CN105982009A - 用于调节人体肠道微生态的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于调节人体肠道微生态的组合物，其包括水苏糖和低聚甘露糖作为有效活性成分。本发明组合物能有效调节肠道菌群功能。

Description

用于调节人体肠道微生态的组合物

技术领域

本发明涉及用于调节人体肠道微生态的组合物，特别是涉及包括水苏糖和低聚甘露糖作为有效活性成分的组合物。

背景技术

人体所携带的微生物细胞数达百万亿之多，这些数量庞大的共生微生物群体主要分布于人体的皮肤、口腔以及胃肠道，其中肠道是微生物最为集中的部位。实验证实，肠道菌群对宿主的营养、代谢以及免疫功能起到了至关重要的作用，对维持人体健康十分重要，是实现宿主正常生理功能不可或缺的一部分。

在人体微生态系统中，肠道微生态是主要的，最活跃的，对人体健康具有显著的影响。肠道微生态系统是指由肠道菌群等生物成分与食源性非生物成分(未被消化的食物)以及来自胃、肠、胰和肝的分泌物(如激素、酶、黏液和胆盐等)共同构成的位于肠道的局部的生态系统。

研究表明，新生儿离开母体后，皮肤、气管和消化道等表面上就开始滋生大量的细菌。新生儿第一次排泄的胎粪是无菌的，3～4小时后就发现有细菌，哺乳后细菌数量急剧增长。新生儿出生后3～4天内，粪便中就会出现双歧杆菌，到第5天时成为优势菌。随着婴儿的生长发育，到断乳时肠道菌群的组成即可达到一种相对稳定的状态。正常情况下，这种相对稳定的肠道菌群组成会伴随着人体的成长，一直到成年期。而到了老年期后，肠道菌群组成会发生较大的变化，粪便中的双歧杆菌数量大为减少，而拟杆菌和梭状芽孢杆菌数量则大幅增加。

肠道菌群与人体在漫长的进化中建立了密切的关系，二者之间是既对立又统一的矛盾的统一体。经过长期的自然选择过程，肠道菌群和人体达到了一种互惠互利又相互制约的相对稳定的动态平衡状态。人体为菌群提供生存空间以及能量来源，菌群则帮助人体合成一些营养素、并直接或者间接影响人体的生理机能。

大量实验证实，肠道菌群对人体的正常代谢活动、营养吸收、上皮细胞的生长分化、正常肠道粘膜的免疫应答形成和维持等方面起到非常重要的作用，同时它们与某些疾病也具有紧密的联系，包括腹胀腹痛等消化不良性疾病、炎症性肠病、癌症、多发性器官紊乱、过敏症等等。

肠道菌群不仅影响食物的消化和吸收，还会影响到口服药物的吸收和代谢。因此，肠道菌群对药物的代谢以及治疗效果都会产生影响，还可能是药物治疗产生个体差异的原因之一。

人体肠道菌群按照作用分类可以分为：益生菌、条件致病菌和致病菌。(1)益生菌，顾名思义即是对人体健康有益的菌。益生菌是人体肠道微生态环境中不可缺少的组成部分，在健康人体中为肠道优势菌群，具有营养及免疫调节等作用。人体主要益生菌包括乳酸杆菌、双歧杆菌等；(2)条件致病菌，是指在肠道微生态平衡时无害，但在特定的条件下又具有侵袭性的一类菌，在健康人体中为肠道非优势菌群，如肠球菌、肠杆菌等；(3)致病菌，是指对人体有害，能引起人体病理反应的菌。致病菌大多为过路菌，长期定植于肠道的机会比较少，在宿主体内存留数小时、数天或数周，如变形杆菌、假单胞菌和产气荚膜梭菌等。

人体肠道菌群按照需氧情况可以分为：厌氧菌、兼性厌氧菌和需氧菌。其中专性厌氧菌占99％以上，而仅拟杆菌及双歧杆菌就占细菌总数的90％以上。由于胃酸、胆汁作用及小肠液流量大、蠕动快，因而胃、十二指肠、空肠细菌的种类及数量极少，主要为革兰阳性需氧菌。回肠末端由于肠液流量少、蠕动减慢，细菌数逐渐增加，主要含乳酸杆菌、大肠埃希菌、类杆菌和梭状芽孢杆菌等。至结肠，细菌数明显增加，形成了微生物密度最高的菌落群，而且其中大多数为厌氧菌，主要为双歧杆菌、拟杆菌和乳酸杆菌等。

一些学者认为，益生菌的作用可以概括为：防治腹泻、缓解乳糖不耐受症状、预防阴道感染、增强人体免疫力、缓解过敏、降低血清胆固醇、预防癌症和抑制肿瘤生长。另外还有防止骨质丢失与骨质疏松症的作用。

益生菌对于人体的健康促进作用已经广为人知了。因此相应的产品也慢慢多了起来。目前市场上针对人体肠道微生态的产品主要有三类：益生菌类产品、益生元类产品和由前二者组合而成的名为“合生元”类的产品。

“益生菌类产品”与之前所述人体肠道益生菌这个概念是有区别的。人体肠道益生菌属于原籍菌，是经过人体与微生物体长期的自然选择过程最终互认并长期定植于人体肠道中的细菌总称。而“益生菌类产品”属于外籍菌，是人为加入到体内的与人体肠道益生菌相类似的菌种。只有那些能够通过胃肠道环境的考验存活下来并且成功定植的菌株才能真正转化为“人体肠道益生菌”。这其中还要经过人体的免疫系统清洗以及肠道本身原籍菌的竞争性抑制，因此，成功率是很低的。

目前，美国食品药物管理局(FDA)认为安全的益生菌已达40种之多，随着科技的发展、研究的深入，还会越来越多。根据报道，人体肠道细菌包括200多种菌属，共800余菌种，菌株种类则达7000余种。学术界对于外加益生菌一直存在下述担忧：面对如此多样的菌群系统，单纯地补充几种益生菌能起到的作用以及是否会导致人体的过敏反应，以及外源益生菌会否因为生产储运条件的变化而发生变异成为致病菌，等等。就安全角度而言，直接使用益生菌制剂具有一定的风险。

益生元(Prebiotics)是指能够选择性地促进宿主肠道内原有的有益细菌(益生菌)生长繁殖的物质。通过有益菌的增多，抑制有害细菌生长，从而达到调整肠道菌群，促进机体健康的目的。其具有激活体内益生菌增殖、抑制有害菌，激发细胞活力、增强人体免疫活力的健康作用。

目前对益生元的研究和使用主要集中在功能性低聚糖上。功能性低聚糖一般具有下述特征：1、是由2～10个相同的或不同的单糖，以糖苷键聚合而成的(可以是直链，也可以是支链)；2、具有糖类的特性，可直接作为食品配料，但是不被人体消化道酶和胃酸降解，不被(或难被)小肠吸收；3、具有促进人体双歧杆菌增殖等生理功能。功能性低聚糖包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖、大豆低聚糖、低聚甘露糖、水苏糖、棉籽糖等。

功能性低聚糖被肠道有益菌发酵，产生短链脂肪酸，其中乙酸、丁酸约占总产酸量的95％。短链脂肪酸的产生可降低肠内pH值，进一步抑制肠道致病菌和条件致病菌的生长繁殖；调节机体水电解质平衡、促进钙吸收；抑制肠上皮细胞的增殖、分化、转移以及DNA的合成和甲基化水平，起到抗肿瘤的作用。

“合生元”类产品是“益生菌”类产品与“益生元”类产品组合而成，因为其含有益生菌，因此没有解决“益生菌”类产品的安全性问题担忧。

“益生元”类产品相比“益生菌”类产品性质更加稳定、质量可控性更强，而且通过增殖原籍菌而起到“益生”作用，不用担心人为添加的外籍菌的活性问题以及变异问题，因此得到更多学者乃至消费者的信赖。2007年1月16日，OLIGO(低聚糖)项目被列入我国的公众营养改善项目，成为我国继实施“食盐加碘”、“营养强化面粉”等措施之后启动的又一公众营养改善项目。这一方面说明了“益生元”类产品的市场广阔，另一方面也说明了业界对“益生元”类产品的认可。

近年来，提出了各种各样的包含益生元的组合物。

例如，专利文献1(CN102488100A)公开了一种含有复合益生素的饲料添加剂，其原料组分为熟化玉米皮、玉米浆、低聚异麦芽糖、低聚甘露糖、低聚半乳糖、布拉酵母菌液、地衣芽孢杆菌菌液和乳酸杆菌菌液。所述饲料添加剂中益生菌的存活菌量高，具有安全、环境可降解及成本低的特点。

专利文献2(CN101263841A)公开了一种功能保健奶产品，其特征是添加了功能低聚糖，包括低聚甘露糖、低聚木糖、低聚果糖，低聚半乳糖、水苏糖、棉籽糖、低聚异麦芽糖、低聚麦芽糖、大豆低聚糖、壳低聚糖、低聚乳果糖、低聚龙胆糖，特别是低聚甘露糖、低聚木糖、低聚果糖，可以是其中的一种或者是一种以上的混合物。

专利文献3(CN1731938A)公开了一种含有果糖低聚糖(FOS)和半乳糖低聚糖(GOS)的营养或药物组合物。

专利文献4(TWI337079B)公开了甲基α甘露寡糖、半乳寡糖、果寡糖、壳寡糖等众多低聚糖与原花青素的组合物(权利要求1)。

上述专利文献1中，由于饲料添加剂是用于动物的，与人用的食品的应用范围不一样；此外，文献1的技术方案的目的是为了使产品中益生菌的存活菌量高，而人体内环境与外环境具有本质的区别，体外存活的菌在体内也存活的概率不高；另外，本发明所述组合物中不添加外源菌，也没有加入玉米皮、玉米浆等材料。此外，上述文献1～4均没有公开本发明特定的组合物。

因此，虽然有关各种低聚糖的研究有很多，但是大多数研究方向都局限在单种低聚糖的功能上。极少有人对于低聚糖组合开展深入的研究。由于人体肠道微生态是个复杂的系统，其中所包含的细菌种类繁多，因此作为调节人体肠道微生态的产品研究应该更加注重肠道菌群的整体性和平衡性。中医学理论是以整体观和平衡观为基础的，相比西医学更加重视整体性和平衡性。因此，中医学理论对于调节人体肠道微生态的产品研究具有十分有益的指导作用。传统中医药学认为药物都是具有“偏性”的，在药物应用上更加注重复方配伍，以使各组分扬长避短，发挥更好的效益。本发明即是以“扶正祛邪”这一中医学的重要治则为指导，对水苏糖与低聚甘露糖的组合物开展了一系列研究并取得了令人惊喜的结果。

而且，现有技术对水苏糖和低聚甘露糖的研究较少，且有关水苏糖与低聚甘露糖的组合物研究，目前在国内外尚未见相关报道。

水苏糖是目前实现工业化生产的低聚糖益生元类产品中用量较小的、可以被较多益生菌菌种利用的、组成成分明确的一种低聚糖。但是水苏糖和大豆低聚糖同样具有较大的产气效应，这严重影响了水苏糖的应用。本专利发明人通过对水苏糖与低聚甘露糖的组合进行了深入研究，进而取得了令人意想不到、超出预期的实验结果。

发明内容

本发明的发明人令人惊奇地发现：通过组合使用低聚甘露糖和水苏糖，提供显著增殖益生菌、抑制/排除致病菌、稳定条件致病菌，进而平衡人体肠道微生态的并且用量小、服用方便的、安全有效的组合物。低聚甘露糖和水苏糖的组合显著提高了益生元特性，显示出协同效应。本发明克服了现有技术的不足，提供了能够显著增殖益生菌、抑制/排除致病菌、稳定条件致病菌，纠正菌群失调、平衡人体肠道微生态环境，进而消除因人体肠道微生态失衡导致的诸如腹胀、腹泻、消化不良等亚健康状态及相关病症并且用量小、服用方便、安全有效的组合物。本发明的组合物产气效应较水苏糖单用时大幅改善。

本发明技术方案包括：

项1、一种用于调节人体肠道微生态的组合物，其特征在于，包括水苏糖和低聚甘露糖作为有效活性成分。

项2、如项1所述的组合物，其还包含低聚半乳糖和/或低聚木糖。

项3、如项1所述的组合物，其中，所述水苏糖和低聚甘露糖的重量比为1：10～10：1，优选为1：1～5：1，或优选为1：5～1：1，更优选为1：1～3：1，或更优选为1：3～1：1。

项4、如项1～3中任一项所述的组合物，其中，所述低聚甘露糖中甘露二糖至甘露十糖的含量≥85％(w/w)、优选≥90％(w/w)，且甘露二糖至甘露六糖的含量≥50％(w/w)。

项5、如项2所述的组合物，其中，所述低聚半乳糖以半乳低聚二糖至半乳低聚八糖计，含量≥57％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥90％(w/w)、进一步优选≥99％(w/w)，且乳糖含量≦23％(w/w)、优选≦20％(w/w)、更优选≦10％(w/w)，且葡萄糖含量≦22％(w/w)、优选≦10％(w/w)、更优选≦5％(w/w)。

项6、如项2所述的组合物，其中，所述低聚木糖以木二糖至木七糖计，含量≥70％(w/w)、优选≥80％(w/w)、更优选≥90％(w/w)，且木二糖至木四糖的含量≥50％(w/w)、优选≥60％(w/w)。

项7、如项1～6中任一项所述的组合物，其中，水苏糖含量≥60％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥80％(w/w)。

项8、如项1～7中任一项所述的组合物，其中，还包括碳水化合物，例如壳寡糖、低聚异麦芽糖、酵母β-葡聚糖、菊粉、抗性糊精、棉籽低聚糖。

项9、如项1～7中任一项所述的组合物，其中，还包含辅料和/或食材。

项10、一种食品、保健食品或药物制剂，含有如项1～9中任一项所述的组合物，所述食品、保健食品或药物制剂优选为固体、半固体或者液体形式。

项11、如项1～9中任一项所述的组合物在制备用于调节人体肠道微生态的食品、保健食品或药物制剂中的用途。

本发明的有益效果是：(1)本发明组合物在给定的范围内可以使益生元指数(Prebiotic Index，PI)得到显著的提高，显示出明显的协同作用，调节肠道菌群功能明显高于单种低聚糖，用量小，能够在摄入热量低的情况下实现更好的益生效果；(2)本发明组合物的产气作用较同等剂量的水苏糖单剂显著降低；(3)本发明组合物对于不同原因引起的腹泻症状改善均显示出明显作用。

具体实施方式

本说明书中所述“调节人体肠道微生态”即是通过调节肠道菌群，使人体肠道微生态环境达到健康的平衡状态，进而对人体体现出各种健康益处。

本说明书中所述“水苏糖”为：具有其在本领域中通用的含义，其可以是合成的，也可以是从天然来源加工获得的。优选天然来源加工获得的水苏糖。其表示由蔗糖的葡萄糖基一侧以α-1，6糖苷键结合了两个α-半乳糖构成的四糖。本文中的“水苏糖”也包括主成分为水苏糖的混合物。优选地，主成分为水苏糖的混合物中，水苏糖含量≥60％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥80％(w/w)。

本说明书中所述“低聚甘露糖”具有其在本领域中通用的含义，其可以是合成的，也可以是从天然来源加工获得的。优选天然来源加工获得的低聚甘露糖。其表示由2～10个(优选2～6个)甘露糖分子聚合而成的物质。本文中的“低聚甘露糖”也包括主成分为低聚甘露糖的混合物。优选地，主成分为低聚甘露糖的混合物中，甘露二糖至甘露十糖的含量≥85％(w/w)、优选≥90％(w/w)，且甘露二糖至甘露六糖的含量≥50％(w/w)。)

本说明书中所述“低聚半乳糖”具有其在本领域中通用的含义，其可以是合成的，也可以是从天然来源加工获得的。优选天然来源加工获得的低聚半乳糖。其表示以乳糖分子为基础结合半乳糖分子生成的含有2～10个(优选2～8个)单糖分子的低聚半乳糖。本文中的“低聚半乳糖”也包括主成分为低聚半乳糖的混合物。优选地，主成分为低聚半乳糖的混合物中，半乳低聚二糖至半乳低聚八糖含量≥57％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥90％(w/w)、进一步优选≥99％(w/w)，且乳糖含量≦23％(w/w)、优选≦20％(w/w)、更优选≦10％(w/w)，且葡萄糖含量≦22％(w/w)、优选≦10％(w/w)、更优选≦5％(w/w)。

本说明书中所述“低聚木糖”具有其在本领域中通用的含义，其可以是合成的，也可以是从天然来源加工获得的。优选天然来源加工获得的低聚木糖。其表示由2～10个木糖分子结合而成的低聚糖。优选由2～7个木糖分子以β-1，4-糖苷键连接，并以木二糖、木三糖、木四糖为主要成分的低聚木糖混合物。本文中的“低聚木糖”也包括主成分为低聚木糖的混合物。优选地，主成分为低聚木糖的混合物中，木二糖至木七糖含量≥70％(w/w)、优选≥80％(w/w)、更优选≥90％(w/w)，且木二糖至木四糖的含量≥50％(w/w)、优选≥60％(w/w)。

本发明的所述组合物中包括的辅料和食材为食品和药物领域中常用的那些，例如：助流剂、pH调节剂、崩解剂、淀粉、抗性淀粉、糊精、抗性糊精、属于药食同源的中药材、食用香精、调味料。

实施例

下面结合实施例对本发明进一步地说明，但本发明并不局限于此。

产品实施例1：

水苏糖和低聚甘露糖分别过100目筛，称取1000克水苏糖、3000克低聚甘露糖，混合均匀后分装成1000袋，优选铝塑包装。

产品实施例2：

称取3000克水苏糖、1000克低聚甘露糖，与适量糊精混匀后，以85％乙醇制粒、烘干后包装成1000袋，优选铝塑包装。

产品实施例3：

称取1克水苏糖、10克低聚甘露糖，以少量蒸馏水溶解后加入到各种膏滋中。

产品实施例4：

称取5000克水苏糖、1000克低聚甘露糖，分别以蒸馏水10000毫升、5000毫升配制成溶液后混合均匀并调节体积至15000毫升或者先混合后以蒸馏水配制成15000毫升溶液，滤过、灌装成1000支口服液。

产品实施例5：

称取1000克水苏糖、5000克低聚甘露糖，以15000毫升蒸馏水溶解后，浓缩至糖浆形态、分装成1000份，优选铝塑包装。

产品实施例6：

原料经烘干后称取1000克水苏糖、1000克低聚甘露糖、无水柠檬酸680克、碳酸氢钠500克、微晶纤维素100克、PEG6000 110克、硬脂酸镁10克，混合均匀，粉末直接压片，制成1000片。

测试实施例：

一、材料与方法

(一)本发明中低聚糖来源分别为：

水苏糖：市售产品，水苏糖含量80％。

低聚甘露糖：市售产品，低聚甘露糖以甘露二糖至甘露十糖计含量90％。

(二)分析标准

1、《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中对于调节肠道菌群功能阳性结果的定性判定标准为：

A、动物实验

比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况，实验组实验前后自身比较差异有显著性，或实验后实验组与对照组组间比较差异有显著性、且实验组实验前后自身比较差异有显著性，符合以下任一项，可以判定该受试样品动物实验结果阳性。

1)粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌、肠球菌无明显变化。

2)粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌明显增加，但增加的幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。

B、人体试食实验

符合以下任一项，且试验组试食前后自身比较及试食后试食组与对照组比较，差异均有显著性，可以判定该受试样品具有调节肠道菌群功能的作用。

1)粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌、肠球菌、拟杆菌无明显变化。

2)粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌、拟杆菌明显增加，但增加的幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。

2、R.Palframan等人(Development of a quantitative tool for thecomparison of the prebiotic effect of dietary oligosaccharides.Letters inApplied Microbiology 2003,37,281-284)提出了定量分析益生元作用的指标：益生元指数(Prebiotic Index，PI)。本发明人根据我国现行的对于调节肠道菌群功能判定的标准，在不额外增加实验负担的前提下，设计了适合我国使用的动物实验PI计算方法和人体试食实验PI计算方法。分别为：

动物PI＝(双/总)+(乳/总)－(梭/总)－(杆/总)－(球/总)

其中“双”、“乳”、“梭”、“杆”、“球”分别表示实验后的双歧杆菌数、乳杆菌数、产气荚膜梭菌数、肠杆菌数以及肠球菌数与其各对应菌实验前的菌数之比；“总”表示实验后的上述5种菌菌数之和与实验前菌数之和的比值。

人PI＝(双/总)+(乳/总)－(梭/总)－(杆/总)－(球/总)－(拟/总)

其中“双”、“乳”、“梭”、“杆”、“球”、“拟”分别表示实验后的双歧杆菌数、乳杆菌数、产气荚膜梭菌数、肠杆菌数、肠球菌数以及拟杆菌与其各对应菌实验前的菌数之比；“总”表示实验后的上述6种菌菌数之和与实验前菌数之和的比值。

二、动物实验

1、实验动物

SPF近交系BALB/c雄性小鼠，18-22g，每组10只。

2、分组及受试样品给予时间

实验设试验组和空白对照组，受试样品给予时间14天。

3、实验步骤

在给予受试样品之前，无菌采取小鼠粪便0.1g，10倍系列稀释，选择合适的稀释度分别接种在各培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，计算出每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24h，与实验前同样方式取直肠粪便，检测肠道菌群，方法同上。

4、数据处理：

资料用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

5、实验结果与分析

5.1实验(1)

水苏糖、低聚甘露糖及其组合物(1：1)均以日剂量为0.6g/kg给予小鼠。各受试物以无菌蒸馏水溶解配置后于4℃密闭冷藏保存，保存时间不超过5天，灌胃前提前取出放置至室温。小鼠灌胃体积为0.1ml/10g。各组小鼠分别连续灌胃给予14天后测定结果。空白对照组灌胃给予相应体积的无菌生理盐水。

实验结果表明：水苏糖和低聚甘露糖分别单独使用时，均显示出增殖双歧杆菌、乳杆菌并抑制产气荚膜梭菌的作用，肠杆菌数、肠球菌数变化不明显，表现出调节肠道菌群功能，动物PI值经自身比较及与对照组比较均显示有显著性差异(P<0.05)。但水苏糖的作用偏重于对益生菌的增殖、而低聚甘露糖的作用偏重于对致病菌的抑制；而同样在相同剂量下的水苏糖和低聚甘露糖的组合物却显示出更加显著的益生元功能。该组合物显示出更加显著的增殖双歧杆菌、乳杆菌并抑制产气荚膜梭菌的作用，肠杆菌数、肠球菌数变化不明显，动物PI值经自身比较及与对照组比较均显示有极显著性差异(P<0.01)，而且对益生菌的增殖作用与对致病菌的抑制作用更加均衡。显示着该组合物产生了较单独使用时更加强效的协同效应。

5.2实验(2)

我们另外测试了在每日0.6g/kg的剂量下水苏糖和低聚甘露糖不同配比的组合物(7：1，5：1，3：1，1：1、1：3、1：5)对益生元指数的影响，测试方法同实验(1)所述方法。结果表明各组合物均表现为调节肠道菌群功能阳性，其中动物PI值在3：1、1：1和1：3比例的组合物组最高(P<0.01)，在7：1、5：1和1：5比例的组合物组低一些，但仍然表现出一定的调节肠道菌群功能(P<0.05)。

5.3实验(3)

将水苏糖、低聚甘露糖和它们的组合物(配比为1：1)均以每日0.6g/kg的剂量同实验(1)所述方法连续给予小鼠14天。每组小鼠数量增加至20只，在连续给予7天后各组小鼠分别再另外灌注鼠伤寒沙门氏菌，菌液浓度为1×10⁸CFU/ml，0.2ml/只，连续2天，继续观察5天，记录小鼠死亡情况及腹泻情况。

[表1]

小鼠	空白对照	水苏糖(A)	低聚甘露糖(B)	A+B
					腹泻发生数(只)	20	18	15	11
死亡数(只)	13	8	10	4

实验结果表明，空白对照组全部出现腹泻，其中有13只出现死亡；各低聚糖组的腹泻发生率和死亡率均有不同程度降低，水苏糖+低聚甘露糖组合物组降低幅度明显大于各单独低聚糖组。该结果进一步证实了组合物的协同作用，同时也预示着该组合物具有抑制/清除致病菌、预防致病菌引起的腹泻和减轻症状、减少死亡的作用。

三、人体试食试验

1、受试者纳入标准

一个月内未患过胃肠疾病者；一个月内未服用过抗生素者。

2、试验设计及分组要求

采用自身和组间两种对照设计。按受试者的菌群状况随机分为试食和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食因素等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者50例。

3、受试样品的剂量和使用方法

试食组每人每日服用本组合物3g，服用时将本品溶于100毫升温水中，顿服。对照组采用空白对照。受试样品给予时间14天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。

4、观察指标

双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌、人PI值、产气情况等。

5、试验步骤

在给予受试样品之前，无菌采取受试者粪便1.0g，10倍系列稀释，选择合适的稀释度分别接种在各培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，计算出每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24hr，用同样的方法再次检测。

6、数据处理

试验数据为计量资料，用t检验进行分析。自身对照资料采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；对变异系数太大(如CV>50％)的资料应用秩和检验。

7、实验结果与分析

将水苏糖和水苏糖+低聚甘露糖(1:1)的组合物均以每日3g的剂量按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)功能学评价检验方法中的“调节肠道菌群功能检验方法”进行人体试食实验。连续给予14天后测定结果。

实验结果表明：水苏糖以及水苏糖+低聚甘露糖的组合物均表现为调节肠道菌群功能阳性。而组合物组表现出来的效应更强，其PI值明显高于水苏糖单独使用时的PI值。另外，水苏糖组92％的参试者报告产气增多，而组合物实验组中报告产气增多的人数只有34％。

另外一项人体试食试验将拟赴印尼参加公司年会的52人随机分成两组，每组26人。其中一组提前5天服用水苏糖+低聚甘露糖的组合物(1：1)，每人每日服用量3g，服用时将本品溶于100毫升温水中，顿服，连续服用5天；另外一组不服用。年会为期6天，期间各参试者均为统一食宿。年会期间未服用本组合物组有8人出现腹泻，服用组则无人出现腹泻，服用组报告产气增多的人数为3例。试验结果说明本组合物对旅行者腹泻有很好的预防作用。

综合上述实验结果，水苏糖+低聚甘露糖的组合物表现出很好的调节肠道菌群功能，在显著增殖益生菌的同时也能显著抑制/排除致病菌，起到很好的“扶正祛邪”作用，同时大大改善了水苏糖产气的不良体感。该组合物还表现出令人意想不到的协同作用，在很低的剂量下达到了显著的效果。这对于后期的产品应用具有非常积极的作用。

Claims (11)

1.一种用于调节人体肠道微生态的组合物，其特征在于，包括水苏糖和低聚甘露糖作为有效活性成分。

2.如权利要求1所述的组合物，其还包含低聚半乳糖和/或低聚木糖。

3.如权利要求1所述的组合物，其中，所述水苏糖和低聚甘露糖的重量比为1：10～10：1，优选为1：1～5：1，或优选为1：5～1：1，更优选为1：1～3：1，或更优选为1：3～1：1。

4.如权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，所述低聚甘露糖中甘露二糖至甘露十糖的含量≥85％(w/w)、优选≥90％(w/w)，且甘露二糖至甘露六糖的含量≥50％(w/w)。

5.如权利要求2所述的组合物，其中，所述低聚半乳糖以半乳低聚二糖至半乳低聚八糖计，含量≥57％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥90％(w/w)、进一步优选≥99％(w/w)，且乳糖含量≦23％(w/w)、优选≦20％(w/w)、更优选≦10％(w/w)，且葡萄糖含量≦22％(w/w)、优选≦10％(w/w)、更优选≦5％(w/w)。

6.如权利要求2所述的组合物，其中，所述低聚木糖以木二糖至木七糖计，含量≥70％(w/w)、优选≥80％(w/w)、更优选≥90％(w/w)，且木二糖至木四糖的含量≥50％(w/w)、优选≥60％(w/w)。

7.如权利要求1～6中任一项所述的组合物，其中，水苏糖含量≥60％(w/w)、优选≥70％(w/w)、更优选≥80％(w/w)。

8.如权利要求1～7中任一项所述的组合物，其中，还包括碳水化合物，例如壳寡糖、低聚异麦芽糖、酵母β-葡聚糖、菊粉、抗性糊精、棉籽低聚糖。

9.如权利要求1～7中任一项所述的组合物，其中，还包含辅料和/或食材。

10.一种食品、保健食品或药物制剂，含有如权利要求1～9中任一项所述的组合物，所述食品、保健食品或药物制剂优选为固体、半固体或者液体形式。

11.如权利要求1～9中任一项所述的组合物在制备用于调节人体肠道微生态的食品、保健食品或药物制剂中的用途。