CN105866232A

CN105866232A - 测定生物机体组织和脏器中总量汞和价态汞含量的方法

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Publication number: CN105866232A
Application number: CN201510026429.2A
Authority: CN
Inventors: 夏晶; 季申; 胡青; 李丽敏; 曹帅; 陈虹; 张甦; 陆继伟; 王少敏; 毛丹; 陈铭; 冯睿; 仇佳思; 杨盈盈; 杨文婷
Original assignee: Shanghai Food & Drug Testing Institute
Current assignee: Shanghai Food & Drug Testing Institute
Priority date: 2015-01-19
Filing date: 2015-01-19
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2035-01-19
Also published as: CN105866232B

Abstract

本发明公开一种测定生物机体组织和脏器中汞形态及价态含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：(1)生物机体样品依次经过预处理、酶解、过滤和消解，从而提取其中的汞；(2)ICP-MS法测定生物机体样品中的总量汞含量。本发明也公开一种测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：(1)生物机体样品依次经过预处理、酶解和过滤，从而提取其中的价态汞；(2)HPLC-ICP-MS法测定生物机体样品中的价态汞含量。该方法简便可行，不仅能有效完全的提取出生物机体中的汞，还能保证价态汞的稳定。

Description

测定生物机体组织和脏器中总量汞和价态汞含量的方法

技术领域

本发明涉及一种测定生物机体组织和脏器中总量汞含量的方法，本发明也涉及一种测定生物机体组织和脏器中价态汞含量的方法。

背景技术

朱砂为我国常用的矿物类中药，临床应用的历史已有几千年，最早入药的记载为《神农本草经》，可内服外用且用途广泛。现有的国家标准中收载了含朱砂的成方制剂约460种；目前中国药典2010年版一部中收录含朱砂品种有34种、含雄黄和朱砂的品种有23个，未收载到中国药典2010年版一部的品种中，含朱砂的为227种，含雄黄和朱砂的有94种。其中小儿用药品种就有66种之多。说明朱砂对于中药来说，有着极其重要的作用。

朱砂的开采历史较早，根据考古发现，在六千多年前的河姆渡文化时期就已采用朱砂做彩绘颜料。朱砂药用的历史，最早出自《山海经》，名为丹砂，考古出土的2100多年前西汉帛书《五十二病方》也有记载，在我国第一部药物学专著《神农本草经》中朱砂被列为上品，说明我国使用朱砂作为药用的历史悠久。

传统医学认为朱砂具有清心镇惊、安神解毒等功能，被某些中医列为镇静安神药之首。在几千年的临床实践中已证明其有效性，近年来，通过动物模型及药理实验，发现朱砂及其制剂在镇静安神、抗焦虑、脑损伤的保护、抗惊厥及抑菌上有显著疗效。但朱砂发挥药效的机制至今仍未有确切说法。

随着人们对自身身体健康的日益重视，对汞的认识也逐步深入，发现汞毒性较强，能污染环境，尤其是日本水俣病(甲基汞中毒)引起了全世界的注意，朱砂作为含汞量达86％的中药，加上受传统用药习惯(认为中药可以长期服用或煎煮汤服等)，临床上使用的误区(长期、大量的服用、与其他药物不合理配伍等)等影响，朱砂及其制剂引起的不良反应或中毒事件时有报道，加上中西方一些媒体的宣传，使朱砂的安全问题日益重要。但许多试验也证明，朱砂的许多不良反应并非本身质量引起，与用药不当有密切关系。

上述药理和毒性研究基本均采用动物模型或临床症状，采用的结果判别依据基本均是症状描述、临床指标或病理切片等，少部分采用汞总量作为结果评价的依据，基本未见用汞价态对结果进行分析。

自然界的汞主要以金属汞、无机汞(Hg²⁺，Hg⁺)和有机汞(甲基汞，乙基汞)形式存在，汞是具毒性的一种元素，其对生物体毒性的大小取决于汞的形态及化合物种类，金属状态的汞几乎是无毒的，蒸气汞毒性较大。常见的无机汞有甘汞(HgCl)、升汞(HgCl₂)和朱砂，毒性大小为升汞＞甘汞＞朱砂。总体来说，无机汞的毒性与其水溶性大小有关，毒性远小于有机汞，有机汞因具有脂溶性，易被机体所吸收，尤其是甲基汞，机体吸收率可达100％，对神经系统易造成不可逆的损害。

朱砂产生毒性的机制至今未有明确的说法，有学者认为，朱砂大量内服后可能会转化成甲基汞从而增加造成中毒机会，但另有学者持反对意见，认为虽然不排除肠道菌群代谢朱砂产生甲基化是朱砂毒性机制的可能，但理论上产生的甲基汞很微量，不足以产生中毒。

造成现在朱砂药效和毒性不明的主要原因，是无有效的手段对生物机体中的汞形态及价态进行准确测定，现有文献报道的方法均不能在完全提取出生物机体中的汞的前提下保证汞价态不发生变化，由于不同价态汞的毒性不一样，准确的测定生物机体中各价态汞的含量，对朱砂药效及毒性的机制判断至关重要。

发明内容

鉴于现有技术的状况，本申请人经过深入研究，建立了通过生物降解法提取生物机体组织和脏器中的总量汞从而测定生物机体组织和脏器中的总量汞含量的方法，该方法一方面通过有效破坏生物机体组织和脏器的基质，消除生物基质带来的干扰，另一方面通过金属置换反应，使与细胞或其他物质结合的价态汞能全部被释放，同时保证价态的完整。本申请还建立了与总量汞基本统一的价态汞的测定方法，测定结果准确可靠，整个方法简便可行。

因此，本发明的一个目的在于提供一种测定生物机体组织和脏器中总量汞含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：

(1)生物机体组织和脏器样品依次经过预处理、酶解、过滤和消解，从而提取其中的汞；

(2)ICP-MS法测定生物机体组织和脏器样品中的总量汞含量。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述生物机体组织和脏器选自动物、植物和微生物，其中动物样品例如为动物血液、乳汁、唾液、精液；或心、肝、脾、肾或脑；所述植物样品例如为植物的根、茎、叶、花、果实；所述微生物一般指藻类。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述生物机体组织和脏器样品的预处理步骤包括能有效破坏生物机体的基质的任何方法。例如，动物血液应加抗凝剂(如枸橼酸盐、肝素、草酸盐等)混匀，其余脏器或组织均需捣碎或匀浆均匀(不可加入生理盐水或其他含盐溶液)；植物或微生物中含水量大的应匀浆均匀、含水量小的应粉碎过80目筛。

经预处理的生物机体组织和脏器样品进一步进行酶解。根据本发明的一个优选的实施方式，所述酶解按照如下步骤进行：在经预处理的生物机体样品中加入0.1mol/L硝酸银溶液200～800μl和特制人工胃液15～50ml，涡旋均匀，置37℃～55℃水浴中酶解4～48小时，以保证生物机体能完全在酶的作用下分解成肽片段，并通过置换剂将价态汞置换出来。

本发明所述的特制人工胃液(硝酸配)的配制方法：取20ml～80ml稀硝酸，加水约800ml与人工胃蛋白酶(酶活力大于等于1∶27000)10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，即得，优选加入32.8ml稀硝酸；对于含角质的生物机体，如毛发、指甲等，需再加入2-5g角蛋白酶。

经酶解的生物机体组织和脏器样品进一步进行过滤。根据本发明的一个优选的实施方式，所述过滤步骤采用双层滤膜进行或相应的大粒径单层滤膜分次进行。根据本发明的一个特别优选的实施方式，所述双层滤膜的孔径大小约为10～15μm+2～3μm，以保证大分子形态汞完全保留且不带入过多大分子有机基质。

经过滤的生物机体组织和脏器样品进一步进行消解。根据本发明的一个优选的实施方式，所述消解按照如下步骤进行：在经过滤的生物机体样品中加入硝酸1.0～4.0ml、盐酸0.2～1.0ml，加盖密封并在60～90℃水浴水解1～4小时(也可采用与之相当的常规消解方法)，使大分子形态汞消解成离子汞，同时消除有机基质对ICP-MS仪的基质干扰，保证总量汞含量的准确。此处硝酸和盐酸都是指纯酸。

通过上述步骤，可保证完全提取出生物机体组织和脏器中的总量汞。提取出的生物机体组织和脏器中的总量汞采用灵敏度较高的电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)进行测定，根据本发明的一个优选的实施方式，所述ICP-MS的质谱条件为：采用同轴雾化器或其他雾化器；以高纯液态氩气为工作气体和载气；以氦气或氢气作为反应气。

本发明的另一个目的在于提供一种测定生物机体组织和脏器中价态汞含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：

(1)生物机体组织和脏器样品依次经过预处理、酶解和过滤，从而提取其中的价态汞；

(2)HPLC-ICP-MS法测定生物机体组织和脏器样品中的价态汞含量。

经预处理的生物机体样品进一步进行酶解。根据本发明的一个优选的实施方式，所述酶解按照如下步骤进行：在经预处理的生物机体样品中加入0.1mol/L硝酸银溶液200～800μl和特制人工胃液15～50ml，涡旋均匀，置37℃～55℃水浴中酶解4～48小时，以保证生物机体能完全在酶的作用下分解成肽片段，并通过置换剂将价态汞置换出来。

过滤之后，采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定生物机体样品中的价态汞含量，此时的溶液中各种形态汞均以最原始状态存在，并且由于酶与其结合的原因，状态较为稳定，故价态汞可通过色谱柱分离进行直接测定。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述HPLC-ICP-MS法的色谱条件为：色谱柱为C₁₈柱，优选ZORBAX XDB-C₁₈柱，整体柱效果更佳；流动相由乙酸铵和甲醇组成。优选所述流动相的流速为0.7～1.5ml/min，优选1.0ml/min。所述乙酸铵含有0.05～0.25％L的半胱氨酸，优选所述乙酸铵含有0.12％L的半胱氨酸；其pH值为6～8，优选7.5。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述乙酸铵溶液的浓度为0.05～0.02mol/L，优选0.01mol/L。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述乙酸铵∶甲醇＝85～95∶15～5，优选92∶8。

根据本发明的一个优选的实施方式，所述HPLC-ICP-MS法的质谱条件为：采用同轴雾化器或其他雾化器；以高纯液氩为工作气体和载气；以氦气或氢气作为反应气。

本发明通过采用欧共体标准物质局提供的金枪鱼标准物质BCR-463(含甲基汞3.04μg/g，总量汞2.85μg/g)，对结果进行验证，价态基本没有变化，另外还采用总量与消解所得结果(按国家标准操作)进行比较，计算提取效率，基本达到90％以上。通过上述手段，可保证完全提取出生物机体中的汞，并且保证汞价态的完整，真实反映了生物体内汞存在的形式，对研究朱砂的药效和毒理提供了可靠的数据支撑，为探明朱砂在机体中发挥的作用和产生毒性的机制搭建了桥梁。

附图说明

图1为对照品的高效液相色谱图，其中Hg(I)、Hg(II)、MeHg、EtHg分别代表一价汞、二价汞、甲基汞、乙基汞；

图2为欧共体标准物质局提供的金枪鱼标准物质BCR-463(含甲基汞3.04μg/g，总量汞2.85μg/g)的高效液相色谱图；

图3为实施例2大鼠血中价态汞的高效液相色谱图；

图4为实施例2大鼠肝中价态汞的高效液相色谱图；

图5为实施例2大鼠肾中价态汞的高效液相色谱图；

图6为实施例2大鼠心中价态汞的高效液相色谱图；

图7为实施例2大鼠肺中价态汞的高效液相色谱图；

图8为实施例2大鼠脑中价态汞的高效液相色谱图；

图9为实施例2大鼠脾中价态汞的高效液相色谱图；

图10为各脏器和组织中价态汞及总量汞与消解值(采用国家标准公认的测定法测定)的比较图。

具体实施方式

以下通过具体实施例来进一步阐述本发明，但以下具体实施例不对本发明构成任何形式的限制。

实施例1

大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中总量汞的测定：按照电感耦合等离子体质谱法(中国药典2010年版一部附录XI D)测定。

试药和仪器

美国Agilent公司7700ce型电感耦合等离子体质谱仪；必能信超声(上海)有限公司B9500S-DTH型超声波清洗机(功率300W，频率45kHz)；美国Millipore公司Milli-Q超纯水机。汞标准溶液(1000mg/L，批号HC931554)，购自Merk公司。

硝酸、盐酸均为优级纯(Merck公司)；胃蛋白酶为生化试剂，酶活力为1∶27000，批号为100710，购自上海惠兴生化试剂有限公司；胰酶为生化试剂，酪蛋白转化力≥25.0，批号为F20100714，购自国药集团化学试剂有限公司；水为经Milli-Q处理的去离子水。高纯液态氩气(纯度＞99.99％)和氦气(纯度为99.999％)由上海成功气体工业有限公司提供。

ICP-MS工作条件：

Agilent Micromist Nebulizer同轴雾化器；石英一体化炬管，2.5mm中心通道；石英双通道型雾化室；八级杆碰撞反应池；piltier半导体控温于约2℃；镍采样锥和截取锥；以高纯液氩为工作气体和载气；以氦气作为反应气。7700ce型电感耦合等离子体质谱仪具体操作条件和采集参数见表1。

表1 Agilent 7700Ce ICP-MS仪器工作参数

仪器参数	具体设定值	仪器参数	具体设定
				射频功率	1500W	分析模式	定量分析
采样深度	8.0mm	数据采集模式	图谱模式
				等离子气流量	15.0L·min^-1	单位质量数采集点	3
载气流量	0.9L·min^-1	数据采集重复次数	3

其中取浓度为2μg/L的对照汞溶液分别测定3～5次，测定值的RSD值应小于5％。

对照品储备溶液的制备：精密称取二氯化汞(HgCl₂)0.1354g，置100ml量瓶中，加20％混合酸溶液(硫酸∶硝酸＝1∶1)10ml溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于1.0mg的汞)。

对照品溶液的制备：精密量取对照品储备溶液适量，置聚四氟乙烯材料的量瓶中，用0.125mol/L盐酸溶液制成每L含汞为0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg的溶液，即得。

内标溶液的制备：精密量取铋单元素对照溶液适量，置聚四氟乙烯材料的量瓶中，用0.125mol/L盐酸溶液制成每L含1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：全血为抗凝全血；脏器或组织均需捣碎或匀浆均匀(不可加入生理盐水或其他含盐溶液)。取抗凝全血1ml、脏器或组织各0.2g～0.3g，精密称定，按表2所列考察的试验因素和水平进行正交试验，具体操作按表3进行(分别加0.1mol/L硝酸银溶液，加特制人工胃液，涡旋均匀，放已到温度的水浴中酶解)，取出，放冷，摇匀，放置2小时，取上清液滤过(10μm+3μm滤膜)，取滤液1～3ml，置顶空进样瓶中，加硝酸2.0ml、盐酸0.5ml，加盖密封，80℃水浴水解规定时间，取出，放冷，置10ml聚四氟乙烯材料的量瓶中，用水稀释至刻度，离心，取上清液即得。同供试品溶液制备方法制备试剂空白溶液。另同时取标准物质BCR-4630.1g，按A₃B₃C₃D₃进行测定。

待正交试验确定具体参数后，再进行重复性和准确度等试验。

表2 考察的试验因素和水平

W1、人工胃液1(硝酸配)：取16.4ml稀硝酸(取105ml硝酸溶于1000ml水)，加水约800ml与人工胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，即得。

W2、人工胃液2(硝酸配)：取32.8ml稀硝酸(取105ml硝酸溶于1000ml水)，加水约800ml与人工胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，即得。

W3、人工胃液3(硝酸配)：取49.2ml稀硝酸(取105ml硝酸溶于1000ml水)，加水约800ml与人工胃蛋白酶10g，摇匀后，加水稀释成1000ml，即得。

表3 L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

测定：测定时选取的同位素为²⁰²Hg，以²⁰⁹Bi作为内标，选择碰撞池反应模式并根据不同仪器的要求选用适宜校正方程对测定的元素进行校正。

仪器的内标进样管在仪器分析工作过程中始终插入内标溶液中，依次将仪器的样品管插入各个浓度的对照品溶液中进行测定(浓度依次递增)，取每一浓度测得三次读数的平均值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制对照曲线。再将仪器的样品管插入供试品溶液中，测定，取三次读数的平均值。从对照曲线上读出供试品溶液中²⁰²Hg的浓度，扣除相应的试剂空白溶液的浓度，计算样品中汞元素的含量。

测定结果见表4～表10，分析结果见表11。

1)正交试验

表4 大鼠血L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表5 大鼠肝L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表6 大鼠肾L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表7 大鼠脑L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表8 大鼠心L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表9 大鼠脾L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表10 大鼠肺L9(3⁴)正交设计试验优选总量汞体内提取结果

表11 总量汞正交试验结果分析

2)重复性试验

分别按正交试验确定的条件对大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中总量汞测定，一式六份，结果见表12。

表12 大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中总量汞重复性试验结果

3)准确度试验

分别取重复性试验项下大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺，加入低、中、高3个浓度水平的汞对照品溶液，一式三份，共九份，按正交试验确定的条件分别测定其中总量汞，计算加样回收率，结果见表13。

表13 大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中总量汞准确度试验结果

实施例2

大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中价态汞的测定：按照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)和电感耦合等离子体质谱法(附录XI D)测定。

试药和仪器

美国Agilent公司7700ce型电感耦合等离子体质谱仪；美国Agilent公司1100型液相色谱仪；必能信超声(上海)有限公司B9500S-DTH型超声波清洗机(功率300W，频率45kHz)；美国Millipore公司Milli-Q超纯水机。

氯化甲基汞(C15100000，50301，纯度为98.5％)、氯化乙基汞(C13345000，50407，纯度为98.0％)二价汞(High Purity Standards，53916，纯度为99.9995％，均购自德国Dr.Ehrenstrorfer公司)。

硝酸、盐酸均为优级纯，购自德国Merck公司；半胱氨酸、醋酸铵、氨水均为优级纯，均购自国药集团化学试剂有限公司；水为经Milli-Q处理的去离子水。高纯液态氩气(纯度＞99.99％)和氦气(纯度为99.999％)由上海成功气体工业有限公司提供。

HPLC-ICP-MS工作条件：

电感耦合等离子体质谱：

Agilent Micromist Nebulizer同轴雾化器；石英一体化炬管，2.5mm中心通道；石英双通道型雾化室；八级杆碰撞反应池；piltier半导体控温于约2℃；镍采样锥和截取锥；以高纯液氩为工作气体和载气；以氦气作为反应气。7700x型电感耦合等离子体质谱仪具体操作条件和采集参数见表1。

高效液相色谱：

色谱柱为ZORBAX XDB-C₁₈(4.6mm ID×150mm，5μm)；流动相为0.01mol/L乙酸铵溶液(含0.12％L-半胱氨酸，调节pH值至7.5)-甲醇(92∶8)；流速为1.0ml/min。

对照品储备溶液的制备：取一价汞(Hg(I))、二价汞(Hg(II))、甲基汞(MeHg)、乙基汞(EtHg)、对照品适量，用流动相制成每1L各含5mg的混合溶液，即得。

对照曲线溶液的制备：精密量取对照品储备溶液适量，分别用流动相制成每L含0μg、4μg、20μg、40μg、100μg、200μg、400μg、800μg的一系列对照溶液，即得。

供试品溶液的制备：全血为抗凝全血；脏器或组织均需捣碎或匀浆均匀(不可加入生理盐水或其他含盐溶液)。取抗凝全血1ml，脏器或组织各0.2g～0.3g，精密称定，按表2所列考察的试验因素和水平进行正交试验，具体操作按表3进行(分别加0.1mol/L硝酸银溶液，加特制人工胃液，涡旋均匀，放已到温度的水浴中酶解)，取出，放冷，摇匀，放置2小时，取上清液滤过(10μm+3μm滤膜)，取滤液即得。同供试品溶液制备方法制备试剂空白溶液。另同时取标准物质BCR-463 0.1g，按A₃B₃C₃D₃进行测定。

测定：取混合对照溶液，注入液相色谱仪，四种不同形态的汞应能完全分开，对照图谱见附图1。

分别精密吸取一系列对照曲线溶液(浓度依次递增)与供试品溶液各5～20μl，注入液相色谱仪，色谱柱流出液体直接进入电感耦合等离子体质谱仪的雾化器，选取同位素为²⁰²Hg，选择碰撞池反应模式并根据不同仪器的要求选用适宜校正方程对测定的元素进行校正。以各对照曲线溶液测得不同形态的汞峰面积值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制对照曲线。如供试品溶液中出现与对照曲线保留时间相同的色谱峰，则根据相应的对照曲线读出供试品溶液中的不同价态汞浓度，计算出样品中不同价态汞的含量，并折算成汞元素的含量。

其中心、血、肝等脏器中价态汞的含量过低，仅对含量较高的肺、脾、肾中的价态汞进行测定，测定结果见表14～表16，分析结果见表17。

1)正交试验

表14 大鼠肺L9(3⁴)正交设计试验优选价态汞体内提取结果

表15 大鼠脾L9(3⁴)正交设计试验优选价态汞体内提取结果

表16 大鼠肾L9(3⁴)正交设计试验优选价态汞体内提取结果

表17 价态汞正交试验结果分析

2)重复性试验

分别按正交试验确定的条件对大鼠肾、脾、肺中价态汞测定(其他四种脏器中价态汞含量较低，未进行重复性试验)，一式六份，结果见表22，结果表明，上述三种种生物组织中的价态汞只有Hg(II)，没有其他两种价态汞。

表22 价态汞含量测定的重复性试验结果(单位：mg/kg)

3)准确度试验

分别取重复性试验项下大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺，加入低、中、高3个浓度水平的汞对照品溶液，一式三份，共九份，按正交试验确定的条件分别测定其中的价态汞，计算加样回收率，结果见表23。

表23 大鼠血中价态汞含量测定的准确度试验结果

表24 大鼠肝中价态汞含量测定的准确度试验结果

表25 大鼠肾中价态汞含量测定的准确度试验结果

表26 大鼠脑中价态汞含量测定的准确度试验结果

表27 大鼠心中价态汞含量测定的准确度试验结果

表28 大鼠脾中价态汞含量测定的准确度试验结果

表29 大鼠肺中价态汞含量测定的准确度试验结果

4)样品测定结果比较分析

分别按正交试验确定的条件对大鼠血、肝、肾、脑、心、脾、肺中总量汞和价态汞进行测定，同时按中国药典2010年版一部附录IX B铅、镉、砷、汞、铜测定法中电感耦合等离子体质谱法测定，结果见表24。

表24 结果比较分析

从附图10可见，总量的提取率均在90％以上，说明提取较完全，提取率均未超出110％，说明已完全消除基质了基质的干扰。价态的提取率均与总量提取率相当，说明生物机体在其余脏器中汞的存在基本以Hg(II)形式存在，心、肺、脑的提取率约90％，与总量有10％的差距，说明这几个器官中汞可能还以其他形式存在。

从数据来看，脾、肺、肾是朱砂进入机体后，主要分布的器官，血、肝中汞含量较少，说明汞并不主要由肝代谢，也并非以血液为主，运输到各器官。具体如何吸收扩散还有待进一步分析。

肾中汞含量较高，基本以Hg(II)为主，说明肾排泄汞以Hg(II)为主。这也是长期服用朱砂，能引起肾功能损伤的原因。

脑中汞的含量虽然较少，但较心、肝、血中高，说明汞能通过血脑屏障进入脑中，其发挥的镇静安神作用可能与汞进入脑中，影响部分神经递质的含量有关，因此在朱砂大量服用或长期服用的情况下，也会造成神经系统的损害。

Claims

1.测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：

(1)生物机体样品依次经过预处理、酶解、过滤和消解，从而提取其中的汞；

(2)ICP-MS法测定生物机体样品中的总量汞含量。

2.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述生物机体选自动物、植物和微生物。

3.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述预处理包括能有效破坏生物机体的基质的步骤。

4.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述酶解包括在经预处理的生物机体样品中加入0.1mol/L硝酸银溶液200～800μl和特制人工胃液15～50ml，涡旋均匀，置37～55℃水浴中酶解4～48小时的步骤。

5.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述过滤采用双层滤膜或相应的大粒径单层滤膜分次进行。

6.根据权利要求5所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述双层滤膜的孔径大小约为10～15μm+2～3μm或相应孔径的大粒径单层滤膜。

7.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述消解包括在经过滤的生物机体样品中加入硝酸1.0～4.0ml、盐酸0.2～1.0ml，加盖密封并在60～90℃水浴酶解1～4小时的步骤。

8.根据权利要求1所述的测定生物机体中总量汞含量的方法，其特征在于所述ICP-MS的质谱条件为：采用同轴雾化器或其他雾化器；以高纯液态氩气为工作气体和载气；以氦气或氢气作为反应气。

9.测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于该方法包括步骤：

(1)生物机体样品依次经过预处理、酶解和过滤，从而提取其中的价态汞；

(2)HPLC-ICP-MS法测定生物机体样品中的价态汞含量。

10.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于所述生物机体选自动物、植物和微生物。

11.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于所述预处理包括能有效破坏生物机体的基质的步骤。

12.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于所述酶解包括在经预处理的生物机体样品中加入0.1mol/L硝酸银溶液200～800μl和特制人工胃液15～50ml，涡旋均匀，置37℃～55℃水浴中酶解4～48小时的步骤。

13.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于所述过滤采用双层滤膜或相应的大粒径单层滤膜分次进行。

14.根据权利要求13所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于所述双层滤膜的孔径大小约为10～15μm+2～3μm或相应孔径的大粒径单层滤膜。

15.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述HPLC-ICP-MS法的色谱条件为：色谱柱为C₁₈柱；流动相由乙酸铵和甲醇组成。

16.根据权利要求15所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述色谱柱为ZORBAX XDB-C₁₈柱或其他性能相近的色谱柱，优选整体柱。

17.根据权利要求15所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.7～1.5ml/min，优选1.0ml/min。

18.根据权利要求15所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述乙酸铵含有0.05～0.25％L的半胱氨酸，优选所述乙酸铵含有0.12％L的半胱氨酸；其pH值为6～8，优选7.5。

19.根据权利要求15所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的浓度为0.05～0.02mol/L，优选0.01mol/L。

20.根据权利要求15所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述乙酸铵∶甲醇＝85～95∶15～5，优选92∶8。

21.根据权利要求9所述的测定生物机体中价态汞含量的方法，其特征在于，所述HPLC-ICP-MS法的质谱条件为：采用同轴雾化器或其他雾化器；以高纯液氩为工作气体和载气；以氦气或氢气作为反应气。