CN105861741B - Senp3基因及其表达产物作为食管癌的诊治靶标 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了SENP3基因及其表达产物可以作为食管癌诊治的分子标志物。通过检测组织中SENP3基因及其表达产物的含量可以判断受试者是否患有食管癌或者诊断受试者是否存在患有食管癌的风险。本发明通过研究体外培养的食管癌细胞的增殖情况发现SENP3基因的表达抑制可以抑制食管癌细胞增殖，并且通过抑制SENP3蛋白的功能同样可以抑制食管癌细胞的增殖，上述研究结果表明SENP3基因及其表达产物是治疗食管癌的一个潜在的药物靶点。

Description

SENP3基因及其表达产物作为食管癌的诊治靶标
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地涉及SENP3基因在食管癌的诊断、治疗中的用途。
背景技术
食管癌(EC)是目前世界上最为常见的十种恶性肿瘤之一(每年有超过300,000新发病例)，食管癌的预后较差，五年生存率不到10％。在消化系统肿瘤中发病率第二，仅次于胃癌，占所有恶性肿瘤的2％，且发病率和死亡率居高不下，在各种恶性肿瘤引起的死亡患者中占第六。在所有食管癌患者中，中老年人群所占比重较高，且具有易发性，总体来说，年龄低于30岁，发病率低，30岁以后发病率与年龄的增长成正相关。中国是食管癌高发区，每年新增250000名患者，但160000的食管癌患者死亡。现有的治疗食管癌的方式主要有手术切除、放射治疗、化学药物治疗等，以上治疗措施的应用不能有效提高患者的生存率和生活质量。因此对食管癌进行研究，探明其可能发生机制及寻找诊断和治疗新途径等乃当务之急。目前广大的医学工作者致力于在基因水平进行干预，为食管癌的治疗带来了新希望。有文献报道食管癌的发生发展是多基因共同作用的结果。目前在食管癌组织中已发现多种表达异常的基因和蛋白，如DCR3基因、PCNA、EBP1、STAT3、CYCLIND1、VEG及食管癌相关基因4等，目前这方面研究较多，但这些基因在临床上的价值微乎其微，不能对食管癌患者治疗效果和预后做出有效的判断提，因此新的的基因或标志物急需研究证实和寻找，例如在肝癌患者中外周血查AFP就具有较高的敏感性。当患者自诉有进行性吞咽困难症状时，一般已经是食管癌中晚期。因此早期诊断食管癌是目前提高患者生存率和治愈率的有效方法，特别是与食管癌相关的肿瘤标记物被认为是早期诊断的有效方法之一
发明内容
本发明的目的在于提供一种可用于食管癌早期诊断的分子标志物。相比现有的食管癌的诊断方法，使用基因标志物来诊断食管癌的具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了检测SENP3基因表达的产品在制备诊断食管癌的工具中的应用。
进一步，所述检测SENP3基因表达的产品包括检测SENP3基因mRNA水平的产品、和/或检测SENP3蛋白水平的产品。
进一步，所述检测SENP3基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测SENP3基因表达以诊断食管癌的产品。
进一步，所述用RT-PCR诊断食管癌的产品至少包括一对特异扩增SENP3基因的引物；所述用实时定量PCR诊断食管癌的产品至少包括一对特异扩增SENP3基因的引物；所述用免疫检测诊断食管癌的产品包括：与SENP3蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断食管癌的产品包括：与SENP3基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断食管癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与SENP3蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与SENP3基因的核酸序列杂交的探针。
所述用实时定量PCR诊断食管癌的产品至少包括的一对特异扩增SENP3基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
所述检测SENP3基因表达的产品可以是检测SENP3基因表达的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。
所述诊断食管癌的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断食管癌的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知SENP3基因的异常与食管癌相关也属于SENP3基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
本发明还提供了一种诊断食管癌的工具，所述工具包括检测SENP3基因表达的试剂；所述试剂包括检测SENP3基因mRNA的引物和/或探针、检测SENP3蛋白的抗体。
所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。
其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测SENP3基因转录水平的针对SENP3基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的SENP3蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括SENP3基因在内的多个基因(例如，与食管癌相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括SENP3蛋白在内的多个蛋白质(例如与食管癌相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与食管癌的标志物同时检测，可大大提高食管癌诊断的准确率。
其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测SENP3基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括SENP3蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测SENP3基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对SENP3基因的引物和/或探针。根据SENP3基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测SENP3基因表达水平的引物和探针。
所述试纸包括检测SENP3基因表达的试剂。
所述高通量测序平台包括检测SENP3基因表达的试剂。
与SENP3基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
进一步，所述SENP3蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述SENP3蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与SENP3蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗体。
在本发明的具体实施方案中，所述检测SENP3基因mRNA的引物包括SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对。
本发明还提供了SENP3基因和/或其表达产物的抑制剂在制备治疗食管癌的药物中的应用。所述抑制剂包括抑制SENP3基因表达的试剂、和/或抑制SENP3基因表达产物的试剂。
进一步，所述抑制SENP3基因表达的试剂包括抑制基因转录的试剂、抑制基因翻译的试剂；所述抑制SENP3基因表达产物的试剂包括抑制SENP3基因mRNA的试剂、抑制SENP3蛋白的试剂。所述抑制SENP3基因mRNA的试剂包括抑制mRNA稳定性的试剂、抑制mRNA翻译活性的试剂。所述抑制SENP3蛋白的试剂包括抑制SENP3蛋白稳定性的试剂、抑制SENP3蛋白活性的试剂、抑制SENP3蛋白功能的试剂。
进一步，抑制SENP3基因mRNA的试剂包括针对SENP3基因mRNA的双链核糖核酸；抑制SENP3蛋白功能的试剂包括SENP3抗原蛋白的肿瘤疫苗、抑制SENP3蛋白功能的抗体。所述抗体可以是多克隆抗体，或是单克隆抗体。
在本发明的具体实施方案中，所述针对SENP3基因mRNA的双链核糖核酸是siRNA。为了确保SENP3基因能够被高效剔除或沉默，根据SENP3基因的mRNA序列设计了siRNA特异性片段。siRNA的设计根据已发表的通用设计原则(Elbashir et.al 2001，Schwarz et.al2003，Khvorova et.al 2003，Reynolds et.al 2004，Hsieh et.al 2004，Ui-Tei et.al2004)，通过在线工具完成设计，该在线工具为：siRNASelectionProgram of WhiteheadInstitute(BingbingYuan et.al 2004，http://jura.wi.mit.edu/bioc/siRNAext/)和BLOCK-iTTM RNAi Designer ofINVITROGEN(winner of the 2004Frost&SullivanExcellence in Research Award，https://rnaidesigner.invitrogen.com/sirna/)。为了进一步提高siRNA片断的有效性，综合两个在线设计工具的优点来设计用于筛选的siRNA片断。最后，通过同源性比对(NCBI BLAST)来过滤siRNA序列，以提高siRNA片断的特异性并减少RNAi干扰的脱靶效应。
优选地，所述siRNA的序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。
本发明还提供了一种用于治疗食管癌的药物组合物，所述药物组合物包括上面所述的SENP3基因和/或其表达产物的抑制剂。
本发明的药物组合物还包括药学上可接受的载体，其中该载体可为赋形剂、稀释剂、增稠剂、填充剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、油脂或非油脂的基剂、表面活性剂、悬浮剂、胶凝剂、辅助剂、防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、着色剂或香料其中之一或两者以上的混合。
本发明的药物组合物可用于制造治疗食管癌的药剂。
本发明的药物组合物首选应用于哺乳动物，其中该哺乳动物优选为人类病患。
本发明的药物组合物可例如以口服、注射等方式给予至该人类病患体内。
本发明的药物组合物还可与其他治疗食管癌的药物联用，多种药物联合使用可以大大提到治疗的成功率。
在本发明的上下文中，“SENP3基因”包括SENP3基因以及SENP3基因的任何功能等同物的多核苷酸。SENP3基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中SENP3基因(NC_000017.11)DNA序列具有70％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
优选地，SENP3基因的编码序列包括以下任一一种DNA分子：
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA序列；
(2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
(3)与(1)或(2)限定的DNA序列具有70％、优选地，90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA分子。
在本发明的具体实施方案中，所述SENP3基因的编码序列是SEQ ID NO.1所示的DNA序列。
在本发明的上下文中，SENP3基因表达产物包括SENP3蛋白以及SENP3蛋白的部分肽。所述SENP3蛋白的部分肽含有与食管癌相关的功能域。
“SENP3蛋白”包括SENP3蛋白以及SENP3蛋白的任何功能等同物。所述功能等同物包括SENP3蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物，等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与SENP3的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。
优选地，SENP3蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：
(1)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个。
(3)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有至少80％同源性(又称为序列同一性)，更优选地，与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列至少约90％至95％的同源性，常为96％、97％、98％、99％同源性的氨基酸序列构成的多肽。
在本发明的具体实施方案中，所述SENP3蛋白是具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白质。
通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是SENP3蛋白的融合蛋白。对于与SENP3蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留SENP3蛋白的生物学活性即可。
本发明的SENP3蛋白也包括对SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只要经过修饰的蛋白质仍然能够保留SENP3蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。
在本发明的上下文中，“诊断食管癌”既包括判断受试者是否已经患有食管癌、也包括判断受试者是否存在患有食管癌的风险。
在本发明的上下文中，“治疗食管癌”从疾病的状态变化来分，可以包括疾病的缓解、疾病的完全治愈，还包括用于评价疾病的治疗效果。
本发明的优点和有益效果：
本发明首次发现了SENP3基因表达与食管癌相关，通过检测受试者组织中SENP3的表达，可以判断受试者是否患有食管癌、或者判断受试者是否存在患有食管癌的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
本发明发现了一种新的分子标记物-SENP3基因，相比传统的检测手段，基因诊断更及时、更特异、更灵敏，能够实现食管癌的早期诊断，从而降低食管癌的死亡率。
附图说明
图1显示利用基因芯片检测SENP3基因在食管癌组织与正常组织中的表达情况；
图2显示利用Western blot检测SENP3蛋白在食管癌组织与正常组织中的表达情况；
图3显示利用QPCR检测siRNA对SENP3基因的干扰效率；
图4显示利用Western blot检测siRNA对SENP3蛋白表达的影响；
图5显示抑制SENP3蛋白功能对食管癌细胞增殖的影响。
具体的实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1 SENP3基因的差异表达
1、实验材料：
食管癌组织为医院胸外科手术切除的标本，正常组织为胃镜室镜下取出的标本，手术切除的食管肿瘤组织离体后立即取材，取材时均佩戴一次性无菌手套，应用高压灭菌的手术刀片切取。
所有病例均经病理确诊。包括食管癌组织40例，正常食管组织30例。其中食管鳞癌34例，食管腺癌6例。以正常食管组织作为对照组。所有患者术前均病理证实，术前均未行放疗、化疗等治疗，且无其他部位的肿瘤等。所有组织均在手术半小时内液氮保存后，移入-80度冰箱冻存。
2、食管癌组织和正常食管上皮组织的RNA的获取
使用Trizol一步法提取食管癌组织和正常食管组织的总RNA，通过Nanodrop ND-1000读取260nm和280nm处的吸光度值(A)测定RNA溶液的纯度。经1％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，紫外透射光下观察，检测RNA的完整性。
3、基因芯片杂交及扫描
总RNA经线性化扩增后，cy3-UTP标记，荧光标记后的cRNAs采用RNEASY Mini Kit纯化，用Amhion的RNA Fragmentation Reagents对标记好的cRNAs进行片段化处理。采用美国Agilent公司的人全基因表达谱芯片(4x 44K基因)，在芯片杂交炉中65℃杂交17h，然后洗脱、染色，最后用Agilent DNA MicroarrayScanner扫描仪扫描。
4、芯片数据处理与分析
杂交后的芯片经芯片扫描仪读取数据点后，将数据导入分析软件，对于两组比值的自然对数绝对值大于2.0或小于0.5的基因作为差异表达基因。
5、统计学处理
采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，组间差异比较采用单因素方差分析法，P<0.05差异有显著性意义。
6、结果
结果显示(如图1所示)，与正常食管组织相比，食管癌组织中SENP3基因的mRNA水平显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。
实施例2 SENP3蛋白的差异表达
1、研究对象同实施例1。
2、提取组织总蛋白
按照EpiQuik组织/细胞总蛋白提取试剂盒的说明书进行蛋白提取的操作。
3、Western blot检测
将提取的蛋白定量进行SDS-PAGE电泳，之后进行转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色。
4、统计学处理
将蛋白条带的灰度值使用Image J软件进行分析，以β-actin为内参，将SENP3蛋白条带的灰度值进行归一化处理。结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
5、结果
结果如图2所示，与正常食管组织相比，食管癌组织中SENP3蛋白的表达水平显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。
实施例3 抑制SENP3基因表达
1、siRNA设计合成
针对SENP3的siRNA序列：
siRNA1-SENP3：
正义链为5’-ACGUUUGAAGGAAUUCGUCCA-3’(SEQ ID NO.7)；
反义链为5’-GACGAAUUCCUUCAAACGUAU-3’(SEQ ID NO.8)，
siRNA2-SENP3：
正义链为5’-AACUAUUGAAGAAAUGCACCU-3’(SEQ ID NO.9)；
反义链为5’-GUGCAUUUCUUCAAUAGUUUC-3’(SEQ ID NO.10)，
siRNA3-SENP3：
正义链为5’-UAGAUACUUGGCAAUAUGCUU-3’(SEQ ID NO.11)；
反义链为5’-GCAUAUUGCCAAGUAUCUACA-3’(SEQ ID NO.12)
阴性对照siRNA序列(siRNA-NC)：
正义链为5’-CGUACGCGGAAUACUUCGA-3’(SEQ ID NO.13)；
反义链为5’-UCGAAGUAUUCCGCGUACG-3’(SEQ ID NO.14)。
2、食管癌细胞的培养与转染
2.1 细胞培养
食管癌细胞系ECA109接种于含有10％胎牛血清的DMEM培养液中、将其放置于37℃、5％CO2培养箱内培养，待细胞达80％融合时，用0.25％胰蛋白酶消化传代。
2.2 细胞转染
将食管癌细胞按1×104/孔接种到24孔细胞培养板中，在37℃、5％CO2培养箱中细胞培养24h，转染按照脂质体转染试剂2000(购自于Invitrogen公司)的说明书转染，实验分为、阴性对照组和实验组(20nM)，其中，阴性对照组siRNA与SENP3基因的序列无同源性，浓度为20nM/孔，同时分别转染。
2、利用QPCR实验检测siRNA的干扰效率。
2.1 提取细胞总RNA利用常规方法进行操作。
2.2 逆转录
利用TAKARA公司的逆转录试剂盒进行RNA的逆转录。
2.3 QPCR
(1)引物设计
根据Genbank中SENP3基因和GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。具体引物序列如下：
SENP3基因：
正向引物为5’-CATATTGCCAAGTATCTAC-3’(SEQ ID NO.3)；
反向引物为5’-GTCACTGTCATTATTCTG-3’(SEQ ID NO.4),
GAPDH基因：
正向引物为5’-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3’(SEQ ID NO.5)；
反向引物为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.6)。
(2)按照表1配制PCR反应体系：
其中，SYBR Green聚合酶链式反应体系购自Invitrogen公司。
表1 PCR反应体系
试剂 体积
正向引物 1μl
反向引物 1μl
SYBR Green聚合酶链式反应体系 12.5μl
模板 2μl
去离子水 补足25μl
(3)PCR反应条件：95℃10min，(95℃15s，60℃40s)*45个循环。以SYBR Green作为荧光标记物，在Light Cycler荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。
2.4 统计学方法
实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，干扰SENP3基因表达组与对照组之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
2.5 结果
结果如图3所示，与siRNA2-SENP3、siRNA3-SENP3相比，siRNA1-SENP3能够更有效的抑制SENP3基因的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)，使用siRNA1-SENP3进行后续的实验。
3、Western blot实验检测siRNA1-SENP3的干扰效率
步骤同实施例2。
结果如图4所示，与转染siRNA-NC组相比，转染siRNA1-SENP3的细胞中SENP3蛋白的含量明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。
实施例4 SENP3基因的表达对食管癌细胞增殖能力的测定
使用Cell Counting kit-8(cck-8)试剂盒用于检测食管癌细胞增殖
1、步骤
按照前面实施例的方法进行食管癌细胞的培养和转染，细胞分为二个实验组：
组1：转染siRNA-NC细胞组；
组2：转染siRNA1-SENP3细胞组。
转染24h后，以2.5×105/ml密度接种于96孔细胞培养板中，每个实验组设计三复孔，每孔加入10μl的CCK-8溶液，37℃，5％CO2培养箱中孵育4h；然后按照试剂盒说明，选择450nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值(OD值)。
2、统计学方法
实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
3、结果
结果如表2所示，与转染siRNA-NC组相比，转染siRNA1-SENP3细胞组细胞增殖缓慢，差异具有统计学意义(P<0.05)。上述实验结果表明，SENP3基因表达促进了食管癌细胞的增殖。
表2 食管癌细胞OD值
实验组 OD值(光密度)
siRNA-NC 1.561±0.124
siRNA-SENP3 0.547±0.072
实施例5 食管癌细胞抗体中和实验
1、步骤：
将食管癌细胞接种于96孔细胞培养板中，每孔2*103个细胞/孔/200μl，细胞贴壁后进行如下处理：
实验组1(对照组)：食管癌细胞中加入无关单抗(1:50)；
实验组2：食管癌细胞中加入抗人SENP3单抗(1:50)。
将细胞在37℃、5％CO2培养箱孵育24小时后，加入3H-TdR(1μCi/孔)，再培养24小时，收集细胞，加液体闪烁液，β计数仪检测cpm值。
2、统计学方法
实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。
3、结果
结果如图5所示，相比于对照组，加入抗人SENP3单抗的细胞组细胞增殖减缓。上述实验结果表明，抑制SENP3蛋白的功能可以抑制食管癌细胞增殖。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.检测SENP3基因表达的产品在制备诊断食管癌的工具中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测SENP3基因表达以诊断食管癌的产品；所述用RT-PCR诊断食管癌的产品至少包括一对特异扩增SENP3基因的引物；所述用实时定量PCR诊断食管癌的产品至少包括一对特异扩增SENP3基因的引物；所述用免疫检测诊断食管癌的产品包括：与SENP3蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断食管癌的产品包括：与SENP3基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断食管癌的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与SENP3蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与SENP3基因的核酸序列杂交的探针。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断食管癌的产品至少包括的一对特异扩增SENP3基因的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述工具包括检测SENP3基因表达的试剂；所述试剂包括检测SENP3基因mRNA的引物和/或探针、检测SENP3蛋白的抗体。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测SENP3基因mRNA的引物包括SEQID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物对。
6.SENP3基因和/或其表达产物的抑制剂在制备治疗食管癌的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括抑制SENP3基因表达的试剂、和/或抑制SENP3基因表达产物的试剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抑制SENP3基因表达产物的试剂包括抑制针对SENP3基因的siRNA、和/或SENP3蛋白的抗体。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述针对SENP3基因的siRNA序列如SEQ IDNO.7和SEQ ID NO.8所示。
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