CN106008737B

CN106008737B - 一种裙带菜孢子叶多糖及其制备方法

Info

Publication number: CN106008737B
Application number: CN201610554968.8A
Authority: CN
Inventors: 启航; 董秀芳; 刘山; 纪晓林; 熊欣; 贺宝玉; 董秀萍; 秦磊; 姜鹏飞
Original assignee: Dalian Polytechnic University
Current assignee: Dalian Polytechnic University
Priority date: 2016-07-14
Filing date: 2016-07-14
Publication date: 2019-06-04
Anticipated expiration: 2036-07-14
Also published as: CN106008737A

Abstract

本发明涉及一种裙带菜孢子叶多糖及其制备方法，该裙带菜孢子叶多糖是经10‑20V电压条件下、将含有所述多糖的溶液电渗析30‑90min脱盐制得，所述多糖的含盐率为2‑6％。通过本发明的技术方案提供的裙带菜孢子叶多糖的制备方法，在解决传统制备裙带菜孢子叶多糖含盐分高的问题的同时，能得到纯度较高、生物活性较好且提取率也较高的裙带菜孢子叶多糖，提高了裙带菜孢子叶多糖的质量。

Description

一种裙带菜孢子叶多糖及其制备方法

技术领域

本发明主要涉及一种多糖及其制备方法，尤其涉及一种裙带菜孢子叶多糖及其制备方法。

背景技术

裙带菜(Undaria pinnatifida)是褐藻门，褐藻纲，海带目，翅藻科，裙带菜属的一年生大型的温带性海洋藻类，是中国重要的经济型藻类之一，也是中国重要的出口水产品之一。2014年，我国裙带菜总量达到了20.3万吨(干重)，主要集中在辽宁、山东。

裙带菜外形很像破的芭蕉叶扇，叶片作羽状裂，也很像裙带。裙带菜明显地分化为固着器、柄及叶片三部分。固着器为叉状分枝的假根组成，假根的末端略粗大，以固着在岩礁上；柄稍长，扁圆形，中间略隆起，叶片的中部有柄部伸长而来的中肋，两侧形成羽状裂片。在成长的孢子体柄部两侧，形成木耳状重叠褶皱的孢子叶，成熟时，在孢子叶上形成孢子囊，即孢子叶就是裙带菜叶片的生长点所在处的生长带。裂叶和中肋(茎)这两部分是我们通常食用的主要部分。而裙带菜孢子叶，因质地较硬而很少被人食用，在加工过程中通常被当作加工废弃物所丢弃，这不仅造成了资源的浪费，还带来一定的环境污染。

研究表明，裙带菜孢子叶含有十几种人体必需的氨基酸、钙、碘、锌、硒、叶酸和维生素A、B、C等矿物质。更为重要的是，孢子叶具有极好的药用价值，特别在预防和治疗高血压、成人疾病等方面具有特殊功效。孢子叶中含有多种生物活性物质，主要成分为多糖，按其组成可分为褐藻糖胶、褐藻酸钠、膳食纤维。孢子叶多糖具有抗凝血，调节免疫力，抗肿瘤，抗病毒等生物活性。

目前对植物活性多糖的提取方法有很多，包括水提法、酸提法、碱提法、酶提法、超声波提取法等。

水提法时，用水作溶剂来提取多糖，可用热水浸煮提取，也可用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物。也可利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖。但以根茎为主的植物体，细胞壁多糖含量高，热水直接提取率不高。

有些多糖用酸提法也可获得较高的纯度，但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。

有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。

为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法：一为弱碱溶解，二为酶解。酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物。常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。

超声波是一种高频率的机械波，超声波提取法的主要原理是利用超声波产生的空化作用对细胞膜的破坏。空化作用是指存在于液体中的微气核空化泡在声波的作用下振动，当声压达到一定值时发生的生长和崩溃的动力学过程。该法有利于植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有：超声时间、超声频率(一般低频中提取效率高，但也有例外)、料液比和温度等。

在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去。

但采用单一上述这些方法的多糖提取率较低且盐分含量较高。盐分杂质的存在影响了多糖成分的纯度，也不利于多糖生物活性作用的发挥。现有传统提取技术公开了采用乙醇-水相结合的方法提取裙带菜多糖，但是提取的该多糖纯度不高，盐分含量较高；也有公开了采用酶解-超声波相结合的方法提取裙带菜多糖，但是提取的该多糖颜色较深，盐分含量较高；还有公开了采用酶解-超声波相结合的方法，以裙带菜孢子叶为原料提取多糖，但是该多糖盐分含量也较高。

因此有必要提出一种裙带菜孢子叶多糖的制备方法，能解决传统方法制备裙带菜孢子叶多糖的高盐分含量的问题，同时也提供一种该方法制得的裙带菜孢子叶多糖。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种裙带菜孢子叶多糖及其制备方法，该方法制备出的裙带菜孢子叶多糖含盐分较低。

本发明提出的一种裙带菜孢子叶多糖，其特征在于，所述多糖是经10-20V电压条件下、电渗析30-90min脱盐制备而得的含盐率为2-6％的裙带菜孢子叶多糖。

本发明提供了一种裙带菜孢子叶多糖的制备方法，所述方法包含了经10-20V电压条件下、将含有所述多糖的溶液电渗析30-90min的脱盐步骤。

上述的方法，所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法还包括步骤：

S1、将复水后或近似新鲜状的裙带菜孢子叶，经100-250kPa压力、105-121℃温度高压含水保温5-20min；

上述的方法，在S1步骤后还包括步骤S2：将所述高压保温后的裙带菜孢子叶匀浆处理，即被打散并被研磨成均匀的糊状物溶液。

在所述步骤S1中所述复水是将干燥裙带菜孢子叶加10-40倍体积的水，在30-60℃温度条件下复水2-5h。

在所述步骤S1中，当所用原料为近似新鲜状的裙带菜孢子叶时，在所述步骤S2中匀浆处理之前，裙带菜孢子叶需与其质量的2-4倍水混合后一起匀浆处理。

S3、将所述匀浆后的裙带菜孢子叶溶液经40-60℃温度、100-500W超声波加热处理20-40min。

上述的方法，所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法在脱盐步骤前还包括步骤：

S4、将所述裙带菜孢子叶溶液调至pH为7.5-8.5，加入0.5-1.0％第一种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min；再将裙带菜孢子叶溶液调至pH为5.5-6.5，加入0.5-1.0％第二种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min。

上述的方法，在S4步骤中所述第一种蛋白酶为胰蛋白酶，所述第二种蛋白酶为木瓜蛋白酶。

S6、将所述脱盐后的溶液浓缩至原溶液体积的1/3-1/2；

S7、在S6后，使用乙醇对浓缩后的物质在2-6℃温度下醇沉8-12h，获得沉淀物；

S8、将所述沉淀物进行干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖。

上述的方法，在步骤S4之前还包括步骤S41：将超声波加热处理后的溶液加入1-3％双氧水，在50-60℃温度下进行2-3h的双氧水脱色处理。

在S7步骤中所述乙醇为80％体积含量的乙醇溶液；在S7步骤中所述沉淀物是在3000-5000r/min的速度下离心处理10-30min所得。

在S5步骤中将酶解后的溶液稀释至总固形物含量小于50g/L后进行脱盐处理。

在S6步骤中所述浓缩采用超滤浓缩法。

本发明的技术方案，在裙带菜孢子叶多糖的制备方法中，进行了10-20V电压条件下、电渗析30-90min的脱盐处理，使得制备出的裙带菜孢子叶多糖含盐量降至2-6％，提高了裙带菜孢子叶多糖的质量。

附图说明

图1是本发明裙带菜孢子叶多糖的制备方法主要流程图。

具体实施方式

以下结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明，以便能够更好地理解本发明的方案以及各个方面的优点。然而，以下描述的具体实施方式和实施例仅是说明的目的，而不是对本发明的限制。

需要说明的是，本申请文中的复水，是指使得裙带菜孢子叶重新吸回水分，恢复原状，该步骤为干燥的逆过程。

本文中一些符号或标记的代表意义如下：

h：小时；kPa：千帕；kHz：千赫兹；W：瓦；min：分钟；℃：摄氏度；V：伏；m：米；r/min:转/分；g：克；L：升；nm：纳米。

另外，本申请文中所指的高压是100-250kPa压力；高温是在105-121℃的温度。

本发明的实施例结合图1来加以说明。所用裙带菜孢子叶可以是新鲜的，也可以是干燥过的，如果是干燥过的，要进行复水处理，复水的方法是把一定量的干燥裙带菜孢子叶浸泡在10-40倍体积的水中，保持水温为30-60℃，浸泡时间为2-5h。

如图1所示为本发明裙带菜孢子叶多糖的制备方法流程图。首先将复水后或新鲜裙带菜孢子叶高温高压含水处理。处理过程类似于蒸煮的过程，可以水浴也可以气浴，将复水后的裙带菜孢子叶在100-250kPa压力下、105-121℃温度下蒸煮或用相同温度的热水喷淋5-20min，以保证高温高压下的裙带菜孢子叶湿润不干枯。

高温加热是为了易于提取裙带菜孢子叶多糖，高温下利于多糖成分的释放。采用高压蒸煮，可以缩短加热时间，提高了提取的速率。采用高温高压比不加热浸泡可以更大程度增加裙带菜孢子叶内部组织破碎程度，从而提高多糖的提取率。

高温高压水处理后的裙带菜孢子叶进行匀浆处理。把高温的裙带菜孢子叶冷却后，可用打浆机将其充分匀浆，即裙带菜孢子叶被打散并被研磨成均匀的糊状物溶液。该匀浆处理是为后续进一步对裙带菜孢子叶的细胞壁破坏做准备，孢子叶被研磨细后更易于糖分的析出与提取。

进一步对匀浆后的裙带菜孢子叶溶液进行超声加热处理。在100-500W超声波条件下40-60℃加热处理20-40min。超声波能引起空化等一系列的特殊反应，能有效地破坏裙带菜孢子叶细胞壁，再结合传统的水煮法，促使更多的多糖成分流出，从而提高裙带菜孢子叶多糖提取率。

超声加热后对裙带菜孢子叶溶液进行双酶酶解处理。将裙带菜孢子叶溶液调至pH为7.5-8.5，加入0.5-1.0％第一种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min；再将裙带菜孢子叶溶液调至pH为5.5-6.5，加入0.5-1.0％第二种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min。

上述第一种蛋白酶可为胰蛋白酶，所述第二种蛋白酶可为木瓜蛋白酶。采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶酶解，能更大程度地降解裙带菜孢子叶溶液中大分子的蛋白质杂质，该杂质可在后续的醇沉处理过程中除去，进而提高裙带菜孢子叶多糖的纯度。

当然在双酶酶解之前还可对裙带菜孢子叶脱色处理，即将超声波加热处理后的溶液加入1-3％的双氧水，在50-60℃温度下进行2-3h的双氧水脱色处理。

接下来是关键的一步，即脱盐处理。将双酶酶解后的溶液，用水再适当稀释至总固形物含量小于50g/L，在10-20V电压条件下，电渗析30-90min。电渗析过程是电化学过程和渗析扩散过程的结合：在外加直流电场的驱动下，利用离子交换膜的选择透过性(即阳离子可以透过阳离子交换膜，阴离子可以透过阴离子交换膜)，阴、阳离子分别向阳极和阴极移动。离子迁移过程中，若膜的固定电荷与离子的电荷相反，则离子可以通过；如果它们的电荷相同，则离子被排斥，从而实现溶液纯化的目的。

采用电渗析能有效地减少盐分含量，提高了裙带菜孢子叶多糖的纯度。

为了进一步提高裙带菜孢子叶多糖的纯度，将脱盐后的裙带菜孢子叶溶液浓缩到一定浓度后进行乙醇醇沉处理。

裙带菜孢子叶溶液浓缩可采用超滤浓缩法，即溶质被膜截留，水分子穿过膜，溶质得以浓缩的方法。

目前超滤膜可以是由表面活性层与大孔支撑层两层组成，表面活性层很薄，厚度0.1-1.5mm超滤膜的分离性能主要取决于这一层，表面活性层孔径1-20nm的膜为超滤膜。支撑层的厚度为50-250m，起支撑作用，它决定膜的机械强度，呈多孔状，超滤膜的大孔支撑层为指状孔。

超滤膜的另一种形式也可是中空纤维膜，超滤膜使用时不需专门的支撑结构，其另一个特点是单位体积内膜具有非常大的表面积，能有效地提高渗透通量。

超滤技术应用在浓缩的过程中，不仅能起浓缩的作用，同时还可以进一步除去溶液中的小分子杂质。

使用乙醇对浓缩后的物质在2-6℃温度下醇沉8-12h，获得沉淀物。乙醇可以是80％体积含量的乙醇溶液或无水乙醇，视处理的溶液浓度而定。

醇沉后裙带菜孢子叶溶液被分成上清层和沉淀层，裙带菜孢子叶多糖在沉淀层。为了获取沉淀物，可以采用转速3000-5000r/min的离心处理方法处理10-30min获得。

沉淀物经干燥后可获得成品裙带菜孢子叶多糖。

干燥可先通过将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再使用微波干燥机进行完全干燥。

通过上述方法获得的裙带菜孢子叶多糖的提取率为10-15％。尤为重要的是，上述方法因包含了脱盐的处理步骤，所提取的孢子叶多糖的盐分降至2-6％。

下面结合具体实施例及试验数据来说明本发明的技术方案。

第一实施例

称取200g的干燥裙带菜孢子叶，加入2L(10倍)水，60℃温度下将裙带菜孢子叶复水5h。

在压力100±3kPa、温度105±3℃的高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮20min。

冷却后，用打浆机将裙带菜孢子叶充分匀浆。

再在40℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、500W超声波处理20min。

加入3％体积浓度的双氧水，50℃温度对裙带菜孢子叶进行脱色处理3h。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.0，加入0.5％胰蛋白酶进行酶解5h，95℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.0，加入0.5％木瓜蛋白酶进行酶解5h，95℃灭酶10min。

将双酶酶解后的溶液再加入2L水，保证总固形物含量小于50g/L，然后在10V电压条件下，电渗析90min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉10h，之后对醇沉后分层的物质在转速4000r/min下离心处理20min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机使之完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为10.3％。经成分分析仪测得其含盐率为5.5％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.3％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(17.3％-5.5％)/17.3％＝68.2％。

第二实施例

称取200g干燥裙带菜孢子叶，加入8L(40倍)水，30℃温度下将裙带菜孢子叶复水4h。

在压力202±3kPa，温度118±3℃高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮10min。

冷却后，将裙带菜孢子叶用打浆机将其充分匀浆。

再在60℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、300W超声波处理20min。

加入1％体积浓度的双氧水，60℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理2h。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.5，加入1.0％胰蛋白酶进行酶解3h，90℃灭酶15min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.5，加入1.0％木瓜蛋白酶进行酶解3h，90℃灭酶15min。

将双酶酶解后的溶液(总固形物含量已小于50g/L)在20V电压条件下，电渗析60min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/2。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉12h，之后对醇沉后分层的物质在转速4500r/min下离心处理20min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为15.0％。

经成分分析仪测得其含盐率为4.1％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为18.0％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(18.0％-4.1％)/18.0％＝77.2％。

第三实施例

称取200g干燥裙带菜孢子叶，加入6L(30倍)水，50℃温度下将裙带菜孢子叶复水3h。

在200±3kPa，温度115±3℃高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮15min。

冷却后，将裙带菜孢子叶用打浆机将其充分匀浆。

再在50℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、400W超声波处理20min。

加入2％体积浓度的双氧水，50℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理3h。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为7.5，加入1.0％胰蛋白酶进行酶解4h，95℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.0，加入1.0％木瓜蛋白酶进行酶解4h，95℃灭酶10min。

将双酶酶解后的溶液(总固形物含量已小于50g/L)在10V电压条件下，电渗析30min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉8h，之后对醇沉后分层的物质在转速4000r/min下离心处理20min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为14.2％。

经成分分析仪测得其含盐率为5.9％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.6％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(17.6％-5.9％)/17.6％＝66.5％。

第四实施例

称取200g干燥裙带菜孢子叶，加入4L(20倍)水，40℃温度下将裙带菜孢子叶复水4h。

在100±3kPa，温度105±3℃高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮20min。

冷却后，将裙带菜孢子叶用打浆机将其充分匀浆。

再在40℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、400W超声波处理30min。

加入2％体积浓度的双氧水，60℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理2h。

将双酶酶解后的溶液再加入500mL水，保证总固形物含量小于50g/L，然后在20V电压条件下，电渗析50min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为13.1％。

经成分分析仪测得其含盐率为4.2％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.9％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(17.9％-4.2％)/17.9％＝76.5％。

第五实施例

称取200g干燥裙带菜孢子叶，加入3L(15倍)水，60℃温度下将裙带菜孢子叶复水5h。

在125±3kPa，温度105±3℃高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮5min。

冷却后，将裙带菜孢子叶用打浆机将其充分匀浆。

再在50℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、300W超声波处理30min。

加入2％体积浓度的双氧水，55℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理2h。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.0，加入1.0％胰蛋白酶进行酶解3h，100℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.0，加入1.0％木瓜蛋白酶进行酶解3h，100℃灭酶10min。

将双酶酶解后的溶液再加入1L水，保证总固形物含量小于50g/L，然后在20V电压条件下，电渗析50min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉8h，之后对醇沉后分层的物质在转速4500r/min下离心处理25min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为12.5％。

经成分分析仪测得其含盐率为4.0％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.8％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(17.8％-4.0％)/17.8％＝77.5％。

第六实施例

称取200g新鲜的裙带菜孢子叶在170±3kPa，温度115±3℃高压高温条件下蒸煮20min。

冷却后，将裙带菜孢子叶与400mL水混合，然后用打浆机将其充分匀浆。

再在60℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、500W超声波处理30min。

加入1％体积浓度的双氧水，50℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理2.5h。

将双酶酶解后的溶液加入300mL水，保证总固形物含量小于50g/L，然后在15V电压条件下，电渗析90min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉12h，之后对醇沉后分层的物质在转速5000r/min下离心处理20min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为13.6％。

经成分分析仪测得其含盐率为3.5％。

另取同样重量的新鲜裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为19.1％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(19.1％-4.0％)/19.1％＝79.1％。

第七实施例

称取200g新鲜的裙带菜孢子叶在175±3kPa，温度115±3℃高压高温条件下蒸煮15min。

冷却后，将裙带菜孢子叶与600mL水混合，然后用打浆机将其充分匀浆。

再在40℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、300W超声波处理40min。

加入1％体积浓度的双氧水，55℃温度下对裙带菜孢子叶进行脱色处理3h。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.5，加入0.5％胰蛋白酶进行酶解5h，95℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为5.5，加入0.5％木瓜蛋白酶进行酶解5h，90℃灭酶8min。

将双酶酶解后的溶液加入100mL水，保证总固形物含量小于50g/L，然后在20V电压条件下，电渗析90min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/2。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为13.5％。

经成分分析仪测得其含盐率为2.5％。

另取同样重量的新鲜裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.8％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(18.8％-2.5％)/18.8％＝86.7％。

第八实施例

称取200g新鲜裙带菜孢子叶在100±3kPa，温度105±3℃高压高温条件下蒸煮15min。

冷却后，将裙带菜孢子叶与800mL水混合，然后用打浆机将其充分匀浆。

再在50℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、200W超声波处理40min。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.5，加入1.0％胰蛋白酶进行酶解3h，95℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.5，加入1.0％木瓜蛋白酶进行酶解3h，95℃灭酶10min。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/2。

经成分分析仪测得其含盐率为3.4％。

另取同样重量的新鲜裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为17.6％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(17.6％-3.4％)/17.6％＝80.7％。

第九实施例

称取200g干燥裙带菜孢子叶，加入5L(25倍)水，40℃温度下将裙带菜孢子叶复水5h。

在200±3kPa，温度120±3℃高压高温条件下，将复水后的裙带菜孢子叶蒸煮20min。

冷却后，将裙带菜孢子叶用打浆机将其充分匀浆。

再在60℃温度下，将匀浆后的裙带菜孢子叶溶液40kHZ、200W超声波处理40min。

将脱色后的裙带菜孢子叶溶液调pH为8.5，加入1.0％胰蛋白酶进行酶解4h，95℃灭酶10min；再调裙带菜孢子叶溶液pH为6.5，加入1.0％木瓜蛋白酶进行酶解4h，100℃灭酶12min。

将双酶酶解后的溶液(总固形物含量已小于50g/L)在15V电压条件下，电渗析90min脱盐处理。

超滤法将溶液浓缩至原溶液体积的1/3。

再在4℃温度下、使用80％乙醇溶液对浓缩后的溶液醇沉8h，之后对醇沉后分层的物质在转速5000r/min下离心处理20min获得沉淀物。

将沉淀物放入鼓风干燥箱中，至固体表面无液体后，再用微波干燥机完全干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖，经测量计算其提取率为14.4％。

经成分分析仪测得其含盐率为3.1％。

另取同样重量的干燥裙带菜孢子叶进行如上述方法同样的处理，唯一不同的是未经脱盐处理，经测得该方法获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量为18.2％。

则经脱盐处理方法后获得的裙带菜孢子叶多糖的含盐量比不经脱盐处理的含盐量降低(18.2％-3.1％)/18.2％＝83.0％。

本发明技术方案提出的裙带菜孢子叶多糖的制备方法，既解决了传统方法制备裙带菜孢子叶多糖的高盐分含量的问题，同时也提供了一种该方法制得的高质量的裙带菜孢子叶多糖。

最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。

Claims

1.一种裙带菜孢子叶多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包含了步骤S5：经10-20V电压条件下、将含有所述多糖的总固形物含量小于50g/L的溶液电渗析30-90min脱盐处理；

所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法还包括步骤：S1、将复水后或近似新鲜状的裙带菜孢子叶，经100-250kPa压力、105-121℃温度含水保温5-20min；

所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法在所述步骤S5之前还包括步骤：

S4、将裙带菜孢子叶溶液调至pH为7.5-8.5，加入0.5-1.0％第一种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min；再将裙带菜孢子叶溶液调至pH为5.5-6.5，加入0.5-1.0％第二种蛋白酶进行酶解3-5h，90-100℃灭酶5-15min。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

在所述S1步骤后还包括步骤S2：将高压保温后的裙带菜孢子叶匀浆处理，即被打散并被研磨成均匀的糊状物溶液；

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

在所述步骤S1中，当所用原料为近似新鲜状的裙带菜孢子叶时，在所述步骤S2中匀浆处理之前，裙带菜孢子叶需与其质量的2-4倍的水混合后一起匀浆处理。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法还包括步骤：

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述S4步骤中所述第一种蛋白酶为胰蛋白酶，所述第二种蛋白酶为木瓜蛋白酶。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裙带菜孢子叶多糖的制备方法还包括步骤：

S6、将所述脱盐后的溶液浓缩至原溶液体积的1/3-1/2。

S8、将所述沉淀物进行干燥，即得到裙带菜孢子叶多糖。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在S6步骤中所述浓缩采用超滤浓缩法。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，

在步骤S4之前还包括步骤S41：将超声波加热处理后的溶液加入1-3％双氧水，在50-60℃温度下进行2-3h的双氧水脱色处理；

在S7步骤中所述乙醇为80％体积含量的乙醇溶液；在S7步骤中所述沉淀物是在3000-5000r/min的速度下离心处理10-30min所得；

S5步骤中将酶解后的溶液稀释至总固形物含量小于50g/L后进行脱盐处理。

9.一种裙带菜孢子叶多糖，其特征在于，所述多糖含盐率为2-6％，是由权利要求1-8中任一所述方法制备而成。