CN105920028B - 一种多糖类成分及其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多糖类成分及其制备方法及应用，该多糖的制备方法以芦笋茎为原料，通过水提醇沉和碱提醇沉的结合获得各部位芦笋多糖，该提取方法在比较温和的条件下进行，完好的保存了多糖的组分。该芦笋多糖在润肠通便、镇静安神、抗失眠及抗惊厥方面表现出活性。这些可为将来在医药等领域中的应用提供依据。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及植物多糖的制备方法以及植物多糖的用途，更具体的是说芦笋粗多糖的制备方法，还涉及芦笋粗多糖在润肠通便、镇静安神、治疗失眠及抗惊厥方面的应用。
背景技术
芦笋(Asparagus officinalis L)，学名为石刁柏，又名露笋、龙须菜、文山竹、芦荀等，属于百合科天门冬属。芦笋被世界卫生组织列为世界十大最具营养价值的蔬菜之首，有“蔬菜之王”的美誉，长期食用具有活血通经、抗衰老、抗疲劳等功能，因其独特的营养价值、保健功效和药用活性而畅销不衰，成为广受人们喜欢的绿色食品。
芦笋可食用部分中富含多糖，蛋白质，维生素，脂肪，氨基酸，黄酮，皂苷等。研究表明，芦笋提取物具有免疫调节、保肝等方面的活性。目前，国内外对芦笋活性成分的研究主要集中在黄酮和皂苷类化合物，对芦笋多糖的结构和活性的研究还不够深入。
发明内容
为了进一步开发芦笋资源，本发明以芦笋茎为原料，采用水提醇沉法得到粗多糖。本发明得到的芦笋多糖在润肠通便、安神、缓解失眠及抗惊厥表现出药理活性，为其在医药等领域中的应用提供依据。作为主要活性成分的芦笋多糖具有潜在的开发应用价值。
本发明的目的在于提供芦笋多糖的提取方法。
本发明的另一目的在于提供上述芦笋多糖的应用。
本发明所采取的技术方案是：
芦笋多糖在制备调节肠胃不适的药物中的应用。
芦笋多糖在制备润肠通便的药物中的应用。
芦笋多糖在制备预治便秘的药物中的应用。
芦笋多糖在制备缓解睡眠功能障碍的药物中的应用。
芦笋多糖在制备安神药物中的应用。
芦笋多糖在制备抗惊厥的药物中的应用。
芦笋多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)剪切：新鲜或干燥的芦笋洗净，切成小块；
2)水提：将剪切好的芦笋进行水提，分别收集提取液和残渣。
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至a％，静置，离心，收集沉淀，即得粗多糖Pa；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至b％，按同样方法即得粗多糖Pb；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至c％，即得粗多糖Pc；其中10≤a＜b＜c＜100；
4)碱提：将水提后残渣浸泡于0.1～1M NaOH溶液中，静置1～4h，上清液用HCl进行中和，使上清液的pH为6～8，离心取上清，浓缩，加入乙醇调浓度至50％～90％，静置，离心，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB；
5)纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得芦笋多糖。
进一步的，步骤2)中所述水提的具体操作为用0.5～15倍体积的60～100℃热水对芦笋进行提取，提取时间1～10h。
进一步的，步骤3)中所有所述浓缩为30～70℃减压浓缩，所有所述静置的时间为5～28h。
进一步的，步骤3)中10≤a＜60，60＜b＜80，80＜c＜100。
本发明的有益效果是：
1)本发明发现了芦笋多糖具有预防和治疗便秘、睡眠功能障碍及抗惊厥的作用，并且筛选出了含量高、活性强的芦笋多糖组分，为芦笋多糖在医药等领域的应用提供依据。
2)与传统水煮法提取多糖相比，本发明采用水提醇沉法，乙醇浓度由低到高进行分级醇沉，对芦笋多糖进行初步分离，同时高浓度乙醇能将极性大、水溶性好的多糖与极性小、水溶性差的多糖分离。本制备工艺简单，操作方便，且可以大规模生产。
附图说明
图1为芦笋多糖润肠通便药理实验结果；A为小鼠首排黑便时间的检测结果，B为小鼠湿便总重的检测结果；图中Pa-1、Pb-1、Pc-1、PB-1是指Pa、Pb、Pc、PB的给药剂量均为200mg/kg；Pa-2、Pb-2、Pc-2、PB-2是指Pa、Pb、Pc、PB的给药剂量均为400mg/kg；
图2为芦笋多糖镇静安神、治疗失眠药理实验结果；A为小鼠入睡潜伏期长短的检测结果，B为小鼠睡眠时间长短的检测结果；图中Pa-1、Pb-1、Pc-1、PB-1是指Pa、Pb、Pc、PB的给药剂量均为200mg/kg；Pa-2、Pb-2、Pc-2、PB-2是指Pa、Pb、Pc、PB的给药剂量均为400mg/kg；
图3为芦笋多糖抗惊厥药理实验结果；A为小鼠惊厥延迟时间长短的检测结果，B为小鼠死亡潜伏期长短的检测结果；C为小鼠60分钟内存活的只数。
具体实施方式
芦笋多糖在制备调节肠胃不适的药物中的应用。
芦笋多糖在制备润肠通便的药物中的应用。
芦笋多糖在制备预治便秘的药物中的应用。
芦笋多糖在制备缓解睡眠功能障碍的药物中的应用。
芦笋多糖在制备安神药物中的应用。
芦笋多糖在制备抗惊厥的药物中的应用。
芦笋多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)剪切：新鲜或干燥的芦笋洗净，切成小块；
2)水提：将剪切好的芦笋进行水提，分别收集提取液和残渣。
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至a％，静置，离心，收集沉淀，即得粗多糖Pa；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至b％，按同样方法即得粗多糖Pb；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至c％，即得粗多糖Pc；其中10≤a＜b＜c＜100；
4)碱提：将水提后残渣浸泡于0.1～1M NaOH溶液中，静置1～4h，上清液用HCl进行中和，使上清液的pH为6～8，离心取上清，浓缩，加入乙醇调浓度至50％～90％，静置，离心，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB；
5)纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得芦笋多糖。
优选的，步骤1)中所述小块为0.3～0.6cm3的小块。
优选的，步骤2)中所述水提的具体操作为用0.5～15倍体积的60～100℃热水对芦笋进行提取，提取时间1～10h。
优选的，步骤3)中所有所述浓缩为30～70℃减压浓缩，所有所述静置的时间为5～28h。
优选的，步骤3)中10≤a＜60，60＜b＜80，80＜c＜100。
优选的，步骤4)中NaOH溶液体积用量为残渣体积的1～20倍。
优选的，步骤5)中所述纯化具体操作为利用Sevag法分别对粗多糖Pa、Pb、Pc、AB除蛋白，除蛋白后再经透析袋进行透析、冻干。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1芦笋粗多糖的制备方法
1)剪切：将新鲜或干燥芦笋茎洗净，切成0.5cm3左右的小块。
2)水提：将切好的芦笋用1.5倍量热水(60～100℃)提取，提取时间3h，合并提取液，残渣晾干。
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至50％，室温静置24h后，离心，收集沉淀，得粗多糖Pa；收集上清液于50℃减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为70％，室温静置28h后，离心，收集沉淀，得粗多糖Pb，重复按上述同样的操作(除了乙醇体积浓度为90％，其他操作均同上)，得粗多糖Pc。
4)碱提：将水提后残渣浸没于1倍体积量的0.3M NaOH溶液中，室温放置3h，上清液用0.5M HCl进行中和，使其pH为6～8，取上清液进行离心，取上清液并浓缩，然后加入乙醇使乙醇体积浓度为75％，静置24h后离心，收集沉淀，得碱提粗多糖PB。
5)纯化：利用Sevag法对分别对各组分粗多糖Pa、Pb、Pc和AB进行除蛋白，除蛋白后粗多糖用透析袋进行透析、冻干，即得芦笋多糖。
实施例2芦笋多糖润肠通便活性研究
方法：取20～25g的ICR雄性小鼠，SPF级(由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供)，按体重对等原则随机分组。
实验开始前24小时小鼠禁食不禁水。实验分共10个组，包括空白对照组(灌胃生理盐水)，阳性对照组(新斯的明)及芦笋多糖样品8个组，样品组分别灌胃给予芦笋多糖Pa(200mg/kg)、Pa(400mg/kg)、Pb(200mg/kg)、Pb(400mg/kg)、Pc(200mg/kg)、Pc(400mg/kg)、PB(200mg/kg)、PB(400mg/kg)，给药体积为0.1mL/10g，阳性对照组为皮下注射新斯的明(0.1mL/10g)。所有组分别给药30min后，以10％的黑墨汁灌胃，随后将每只小鼠单独放置在有干净滤纸的笼子中。观察记录黑色粪便首次出现的时间以及在黑墨汁灌胃后4小时内粪便总重量。
结果：首排黑便时间的检测结果如图1-A所示，从中可以看出，芦笋多糖PB低剂量组明显降低了小鼠首排黑便时间，与阳性对照组首排黑便时间相近，表现出润肠通便活性。
图1-B为小鼠湿便总重的检测结果，从中可以看出，Pa、Pc高剂量组显著增加小鼠的湿便总重，效果优于阳性药，说明二者也具有显著的润肠通便活性。
上述结果说明芦笋多糖具有润肠通便作用，可用于制备润肠通便的药物，用于预防和治疗便秘、调节肠胃不适等症状。
实施例3芦笋多糖安神、缓解失眠活性研究
方法：取20～25g的ICR雄性小鼠，SPF级(由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供)，按体重对等原则随机分组。
小鼠是否入睡以翻正反射(Right reflex)消失为指标。经实验测试，戊巴比妥钠阈下剂量(即使小鼠100％不入睡的最大剂量)为25mg/kg。实验分10个组，包括空白对照组(生理盐水)，阳性对照组(地西泮，2mg/kg)，芦笋多糖样品8个组：Pa(200mg/kg)、Pa(400mg/kg)、Pb(200mg/kg)、Pb(400mg/kg)、Pc(200mg/kg)、Pc(400mg/kg)、PB(200mg/kg)、PB(400mg/kg)。所有组分别给药(0.2mL/10g)30min后腹腔注射戊巴比妥钠25mg/kg(0.1mL/10g)。以腹腔注射戊巴比妥钠到翻正反射消失之间的时间为入睡潜伏期，小鼠翻正反射消失30秒为睡着的时间点，翻正反射消失到翻正反射恢复的时间为睡眠时间。
结果：图2-A考察样品与戊巴比妥钠协同作用进而影响小鼠入睡潜伏期长短的检测结果，从中可以看出，Pc低剂量组能使小鼠的入睡潜伏期显著缩短，其效果甚至优于阳性对照；同时，与空白组相比，该样品显著延长小鼠睡眠时间至28.3±4.8min(图2-B)。此外，实验表明Pa、Pb各剂量组均缩短了小鼠的入睡潜伏期。
图2-B为考察样品与戊巴比妥钠协同作用进而影响小鼠睡眠时间长短的检测结果，从中可以看出Pb高剂量组、Pc低剂量组分别与戊巴比妥钠产生了协同作用，使小鼠睡眠时间分别延长至24.7±5.4min、28.3±4.8min，表现出促进小鼠睡眠的的作用。
上述结果说明，芦笋多糖具有镇静安神、治疗失眠、促进睡眠的作用，可用于制备缓解睡眠功能障碍的药物。
实施例4芦笋多糖抗惊厥活性研究
方法：取20-25g的ICR雄性小鼠，SPF级(由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供)，按体重对等原则随机分组。
实验分6个组，包括空白对照组(生理盐水)，阳性对照(地西泮，2mg/kg)及芦笋多糖样品4个组：Pa(400mg/kg)、Pb(400mg/kg)、Pc(400mg/kg)、PB(400mg/kg)。所有组分别灌胃给药30min后，腹腔注射尼可刹米(400mg/kg，0.1mL/10g)，观察60min内小鼠癫痫发作和阵挛性惊厥情况。注射尼可刹米到发生惊厥为惊厥延迟时间，注射尼可刹米到死亡之间的时间为死亡潜伏期，小鼠未发生惊厥视为样品具有预防作用。
结果：图3-A为小鼠惊厥延迟时间长短的检测结果，从中可以看出，Pb、Pc组的小鼠惊厥延迟时间长于阳性对照组。
图3-B为小鼠60分钟内存活的只数，从中可以看出Pa、Pb组都有1只小鼠未死亡，PB组有3只存活的小鼠，说明与空白组对比，样品可提高惊厥小鼠的存活率，对于惊厥小鼠具有一定的保护作用。在本实验中芦笋多糖能显著降低尼可刹米诱发小鼠惊厥的死亡率。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.芦笋多糖在制备缓解睡眠功能障碍的药物中的应用，所述芦笋多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)剪切：新鲜或干燥的芦笋洗净，切成小块；
2)水提：将剪切好的芦笋进行水提，分别收集提取液和残渣；
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至a％，静置，离心，收集沉淀，即得粗多糖Pa；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至b％，按同样方法即得粗多糖Pb；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至c％，即得粗多糖Pc；其中10≤a＜b＜c＜100；
4)碱提：将水提后残渣浸泡于0.1～1M NaOH溶液中，静置1～4h，上清液用HCl进行中和，使上清液的pH为6～8，离心取上清，浓缩，加入乙醇调浓度至50％～90％，静置，离心，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB；
5)纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得芦笋多糖。
2.芦笋多糖在制备安神药物中的应用，所述芦笋多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)剪切：新鲜或干燥的芦笋洗净，切成小块；
2)水提：将剪切好的芦笋进行水提，分别收集提取液和残渣；
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至a％，静置，离心，收集沉淀，即得粗多糖Pa；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至b％，按同样方法即得粗多糖Pb；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至c％，即得粗多糖Pc；其中10≤a＜b＜c＜100；
4)碱提：将水提后残渣浸泡于0.1～1M NaOH溶液中，静置1～4h，上清液用HCl进行中和，使上清液的pH为6～8，离心取上清，浓缩，加入乙醇调浓度至50％～90％，静置，离心，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB；
5)纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得芦笋多糖。
3.芦笋多糖在制备抗惊厥的药物中的应用，所述芦笋多糖的提取方法，包括以下步骤：
1)剪切：新鲜或干燥的芦笋洗净，切成小块；
2)水提：将剪切好的芦笋进行水提，分别收集提取液和残渣；
3)分级醇沉：提取液浓缩后，加入乙醇调浓度至a％，静置，离心，收集沉淀，即得粗多糖Pa；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至b％，按同样方法即得粗多糖Pb；收集上清液浓缩后，加入乙醇调浓度至c％，即得粗多糖Pc；其中10≤a＜b＜c＜100；
4)碱提：将水提后残渣浸泡于0.1～1M NaOH溶液中，静置1～4h，上清液用HCl进行中和，使上清液的pH为6～8，离心取上清，浓缩，加入乙醇调浓度至50％～90％，静置，离心，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB；
5)纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得芦笋多糖。
4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，步骤2)中所述水提的具体操作为用0.5～15倍体积的60～100℃热水对芦笋进行提取，提取时间1～10h。
5.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，步骤3)中所有所述浓缩为30～70℃减压浓缩，所有所述静置的时间为5～28h。
6.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，步骤3)中10≤a＜60，60＜b＜80，80＜c＜100。
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