CN105954435B - 一种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法 - Google Patents
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Abstract
一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，涉及中药制剂质量控制方法。肾康宁胶囊用甲醇超声波提取，以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱方法为梯度洗脱。本发明建立的肾康宁胶囊指纹图谱与相应的对照图谱进行相似度评价，其相似度大于0.9，能有效的检测到肾康宁胶囊处方中除山药、淡附片、茯苓外各药材的特征峰，有利于监控本产品的内在质量，从而保障其在治疗上的有效性。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂的质量控制方法，特别是涉及一种用高效液相色谱法对肾康宁胶囊制剂指纹图谱的构建方法。
背景技术
中药质量控制是中药现代化的重要内容，指纹图谱技术被认为是中药质量控制的有效手段。现行参照西药的质量控制模式的质量标准不能恰当的反应中药内在的质量。宏观的鉴别和主要有效成分含量测定结合才是质量控制模式的发展趋势。中药指纹图谱能科学地反映中药制剂中相关处方药的化学物质的种类，是实现中药真实性、质量可控性和产品稳定性的可行模式，能更好地反映中药的内在品质。
肾康宁胶囊由黄芪、丹参、茯苓、泽泻、益母草、淡附片、锁阳、山药八味药制成的纯中药制剂。具有温肾，益气，和血，渗湿的作用。用于慢性肾炎，肾气亏损，肾功能不全所引起的的腰酸、疲乏、畏寒及夜尿增多。现行《中国药典》中肾康宁胶囊的质量控制方法主要包括鉴别和含量测定两方面。仅仅是选取其中一两种成分状况来说明产品的内在质量，这些控制方法不足以代表其质量整体，具有一定的局限性。现行的肾康宁胶囊的质量控制标准已不能真实反映其内在品质及批次之间产品质的一致性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法，该方法以高效液相色谱法对肾康宁胶囊中的某些指标成分进行实验，获得指纹图谱，用于评价和控制肾康宁胶囊的质量，以确保证肾康宁胶囊的质量稳定性、一致性和可控性，从而提高肾康宁胶囊的安全性和有效性。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案。
一种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法：取肾康宁胶囊内容物用甲醇超声波提取；以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱过程为梯度洗脱。
进一步的，上述肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法：取肾康宁胶囊内容物，研细后用甲醇超声波提取，滤过，浓缩，取滤液；以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱过程为梯度洗脱。
前述肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法如下：
（a）供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物0.5～2.0g，充分研细后加入甲醇25～100ml，超声处理20～40分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5～20ml，取续滤液为供试品溶液，所述滤过为采用微孔滤头滤过；
（b）对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品适量、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量、毛蕊异黄酮对照品适量，加甲醇分别制成每1ml各含0.2mg的对照品溶液；
（c）色谱条件为：ODS C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速0.5～1.5ml/min，柱温25～35℃，检测波长：260～300nm；
（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
进一步地，前述肾康宁胶囊指纹图谱的方法优选方案如下：
（a）供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物1g，充分研细后加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml，取续滤液为供试品溶液；
（b）对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为丹参素对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮对照品溶液；
（c）色谱条件为： ODS C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长：280nm；
（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
前述方法中所述梯度洗脱的程序以如下体积比浓度配置进行。
用前述方法建立的指纹图谱中有12特征峰，其中峰3为丹参素，峰8为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，峰12为毛蕊异黄酮，图谱总长度为71min。
上述指纹图谱中所述12个特征共有峰的平均保留时间（min）如下。
峰1黄芪药材、泽泻药材、锁阳药材的共有峰，峰2为黄芪药材、泽泻药材共有峰，峰3、6、9、10、11为丹参专属峰，峰5为益母草专属峰，峰7为益母草、泽泻药材共有峰，峰8、12为黄芪药材专属峰。方中山药、茯苓和淡附片在该色谱条件下基本检不出特征峰。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
（1）用本发明所提供的方法建立的肾康宁胶囊HPLC 指纹图谱与对照图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版相似度软件对比评价，相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。
（2）指纹图谱注重各特征峰的关联性和指纹图谱的整体面貌特征，标定了12个共有峰，反应信息比较完全，保证了产品质量的长期稳定性，疗效的安全性和可靠性。
（3）本发明具有方便、快捷、稳定、精密度高和重现性好等优点，可准确可靠的控制肾康宁胶囊的质量。
附图说明
图1为肾康宁胶囊指纹图谱。
图2为6批次肾康宁胶囊的指纹图谱。
图3为丹参药材色谱图。
图4为黄芪药材色谱图。
图5为益母草药材色谱图。
图6为泽泻药材色谱图。
图7为锁阳药材色谱图。
具体实施方式
除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域普通技术人员通常理解的含义相同。通常，本发明使用的命名及下述实验方法都是本领域公知的或常用的。为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步的说明。
仪器：Waters高效液相色谱仪（Waters2695分离单元，Waters2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；AB104-N万分之一天平（梅特勒-托利多）；AUW2200十万分之一天平（SHIMADZU 岛津）；KQ3200超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；Mili-Q超纯水仪：（美国Milipore公司）。
试药和试剂： 肾康宁胶囊（批号：121101、121102、121103、121104、121201、121202、130702、130703）；甲醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）、醋酸（分析纯）。
实施例1：肾康宁胶囊基于指纹图谱的质量控制方法。
供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物1g，充分研细后加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml为供试品溶液。
对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为丹参素对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮对照品溶液。
色谱条件为： ODS C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温25～35℃，检测波长：280nm。
梯度洗脱的程序以如下体积比浓度配置进行。
测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
实施例2：肾康宁胶囊指纹图谱的建立。
采用实施例1 所述方法测定共6个批次的肾康宁胶囊（批号：130101、130102、130301、130302、130401、130501），得到6批次的肾康宁胶囊指纹图谱。
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版相似度软件，对6批次肾康宁胶囊HPLC图谱的进行相似度评价，肾康宁胶囊指纹图谱相似度研究如下。
6个批次肾康宁胶囊指纹图谱相似度计算结果。
上表显示，不同批次肾康宁胶囊指纹图谱的相似度大于0.9，说明各批次的样品色谱模式相似，其化学成分一致性较好。
应当说明的是，虽然本发明以较佳实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此项技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于肾康宁胶囊内容物以甲醇为溶剂超声提取，滤过，取滤液测试；以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，用甲醇溶解，照高效液相色谱法建立指纹图谱；指纹图谱中12个特征共有峰与峰3的相对保留时间如下：峰1 ：0.52；峰2 ：0.76 ；峰3 ：1.00；峰4 1.23；峰5 ：1.55；峰6 ：1.57；峰7 ：2.23；峰8 ：2.81；峰9 ：3.30 ；峰10 ：3.64；峰11 ：3.75；峰12 ：3.81；所述峰3为丹参素；高效液相色谱法的色谱条件为：C18色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液；检测波长260～300nm；柱温为15～35℃ ；流速0.5～1.5ml/min；洗脱方法为梯度洗脱，其中梯度洗脱的时间程序及其流动相的体积变化按下表设置进行：
。
2.根据权利要求1所述的一种肾康宁胶囊HPLC 指纹图谱的建立方法，其特征在于：
（a）供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物0.5～2g，充分研细后加入甲醇25～100ml，超声处理20～40分钟，取出放冷，滤过，滤液浓缩至5～20ml，用孔径为0.45μm的滤头滤过为供试品溶液；
（b）对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品适量、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量、毛蕊异黄酮对照品适量，加甲醇分别制成每1ml各含0.2mg的对照品溶液；
（c）色谱条件：C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速0.5～1.5ml/min，柱温25～35℃，检测波长：280nm；
（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液5～15μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
3.根据权利要求2所述的一种肾康宁胶囊HPLC 指纹图谱的建立方法，其特征在于：
（a）供试品溶液的制备：精密称取充分研细后的肾康宁胶囊内容物1g，加入甲醇50ml，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml，取续滤液为供试品溶液；
（b）对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为丹参素对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液；精密称取毛蕊异黄酮对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异黄酮对照品溶液；
（c）色谱条件：C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长：280nm；
（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
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