CN110526998A - 一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明主要涉及中药成分提取技术领域，公开了一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，包括：预处理、一次提取、二次提取、加热浓缩、醇沉、一次除蛋白、二次除蛋白、干燥；本发明提供的从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，方法简单，便于操作，使玉竹粘多糖的纯属高，不残留化学试剂，更加安全健康；将新鲜玉竹使用超声清洗和冷冻干燥，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，并且新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料。

Description

一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法

技术领域

本发明主要涉及中药成分提取技术领域，尤其涉及一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法。

背景技术

随着人们保健和健康意识的不断增强，中药越来越受到青睐，因为中药的毒副作用明显小于西药，但是中药煎煮比较麻烦，因此中成药就逐渐产生，中成药是以中草药为原料，经制剂加工制成各种不同剂型的中药制品，包括丸、散、膏、丹等各种剂型。

玉竹为百合科多年生草本植物，根茎横走，肉质黄白色，密生多数须根。玉竹不仅具有观赏价值，更具有很大的药用、养生和食用价值，根状茎含玉竹粘多糖，由D-果糖，D-甘露糖，D-葡萄糖及半乳糖醛酸所组成，玉竹的益处有很多，对女性而言，玉竹是不可多得的好东西，常喝玉竹茶，能够减去身上多余的脂肪，不仅如此，玉竹配糖体对离体蛙心还具有强心作用，玉竹浸膏腹腔注射，可增强烧伤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用，提高血清溶血素抗体水平，改善脾淋巴细胞对ConA的增殖反应。并且玉竹补而不腻，不寒不燥，故有“清热润肺，养阴熄风，补益五脏，滋养气血，平补而润，兼除风热”之功效，作用于脾胃，故久服不伤脾胃。不仅如此，玉竹还有抗衰老及润肤美容的作用。

现有专利文件CN105596727A公开了一种含玉竹粘多糖组合物口腔凝胶制剂及其制作，具体公开了将玉竹、薄荷油及蜂胶交互组合，制备口腔凝胶制剂，其中玉竹的处理方法是先将玉竹进行超微粉碎，然后加入乙醇溶液进行加热回流，过滤后再向残渣中加水进行加热回流，再使用脱脂棉进行过滤，再将提取液进行合并，专利文件公开的方法简单，但是得到的玉竹提取液有效成分含量较低，不能对玉竹进行充分利用，提高了口腔凝胶制剂的生产成本。

发明内容

为了弥补已有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法。

一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，包括以下步骤：

（1）预处理：将新鲜的玉竹根茎置于水中，新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料，于30~32℃、24~26kHz超声清洗8~10min，取出，用水冲洗干净，冷冻干燥至含水量为0~8%，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，粉碎至150~200目，得玉竹粉；

（2）一次提取：向玉竹粉中加入玉竹粉重量100~120倍量的热水，于25~27kHz保温超声120~150min，再于8000~10000r/min离心10~15min，促进玉竹粘多糖融入水中，缩短提取时间，得一次提取液和一次提取渣；

（3）二次提取：向一次提取渣中加入一次提取渣重量3~4倍量的冷水，置于-38~-40℃冷冻10~12h，快速结冰利于破坏玉竹粉的细胞结构，促进玉竹粘多糖的浸出，再加入冷水逐渐进行加热和超声，使残留的玉竹粘多糖缓慢渗出，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料和生产成本，取出，加热至完全溶解，再加入一次提取渣重量70~90倍量的水，逐渐加热至70~75℃，于25~27kHz保温超声100~120min，再于8000~10000r/min离心10~15min，得二次提取液和二次提取渣；

（4）加热浓缩：将一次提取液和二次提取液合并，混合均匀，置于旋转蒸发仪中，旋转蒸发至体积为原来的1/8~1/10，得浓缩液；

（5）醇沉：向浓缩液中加入无水乙醇，调节至乙醇的体积分数为70~75%，搅拌均匀，于2~4℃静置24~36h，使浓缩液中的玉竹粘多糖进行充分沉淀而分离，能够减少乙醇用量，节约成本，同时能够避免使用有毒试剂，更加安全健康，过滤，保留沉淀，冷冻干燥至无水分，加水充分溶解，经超微滤膜进行过滤，得玉竹粘多糖粗提液；

（6）一次除蛋白：向玉竹粘多糖粗提液中加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，使木瓜蛋白酶的浓度为0.12~0.16%（m/v），调节pH为6~7，于55~57℃保温搅拌酶解160~180min，分解玉竹粘多糖粗提液中的蛋白质，简单方便，能够有效去除玉竹粘多糖中的蛋白质，避免对玉竹粘多糖产生破坏，提高多糖保留率，再置于沸水浴中搅拌加热6~8min，过滤，弃沉淀，得一次除蛋白液；

（7）二次除蛋白：再向一次除蛋白液中加入一次除蛋白液体积25~27%的氯仿-正丁醇试剂，调节至pH为3~4，于40~50r/min搅拌30~40min，于5000~6000r/min离心2~3min，能够去除粘多糖中残留的木瓜蛋白酶，明显减少了氯仿-正丁醇试剂的使用量和沉淀次数，更加简单方便，取水相，得二次除蛋白液；

（8）干燥：将二次除蛋白液的pH调节为6~7，于-45~-43℃冷冻干燥至无水分，粉碎，得玉竹粘多糖。

所述步骤（1）的玉竹，为生长3~4年的玉竹。

所述步骤（1）的冷冻干燥，温度为-40~-42℃。

所述步骤（2）的热水，将纯水加热至80~84℃。

所述步骤（4）的旋转蒸发，真空度为-0.01~0.02MPa，转速为90~100r/min，温度为65~67℃。

所述步骤（5）的超微滤膜，孔径为0.5μm。

所述步骤（7）的氯仿-正丁醇试剂，氯仿:正丁醇=5:1。

所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法制备得到的玉竹粘多糖。

本发明的优点是：本发明提供的从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，方法简单，便于操作，使玉竹粘多糖的纯属高，不残留化学试剂，更加安全健康；将新鲜玉竹使用超声清洗和冷冻干燥，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，并且新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料；将玉竹粉碎后加入热水进行一次提取，并进行高温超声提取，促进玉竹粘多糖融入水中，缩短提取时间；一次提取后将一次提取渣进行冷冻，快速结冰利于破坏玉竹粉的细胞结构，促进玉竹粘多糖的浸出，再加入冷水逐渐进行加热和超声，使残留的玉竹粘多糖缓慢渗出，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料和生产成本；将提取液合并后进行旋转蒸发，对提取液进行浓缩，然后加入无水乙醇，充分搅拌后进行低温静置，使浓缩液中的玉竹粘多糖进行充分沉淀而分离，能够减少乙醇用量，节约成本，同时能够避免使用有毒试剂，更加安全健康；将沉淀加水复溶后再加入少量木瓜蛋白酶进行酶解，分解玉竹粘多糖粗提液中的蛋白质，简单方便，能够有效去除玉竹粘多糖中的蛋白质，避免对玉竹粘多糖产生破坏，提高多糖保留率；再加入氯仿-正丁醇试剂，调节至酸性，并进行充分搅拌和沉淀，能够去除粘多糖中残留的木瓜蛋白酶，明显减少了氯仿-正丁醇试剂的使用量和沉淀次数，更加简单方便，使处理过程更加安全健康。

具体实施方式

下面用具体实施例说明本发明。

实施例1

一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，包括以下步骤：

（1）预处理：将生长3年的新鲜玉竹根茎置于水中，新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料，于30℃、24kHz超声清洗8min，取出，用水冲洗干净，于-40℃冷冻干燥至含水量为0~8%，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，粉碎至150~200目，得玉竹粉；

（2）一次提取：向玉竹粉中加入玉竹粉重量100倍量的热水，所述的热水，将纯水加热至80~84℃，于25kHz保温超声120min，再于8000r/min离心10min，促进玉竹粘多糖融入水中，缩短提取时间，得一次提取液和一次提取渣；

（3）二次提取：向一次提取渣中加入一次提取渣重量3倍量的冷水，置于-38℃冷冻10h，快速结冰利于破坏玉竹粉的细胞结构，促进玉竹粘多糖的浸出，再加入冷水逐渐进行加热和超声，使残留的玉竹粘多糖缓慢渗出，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料和生产成本，取出，加热至完全溶解，再加入一次提取渣重量70倍量的水，逐渐加热至70~75℃，于25kHz保温超声100min，再于8000r/min离心10min，得二次提取液和二次提取渣；

（4）加热浓缩：将一次提取液和二次提取液合并，混合均匀，置于旋转蒸发仪中，所述的旋转蒸发，真空度为-0.01~0.02MPa，转速为90r/min，温度为65℃，旋转蒸发至体积为原来的1/8~1/10，得浓缩液；

（5）醇沉：向浓缩液中加入无水乙醇，调节至乙醇的体积分数为70%，搅拌均匀，于2℃静置24h，使浓缩液中的玉竹粘多糖进行充分沉淀而分离，能够减少乙醇用量，节约成本，同时能够避免使用有毒试剂，更加安全健康，过滤，保留沉淀，冷冻干燥至无水分，加水充分溶解，经孔径为0.5μm的超微滤膜进行过滤，得玉竹粘多糖粗提液；

（6）一次除蛋白：向玉竹粘多糖粗提液中加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，使木瓜蛋白酶的浓度为0.12%（m/v），调节pH为6~7，于55℃保温搅拌酶解160min，分解玉竹粘多糖粗提液中的蛋白质，简单方便，能够有效去除玉竹粘多糖中的蛋白质，避免对玉竹粘多糖产生破坏，提高多糖保留率，再置于沸水浴中搅拌加热6min，过滤，弃沉淀，得一次除蛋白液；

（7）二次除蛋白：再向一次除蛋白液中加入一次除蛋白液体积25%的氯仿-正丁醇试剂，所述的氯仿-正丁醇试剂，氯仿:正丁醇=5:1，调节至pH为3~4，于40r/min搅拌30min，于5000r/min离心2min，能够去除粘多糖中残留的木瓜蛋白酶，明显减少了氯仿-正丁醇试剂的使用量和沉淀次数，更加简单方便，取水相，得二次除蛋白液；

（8）干燥：将二次除蛋白液的pH调节为6~7，于-45℃冷冻干燥至无水分，粉碎，得玉竹粘多糖。

所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法制备得到的玉竹粘多糖。

实施例2

一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，包括以下步骤：

（1）预处理：将生长4年的新鲜玉竹根茎置于水中，新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料，于31℃、25kHz超声清洗9min，取出，用水冲洗干净，于-41℃冷冻干燥至含水量为0~8%，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，粉碎至150~200目，得玉竹粉；

（2）一次提取：向玉竹粉中加入玉竹粉重量110倍量的热水，所述的热水，将纯水加热至80~84℃，于26kHz保温超声135min，再于9000r/min离心10~153min，促进玉竹粘多糖融入水中，缩短提取时间，得一次提取液和一次提取渣；

（3）二次提取：向一次提取渣中加入一次提取渣重量4倍量的冷水，置于-39℃冷冻11h，快速结冰利于破坏玉竹粉的细胞结构，促进玉竹粘多糖的浸出，再加入冷水逐渐进行加热和超声，使残留的玉竹粘多糖缓慢渗出，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料和生产成本，取出，加热至完全溶解，再加入一次提取渣重量80倍量的水，逐渐加热至70~75℃，于26kHz保温超声110min，再于9000r/min离心13min，得二次提取液和二次提取渣；

（4）加热浓缩：将一次提取液和二次提取液合并，混合均匀，置于旋转蒸发仪中，所述的旋转蒸发，真空度为-0.01~0.02MPa，转速为95r/min，温度为66℃，旋转蒸发至体积为原来的1/8~1/10，得浓缩液；

（5）醇沉：向浓缩液中加入无水乙醇，调节至乙醇的体积分数为73%，搅拌均匀，于3℃静置30h，使浓缩液中的玉竹粘多糖进行充分沉淀而分离，能够减少乙醇用量，节约成本，同时能够避免使用有毒试剂，更加安全健康，过滤，保留沉淀，冷冻干燥至无水分，加水充分溶解，经孔径为0.5μm的超微滤膜进行过滤，得玉竹粘多糖粗提液；

（6）一次除蛋白：向玉竹粘多糖粗提液中加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，使木瓜蛋白酶的浓度为0.14%（m/v），调节pH为6~7，于56℃保温搅拌酶解170min，分解玉竹粘多糖粗提液中的蛋白质，简单方便，能够有效去除玉竹粘多糖中的蛋白质，避免对玉竹粘多糖产生破坏，提高多糖保留率，再置于沸水浴中搅拌加热7min，过滤，弃沉淀，得一次除蛋白液；

（7）二次除蛋白：再向一次除蛋白液中加入一次除蛋白液体积26%的氯仿-正丁醇试剂，所述的氯仿-正丁醇试剂，氯仿:正丁醇=5:1，调节至pH为3~4，于45r/min搅拌35min，于4500r/min离心3min，能够去除粘多糖中残留的木瓜蛋白酶，明显减少了氯仿-正丁醇试剂的使用量和沉淀次数，更加简单方便，取水相，得二次除蛋白液；

（8）干燥：将二次除蛋白液的pH调节为6~7，于-44℃冷冻干燥至无水分，粉碎，得玉竹粘多糖。

所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法制备得到的玉竹粘多糖。

实施例3

一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，包括以下步骤：

（1）预处理：将生长4年的新鲜玉竹根茎置于水中，新鲜玉竹未经过任何处理，能够避免玉竹粘多糖流失，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料，于32℃、26kHz超声清洗10min，取出，用水冲洗干净，于-42℃冷冻干燥至含水量为0~8%，能够快速去除玉竹表面的杂质，破坏玉竹细胞，促进玉竹粘多糖的提取，粉碎至200目，得玉竹粉；

（2）一次提取：向玉竹粉中加入玉竹粉重量120倍量的热水，所述的热水，将纯水加热至80~84℃，于27kHz保温超声150min，再于10000r/min离心15min，促进玉竹粘多糖融入水中，缩短提取时间，得一次提取液和一次提取渣；

（3）二次提取：向一次提取渣中加入一次提取渣重量4倍量的冷水，置于-40℃冷冻12h，快速结冰利于破坏玉竹粉的细胞结构，促进玉竹粘多糖的浸出，再加入冷水逐渐进行加热和超声，使残留的玉竹粘多糖缓慢渗出，提高玉竹粘多糖的提取率，节约原料和生产成本，取出，加热至完全溶解，再加入一次提取渣重量90倍量的水，逐渐加热至70~75℃，于27kHz保温超声120min，再于10000r/min离心15min，得二次提取液和二次提取渣；

（4）加热浓缩：将一次提取液和二次提取液合并，混合均匀，置于旋转蒸发仪中，所述的旋转蒸发，真空度为-0.01~0.02MPa，转速为100r/min，温度为67℃，旋转蒸发至体积为原来的1/8~1/10，得浓缩液；

（5）醇沉：向浓缩液中加入无水乙醇，调节至乙醇的体积分数为75%，搅拌均匀，于4℃静置36h，使浓缩液中的玉竹粘多糖进行充分沉淀而分离，能够减少乙醇用量，节约成本，同时能够避免使用有毒试剂，更加安全健康，过滤，保留沉淀，冷冻干燥至无水分，加水充分溶解，经孔径为0.5μm的超微滤膜进行过滤，得玉竹粘多糖粗提液；

（6）一次除蛋白：向玉竹粘多糖粗提液中加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，使木瓜蛋白酶的浓度为0.16%（m/v），调节pH为6~7，于57℃保温搅拌酶解180min，分解玉竹粘多糖粗提液中的蛋白质，简单方便，能够有效去除玉竹粘多糖中的蛋白质，避免对玉竹粘多糖产生破坏，提高多糖保留率，再置于沸水浴中搅拌加热8min，过滤，弃沉淀，得一次除蛋白液；

（7）二次除蛋白：再向一次除蛋白液中加入一次除蛋白液体积27%的氯仿-正丁醇试剂，所述的氯仿-正丁醇试剂，氯仿:正丁醇=5:1，调节至pH为3~4，于50r/min搅拌40min，于6000r/min离心3min，能够去除粘多糖中残留的木瓜蛋白酶，明显减少了氯仿-正丁醇试剂的使用量和沉淀次数，更加简单方便，取水相，得二次除蛋白液；

（8）干燥：将二次除蛋白液的pH调节为6~7，于-43℃冷冻干燥至无水分，粉碎，得玉竹粘多糖。

所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法制备得到的玉竹粘多糖。

对比例1

步骤（1）中的玉竹为5年生的玉竹，其余方法，同实施例1。

对比例2

步骤（1）中为炮制完成的干燥中药玉竹，其余方法，同实施例1。

对比例3

去除步骤（3）中的冷冻，其余方法，同实施例1。

对比例4

去除步骤（6），步骤（7）操作2次，其余方法，同实施例1。

对比例5

去除步骤（7）中的调节pH，其余方法，同实施例1。

对比例6

现有专利文件CN105596727A公开了一种含玉竹粘多糖组合物口腔凝胶制剂及其制作。

实施例和对比例玉竹粘多糖的提取效果：

随机选择4年生的新鲜江北玉竹根茎，分别按照实施例2和对比例1~5的方法提取玉竹粘多糖，并使用苯酚硫酸法测玉竹粘多糖的质量，回归方程为y=7.5211x-0.0069，R²=0.9994，计算玉竹中粘多糖含量，粘多糖含量(mg/g)=除蛋白后样品中的粘多糖质量/干燥玉竹样品质量；计算粘多糖保留率，粘多糖保留率(%)=除蛋白前样品中的粘多糖质量/除蛋白后样品中的粘多糖质量×100%；使用考马斯亮蓝法测蛋白质的质量，回归方程为：y=0.0064x+0.0063，R²=0.9991，分别测除蛋白前样品中的蛋白质质量和除蛋白后样品中的蛋白质质量，计算蛋白清除率，蛋白清除率(%)=除蛋白前样品中的蛋白质质量/除蛋白后样品中的蛋白质质量×100%，每个试验重复3次，结果取平均值，实施例和对比例玉竹粘多糖的提取效果见表1。

表1：实施例和对比例玉竹粘多糖的提取效果

注：“—”表示无。

从表1的结果表明，实施例的从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，提取得到的玉竹粘多糖明显较对比例多，并且除蛋白后粘多糖保留率和蛋白清除率的效果都明显优于对比例，说明本发明提供的从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法具有很好的提取效果。

Claims (7)

1.一种从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）预处理：将新鲜的玉竹根茎置于水中，于30~32℃、24~26kHz超声清洗8~10min，取出，用水冲洗干净，冷冻干燥至含水量为0~8%，粉碎至150~200目，得玉竹粉；

（2）一次提取：向玉竹粉中加入玉竹粉重量100~120倍量的热水，于25~27kHz保温超声120~150min，再于8000~10000r/min离心10~15min，得一次提取液和一次提取渣；

（3）二次提取：向一次提取渣中加入一次提取渣重量3~4倍量的冷水，置于-38~-40℃冷冻10~12h，取出，加热至完全溶解，再加入一次提取渣重量70~90倍量的水，逐渐加热至70~75℃，于25~27kHz保温超声100~120min，再于8000~10000r/min离心10~15min，得二次提取液和二次提取渣；

（4）加热浓缩：将一次提取液和二次提取液合并，混合均匀，置于旋转蒸发仪中，旋转蒸发至体积为原来的1/8~1/10，得浓缩液；

（5）醇沉：向浓缩液中加入无水乙醇，调节至乙醇的体积分数为70~75%，搅拌均匀，于2~4℃静置24~36h，过滤，保留沉淀，冷冻干燥至无水分，加水充分溶解，经超微滤膜进行过滤，得玉竹粘多糖粗提液；

（6）一次除蛋白：向玉竹粘多糖粗提液中加入木瓜蛋白酶，搅拌均匀，使木瓜蛋白酶的浓度为0.12~0.16%（m/v），调节pH为6~7，于55~57℃保温搅拌酶解160~180min，再置于沸水浴中搅拌加热6~8min，过滤，弃沉淀，得一次除蛋白液；

（7）二次除蛋白：再向一次除蛋白液中加入一次除蛋白液体积25~27%的氯仿-正丁醇试剂，调节至pH为3~4，于40~50r/min搅拌30~40min，于5000~6000r/min离心2~3min，取水相，得二次除蛋白液；

（8）干燥：将二次除蛋白液的pH调节为6~7，于-45~-43℃冷冻干燥至无水分，粉碎，得玉竹粘多糖。

2.根据权利要求1所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）的冷冻干燥，温度为-40~-42℃。

3.根据权利要求1所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）的热水，将纯水加热至80~84℃。

4.根据权利要求1所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，所述步骤（4）的旋转蒸发，真空度为-0.01~0.02MPa，转速为90~100r/min，温度为65~67℃。

5.根据权利要求1所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，所述步骤（5）的超微滤膜，孔径为0.5μm。

6.根据权利要求1所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法，其特征在于，所述步骤（7）的氯仿-正丁醇试剂，氯仿:正丁醇=5:1。

7.根据权利要求1~6任一项所述从中药玉竹中提取玉竹粘多糖的方法制备得到的玉竹粘多糖。