酸；组合物pH值范围为3.0～8.0，优选5.0～7.0。

9.按权利要求1～7的任一权利要求所述的组合物，其特征在于，所述组合物剂型包括但不限于精华液、粉剂(胶囊)、乳剂、霜剂、凝胶、面膜、敷料。

10.按权利要求1～9的任一权利要求所述的组合物，其特征在于，所述组合物产品包括但不限于祛皱抗衰面膜、抗皱补水精华、眼部或脸部祛皱精华、抗皱面霜、医用敷料。