CN105911276A - 一种七联金标检测卡及其的制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种七联金标检测卡,本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种基于酵母重组表达自身抗原的新型自身抗体七联金标检测卡。为能迅速的给医生提供综合判断依据，本发明提供一种金标检测盒，所述的检测盒包括有上壳体和下壳体，所述的下壳体内设有检测单元，所述的上壳体上设有观测窗；所述的检测单元包括有硝酸纤维素膜，设于硝酸纤维素膜上层前端的包被的金标垫，液体吸收垫，样品垫，以及检测带。本发明的有益效果在于，通过对血清或血浆中的七种自身抗体的联合检测可提高系统性红斑狼疮、干燥综合症、混合性结缔组织病、肌炎/皮肌炎诊断的敏感性，更有利于全面分析病情所处的阶段，对病情的分型、追踪和预后判定有重要的意义。

Description

一种七联金标检测卡及其的制备方法
技术领域
本发明涉及医学技术领域，具体涉及一种基于酵母重组表达自身抗原的新型自身抗体七联金标检测卡。
背景技术
自身免疫性疾病是继心血管疾病和癌症后排位第三的最为常见的疾病，其总体发病率占世界人口的3%～5%，并且还在呈上升趋势，而且自身免疫性疾病范围广，包括SLE（系统性红斑狼疮）、SS(干燥综合症)、混合性结缔组织病(MCTD)、多发性肌炎/皮肌炎抗体(PM/DM)等，各种临床症状存在着部分交迭，难以确立明确的判断标准。
抗Sm抗体对SLE的诊断具有较高特异性，是目前公认的SLE的血清标志抗体, SmD1、SmB'多肽是最常见的抗Sm特异性自身免疫应答标靶，有利于SLE的早期诊断。抗SSA抗体又称抗Ro抗体(ant-Roantibodies)，抗干燥综合症抗原A抗体，抗SSA抗体靶抗原有52kD和60kD 两种核糖核酸蛋白。抗SSB抗体又称抗La抗体(anti-La antibodies)，抗干燥综合症抗原B抗体，抗SSA抗体和抗SSB抗体常常同时出现，同抗SSA抗体一样，抗SSB抗体亦可引起新生儿狼疮综合症(NLE)，在其他自身免疫性疾病中如出现抗SSB抗体，患者常伴有继发性干燥综合症。抗U1-snRNP抗体见于在混合性结缔组织病(MCTD) 患者，抗U1-snRNP抗体也可在多种风湿病中出现。抗Jo-1抗体为多发性肌炎/皮肌炎抗体(PM/DM) 的血清标志性抗体，且多数患者伴有间质性肺疾病( ILD)和多关节炎或关节痛等，抗Jo-1抗体为多发性肌炎/皮肌炎抗体(PM/DM) 的血清标志性抗体。
目前，国内外用于自身抗体检测采用的方法原理主要有间接免疫荧光法、酶联免疫法、化学发光法和胶体金法。间接免疫荧光需要技术熟练的技术人员进行操作，且耗时不能批量处理，化学发光需要专用分析仪，且价格昂贵，技术尚不够成熟，酶联免疫法大多采用96微孔板检测，步骤繁琐耗时，胶体金法操作简单、使用方便、检测速度快，同时由于各种临床症状存在着部分交迭，而各自单独诊断费用高昂，耗时大，难以给医生提供综合判断依据。
发明内容
为解决上述提到的问题，因此本发明使用七联金标卡，所述的七联金标卡能同时检测七种自身抗体，即抗SmD1抗体、抗SmB'抗体、抗SSA52kD抗体、抗SSA60kD抗体、抗SSB抗体、抗U1-snRNP抗体、抗Jo-1抗体，不仅可以单独检测出系统性红斑狼疮、干燥综合症、混合性结缔组织病、肌炎/皮肌炎诊断的敏感性，综合参考更有利于提高确诊率。本发明提供的技术方案如下：
一种七联金标检测盒，所述的检测盒包括有上壳体和下壳体，所述的下壳体内设有两个以上的检测单元，所述的检测单元并列排设下壳体内。所述的上壳体上设有两个以上分别与两个以上所述的检测单元配合使用的用于添加样品的样品孔和用于观测检测结果的观测窗；所述的检测单元包括有设于下壳体上隔离槽和设于隔离槽内底层的抗原包被的硝酸纤维素膜，设于硝酸纤维素膜上层前端的包被的金标垫，设于硝酸纤维素膜上层后端的液体吸收垫，设于包被的金标垫上与样品孔对应位置的样品垫，以及设于硝酸纤维素膜上层与观测窗对应的位置的对照带和一条以上的检测带。
进一步的，所述的两个以上检测单元包含有用于检测干燥综合症的干燥综合症检测单元，所述的干燥综合症检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SSA52kD抗原、SSB抗原和SSA60kD抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SSA52kD抗原包被的检测带、SSB抗原包被检测带和SSA60kD抗原包被的检测带。
进一步的，所述的两个以上检测单元包含有用于检测混合性结缔组织病的混合性结缔组织病检测单元，所述的混合性结缔组织病检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为U1-snRNP抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为U1-snRNP抗原包被的检测带。
进一步的，所述的两个以上检测单元包含有用于检测系统性红斑狼疮的系统性红斑狼疮检测单元，所述的混合性结缔组织病检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SmD1抗原和SmB'抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SmD1抗原包被的检测带和SmB'抗原包被的检测带。
进一步的，所述的两个以上检测单元包含有用于检测多发性肌炎/皮肌炎的多发性肌炎/皮肌炎检测单元，所述的多发性肌炎/皮肌炎检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为Jo-1抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为Jo-1抗原包被的检测带。
进一步的，所述的对照带为羊抗鼠IgG包被的对照带。
一种七联金标检测盒的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：
一、包被硝酸纤维素膜
1.1）配制包被液：将SmD1、SmB'、SSA52、SSA60、SSB、U1-snRNP及Jo-1抗原，以及羊抗鼠IgG分别配制成0.5mg/ml—5mg/ml的包被液；
1.2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将1.1）中配置好的包被液包被在4条硝酸纤维膜上：一条硝酸纤维膜上包含SSA52KD、SSA60KD、SSB和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜上包含U1-snRNP和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜包含SmD1、SmB'和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜上包含Jo-1和羊抗鼠IgG包被液；
1.3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜条置于37℃恒温干燥2个小时；
二、包被金标垫
2.1）标记鼠抗人IgG：制备胶体金标记的0.5mg/ml—5mg/ml鼠抗人IgG；
2.2）包被：将包被的金标垫裁成膜片，将2.1）中配制好的溶液包被在包被的金标垫上；
2.3）干燥：将包被好的包被金标垫条置于37℃恒温干燥2个小时；
三、贴合
3.1、将干燥好的样品垫、包被的金标垫、硝酸纤维素膜和液体吸收垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；
四、切割
4.1）将（三）中贴好的检测条和隔离槽配合使用的条带；
五、组装
5.1）将条带序依次装入隔离槽内，合紧上壳和下壳。
一种七联金标检测盒的使用方法，包括如下步骤：往四个加样孔中分别加入100μl待测样本，15-20分钟后从观察窗中判断结果，若检测带和对照带均显色，则表明样本中含有检测带所包被抗原的特异性抗体；若检测带不显色，仅对照带显色，则表明样本中不包含检测带所包被抗原的特异性抗体或浓度未达到可检测水平；若检测带和对照带均不显色，则表明检测无效。
本发明的有益效果在于，通过对血清或血浆中的抗SmD1抗体、抗SmB'抗体、抗SSA52抗体、抗SSA60抗体、抗SSB抗体、抗U1-snRNP抗体、抗Jo-1抗体等七种自身抗体的联合检测可提高系统性红斑狼疮、干燥综合症、混合性结缔组织病、肌炎/皮肌炎诊断的敏感性，更有利于全面分析病情所处的阶段，对病情的分型、追踪和预后判定有重要的意义。
附图说明
附图1为本发明检测卡的简单示意图；
图2为本发明的A-A向剖视图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的说明。
实施例1
请参照图1和图2，一种七联金标检测盒，所述的检测盒包括有上壳体和下壳体，所述的检测盒包括有所述的下壳体内设有4个检测单元（1、2、3、4），所述的上壳体上设有4个与所述的检测单元（1、2、3、4）配合使用的用于添加样品的样品孔7和用于观测检测结果的观测窗11；所述的检测单元（1、2、3、4）包括有设于下壳体上隔离槽5和设于隔离槽5内底层的抗原包被的硝酸纤维素膜10，设于硝酸纤维素膜10上层前端的包被的金标垫8，设于硝酸纤维素膜10上层后端的液体吸收垫9，设于包被的金标垫8上与样品孔对应位置的样品垫7，以及设于硝酸纤维素膜10上层与观测窗11对应的位置的对照带C和一条以上的检测带T。所述的4G个检测单元包含有用于检测干燥综合症的干燥综合症检测单元1，所述的干燥综合症检测单元1内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SSA52kD抗原、SSB抗原和SSA60kD抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SSA52kD抗原包被的检测带T1、SSB抗原包被检测带T2和SSA60kD抗原包被的检测带T3;用于检测混合性结缔组织病的混合性结缔组织病检测单元2，所述的混合性结缔组织病检测单元2内的抗原包被的硝酸纤维素膜为U1-snRNP抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为U1-snRNP抗原包被的检测带T4;用于检测系统性红斑狼疮的系统性红斑狼疮检测单元3，所述的混合性结缔组织病检测单元3内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SmD1抗原和SmB'抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SmD1抗原包被的检测带T5和SmB'抗原包被的检测带T6;用于检测多发性肌炎/皮肌炎的多发性肌炎/皮肌炎检测单元4，所述的多发性肌炎/皮肌炎检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为Jo-1抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为Jo-1抗原包被的检测带T7;所述的对照带为羊抗鼠IgG包被的对照带C。
实施例2
所述七联金标检测卡制备方法如下：
一、包被硝酸纤维素膜
1）配制包被液：将SmD1、SmB'、SSA52、SSA60、SSB、U1RNP及Jo-1抗原，以及羊抗鼠IgG质控配制成相应的包被浓度，分别为0.5mg/ml、1 mg/ml、1.5 mg/ml、2 mg/ml、2.5 mg/ml、3 mg/ml、3.5 mg/ml、4 mg/ml、4.5 mg/ml、5mg/ml；
2）包被抗原：根据免疫印迹点样器的大小，将硝酸纤维膜裁成膜片，通过物理吸附和共价结合的方式，将1）中配置好的点样溶液以一定的排列次序包被在膜片上，分别为包被有采用酵母重组表达的SmD1、SmB'抗原的一条样品带、包被有采用酵母重组表达的SSA52KD、SSA60KD、SSB抗原的一条样品带、包被采用酵母重组表达的有U1-snRNP的一条样品带、包被采用酵母重组表达的 Jo-1的一条样品带，共计四条硝酸纤维素膜，形成独立的检测线；
3）干燥：将包被好的膜片条放入37℃恒温干燥2个小时；
二、包被金标垫
1）标记鼠抗人IgG：制备胶体金标记的鼠抗人IgG；
2）包被：根据免疫印迹点样器的大小，将金标垫裁成膜片，通过物理吸附的方式，将1）中配制好的溶液包被在垫上；
3）干燥：将包被好的金标垫条放入37℃恒温干燥2个小时；
三、贴膜
1、将干燥好的NC膜（硝酸纤维素膜）、金标垫和样品垫、液体吸收垫按照一定顺序组合黏贴在双面粘性的PVC板的正面，如图2所示；
切割
将（三）中贴好的膜片按照独立检测线切成一定宽度的条带；
五、组装
1）将切割成单人份的小条按照次序装于金标外壳，合紧金标上盖。
实施例3
检测时，将检测卡平放于实验台上，用滴管或加样枪在四个加样孔中分别加入100μl待测样本，15-20分钟后从观察窗中判断结果，若检测带和对照带均显色，则表明样本中含有检测带所包被抗原的特异性抗体，若检测带不显色，仅对照带显色，则表明样本中不包含检测带所包被抗原的特异性抗体或浓度未达到可检测水平，若检测带和对照带均不显色，则表明检测无效。在实际的操作中，该检测卡的效果非常好，和单独检测相比，节省了大量的时间和费用，而且能给医生一个综合的评价参考。

Claims (8)

1.一种金标检测盒，所述的检测盒包括有上壳体和下壳体，其特征在于，所述的下壳体内设有两个以上的检测单元，所述的上壳体上设有两个以上分别与两个以上所述的检测单元配合使用的用于添加样品的样品孔和用于观测检测结果的观测窗；所述的检测单元包括有设于下壳体上隔离槽和设于隔离槽内底层的抗原包被的硝酸纤维素膜，设于硝酸纤维素膜上层前端的包被的金标垫，设于硝酸纤维素膜上层后端的液体吸收垫，设于包被的金标垫上与样品孔对应位置的样品垫，以及设于硝酸纤维素膜上层与观测窗对应的位置的对照带和一条以上的检测带。
2.如权利要求1所述的检测盒，其特征在于，所述的两个以上检测单元包含有用于检测干燥综合症的干燥综合症检测单元，所述的干燥综合症检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SSA52kD抗原、SSB抗原和SSA60kD抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SSA52kD抗原包被的检测带、SSB抗原包被检测带和SSA60kD抗原包被的检测带。
3.如权利要求1所述的检测盒，其特征在于，所述的两个以上检测单元包含有用于检测混合性结缔组织病的混合性结缔组织病检测单元，所述的混合性结缔组织病检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为U1-snRNP抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为U1-snRNP抗原包被的检测带。
4.如权利要求1所述的检测盒，其特征在于，所述的两个以上检测单元包含有用于检测系统性红斑狼疮的系统性红斑狼疮检测单元，所述的混合性结缔组织病检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为SmD1抗原和SmB'抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为SmD1抗原包被的检测带和SmB'抗原包被的检测带。
5.如权利要求1所述的检测盒，其特征在于，所述的两个以上检测单元包含有用于检测多发性肌炎/皮肌炎的多发性肌炎/皮肌炎检测单元，所述的多发性肌炎/皮肌炎检测单元内的抗原包被的硝酸纤维素膜为Jo-1抗原包被的硝酸纤维素膜，相应的检测带为Jo-1抗原包被的检测带。
6.如权利要求1所述的检测盒，其特征在于，所述的对照带为羊抗鼠IgG包被的对照带。
7.一种七联金标检测盒的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
一、包被硝酸纤维素膜
1.1）配制包被液：将SmD1、SmB'、SSA52、SSA60、SSB、U1-snRNP及Jo-1抗原，以及羊抗鼠IgG分别配制成0.5mg/ml—5mg/ml的包被液；
1.2）包被：将硝酸纤维膜裁成片，将1.1）中配置好的包被液包被在4条硝酸纤维膜上：一条硝酸纤维膜上包含SSA52KD、SSA60KD、SSB和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜上包含U1-snRNP和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜包含SmD1、SmB'和羊抗鼠IgG包被液，一条硝酸纤维膜上包含Jo-1和羊抗鼠IgG包被液；
1.3）干燥：将包被好的硝酸纤维膜条置于37℃恒温干燥2个小时；
二、包被金标垫
2.1）标记鼠抗人IgG：制备胶体金标记的0.5mg/ml—5mg/ml鼠抗人IgG；
2.2）包被：将包被的金标垫裁成膜片，将2.1）中配制好的溶液包被在包被的金标垫上；
2.3）干燥：将包被好的包被金标垫条置于37℃恒温干燥2个小时；
三、贴合
3.1、将干燥好的样品垫、包被的金标垫、硝酸纤维素膜和液体吸收垫按次序依次组合后黏贴在PVC板上，制成检测条；
四、切割
4.1）将（三）中贴好的检测条和隔离槽配合使用的条带；
五、组装
5.1）将条带序依次装入隔离槽内，合紧上壳和下壳。
8. 一种七联金标检测盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：往四个加样孔中分别加入100μl待测样本，15-20分钟后从观察窗中判断结果，若检测带和对照带均显色，则表明样本中含有检测带所包被抗原的特异性抗体；若检测带不显色，仅对照带显色，则表明样本中不包含检测带所包被抗原的特异性抗体或浓度未达到可检测水平；若检测带和对照带均不显色，则表明检测无效。
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CN108362674A (zh) * 2018-04-08 2018-08-03 中国人民解放军南京军区南京总医院 一种便携式血液荧光免疫分析仪
CN108362674B (zh) * 2018-04-08 2024-05-03 中国人民解放军南京军区南京总医院 一种便携式血液荧光免疫分析仪

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