CN105928942A - 金银花单宁的一种原位检测方法 - Google Patents

金银花单宁的一种原位检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105928942A
CN105928942A CN201610242475.0A CN201610242475A CN105928942A CN 105928942 A CN105928942 A CN 105928942A CN 201610242475 A CN201610242475 A CN 201610242475A CN 105928942 A CN105928942 A CN 105928942A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
tannin
hours
milliliter
detection method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610242475.0A
Other languages
English (en)
Inventor
刘林
廉玉姬
赵小梅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Linyi University
Original Assignee
Linyi University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Linyi University filed Critical Linyi University
Priority to CN201610242475.0A priority Critical patent/CN105928942A/zh
Publication of CN105928942A publication Critical patent/CN105928942A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
    • G01N2021/8466—Investigation of vegetal material, e.g. leaves, plants, fruits

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

本发明提出了金银花单宁的一种原位检测方法，包括以下步骤：(1)、金银花样品用2％戊二醛溶液浸泡12小时；(2)、洗净样品中多余的戊二醛，用1％的四氧化锇水溶液浸泡4小时；(3)、样品用梯度酒精脱水，每级15分钟；(4)、脱水后样品用树脂包埋；(5)、切片，厚度1‑2微米；(6)、显微观察单宁。

Description

金银花单宁的一种原位检测方法
技术领域
本发明涉及金银花单宁的一种原位检测方法。
背景技术
金银花不但作为中药材，也用于生产保健饮料。单宁影响饮料的口感，因此有必要对金银花中的单宁进行检测。过去的检测方法特点是先从金银花中提取单宁，根据单宁的吸光特性用吸光光度检测仪检测，这种方法有利于定量分析，但不能进行原位分析，因为不能显示单宁在金银花中的位置。
发明内容
基于背景技术中存在的问题，本发明提出了金银花单宁的一种原位检测方法，包括以下步骤：
1、金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步，将新鲜或充分水合后的花蕾样品用双面刀片切成小块或小片(小于1.0毫米×1.0毫米)，在1毫升2％戊二醛溶液(用pH6.8的磷酸缓冲液配制)中浸泡2小时，容器为1.5毫升带盖离心管，温度为室温。期间用真空泵抽气；
第二步，吸出管中的戊二醛溶液，用pH6.8的磷酸缓冲液浸洗3次，每次20分钟，之后加入0.3毫升1％的四氧化锇水溶液，使样品在其中浸泡2小时，温度为室温；
第三步，将四氧化锇溶液吸出，用梯度为10％的酒精系列脱水，从30％酒精开始，直到100％酒精，每级1毫升，15分钟；到100％酒精之后，换以100％丙酮，2次，每次20分钟；在更换溶液的过程中勿使样品接触空气，即样品始终位于液面之下；
第四步，将丙酮吸出，加入含有一半丙酮和一半液态树脂的混合物1毫升，1小时后将混合物吸出，注意吸出混合物时不要让样品接触空气；之后加入纯树脂0.5毫升，2小时后将样品转入另一个含有1毫升树脂的管子里，2小时后，将样品转移到橡皮模具里，摆在模槽的两头，静置1小时，之后将模具置于培养箱内，平放，将温度调到60℃，使树脂发生聚合反应，38小时后即形成包埋块，取出；
第五步，将包埋块修头部含有样品的部分修成下底0.5毫米、上底0.3毫米的梯形，用玻璃刀切片，厚度1-2微米，取一干净载玻片，滴一滴蒸馏水，将切片转移到水滴上面，再将载玻片放在电热板上加热，直到水蒸发干净；
第六步，切片降至室温后，于显微镜下观察并照相，结果，单宁显示为棕色至黑色，位于液泡内，含单宁的细胞主要是表皮毛细胞和药隔细胞。
本发明金银花单宁的一种原位检测方法，其效果是：
(1)、单宁显示为棕色至黑色，单宁含量越高，颜色越深。
(2)、显示含单宁细胞在金银花组织中的准确定位。
(3)、显示单宁在细胞中的准确定位。
(4)、切片不需要染色，节省时间。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
本实例金银花鲜样品中单宁的原位检测方法，包括以下步骤：
第一步，将花蕾不同组织用双面刀片切成小块或小片(小于1.0毫米×1.0毫米)，在1毫升2％戊二醛溶液(用pH6.8的磷酸缓冲液配制)中浸泡2小时，容器为1.5毫升带盖离心管，温度为室温。期间用真空泵抽气；
第二步，吸出管中的戊二醛溶液，用pH6.8的磷酸缓冲液浸洗3次，每次20分钟，之后加入0.3毫升1％的四氧化锇水溶液，使样品在其中浸泡2小时，温度为室温；
第三步，将四氧化锇溶液吸出，用梯度为10％的酒精系列脱水，从30％酒精开始，直到100％酒精，每级1毫升，15分钟；到100％酒精之后，换以100％丙酮，2次，每次20分钟；在更换溶液的过程中勿使样品接触空气，即样品始终位于液面之下；
第四步，将丙酮吸出，加入含有一半丙酮和一半液态树脂的混合物1毫升，1小时后将混合物吸出，注意吸出混合物时不要让样品接触空气；之后加入纯树脂0.5毫升，2小时后将样品转入另一个含有1毫升树脂的管子里，2小时后，将样品转移到橡皮模具里，摆在模槽的两头，静置1小时，之后将模具置于培养箱内，平放，将温度调到60℃，使树脂发生聚合反应，38小时后即形成包埋块，取出；
第五步，将包埋块修头部含有样品的部分修成下底0.5毫米、上底0.3毫米的梯形，用玻璃刀切片，厚度1-2微米，取一干净载玻片，滴一滴蒸馏水，将切片转移到水滴上面，再将载玻片放在电热板上加热，直到水蒸发干净；
第六步，切片降至室温后，于显微镜下观察并照相，结果，单宁显示为棕色至黑色，位于液泡内，含单宁的细胞主要是表皮毛细胞和药隔细胞。
实施例2
本实例金银花干燥样品中单宁的原位检测方法，包括以下步骤：
第一步，将干燥花蕾在磷酸缓冲液中充分水合，不同组织用双面刀片切成小块或小片(小于1.0毫米×1.0毫米)，在1毫升2％戊二醛溶液(用pH6.8的磷酸缓冲液配制)中浸泡2小时，容器为1.5毫升带盖离心管，温度为室温。期间用真空泵抽气；
第二步，吸出管中的戊二醛溶液，用pH6.8的磷酸缓冲液浸洗3次，每次20分钟，之后加入0.3毫升1％的四氧化锇水溶液，使样品在其中浸泡2小时，温度为室温；
第三步，将四氧化锇溶液吸出，用梯度为10％的酒精系列脱水，从30％酒精开始，直到100％酒精，每级1毫升，15分钟；到100％酒精之后，换以100％丙酮，2次，每次20分钟；在更换溶液的过程中勿使样品接触空气，即样品始终位于液面之下；
第四步，将丙酮吸出，加入含有一半丙酮和一半液态树脂的混合物1毫升，1小时后将混合物吸出，注意吸出混合物时不要让样品接触空气；之后加入纯树脂0.5毫升，2小时后将样品转入另一个含有1毫升树脂的管子里，2小时后，将样品转移到橡皮模具里，摆在模槽的两头，静置1小时，之后将模具置于培养箱内，平放，将温度调到60℃，使树脂发生聚合反应，38小时后即形成包埋块，取出；
第五步，将包埋块修头部含有样品的部分修成下底0.5毫米、上底0.3毫米的梯形，用玻璃刀切片，厚度1-2微米，取一干净载玻片，滴一滴蒸馏水，将切片转移到水滴上面，再将载玻片放在电热板上加热，直到水蒸发干净；
第六步，切片降至室温后，于显微镜下观察并照相，结果，单宁显示为棕色至黑色，位于液泡内，含单宁的细胞主要是表皮毛细胞和药隔细胞。
以上所述，仅为本发明的两个实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭示的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步，将新鲜或充分水合后的花蕾样品用双面刀片切成小块或小片(小于1.0毫米×1.0毫米)，在1毫升2％戊二醛溶液(用pH6.8的磷酸缓冲液配制)中浸泡2小时，容器为1.5毫升带盖离心管，温度为室温，期间用真空泵抽气；
第二步，吸出管中的戊二醛溶液，用pH6.8的磷酸缓冲液浸洗3次，每次20分钟，之后加入0.3毫升1％的四氧化锇水溶液，使样品在其中浸泡2小时，温度为室温；
第三步，将四氧化锇溶液吸出，用梯度为10％的酒精系列脱水，从30％酒精开始，直到100％酒精，每级1毫升，15分钟；到100％酒精之后，换以100％丙酮，2次，每次20分钟；在更换溶液的过程中勿使样品接触空气，即样品始终位于液面之下；
第四步，将丙酮吸出，加入含有一半丙酮和一半液态树脂的混合物1毫升，1小时后将混合物吸出，注意吸出混合物时不要让样品接触空气；之后加入纯树脂0.5毫升，2小时后将样品转入另一个含有1毫升树脂的管子里，2小时后，将样品转移到橡皮模具里，摆在模槽的两头，静置1小时，之后将模具置于培养箱内，平放，将温度调到60℃，使树脂发生聚合反应，38小时后即形成包埋块，取出；
第五步，将包埋块修头部含有样品的部分修成下底0.5毫米、上底0.3毫米的梯形，用玻璃刀切片，厚度1-2微米，取一干净载玻片，滴一滴蒸馏水，将切片转移到水滴上面，再将载玻片放在电热板上加热，直到水蒸发干净；
第六步，切片降至室温后，于显微镜下观察并照相，结果，单宁显示为棕色至黑色，位于液泡内，含单宁的细胞主要是表皮毛细胞和药隔细胞。
2.如权利1所述的金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，样品在2％戊二醛溶液中浸泡12小时，温度为室温。
3.如权利1所述的金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，样品在四氧化锇水溶液中浸泡2小时，温度为室温。
4.如权利1所述的金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，单宁显示为棕色至黑色，在细胞中的位置是液泡，含有单宁的细胞是表皮毛细胞和药隔细胞。
5.如权利1所述的金银花单宁的一种原位检测方法，其特征在于，切片不需要染色。
CN201610242475.0A 2016-04-19 2016-04-19 金银花单宁的一种原位检测方法 Pending CN105928942A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610242475.0A CN105928942A (zh) 2016-04-19 2016-04-19 金银花单宁的一种原位检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610242475.0A CN105928942A (zh) 2016-04-19 2016-04-19 金银花单宁的一种原位检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105928942A true CN105928942A (zh) 2016-09-07

Family

ID=56838324

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610242475.0A Pending CN105928942A (zh) 2016-04-19 2016-04-19 金银花单宁的一种原位检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105928942A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106959287A (zh) * 2017-03-18 2017-07-18 陕西师范大学 一种双亲性单层分子膜的荧光检测方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10104136A (ja) * 1996-09-26 1998-04-24 Kanagawa Kagaku Gijutsu Akad 組織観察用薄切片試料作製方法
US20020132222A1 (en) * 1999-04-29 2002-09-19 Lossing Ann Bennett Processing technology for lcm samples
CN1587959A (zh) * 2004-09-23 2005-03-02 上海交通大学 基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法
CN103115809A (zh) * 2013-01-23 2013-05-22 浙江大学 一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法
CN104374601A (zh) * 2014-12-08 2015-02-25 扬州大学 一种谷物成熟种子的树脂切片制作方法
CN104792806A (zh) * 2015-04-22 2015-07-22 山东省农业科学院作物研究所 一种植物花粉管细胞钙离子超微结构定位方法
CN105067413A (zh) * 2015-09-21 2015-11-18 河南中医学院 一种用于观察植物细胞中单宁类物质分布的超薄切片的染色方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10104136A (ja) * 1996-09-26 1998-04-24 Kanagawa Kagaku Gijutsu Akad 組織観察用薄切片試料作製方法
US20020132222A1 (en) * 1999-04-29 2002-09-19 Lossing Ann Bennett Processing technology for lcm samples
CN1587959A (zh) * 2004-09-23 2005-03-02 上海交通大学 基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法
CN103115809A (zh) * 2013-01-23 2013-05-22 浙江大学 一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法
CN104374601A (zh) * 2014-12-08 2015-02-25 扬州大学 一种谷物成熟种子的树脂切片制作方法
CN104792806A (zh) * 2015-04-22 2015-07-22 山东省农业科学院作物研究所 一种植物花粉管细胞钙离子超微结构定位方法
CN105067413A (zh) * 2015-09-21 2015-11-18 河南中医学院 一种用于观察植物细胞中单宁类物质分布的超薄切片的染色方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HTTP://WENKU.BAIDU.COM/VIEW/CCB52CDFA8956BEC0975E3EF.HTML: "常规电镜制样步骤", 《百度文库》 *
HTTP://WENKU.BAIDU.COM/VIEW/FA3B70FE941EA76E58FA04CD.HTML: "树脂切片制作过程", 《百度文库》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106959287A (zh) * 2017-03-18 2017-07-18 陕西师范大学 一种双亲性单层分子膜的荧光检测方法
CN106959287B (zh) * 2017-03-18 2019-10-29 陕西师范大学 一种双亲性单层分子膜的荧光检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106404475A (zh) 一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法
CN105925690B (zh) 一种用于鉴别鸽子性别的引物、试剂盒及其鉴别方法
CN106546473B (zh) 一种用于甘蔗不同节位侧芽包埋制片方法
CN103994906A (zh) 木材横截面逐年轮显微切片的制作方法
CN103558055B (zh) 一种针对感染病毒的病变细胞的定位超薄切片方法
CN103900883A (zh) 绒山羊皮肤用于透射电镜观察的超薄切片的制备方法
CN103091826A (zh) 一套用于对组织切片进行免疫组织化学染色及保存的载玻片
CN102866038A (zh) 血斑标本采集和处理方法及其采集卡干血斑dna提取方法
CN105928942A (zh) 金银花单宁的一种原位检测方法
CN108072742A (zh) 一种鉴别成熟油蜂蜜的方法
CN107354217B (zh) 一种用于白花蛇舌草遗传多样性分析的issr分子标记方法
CN106802253B (zh) 岩黄连茎的石蜡切片方法
CN103993095B (zh) 一种新麦草属植物细胞染色体中期分裂相标本制备方法
CN103884560A (zh) 一种中国大鲵趾骨切片的制备方法及应用
CN103411813B (zh) 一种快速高效的丛枝菌根真菌染色的方法
CN103868779A (zh) 甜菜胚珠切割透明制片方法
CN109141959A (zh) 一种用于透射电镜观察的马铃薯块茎超薄切片制作方法
CN106644644A (zh) 一种快速、低毒的蚊虫石蜡切片制作方法
CN102759469A (zh) 一种棉花纤维中单宁的提取及含量检测的方法
CN106706389B (zh) 岩黄连根的石蜡切片方法
CN102184670A (zh) 一种哲罗鱼生物制片技术
CN205808794U (zh) 一种石蜡切片番红固绿染色装置
Al-Refu General methods in preparation of skin biopsies for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry
Gong et al. Natural colorant extraction from Cinnamomum camphora tree leaves of different maturities and its ultrasonic‐assisted extraction process
CN104964865A (zh) 一种病叶的切片棉兰染色方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160907

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication