CN106018661A - 生芪消渴胶囊的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生芪消渴胶囊的质量控制方法,其通过采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别并结合采用超高效液相色谱(UHPLC)对生芪消渴胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛进行含量测定,从而能够更加科学评价生芪消渴胶囊的质量,保证其质量的稳定性,提升产品技术水平,从而实现利用现代分析手段全面提升生芪消渴胶囊的质量标准。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗糖尿病的中药制剂的质量控制方法,属于药品的技术领域。
背景技术
生芪消渴胶囊是由黄芪、地黄、丹参三种药味制成的中药复方制剂,具有益气生津,活血化瘀的功效,临床主要用于气阴两虚证糖尿病的治疗,可改善倦怠,乏力,多食易饥,口渴多饮,小便量多等症状,主要适用于II型糖尿病患者,临床应用多年,疗效确切。
生芪消渴胶囊现行质量标准较为简单,只对黄芪药材中的黄芪甲苷进行了薄层鉴定和浸出物的检查,而含量测定只测定了单一指标成分原儿茶醛,存在“特征鉴别不全面、含量测定专属性差、未对处方主药“地黄”进行质量控制”等问题,难以科学评价其内在质量。因而,为保证生芪消渴胶囊质量的稳定性,提升产品技术水平,利用现代分析手段全面提升生芪消渴胶囊的质量标准尤为关键。
发明内容
本发明的目的是提供一种生芪消渴胶囊的质量控制方法,以解决现有的生芪消渴胶囊的质量控制方法存在的指标成分单一、特征鉴别不全面、含量测定专属性差等问题,从而能够科学评价生芪消渴胶囊的质量。
本发明的技术方案如下:
本发明首先提出了生芪消渴胶囊的质量控制方法,该方法包括如下步骤:采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别;采用超高效液相色谱(UHPLC)对生芪消渴胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛进行含量测定。
其中,采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别时先制备供试品溶液、阴性对照溶液、梓醇对照品溶液和回香醛试液;然后吸取供试品溶液、阴性对照溶液和梓醇对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以回香醛试液,加热至斑点显色清晰,观察供试品色谱中在与梓醇对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点以鉴别供试品的性状。其中,展开剂三组分中三氯甲烷、甲醇和水的质量比为14:6:1。
其中,进行含量测定时分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,按色谱条件测定,得色谱图,根据色谱参数计算系统适用性,观察6种被测化合物与其他物质峰分离情况以测定6种成分的含量。其色谱条件为:色谱柱:Agilent Eclipse Plμs Cl8 RRHD(150 mm×2.1 mm,1.8 μm);流动相:A:0.1%甲酸水溶液、B:0.1%甲酸甲醇溶液;检测波长:280 nm;流速:0.25 ml/min;柱温:45 ℃;进样量:2 µl。
本发明通过采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别并结合采用超高效液相色谱(ΜHPLC)对生芪消渴胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛进行含量测定,从而能够更加科学评价生芪消渴胶囊的质量,保证其质量的稳定性,提升产品技术水平,从而实现利用现代分析手段全面提升生芪消渴胶囊的质量标准。
附图说明
图1是生芪消渴胶囊薄层鉴别示意图;图1中:对照品:梓醇;阴性:缺地黄阴性对照样品;S1-S10:10批生芪消渴胶囊样品;
图2是系统适用性实验混合标准品(对照品)UHPLC色谱图;
图3是系统适用性实验供试品UHPLC色谱图;
图4是系统适用性实验阴性样品UHPLC色谱图;
图2-图4中,1.丹参素钠;2.原儿茶醛;3.毛蕊异黄酮葡萄糖苷;4.迷迭香酸;5.丹酚酸;6.丹酚酸A。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1:生芪消渴胶囊中地黄的定性鉴别
1.1 仪器
DK-98-11恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司),超纯水机(SC-080160,四川沃特尔科技发展有限公司),电子天平(METTLER AE-240,梅特勒-托利多仪器上海有限公司),电热恒温鼓风干燥箱(上海博讯有限公司医疗器械厂)。
1.2 试剂与试药
梓醇对照品(四川省维克奇生物科技有限公司,批号141104,纯度≥98%),茴香醛(国药集团化学试剂有限公司,批号20150312),硅胶G板(200×200 mm,青岛海洋化工厂分厂),甲醇(上海振兴化工一厂,分析纯),正丁醇(上海振兴化工一厂,分析纯)。
1.3 溶液的制备
1.3.1 供试品溶液的制备
取生芪消渴胶囊粉末2 g,加甲醇20 mL,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水5 mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10 mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为供试品溶液。
1.3.2 阴性对照溶液的制备
按生芪消渴胶囊生产方法制备缺地黄阴性对照样品,取阴性对照粉末2 g,加甲醇20mL,加热回流1小时,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水5 mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10 mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇2 mL使溶解,作为阴性对照溶液。
1.3.3对照品溶液的配制
精密称取梓醇对照品0.00500 g于10 mL容量瓶中,加甲醇制成 0.5 mg/mL 的溶液,作为对照品溶液。
1.3.4 回香醛试液的配制
取茴香醛0.5 mL,加醋酸50 mL使溶解,加硫酸1 mL,摇匀,即得。
1.4 薄层鉴别
吸取供试品溶液、阴性对照溶液和梓醇对照品溶液各2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(14:6:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以回香醛试液,在105 ℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与梓醇对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
实施例2:生芪消渴胶囊中6种主要成分的含量测定
2.1实验仪器
Agilent 1290 Infinity UHPLC,美国Agilent,包括自动进样器、二元泵、DAD二极管阵列检测器、柱温箱;TGL-16G高速离心机(上海安亭科学仪器厂);AE240十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司);DK-98-11恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司);EL204万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);CQ250A-TS超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)。
2.2 实验试剂及试药
毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、丹酚酸B对照品、丹酚酸A对照品、丹参素钠对照品、迷迭香酸对照品和和原儿茶酸对照品(四川省维克奇生物科技有限公司,批号140504、150427、140625、140510、MΜST-10120901、110306,纯度≥98%);甲酸(优级纯,FS0630-020,美国TEDIA有限公司),甲醇(分析纯,200909061,上海振兴化工一厂),乙醇(分析纯,10009164,国药集团化学试剂有限公司),蒸馏水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)2.3 色谱条件的选择
2.3 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse Plμs Cl8 RRHD (150 mm×2.1 mm,1.8 μm)
流动相:A:0.1%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸甲醇溶液
梯度洗脱程序见表1;
检测波长:280 nm;流速:0.25 ml/min;柱温:45 ℃;进样量:2 µl。
表1 流动相梯度洗脱表
时间(min) | 流速(ml/min) | A(%) | B(%) | 曲线 |
初始 | 0.25 | 5 | 95 | — |
4 | 0.25 | 10 | 90 | 6 |
12 | 0.25 | 20 | 80 | 6 |
20 | 0.25 | 40 | 60 | 6 |
30 | 0.25 | 40 | 60 | 6 |
35 | 0.25 | 100 | 0 | 6 |
37 | 0.25 | 5 | 95 | 1 |
2.4 对照品和供试品溶液制备
2.4.1 对照品溶液制备
分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛对照品10.50mg、10.22mg、11.40mg、10.04mg、10.40mg、11.60mg于10 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。制得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛对照品储备液的浓度分别为1.050 mg/ml、1.022 mg/ml、1.140 mg/ml、1.004 mg/ml、1.040 mg/ml、1.160 mg/ml,备用。
2.4.2 供试品溶液制备
取装量差异项下生芪消渴胶囊内容物2 g,精密称定,置50 ml圆底烧瓶中,加甲醇25ml回流提取1 h,冷却,补重,过滤,取续滤液微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。
2.4.3阴性对照溶液制备
按处方比例制备不含黄芪、丹参的阴性样品,再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5方法学考察
2.5.1 系统适应性考察
分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各2 µl,按“2.3”项下的色谱条件测定,得色谱图,根据色谱参数计算系统适用性。结果表明,6种被测化合物与其他物质峰分离完全,分离度大于1.5,见图2、图3和图4。
2.5.2 线性关系考察
分别精密量取“2.4.1”项下毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛对照品储备液1.0 mL、5.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、1.0 mL、1.0 mL于10 mL量瓶中。混合,甲醇定容至刻度线。逐步稀释得七个系列浓度的工作液,浓度见表2。
表2 6种成分的线性浓度(µg/mL)
按拟定的色谱条件测定,将测定结果以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制工作曲线,计算回归方程,结果见表3。实验结果表明:6个被测物质在拟定的色谱条件下,线性关系良好。
表3 各成分的回归方程
化合物 | 回归方程 | r | 线性范围 (μg/ml) |
丹参素钠 | Y = 2.4678X - 7.4897 | 0.9999 | 7.8~500 |
原儿茶醛 | Y = 16.708X - 9.6207 | 0.9999 | 1.8~116.0 |
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 | Y = 7.9477X - 1.6983 | 0.9999 | 1.6~105 |
迷迭香酸 | Y = 5.8786X - 6.3207 | 0.9999 | 1.6~104 |
丹酚酸B | Y = 3.5887X - 18.307 | 0.9998 | 8.0~510 |
丹酚酸A | Y = 9.9036X - 36.622 | 0.9996 | 3.6~228.0 |
2.5.3 精密度实验
取同一供试品溶液,连续进样6次,测定峰面积,结果6次峰面积RSD在0.50%~2.6%之间,说明精密度良好。结果见表4。
表4 含量测定精密度实验结果
2.5.4 重复性实验
取同一批号生芪消渴胶囊共6份,精密称定,按“2.4.2.4”项下方法制备供试品溶液,分别测定,计算各指标含量及RSD。实验结果表明,6份供试品溶液中6个成分含量结果RSD(n =6)均小于3.0%,说明此方法的重复性良好,实验结果见表5。
表5 含量测定重复性实验结果(含量%)
2.5.5 稳定性实验
取同一供试品溶液,于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h分别进样,进样量为2 µL,测定各指标成分峰面积。结果表明供试品在10 h内稳定。结果见表6。
表6 含量测定稳定性实验计算结果(mg/mL)
2.5.6 回收率实验
分别称取已测定含量的生芪消渴胶囊6份,精密加入6种被测成分(丹参素钠、原儿茶醛、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A)混合对照品甲醇溶液适量,按供试品溶液制备方法制备后按拟定的色谱条件测定,实验结果见表7~表12。实验结果表明,6个待测成分回收率良好。
表7 丹参素钠回收率实验结果
表8 原儿茶醛回收率实验结果
表9 毛蕊异黄酮葡萄糖苷回收率实验结果
表10 迷迭香酸回收率实验结果
表11 丹酚酸B回收率实验结果
表12 丹酚酸A回收率实验结果
2.6 样品含量测定
将10批生芪消渴胶囊,按“供试品溶液”项下方法操作,按拟定的色谱条件下进行分析,测定10批制剂中6个指标性成分的含量。含量测定结果见表13。结果表明,10批生芪消渴胶囊中6个被测成分的含量波动相对较小,它们的RSD值介于3.17%~5.07%之间。测定的指标成分丹参素钠、原儿茶醛、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的RSD分别为4.75%、4.21%,5.07%、4.53%、3.17%、4.28%,含量较均一。说明不同批次的生芪消渴胶囊中各含量均一性良好。
表13 10批生芪消渴胶囊含量测定结果(%)
2.7 小结
从10批生芪消渴胶囊的含量测定结果显示,6个主要成分占生芪消渴胶囊总含量的1.59%~44.95%,其中生芪消渴胶囊中丹参素钠的含量为0.63%~0.73%,RSD为4.75%;原儿茶醛的含量为0.10%~0.13%,RSD为4.21%;毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量为0.024%~0.029,RSD为5.07%;迷迭香酸的含量为0.074%~0.087%,RSD为4.53%;丹酚酸B的含量为0.42%~0.46%,RSD为3.17%;丹酚酸A的含量为0.20%~0.24%,RSD为4.28%;6个测定成分总量在1.26%~1.65%,RSD为3.63%。含量较高的丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A的RSD为4.75%、4.21%、3.17%、4.28%,含量较为稳定;6个测定成分的含量也较为稳定(RSD为3.63%),表明十批生芪消渴胶囊含量差别不大。该药企生产的生芪消渴胶囊6个指标成分的总含量一致性较好。
当然,以上只是本发明的具体应用范例,本发明还有其他的实施方式,凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案,均落在本发明所要求的保护范围之内。
Claims (5)
1.生芪消渴胶囊的质量控制方法,其特征在于该方法包括如下步骤:采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别;采用超高效液相色谱(UHPLC)对生芪消渴胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素钠、迷迭香酸和和原儿茶醛进行含量测定。
2.根据权利要求1所述的生芪消渴胶囊的质量控制方法,其特征在于:采用薄层色谱法(TLC)对生芪消渴胶囊中地黄进行定性鉴别时,先制备供试品溶液、阴性对照溶液、梓醇对照品溶液和回香醛试液;然后吸取供试品溶液、阴性对照溶液和梓醇对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以回香醛试液,加热至斑点显色清晰,观察供试品色谱中在与梓醇对照品色谱相应的位置上是否显相同颜色的斑点以鉴别供试品的性状。
3.根据权利要求2所述的生芪消渴胶囊的质量控制方法,其特征在于:展开剂三组分中三氯甲烷、甲醇和水的质量比为14:6:1。
4.根据权利要求1所述的生芪消渴胶囊的质量控制方法,其特征在于:进行含量测定时分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,按色谱条件测定,得色谱图,根据色谱参数计算系统适用性,观察6种被测化合物与其他物质峰分离情况以测定6种成分的含量。
5.根据权利要求4所述的生芪消渴胶囊的质量控制方法,其特征在于:含量测定时色谱条件为:色谱柱:Agilent Eclipse Plμs Cl8 RRHD (150 mm×2.1 mm,1.8 μm);流动相:A:0.1%甲酸水溶液、B:0.1%甲酸甲醇溶液;检测波长:280 nm;流速:0.25 ml/min;柱温:45℃;进样量:2 µl。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20161012 |