CN105906539B - 莱菔素抗癌衍生化合物及其制备方法 - Google Patents

莱菔素抗癌衍生化合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及莱菔素抗癌衍生化合物，用于治疗或预防人类或哺乳动物的多种癌症与肿瘤的应用。莱菔素是中药莱菔子中提取的一种天然活性成分，与莱菔硫烷结构相近，也因此与莱菔硫烷的抗癌效果相近。但是由于其结构不稳定，无法长期储存，严重限制了其应用。本发明将其容易降解的基团保护起来，并保留了其抗癌活性，形成了全新的抗癌化合物。化学式如下：

Description

莱菔素抗癌衍生化合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种抗癌化合物，用于治疗或预防人类或哺乳动物的多种癌症与肿瘤的应用。
背景技术
肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。新生物一旦形成，便不再停止生长，他的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常组织与器官，这一点在恶性肿瘤尤其明显。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。
肿瘤的治疗方法有手术治疗、放射治疗和药物治疗(即化疗)等，其中化学治疗为目前主要的治疗手段。化学治疗能治愈一部分肿瘤患者或延长患者的生命，在肿瘤治疗中占有越来越重要地位。但是，传统的抗肿瘤药物对癌症细胞的杀灭率较低或需要较高的浓度，因此产生了许多严重的毒副反应。随着生活水平的提高，人们对于癌症的治疗预期显著提高，希望在治愈癌症的时候身体健康不受到很大的影响，因此，发现新的、高效抗肿瘤化合物显得尤为迫切。
莱菔素是中药莱菔子中提取的一种天然活性成分，与莱菔硫烷结构相近，也因此与莱菔硫烷的抗癌效果相近。但是由于其结构不稳定，无法长期储存，严重限制了其应用。因此本发明将其容易降解的基团保护起来，并保留了其抗癌活性，形成了全新的抗癌化合物。
本发明的具体方法和步骤如下：
本发明的目的是提供一种抗癌化合物，其化学式为：
R1＝H,
R2＝OH,
所述化合物是2-氨基-3-(4-甲基亚磺酰基-丁基-3-烯基巯基氨甲酰基磺酰基)-丙酸。
2-Amino-3-(4-methanesulfinyl-but-3-enylthiocarbamoylsulfanyl)-propionic acid。
结构式II、III、IV、V均是结构式I的其中一种结构：
所述的化合物在制备用于治疗人的肿瘤的药物中的应用。
所述的化合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。
药物组合物，包含所述的化合物以及药用载体。
所述的药物组合物，是片剂、胶囊剂、液剂或混悬剂形式。
所述的化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将莱菔素纯品溶于1至1000倍体积的去离子水中溶解；
(2)在莱菔素溶液中加入含巯基化合物，含巯基化合物与莱菔素的摩尔比例为100:1至1:100；
(3)控制温度在0℃至80℃，反应1至144小时；
(4)若反应体系固含量大于5％，则通过旋转蒸发仪浓缩反应液，至反应液固含量为1-5％；若反应体系固含量小于1％，则加入去离子水，将反应液固含量稀释至1-5％；
(5)通过制备色谱纯化产品。
制备色谱柱选用C18反向色谱柱，流动相为色谱甲醇、色谱乙腈与超纯水。
除非另有说明，否则本文所描述的结构还意在包括该结构的所有立体化学形式，即每个不对称中心的R和S构型。因此，本化合物的外消旋体和外消旋混合物、单一对映体、非对映体混合物和单一非对映异构体明确地包括在本发明范围内。尽管可以用具体立体化学构型来描述本文举例说明的具体化合物，但在任何给定手性中心具有任一种相对立体化学的化合物或其混合物都是可以预见的。
除非另有说明，否则，本文所描述的结构还意味着包括仅仅在存在一个或多个同位素富集的原子方面有差别的化合物。例如，具有本结构的化合物，只是用氘或氚替代氢、或用13C-或14C-富集的碳替代碳，也在本发明范围内。
对本领域技术人员显而易见的是，某些本发明的化合物可以存在交替互变异构形式。本化合物的所有这种互变异构形式都在本发明的范围之内。除非另有陈述，否则任何一种互变异构体的表述意味着包括另一个互变异构体。
本文使用的术语“治疗”是指减轻患者具体病症的症状，或改善与具体病症有关的可确定的测定结果，并且可以包括在无症状的患者中抑制症状的重现，例如，潜伏着病毒感染的患者。治疗包括预防，其是指在患者中预防疾病或病症，或预防这种疾病或病症的症状在患者中出现。本文使用的术语“患者”是指哺乳动物，包括人。
本文使用的术语“目标”是指患者、动物或生物样品。本文使用的术语“生物样品”包括但不限于：细胞培养物或其提取物；适合于体外试验的酶制剂；从哺乳动物或其提取物中获得的活检物质；和血液、唾液、尿、排泄物、精液、泪水或其它体液或其提取物。
附图说明
图1为结构式II的质谱图谱。
图2为结构式II的红外图谱。
图3为结构式II的1H-NMR图谱。
图4为结构式II的13C-NMR图谱。
图5为结构式II的制备色谱图谱。
图6为结构式III的质谱图谱
图7为结构式IV的质谱图谱
图8为结构式V的质谱图谱
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的描述，但这些实施例的目的并不在于限制本发明的保护范围。
实施例1
将100mg莱菔素溶于20ml去离子水中，向其中加入100mg半胱氨酸粉末，室温反应30小时。
使用制备色谱纯化所得到的产物。选用反向C18色谱柱，选择流动相为5％体积浓度的甲醇水溶液。收集色谱图中目标产物峰。
使用旋转蒸发仪去除溶剂，温度设置为45℃，压力为50mbar。旋干后即可得到产品。
实施例2
将100mg莱菔素溶于5ml去离子水中，向其中加入100mg半胱氨酸粉末，室温反应30小时。
将整个反应体系用去离子水稀释至20ml。
使用制备色谱纯化所得到的产物。选用反向C18色谱柱，选择流动相为5％体积浓度的甲醇水溶液。收集色谱图中目标产物峰。
使用旋转蒸发仪去除溶剂，温度设置为45℃，压力为50mbar。旋干后即可得到产品。
实施例3
将100mg莱菔素溶于5ml去离子水中，向其中加入100mg N-乙酰半胱氨酸粉末，室温反应48小时。
将整个反应体系用去离子水稀释至20ml。
使用制备色谱纯化所得到的产物。选用反向C18色谱柱，选择流动相为5％体积浓度的甲醇水溶液。收集色谱图中目标产物峰。
使用旋转蒸发仪去除溶剂，温度设置为45℃，压力为50mbar。旋干后即可得到产品。
实施例4
将100mg莱菔素溶于50ml去离子水中，向其中加入100mg谷氨酸-半胱氨酸二肽粉末，室温反应48小时。
使用旋转蒸发仪浓缩反应体系，温度设置为45℃，压力为50mbar，浓缩至20ml后使用制备色谱纯化。
使用制备色谱纯化所得到的产物。选用反向C18色谱柱，选择流动相为5％体积浓度的乙腈水溶液。收集色谱图中目标产物峰。
使用旋转蒸发仪去除溶剂，温度设置为45℃，压力为50mbar。旋干后即可得到产品。
实施例5
将1g莱菔素溶于100ml去离子水中，向其中加入3g甘氨酸-半胱氨酸二肽粉末，室温反应48小时。
将整个反应体系用去离子水稀释至400mL。
使用制备色谱纯化所得到的产物。选用反向C18色谱柱，选择流动相为5％体积浓度的乙腈水溶液。收集色谱图中目标产物峰。
使用旋转蒸发仪去除溶剂，温度设置为45℃，压力为50mbar。旋干后即可得到产品。
实施例6
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肺鳞癌细胞系H460购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对H460血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的H460细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在H460细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对H460人肺鳞癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的H460细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为9.116μM。
实施例7
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人宫颈癌细胞系Hela购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对Hela血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的Hela细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在Hela细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对Hela人宫颈癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的Hela细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为14.92μM。
实施例8
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肺癌细胞系H446购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对H446血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的H446细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在H446细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对H446人肺癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的H446细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为6.098μM。
实施例9
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人皮肤黑色素瘤细胞系A375购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对A375血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的A375细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在A375细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对A375人皮肤黑色素瘤细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的A375细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为17.515μM。
实施例10
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人乳腺癌细胞系MCF-7购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MCF-7血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MCF-7细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MCF-7细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MCF-7人乳腺癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的MCF-7细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为9.599μM。
实施例11
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人非小细胞肺癌细胞系A549购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对A549血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的A549细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在A549细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对A549人非小细胞肺癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的A549细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为9.154μM。
实施例12
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人非小细胞肺癌细胞系H1299购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对H1299血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的H1299细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在H1299细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对H1299人非小细胞肺癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的H1299细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为8.333μM。
实施例13
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肝癌细胞系HepG2购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对HepG2血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的HepG2细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在HepG2细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对HepG2人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物II对的HepG2细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为8.776μM。
实施例14
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人TNBC亚型的乳腺癌细胞系MDA-MB-453购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MDA-MB-453血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MDA-MB-453细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MDA-MB-453细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MDA-MB-453人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的MDA-MB-453细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为3.08μM。
实施例15
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人TNBC亚型的乳腺癌细胞系MDA-MB-231购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MDA-MB-231血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MDA-MB-231细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MDA-MB-231细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MDA-MB-231人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的MDA-MB-231细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为8.71μM。
实施例16
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人TNBC亚型的乳腺癌细胞系MDA-MB-436购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MDA-MB-436血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MDA-MB-436细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MDA-MB-436细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MDA-MB-436人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的MDA-MB-436细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为3.45μM。
实施例17
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人TNBC亚型的乳腺癌细胞系MDA-MB-468购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MDA-MB-468血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MDA-MB-468细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MDA-MB-468细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MDA-MB-468人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的MDA-MB-468细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为3.59μM。
实施例18
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人ER+亚型的乳腺癌细胞系MCF-7购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对MCF-7血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的MCF-7细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在MCF-7细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对MCF-7人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的MCF-7细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为3.48μM。
实施例19
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人ER+亚型的乳腺癌细胞系ZR-75-1购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对ZR-75-1血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的ZR-75-1细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在ZR-75-1细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对ZR-75-1人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的ZR-75-1细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为2.82μM。
实施例20
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人ER+亚型的乳腺癌细胞系ZR-75-1购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对ZR-75-1血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的ZR-75-1细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在ZR-75-1细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对ZR-75-1人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的ZR-75-1细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为2.82μM。
实施例21
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人HER2+亚型的乳腺癌细胞系Sk-br-3购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物II对Sk-br-3血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的Sk-br-3细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物II用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物II的最终浓度为1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在Sk-br-3细胞接种培养24小时后，换成含有化合物II相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养72小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，实验结果数据见表1。
二、实验结果
表1显示，化合物II对Sk-br-3人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理72小时后，化合物II对的Sk-br-3细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为2.82μM。
实施例22
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肝癌细胞系HepG2购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物III对HepG2血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的HepG2细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物III用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物III的最终浓度为3μM、5μM、10μM、20μM、50μM、70μM和100μM，在HepG2细胞接种培养24小时后，换成含有化合物III相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)。
二、实验结果
化合物III对HepG2人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物III对的HepG2细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为48.222μM。
实施例23
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肝癌细胞系HepG2购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物IV对HepG2血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的HepG2细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物IV用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物IV的最终浓度为3μM、5μM、10μM、20μM、50μM、70μM和100μM，在HepG2细胞接种培养24小时后，换成含有化合物IV相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)。
二、实验结果
化合物IV对HepG2人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物IV对的HepG2细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为58.123μM。
实施例24
一、材料和方法
1.实验细胞系和相关化学试剂：人肝癌细胞系HepG2购买自美国ATCC细胞库，培养在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培养基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常规消化后传代。本实验相关化学试剂皆购自Sigma公司。
2.化合物V对HepG2血细胞的体外抑制实验：取对数生长期的HepG2细胞消化成单个细胞后，接种于96孔板中，每孔3000个细胞，在含5％CO2的37℃培养箱中培养。将化合物V用无菌去离子水溶解后，过0.22μm滤膜除菌，用含血清培养液稀释，使得结合物V的最终浓度为3μM、5μM、10μM、20μM、50μM、70μM和100μM，在HepG2细胞接种培养24小时后，换成含有化合物V相应浓度的培养液培养细胞，阴性对照组培养基中加入等体积的无菌去离子水培养细胞。再分别培养48小时后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培养箱继续孵育3h后，洗净每孔中的溶液，分别加入150μL的DMSO，摇床震荡10min，测定每孔490nm波长下的吸光度。以0小时的阴性对照组存活细胞数为基准，计算细胞生长的半数抑制浓度(IC50)。
二、实验结果
化合物V对HepG2人肝癌细胞的生长增值具有显著的抑制效果。处理48小时后，化合物V对的HepG2细胞生长的半数抑制浓度(IC50)为78.104μM。
表1为结构式II在多种肿瘤细胞中的48小时的IC50值
表2为结构式II在不同亚型乳腺癌中72小时的IC50值
表1
细胞系 Hela H446 A375 MCF-7 H460 A549 H1299 HepG2
IC50(uM) 14.92 6.098 17.515 9.599 9.116 9.154 8.333 8.776
表2

Claims (5)

1.莱菔素抗癌衍生化合物，其化学式如下：
R1＝H,
R2＝OH或
2.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗人的肿瘤的药物中的应用。
3.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。
4.药物组合物，包含权利要求1所述的化合物以及药用载体。
5.按照权利要求4所述的药物组合物，是片剂、胶囊剂、液剂或混悬剂形式。
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