CN105982877B

CN105982877B - 一种葛根素纳米晶胶囊剂及其制备方法

Info

Publication number: CN105982877B
Application number: CN201510041914.7A
Authority: CN
Inventors: 奉建芳; 涂亮星; 胡凯莉; 徐磊; 张艳
Original assignee: Nanjing Langni Pharmaceutical Co ltd; Shanghai Xiuxin Chenpon Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Yi Yueneng
Priority date: 2015-01-27
Filing date: 2015-01-27
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2035-01-27
Also published as: CN105982877A

Abstract

本发明公开了一种葛根素纳米晶胶囊剂及其制备方法。制备方法为：1)将葛根素和十二烷基硫酸钠(质量比≥1:5且＜1:1.5)加入水中，混匀得混合液；2)将混合液匀质(40‑45℃、700‑2000Bar)5次以上，得混悬液(粒径150‑500nm)；3)采用方式①或②进行：①将混悬液于‑50～‑40℃预冻1.5～2.5h，再于‑30～‑20℃保温3.5～4.5h，然后于‑5℃下升华干燥12～16h，25℃下解析干燥1.5～2.5h，粉碎，过筛，填充至胶囊；②将混悬液在进风口温度为150‑200℃下喷雾干燥，填充至胶囊。本发明制得的胶囊剂满足葛根素口服给药的要求。

Description

一种葛根素纳米晶胶囊剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种葛根素纳米晶胶囊剂及其制备方法。

背景技术

葛根素，又名葛根黄酮，8-β-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羟基异黄酮，主要存在于豆科植物葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi根或野葛P.thunbergiana Benth.根中。葛根素为无色结晶；熔点203～205℃；在水和有机溶剂中溶解度都不大，加热可溶于水、甲醇、乙醇，但不溶于乙醇乙酯、氯仿、苯；不被酶解，也不易被稀酸水解。

葛根素具有活血化瘀、改善微循环、扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量等作用，对动物和人体的脑循环以及外周循环有明显的促进作用。不仅改善人体的正常脑微循环，而且对微循环障碍也有明显的改善作用，主要表现为局部微血管血流和运动的幅度增加。葛根素对突发性耳聋患者的甲皱微循环也有改善作用，能加快微血管血流速度，清除血管袢淤血，提高患者的听力。葛根素对缺氧心肌具有保护作用，葛根素能明显降低缺血心肌的耗氧量，保护心脏免受缺血再港灌注所致的超微结构损伤。葛根素通过胃吸收可保护肝损伤，诱导活化肝星状细胞凋亡，有效逆转化学诱导的肝纤维化，对四氯化碳诱导的急性肝损伤也具有保护作用，同时具有多方面的生理活性。

目前，临床上使用的葛根素制剂有葛根素注射剂和葛根素滴眼液，临床用于治疗心脑血管疾病及视网膜血管病、眼底病及突发性耳聋等。注射剂使用不方便，且病人在用药时常出现暂时性腹胀、恶心等消化道反应；少数病人可出现皮疹、过敏性哮喘、过敏性休克、发热等过敏反应，极少数病人出现溶血反应，安全性差。口服给药方便、安全，但由于葛根素的水溶性与脂溶性都很差，水中的溶解度为1.1×10^-2mol/L，因而口服吸收差，其口服给药的绝对生物利用度为4％左右，因此，目前还没有口服给药制剂上市。

将葛根素纳米化是改善其口服吸收的主要途径。专利1(申请号201310102810.3)公开了一种葛根素纳米晶体组合物及其制备方法，其组合物主要由葛根素及两种稳定剂组成，稳定剂I占10～20％，稳定剂II占2～5％，主要采用介质碾礳法制备成一种葛根素混合物混悬液，平均粒径300nm左右，用大鼠试验表明该发明的葛根素纳米晶体混悬液能提高葛根素的生物利用度，但没有具体数据，根据药时曲线图判断提高约1倍左右(估计绝对生物利用度不到10％)。专利2(申请号：201010157869.9)公开的是一种基于混合油的葛根素自微乳组合物及其制备方法，其由葛根素、混合油、乳化剂、助乳化剂等组成，该发明制备的葛根素自微乳组合物可以改善传统乳剂乳粒大、稳定性差、贮存体积大等问题，并可提高葛根素的溶解度和分散度，增加药物的体内吸收，提高生物利用度。大鼠动物试验表明，以葛根素混悬剂为对照，该发明的葛根素自微乳组合物相对口服相对生物利用度为276.7％(估计绝对生物利用度达10％左右)。这些发明虽然能显著提高葛根素口服给药的生物利用度，但由于葛根素本身口服很难吸收，绝对生物利用度仅4％左右，因此，上述发明的技术还不能满足口服给药的要求(口服给药绝对生物利用度需要达20％以上)。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是克服葛根素溶解度差，口服很难吸收，绝对生物利用度低(4％左右)，现有技术虽然能显著提高葛根素口服给药的生物利用度，但还不能满足口服给药的要求(口服给药绝对生物利用度要求达20％以上)的缺陷，而提供了一种葛根素纳米晶胶囊剂及其制备方法。该胶囊剂作为一种口服制剂，口服后以葛根素混悬液为对照的相对生物利用度为447％，绝对生物利用度为22％(达20％以上)，显著地增加了葛根素的口服吸收，大大提高了葛根素口服生物利用度，能够满足葛根素口服给药的要求，具有良好的应用前景。

本发明还提供了一种葛根素纳米晶胶囊剂的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将葛根素和十二烷基硫酸钠加入水中，混合均匀，得混合液；所述葛根素和十二烷基硫酸钠的质量比为大于等于(1:5)且小于(1:1.5)；

(2)将上述混合液循环匀质5次以上，得葛根素纳米晶混悬液；其中，所述匀质的温度为40-45℃，所述匀质的压力为700-2000Bar；所述葛根素纳米晶混悬液的粒径为150-500nm；

(3)步骤(3)采用下述方式中的任一种进行：

方式一：将所述葛根素纳米晶混悬液于-50～-40℃预冻1.5～2.5h，再于-30～-20℃保温3.5～4.5h，然后于-5℃下升华干燥12～16h，25℃下解析干燥1.5～2.5h，得葛根素纳米晶冻干产物，粉碎，过筛，将粉末填充至胶囊中，即可；

方式二：将所述葛根素纳米晶混悬液在进风口温度为150-200℃下进行喷雾干燥，得葛根素纳米晶粉末，填充至胶囊中，即可。

步骤(1)中，所述葛根素与所述水的质量体积比较佳地为(1～2)g：(50～500)mL，更佳地为1g：50mL。

步骤(1)中，所述葛根素占40％以下，但不为零，较佳地为30％-35％；所述十二烷基硫酸钠占60-80％，较佳地为60％-70％；所述百分比均为占所述葛根素纳米晶冻干产物或占所述葛根素纳米晶粉末的质量百分比。

步骤(1)中，所述葛根素与所述十二烷基硫酸钠的质量之比较佳地为(1:2)～(1:3)。

步骤(1)中，所述混合均匀为本领域常规操作，较佳地为伴以搅拌使其混合均匀。其中，所述的搅拌较佳地为磁力搅拌。

步骤(2)中，所述匀质采用的设备为本领域常规设备，较佳地为高压乳匀机。

步骤(2)中，所述匀质的温度较佳地为43℃。

步骤(2)中，所述匀质的压力较佳地为700Bar。

步骤(2)中，所述匀质的循环次数较佳地为6-15次，更佳地为10次。

步骤(2)中，所述葛根素纳米晶混悬液的粒径较佳地为100-300nm，更佳地为242nm。

步骤(3)中，所述的预冻的温度较佳地为-45℃；所述的预冻的时间较佳地为2h。

步骤(3)中，所述的保温的温度较佳地为-25℃；所述的保温的时间较佳地为4h。

步骤(3)中，所述的升华干燥的时间较佳地为14h。

步骤(3)中，所述的解析干燥的时间较佳地为2h。

步骤(3)中，所述预冻、所述保温、所述升华干燥和所述解析干燥所采用的设备为本领域常规设备，较佳地为冻干机。

步骤(3)中，所述的过筛为本领域常规操作，较佳地为过80目筛。

步骤(3)的方式一中，在所述预冻之前，较佳地，还向所述葛根素纳米晶混悬液中加入冻干保护剂。

其中，所述冻干保护剂较佳地为甘露醇、葡萄糖和蔗糖中的一种或多种。所述冻干保护剂的添加量较佳地为0-10％，但不为零，更佳地为6％，所述百分比为占所述葛根素纳米晶冻干产物的质量百分比。

步骤(3)中，所述喷雾干燥采用本领域常规的喷雾干燥机进行。所述进风口温度较佳地为170-190℃，更佳地为180℃。所述喷雾干燥的进料流速为本领域常规，较佳地为4-8rpm，更佳地为8rpm，rpm是指根据所用的喷雾干燥机所用的蠕动泵每分钟转动的圈数。

本发明中，步骤(3)较佳地选择方式一进行。

本发明中，所述的葛根素纳米晶胶囊剂的内容物经过复溶后得到的葛根素纳米晶粒径较佳地为180-600nm，更佳地为246nm。

本发明中，涉及到的粒径均由纳米粒度测定仪测得。

本发明还提供了由上述制备方法制得的葛根素纳米晶胶囊剂。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明制得的葛根素纳米晶胶囊剂的有效成分含量高，口服方便，口服后能大大提高葛根素的生物利用度(高达22％)，同时克服了注射剂临床使用时不良反应，使其在临床使用时比现有制剂更加方便、安全，并保证了其有效性，临床上可用于辅助治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、视网膜动、静脉阻塞、突发性耳聋。本发明提供的葛根素纳米晶胶囊剂，常用的剂量为每天1.0-3.0克/50公斤体重，具体可根据患者的年龄、性别和病情确定。

附图说明

图1为效果实施例1的XRD衍射图谱。

图2为效果实施例1的DSC结果。

图3为效果实施例2中葛根素注射液的药时曲线图。

图4为效果实施例2中原料药、Pue-PVP纳米晶胶囊和Pue-SDS纳米晶胶囊的药时曲线图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

下述实施例中，16h粒径是指葛根素纳米晶混悬液放置16h后的粒径(nm)。

实施例1

取葛根素2g、十二烷基硫酸钠4g，加入100mL水中，磁力搅拌均匀；将上述混合液加入高压乳匀机中，控制制备过程的温度于43℃，在700Bar压力下循环匀质10次，得葛根素纳米晶混悬液；取葛根素纳米晶混悬液，置于冻干机中于-45℃预冻后进行冻干(-45℃预冻2h，-25℃保持4h，-5℃升华干燥保持14h，25℃解析干燥保持2h出箱)，得葛根素纳米晶冻干产物；将葛根素纳米晶冻干产物，粉碎过80目筛，粉末填充胶囊后，即得葛根素纳米晶胶囊剂。

实施例2

本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，取葛根素纳米晶混悬液，改冷冻干燥为喷雾干燥，在进风口温度180℃下，以8rpm的流速进行喷雾干燥，得葛根素纳米晶粉末，填充胶囊后，即得葛根素纳米晶胶囊剂。

实施例3

取与实施例1相同的葛根素纳米晶混悬液，加入6％的甘露醇，置于冻干机中于-20℃预冻后进行冻干，得葛根素纳米晶冻干产物；将葛根素纳米晶冻干产物，粉碎过80目筛，粉末填充胶囊后，即得葛根素纳米晶胶囊剂。

实施例4

本实施例的原料组分和制备过程均同实施例1，不同之处在于：十二烷基硫酸钠的质量为5g。

实施例5

本实施例的原料组分和制备过程均同实施例1，不同之处在于：匀质压力为1000Bar。

实施例6

本实施例的原料组分和制备过程均同实施例1，不同之处在于：匀质压力为1500Bar。

实施例7

本实施例的原料组分和制备过程均同实施例1，不同之处在于：匀质次数为5次。

实施例8

本实施例的原料组分和制备过程均同实施例1，不同之处在于：匀质次数为20次。

对比实施例1～8原料组分不同对产物的影响

取葛根素(Pue)2g，按下列比例加入不同的稳定剂，加入水100mL，按实施例1制备葛根素纳米晶混悬液，具体如表1所示。结果表明，当葛根素与羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆188(P188)分别按质量比为1：1、1：2及葛根素与聚乙烯吡咯烷酮(PVP)按质量比1：1制备时均无法制备成合适的葛根素纳米晶混悬液，也就不能制备成葛根素纳米晶胶囊剂。

表1 对比实施例1～8的配方和结果对比

对比实施例9～11 原料配比不同对产物的影响

取葛根素与SDS，按下列比例加入100mL水中，磁力搅拌均匀，其余同实施例1，具体如表2所示。结果表明，当葛根素与SDS之比大于等于1:1.5时，难以制备得葛根素纳米晶混悬液，也就不能制备成葛根素纳米晶胶囊剂。

表2 对比实施例9～11 的配方和结果对比

对比实施例11为其余条件均同实施例1时，Pue：SDS小于1：5时，制备葛根素纳米晶胶囊剂的对比实施例。结果表明，SDS含量太高可能引起肠道不适。

对比实施例12 匀质压力对制备结果的影响

按实施例1，将上述混合液加入高压乳匀机中，控制制备过程的温度于40℃，在不同的压力下循环匀质10次，其余同实施例1，具体见表3。结果表明，当匀质压力大于等于700Bar以上时才能制备得葛根素纳米晶混悬液，也就能制备成葛根素纳米晶胶囊剂。

表3 对比实施例12的参数设置和结果对比

	匀质压力(Bar)	0h粒径(nm)	16h粒径(nm)
				实施例1	700	242.7±7.2	230.8±12.5
实施例5	1000	225.4±8.2	230.1±10.9
				实施例6	1500	211.6±9.7	215.6±7.3
对比实施例12	600	﹥1000nm	﹥1000nm

对比实施例13 匀质次数对制备结果的影响

按实施例1，将上述混合液加入高压乳匀机中，控制制备过程的温度于40℃，在700Bar压力下循环匀质不同次数，其余同实施例1，具体见表4。结果表明，当匀质次数在5次以上时才能制备得葛根素纳米晶混悬液，也就能制备成葛根素纳米晶胶囊剂。

表4 对比实施例13的参数设置和结果对比

	匀质次数(次)	0h粒径(nm)	16h粒径(nm)
				实施例1	10	242.7±7.2	230.8±12.5
实施例7	5	336.6±11.5	339.3±13.1
				实施例8	20	205.3±7.9	210.2±9.7

对比实施例13

4

﹥1000nm

对比例14～16 匀质温度对制备结果的影响

按实施例1，将上述混合液加入高压乳匀机中，控制制备过程中不同的温度，在700Bar压力下循环匀质10次，其余同实施例1，具体见表5。结果表明，当匀质过程中温度控制于40℃以上时才能制备得葛根素纳米晶混悬液，也就能制备成葛根素纳米晶胶囊剂，但温度过高(﹥46℃)时，混悬液的稳定性不好。

表5 对比实施例14～16的参数设置和结果对比

	匀质温度(℃)	0h粒径(nm)	16h粒径(nm)
				实施例1	43	242.7±7.2	230.8±12.5
对比实施例14	32	﹥1000nm	﹥1000nm
				对比实施例15	37	760.1±16.7	﹥1000nm
对比实施例16	47	225.4±8.1	527.7±9.8

对比实施例17～22 升华干燥温度和解析干燥温度对制备结果的影响

按实施例1，冻干时预冻温度保持不变，改变升华干燥与解析干燥，其余与实施例1制备葛根素纳米晶胶囊剂，取冻干粉进行复溶，测定粒径，具体见表6。结果表明，当升华干燥大于或小于-5℃、解析干燥大于或小于25℃，均有可能使冻干粉的粒子发生改变。

表6 对比实施例17～22的参数设置和结果对比

	升华干燥	解析干燥	复溶后粒径(nm)
				实施例1	-5℃、14h	25℃、2h	235.2±11.2
对比实施例17	-10℃、14h	25℃、2h	有部分粒径﹥1000nm
				对比实施例18	5℃、14h	25℃、2h	有部分粒径﹥1000nm
对比实施例19	15℃、14h	25℃、2h	有部分粒径﹥1000nm
				对比实施例20	-5℃、14h	20℃、2h	有部分粒径﹥1000nm
对比实施例21	-5℃、14h	30℃、2h	有部分粒径﹥1000nm

对比实施例22

-5℃、14h

40℃、2h

有部分粒径﹥1000nm

效果实施例1

对实施例1得到的葛根素纳米晶胶囊剂的内容物，取样分别用X射线衍射(XRD)、示差扫描量热法(DSC)进行分析其结晶状态，结果见图1、图2。图1中，A曲线代表葛根素，B曲线代表葛根素与SDS物理混合物，C曲线代表SDS，D曲线代表纳米结晶冻干粉。图2中，A曲线代表葛根素，B曲线代表纳米结晶冻干粉，C曲线代表葛根素与SDS物理混合物，D曲线代表SDS。结果表明，葛根素本身的结晶峰经制备成葛根素纳米晶后结晶峰消失，已变成无定形末，说明葛根素结晶已融合在SDS中。

效果实施例2

葛根素纳米晶胶囊剂对葛根素Beagle犬口服给药生物利用度的影响

(1)实验材料

葛根素，98％，所述百分比为质量百分比，由上海康汀生物科技有限公司提供；葛根素注射液，由浙江康恩贝制药股份有限公司提供(2mL:0.1g，批号：130201)；葛根素纳米晶胶囊剂，按实施例1方法制备得到；葛根素纳米晶(PVP)胶囊，按照对比实施例8的方法制备得到。

Beagle犬20只，12月龄，体重8-11Kg，由上海中医药大学实验动物中心提供。

(2)方法

取葛根素粉末装入普通胶囊中，制备成葛根素胶囊，每粒含葛根素0.1g。

将Beagle犬20只随机分成4组，每组5只，第一组通过静脉注射葛根素注射液；第二组口服给予葛根素胶囊，第三组给予葛根素纳米晶(PVP)胶囊，第四组给予葛根素纳米晶胶囊剂，均按照50mg/Kg分别给药。给药后分别于5min、15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h取血，每次取血2mL，将所采血液置离心机中以3000r/min离心10min，取上清液，置-20℃冰箱中，待测。

测定方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，0.1％枸橼酸：甲醇(75:25)为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为250nm，按250uL血浆+250uL5％高氯酸甲醇溶液+500uL Pue标液+100uL内标标液加样，将其置漩涡上3min,然后以12000r/min离心10min，取上清液10uL进样，每个浓度进三针，以平均值建立标准曲线。Pue标准溶液分别为：0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10ug/mL。对羟基苯甲酸(内标物)浓度为32.8ug/mL。

按10uL内标标液+50uL血浆+50uL5％高氯酸甲醇溶液的比例加入样品，将其置漩涡上3min，然后以12000r/min离心10min，取上清液10uL进样,记录峰面积，代入标曲中即可求得血药浓度。

(3)结果

葛根素、Pue-PVP纳米晶胶囊和Pue-SDS纳米晶胶囊及葛根素注射液在Beagle犬中的药动学参数如表7。

表7 实验结果

表7的结果表明，以本发明实施例1制备的以SDS为稳定剂的纳米晶胶囊能够使葛根素的绝对生物利用度达到20％以上，比葛根素原料药高4.47倍，能实现葛根素的口服给药，而以PVP为稳定剂的纳米晶不能提高葛根素的生物利用度。葛根素注射液的药时曲线见图3，其它三种样品的药时曲线见图4。

Claims

1.一种葛根素纳米晶胶囊剂的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)将葛根素和十二烷基硫酸钠加入水中，混合均匀，得混合液；其中，所述葛根素和十二烷基硫酸钠的质量比为(1:2)～(1:3)；

(3)步骤(3)采用下述方式中的任一种进行：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述葛根素与所述水的质量体积比为(1～2)g：(50～500)mL；所述葛根素占40％以下，但不为零；所述十二烷基硫酸钠占60-80％；所述百分比均为占所述葛根素纳米晶冻干产物或占所述葛根素纳米晶粉末的质量百分比。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述葛根素与所述水的质量体积比为1g：50mL；所述葛根素占30％-35％；所述十二烷基硫酸钠占60％-70％。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述匀质采用的设备为高压乳匀机；所述匀质的温度为43℃；所述匀质的压力为700Bar；所述匀质的循环次数为6-15次；所述葛根素纳米晶混悬液的粒径为100-300nm。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述匀质的循环次数为10次；所述葛根素纳米晶混悬液的粒径为242nm。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述预冻的温度为-45℃；所述预冻的时间为2h；所述保温的温度为-25℃；所述保温的时间为4h；所述的升华干燥的时间为14h；所述的解析干燥的时间为2h；所述预冻、所述保温、所述升华干燥和所述解析干燥所采用的设备为冻干机；所述的过筛为过80目筛。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)选择方式一进行；方式一中，在所述预冻之前，还向所述葛根素纳米晶混悬液中加入冻干保护剂；所述冻干保护剂的添加量为0-10％，但不为零，所述百分比为占所述葛根素纳米晶冻干产物的质量百分比；

方式二中，所述喷雾干燥采用喷雾干燥机进行；所述进风口温度为170-190℃，所述喷雾干燥的进料流速为4-8rpm；

所述的葛根素纳米晶胶囊剂的内容物经过复溶后得到的葛根素纳米晶粒径为180-600nm。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂为甘露醇、葡萄糖和蔗糖中的一种或多种；所述冻干保护剂的添加量为6％；方式二中，所述进风口温度为180℃，所述喷雾干燥的进料流速为8rpm；

所述的葛根素纳米晶胶囊剂的内容物经过复溶后得到的葛根素纳米晶粒径为246nm。

9.一种如权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的葛根素纳米晶胶囊剂。