JP6566933B2 - ガンを治療するための療法のための標的として使用するためのfalz - Google Patents
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Description
本出願は、2013年3月15日に提出された仮出願第61/790,153号からの35 U.S.C. §119の下における優先権を主張し、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、米国国立衛生研究所及び国立ガン研究所によって与えられた助成金第CA114337号及びCA122947号の下で政府補助によって為された。政府は本発明に特定の権利を有する。
本開示は、FALZの発現レベルを測定することに基づく、ガンの診断、被験体の生存率、及び/又はガンの進行のための方法を提供する。本開示は、FALZの活性及び/又は発現を阻害することによって、ガンを有する被験体を治療する方法をさらに提供する。
以下、本発明の実施形態を示す。
(1)ガンの予後判断の方法であって、以下:
(i)被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(ii)被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)被験体のサンプル中のBPTFのレベルを、1つ以上の対照生物学的サンプルからのBPTFの平均レベルと比較するステップ、
(iv)対照におけるBPTFの平均レベルと比較して、BPTFについてより低い(又はより高い)レベルを有することに基づいて、被験体がガンを有し得るという予後判断を提供するステップ
を含む、方法。
(2)ガンが、黒色腫、乳ガン及び脳腫瘍からなる群より選択される、(1)に記載の方法。
(3)被験体の生物学的サンプルが、組織生検からのものである、(1)に記載の方法。
(4)1つ以上の対照生物学的サンプルが、良性母斑の組織生検からのものである、(2)に記載の方法。
(5)対照生物学的サンプルが、被験体に由来するサンプルを含む、(4)に記載の方法。
(6)対照生物学的サンプルが、被験体に由来しないサンプルを含む、(4)に記載の方法。
(7)被験体がガンを有するかどうかを決定する方法であって、以下:
(i)被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(ii)被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)被験体のサンプル中のBPTFのレベルを、1つ以上の対照生物学的サンプルからのBPTFの平均レベルと比較するステップ、
(iv)対照におけるBPTFの平均レベルと比較して、BPTFについて有意により低い(又はより高い)レベルを有することに基づいて、被験体がガンを有するかどうかを決定するステップ
を含む、方法。
(8)ガンが、黒色腫、乳ガン及び脳腫瘍からなる群より選択される、(7)に記載の方法。
(9)被験体の生物学的サンプルが、組織生検からのものである、(7)に記載の方法。
(10)1つ以上の対照生物学的サンプルが、良性母斑の組織生検からのものである、(7)に記載の方法。
(11)対照生物学的サンプルが、被験体に由来するサンプルを含む、(10)に記載の方法。
(12)対照生物学的サンプルが、被験体に由来しないサンプルを含む、(10)に記載の方法。
(13)被験体におけるガンが進行中であるか又は寛解期にあるかを決定する方法であって、以下:
(i)第一の時点において被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(ii)第一の時点からの被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)第二の時点において被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(iv)第二の時点からの被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(v)第一の時点のBPTFのレベルを、第二の時点のレベルと比較するステップ、及び
(vi)2つの時点のBPTFのレベルにおける変化に基づいて、ガンが進行中であるか又は回復期にあるかを決定するステップであって、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける増加によって、ガンが寛解期にあることが示され、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける増加によって、ガンが進行中であることが示される、ステップ
を含む、方法。
(14)ガンが、黒色腫、乳ガン及び脳腫瘍からなる群より選択される、(13)に記載の方法。
(15)生物学的サンプルが、組織生検からのものである、(13)に記載の方法。
(16)第一のサンプルを得た後に、被験体に抗ガン治療剤を投与するステップをさらに含む、(13)に記載の方法。
(17)BPTFレベルが増加した場合に、被験体にBPTF阻害剤を投与するステップをさらに含む、(13)に記載の方法。
(18)ガンを有する被験体の生存率の予後判断を提供する方法であって、以下:
(i)第一の時点において被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(ii)第一の時点からの被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)第二の時点において被験体から生物学的サンプルを得るステップ、
(iv)第二の時点からの被験体のサンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(v)第一の時点のBPTFのレベルを、第二の時点のレベルと比較するステップ、及び
(vi)2つの時点のBPTFのレベルにおける変化に基づいて、被験体の生存率の予後判断を提供するステップであって、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける増加によって、被験体について低い生存率が示され、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける減少によって、被験体についてより良好な生存率が示される、ステップ
を含む、方法。
(19)ガンが、黒色腫、乳ガン及び脳腫瘍からなる群より選択される、(18)に記載の方法。
(20)生物学的サンプルが、組織生検からのものである、(18)に記載の方法。
(21)被験体におけるガンを治療する方法であって、有効量のBPTF阻害性核酸、及び/又はBPTFの発現を阻害する有効量の薬剤を投与することによって、BPTFの発現を阻害するステップを含む、方法。
(22)ガンが、黒色腫、多形性膠芽腫及び乳ガンからなる群より選択される、(21)に記載の方法。
(23)BPTFの発現の阻害が、ガン細胞の増殖若しくは移動の阻害又は阻止をもたらす、(21)に記載の方法。
(24)1つ以上の追加の抗ガン治療剤と組み合わせて使用される、(21)に記載の方法。
(25)1つ以上の追加の治療剤が、白金類似体、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アンドロゲン、抗副腎剤、抗アンドロゲン剤、抗生物質、抗エストロゲン剤、アロマターゼ阻害4(5)-イミダゾール、代謝拮抗物質、葉酸類似体、エチレンイミン及びメチラメラミン、葉酸補給薬、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、プリン類似体、ピリミジン類似体、トポイソメラーゼ阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、抗ガン抗体、化学療法剤、脱メチル化剤、及び標的化治療剤からなる群より選択される、(24)に記載の方法。
(26)BPTF阻害性核酸を含むベクターを被験体に投与するステップを含む、(21)に記載の方法。
(27)ベクターが発現ベクターを含む、(26)に記載の方法。
(28)ベクターが、複製可能なレトロウイルスベクターを含む、(26)に記載の方法。
(29)BPTF阻害剤及び第一選択抗ガン治療剤を含む、組成物。
C8161.9及び1205-Luヒト黒色腫並びにB16-F10マウス黒色腫細胞を、記載されるように得た(Bagheri et al., 2006; Dar et al., 2011)。U251及びLN18膠芽腫細胞株を、ATCC(Manassas, VA)から購入した。C8161.9細胞を、5%胎児ウシ血清(FBS)(Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)を有するDMEM/F12中で増殖させ; 1205-Lu細胞を、TU2%培地中で増殖させ; B16-F10細胞を、5% FBSを有するRPMI-1640中で増殖させた。U251及びLN18を、5% FBSを有するDMEM中で増殖させた。全ての細胞を、5% CO2を含有する大気中で37℃にて増殖させた。一過的トランスフェクションを、リポフェクタミン-2000(Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)によって製造業者のプロトコールにしたがって実施した。
プラスミドpcMV6-BPTF、pcMV6-Entry及びBPTF標的化shRNAベクターセット(4クローン)pGFP-V-RSを、Origene(Origene Technologies Rockville MD)から購入した。BPTF shRNA 1及びBPTF shRNA 2を、マウス細胞株に対するこのセットから使用した。BPTFを標的化するレンチウイルスベースのshRNAベクターセット(5クローン)(RHS4533_NM_0059、参照により本明細書に組み込まれる)を、Openbiosystems(Lafayette, CO)から購入した。
RNA抽出及びcDNA合成を、当技術分野で一般的な技術を用いて実施した。
mRNAを、TaqMan遺伝子発現アッセイを用いて製造業者の説明書(Applied Biosystems)にしたがってアッセイした。BPTF、HPRT1、CCND2、BCL-XL、TWIST1、RAB14、CEBPB、CHI3L1、DLL3、OLIG2、PDGFRA及びBCL2に対するTaqManプローブを、Applied Biosystems(Foster City, CA)から購入した。
当技術分野で一般的な技術を用いて、記載されるように、細胞生存性及びコロニー形成を実施し、細胞周期解析を実施した。細胞を、様々な濃度のベムラフェニブで72時間、又はダブラフェニブ(Chemitek, Indianapolis, IN)で48時間又は示されるように処理した。DMSOをビヒクルとして使用した。
ウエスタンブロット解析を実施した。標的タンパク質を、BPTF(Bethyl Laboratories Montgomery, TX)、BCL2、及びGAPDH(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)、並びにERK1/2、pERK1/2、CCND2、BCL-XL、p90RSK(Cell Signaling Technology, Danvers, MA)に対する特異的抗体を用いて検出した。
pLKO1-ベクターにクローニングされた選択したshRNAを、GAG/POL、REV及びVSVG遺伝子を含有する発現ベクターと共に、293T細胞に共トランスフェクションした。レンチウイルスを、トランスフェクションの48時間後に回収した。サブコンフルエントのヒト黒色腫又は膠芽腫細胞を、8μg/mlのポリブレンの存在下でそれぞれの回収したレンチウイルスで感染させ、各培養培地中で感染後48時間に1μg/mlのピューロマイシン中で選択した。B16-F10細胞を、BPTF shRNA1、BPTF shRNA 2又はNeg shRNAベクターでトランスフェクションし、安定な形質転換体を2μg/mlのピューロマイシンで選択した。
腫瘍侵襲についてのマトリゲル(Matrigel)アッセイを、日常的な技術を用いて実施した。B16-F10、1205-Lu及びC8161.9細胞について、挿入チャンバーを、6mg/mlタンパク質にて15μlのマトリゲルでコーティングし、C8161.9細胞については7mg/mlタンパク質にて17μlのマトリゲルで、1205-Lu及びU251細胞株については5mg/mlタンパク質にて15μlのマトリゲルでコーティングした。
細胞を、回収し、氷冷した溶解バッファー(100mM KCL、50mM Tris-CL [pH 7.9]、50% [vol/vol] グリセロール、200mM β-メルカプトエタノール及び5mM MgCl2)中に再懸濁し、10分間インキュベートした。懸濁液を4℃にて15分間13,000gでの遠心分離に供し、細胞をバッファーA(50mM Tris-Cl [pH 7.9]、3mM MgCl2、0.2mM フッ化フェニルメタンスルホニル、100mM NaCl、及び1mM ジチオスレイトール)に再懸濁することによって、溶解した細胞から核を回収した。核を、バッファーA中で室温にて3分間DNase Iで消化した。次いで、サンプルをプロテイナーゼKで処理し、DNAをQIAGEN PCR精製キット(Qiagen, Valencia, CA)を用いて回収した。DNase処理したDNAを、BCL2及びBCL-XLに対する特異的プライマーを用いたqPCRに供した。
用いた組織マイクロアレイは、パラフィンブロックから得たコア径1.0mmを用いて以前に作製した。スライドを、ホルマリン固定組織マイクロアレイから調製し、1:100希釈にて抗ヒトBPTF抗体(Bethyl Laboratories Montgomery, TX)で染色した。マイクロウェーブ抗原回収(retrieval)を10mM クエン酸バッファー、pH 6.0中で行った。内因性のペルオキシダーゼを3% H2O2でブロックし、さらなるブロッキングを通常のウサギ血清で実施した。一次抗体をPBS中の1.0% BSA中に希釈し、4℃で一晩適用した。抗体染色を、ビオチン標識抗ヤギIgG及びアビジン-ビオチン(Vector Laboratories, Burlingame, CA)、その後ジアミノベンジジンを用いることによって観察した。切片をヘマトキシリンで対比染色した。
組織マイクロアレイ切片の全体スライド画像を、Mirax MIDI高解像度スキャニングシステム(Carl Zeiss Micro Imaging, Jena, Germany)を用いて撮った。デジタル化プロセスを、Zeiss Plan-Apopchromat 20x/.8NA対物(Carl Zeiss Optronics GmBh, Oberkochen, Germany)を用いてMarlin CCDカメラ(Allied Vision Technologies GmbH, Germany)を使用してソフトウェアによって制御し、.32ミクロン/ピクセルの解像度で画像を作製した。同定可能なメラノサイト病変を有する領域を評価のために選択し、免疫組織化学的染色を、核(ヘマトキシリン染色した)及び細胞質(茶色免疫染色した)を認識する2種の異なるフェーズ測定マスク(phase measurement mask)を有するセグメンテーション特性を適用することによって計算した。画像解析を、コンピュータによって補助される色セグメンテーションによって実施し、陽性色発現ピクセルのパーセンテージを決定した。各陽性ピクセルについて、強度(赤、緑及び青色値の平均として定義される)を、続く解析のために計算した。黒色腫アウトカムにおける様々な予後因子の有意性を評価するために使用した統計的方法は、以前記載された(Bagheri et al., 2006)。
全RNAを、RNeasyキット(Qiagen, Valencia, CA)を用いて細胞から抽出した。10μgの全RNAを、ユニバーサルマウス参照RNA(Stratagene, Santa Clara, CA)と並行して、SuperScript II逆転写酵素(Invitrogen)を用いる、オリゴ(dT)によってプライムした重合によってアミノアリル修飾cDNAに変換し、Cy3又はCy5のN-ヒドロキシスクシンイミジルエステル(Amersham Pharmacia, Pittsburgh, PA)にカップリングさせ、次いで記載されたように(Haqq et al., 2005)マイクロアレイスライドにハイブリダイズさせた。線形正規化、対数(底2)変換、及び教師あり(supervised)階層的クラスタリングの後、得られたクラスターデータ表を、マイクロアレイソフトウェアパッケージの有意性解析に送った。5%の予測擬陽性が含まれるように、デルタを、アウトプット遺伝子リストを制限するために選択した。
BACクローンRP11-304I14、RP11-1134M2、RP11-29C18及びCTD-2314M10を用いて、17q24.3上のBPTF遺伝子座を検出した(2009年2月 UCSC Genome Browser, http://genome.ucsc.eduのフリーズ)。全てのクローンを、Children's Hospital of Oakland Research Institute (CHORI)から得た。BAC DNAを、Large-Constructキット(Qiagen, Valencia, CA)を用いて調製し、記載されたように(Wiegant and Raap, 2001)Alexa Fluor 488 dUTP(Molecular Probes, Green Island, NY)を用いてニック翻訳によって標識した。組織解析前に、全てのプローブの質及びマッピングを、染色体17に対する市販のセントロメアプローブ(Openbiosystems, Lafayette, CO)と組み合わせた、通常の中期スプレッド(metaphase spread)に対するハイブリダイゼーションによって確かめた。組織切片に対するハイブリダイゼーションを、以前記載されたように実施した(Wiegant and Raap, 2001)。画像を、Axiovisionソフトウェア(Zeiss, Jena, Germany)によって制御されるZeiss Axio Imager Z2を用いて得た。
FISHシグナルを評価し、いくつかのZスタック層を有する画像から手動で数えた。各症例から最低30個の核を評価し、シグナルを以前に記載されたガイドラインにしたがって解釈し(Munne et al., 1998)、2、3、4又はそれ以上として記録した。
全ての動物ケアは、Animal Research and California Pacific Medical Center Research InstituteにおけるUniversity of California San Francisco Committeeによって承認された組織ガイドライン及びプロトコールにしたがった。45日齢の雌C57Bl/6(Charles River)の群を、尾静脈注射によって30,000個のB16-F10 BPTF安定細胞で接種した。1x106個の1205-Lu細胞をヌードマウスの尾静脈に注射した。皮下注射について、1x106個の1205-Lu、B16-F10、若しくはC8161.9細胞並びに2x106個のU251細胞をそれぞれ注射した。
全ての定量データは、少なくとも3重のサンプルの平均を、又は示されるように表す。エラーバーは、平均の標準偏差を表す。統計的有意性を、Studentのt検定又はMann-Whitney検定によって決定し、両側p値<0.05を有意と見なした。
黒色腫におけるBPTFの機能的役割を、B16-F10マウス黒色腫モデルにおいてshRNA媒介性標的化を用いて最初に評価した。BPTF発現は、定量的リアルタイムPCR(qRT-PCR)によって決定されるように、2種の異なる抗BPTF shRNA(1及び2)によって顕著に抑制された(図1A)。BPTF発現のshRNA媒介性抑制は、対照shRNAと比較した場合、B16-F10細胞の増殖能を大きく抑制した(図1B)。BPTF shRNA発現細胞はまた、対照shRNA発現細胞と比較した場合、マトリゲル(Matrigel、登録商標)への侵襲の有意な低下を示した(図7A)。BPTF shRNA発現細胞の皮下注射は、腫瘍細胞成長における有意な抑制を示した(図1C)。C57Bl/6マウスにおけるBPTF shRNAの静脈内接種は、肺における転移性腫瘍カウントの高度に有意な低下を示した(図1D)。これらの結果は、黒色腫の増殖及び転移能におけるBPTFの重要な役割を実証する。
マウス黒色腫細胞におけるBPTFについての機能的役割を実証したため、ヒト黒色腫の進行における役割を解析した。マウス研究で使用したものとは異なるshRNA(BPTF shRNA 3)を用いたBPTFの標的化は、突然変異体BRAFを有する1205-Luヒト黒色腫細胞におけるBPTF発現の顕著な抑制をもたらした(図2A)。BPTFの抑制は、G1/G0細胞周期停止を導き、対照shRNAベクターと比べた場合、S期の顕著な短縮をもたらした(図2B)。BPTFノックダウンは、細胞生存(図2C)及びコロニー形成能(図2D、p<0.02)の抑制によって証明されるように、黒色腫細胞の増殖能に有意な影響を有し、1205-Lu細胞のアポトーシス指数の顕著な増加を伴った(図2E、p<0.02)。黒色腫細胞の増殖及び生存に対する同様の影響が、ヒトBPTFを標的とする2種の他のshRNAを用いて観察された。BPTFの抑制はまた、マトリゲル(Matrigel、登録商標)への1205-Lu侵襲性の有意な減少を導いた(図7B)。ヌードマウスにおける皮下腫瘍細胞成長は、対照shRNA発現細胞と比べて、BPTF shRNA発現細胞において、大幅に抑制された(図2F)。最後に、1205-Lu細胞を静脈内接種すると、BPTF発現の抑制は、ヌードマウスの肺において転移性腫瘍負荷の66%の低下をもたらした(図2G)。これらの抗腫瘍効果は、野生型BRAFを有する、高度に悪性(aggressive)のC8161.9黒色腫細胞株においてBPTFのshRNA媒介性抑制後に確かめられた(図8A〜E)。まとめると、これらの研究は、BPTFが、BRAF野生型及び突然変異体の両方の黒色腫細胞株の増殖及び転移能の促進において重要な役割を果たすことを実証する。
BPTFの切断型であるFAC1は、配列特異的DNA結合活性を示す。BCL2及びBCL-XLのプロモーター領域の解析は、BPTFについて可能性のあるコンセンサス配列の存在を示した。これらの遺伝子のプロモーター領域におけるDNase I処理の感受性を、対照対BPTF shRNAを安定に発現する2種のヒト黒色腫細胞株において評価した。DNase I過感受性は、転写因子結合、又はヌクレオソーム位置決定若しくはパッキングにおける変化に起因し得る(Gross and Garrard, 1988)。qPCR解析を用いて、BCL2及びBCL-XL内の推定BPTF結合部位を含有するDNA領域を定量し、これが、BPTF shRNAを発現する1205-Lu及びC8161.9の両方のヒト黒色腫細胞において大幅に低下したレベルで存在することが見出された(図3A〜B)。したがって、BCL2及びBCL-XLのプロモーター領域は、低下したBPTF発現を有するヒト黒色腫細胞においてDNase I処理に対して感受性の増加を示した。次いで、BPTF shRNA発現後に、ヒト黒色腫細胞におけるmRNAレベルでのこれらの遺伝子の下方制御を確かめた(図3C〜D)。これらの遺伝子は生存促進(pro-survival)経路を媒介するため、BPTF発現によって調節される増殖性シグナル伝達経路を調べ、BPTF shRNA発現黒色腫細胞におけるpERK1/2(Thr202/Tyr204)のレベルの大幅な抑制が観察された(図3E〜F)。pERKの下流標的であるp90RSK(Ser380)もBPTFノックダウンによって抑制された。ERK経路のさらなるエフェクターを表すBCL2及びBCL-XL(Boucher et al., 2000)も、1205-Lu及びC8161.9ヒト黒色腫細胞において、CCND2に加えて、BPTFノックダウンによって調節された(図3E〜F)。BPTF shRNAを安定に発現する黒色腫細胞におけるERK1/2又はBCL-XLのいずれかのcDNAの過剰発現は、BPTFノックダウン後に細胞生存の抑制を逆転させ(reverse)、このことは、BPTFの増殖促進機能がERK1/2及びBCL-XLによって少なくとも部分的には媒介されることを示す(図9)。
マウス及びヒト黒色腫の増殖及び転移の促進におけるBPTFの機能的役割を決定したため、BPTF発現の免疫組織化学的解析を、311人のヒト黒色腫患者の組織マイクロアレイコホートにおいて実施し(Rangel et al., 2006)、デジタル画像解析を用いてBPTFレベルを定量した(図11)(Kashani-Sabet et al., 2009)。カプラン・マイヤー解析によって、高レベルのBPTF発現は、遠隔転移のない生存(DMFS、p=0.03、図4A)及び疾患特異的生存(DSS、p=0.008、図4B)の低下を顕著に予測した。多変量Cox回帰分析によって、BPTF発現の増加は、DMFS(表1)及びDSS(表2)の独立した予測因子であった。したがって、BPTF過剰発現は、ヒト黒色腫における遠隔転移の発達及び生存の低下と直接相関し、生存の独立した予測因子であった。
ERK1/2は、MAPキナーゼ経路内のBRAFの下流標的であり、選択的BRAF阻害剤での処理後に顕著に抑制される(Greger et al., 2012; Joseph et al., 2010)。ヒト黒色腫細胞におけるBPTFのshRNA媒介性抑制後の活性化ERK1/2の下方制御を考えて、BPTF発現のレベルを、選択的BRAF阻害剤に対する感受性を決定するために評価した。BPTF shRNA発現1205-Lu細胞は、対照shRNA発現細胞と比べて、ベムラフェニブ処理に対して3.2倍感受性であり(図5A)、ダブラフェニブ処理に対して2.8倍感受性であった(図5B)。逆に、1205-Lu細胞におけるBPTFの過剰発現は、ベムラフェニブ又はダブラフェニブ処理に対するそれらの感受性を顕著に低減した(それぞれ2.5〜3.4倍)(図5C〜D)。BPTF発現の調節後におけるヒト黒色腫細胞の選択的BRAF阻害に対する感受性の調節を、BRAF突然変異体発現LOX細胞株において確かめた(図12)。
BPTFが他の固形腫瘍の進行に関与したかどうかの調査を実施した。メラノサイトは胎児の神経堤に由来するため、そして、BPTF発現はヒト胎児脳に豊富にあるため(Bowser et al., 1995)、これもまた神経外胚葉起源であるGBMの進行におけるBPTFの機能的役割を決定することを目的とした実験を実施した。U251ヒトGBM細胞におけるBPTF shRNA 3によるBPTF発現の安定な抑制(図6A)は、細胞生存(図6B)及びコロニー形成(図6C)のアッセイによって決定されるように、増殖の顕著な低下をもたらした。BPTF発現の抑制は、S期における同時抑制を伴い(図6D、p<0.01)、顕著なG1/G0細胞周期停止、及びアポトーシスの誘導(図6E、p<0.02)を導いた。BPTF抑制はまた、U251細胞の侵襲性を有意に低減した(図7C)。BPTFノックダウンは、GBM細胞においてBCL2、BCL-XL及びCCND2の発現の抑制をもたらし(図6F〜G)、リン酸化ERK1/2及びp90RSKの顕著な抑制を伴った(図6G)。in vivo研究は、BPTF抑制時の皮下接種後にU251腫瘍細胞成長の高度に有意な低下を示した(図6H)。LN18細胞におけるBPTF細胞の抑制後に同様の影響が観察された(図14)。したがって、これらの結果は、黒色腫細胞において同定されたのと類似した遺伝子及び経路を活性化することによる、膠芽腫進行の促進におけるBPTFの機能的役割を実証する。
Claims (24)
- 黒色腫の予後を決定する方法であって、以下:
(i)被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(ii)被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを、1つ以上の対照生物学的サンプルからのBPTFの平均レベルと比較するステップ、及び、
(iii)対照におけるBPTFの平均レベルと比較して、BPTFについてより高いレベルを有することに基づいて、被験体が黒色腫を有し得るという予後の決定を提供するステップ
を含む、前記方法。 - 被験体の生物学的サンプルが、組織生検からのものである、請求項1記載の方法。
- 1つ以上の対照生物学的サンプルが、良性母斑の組織生検からのものである、請求項1又は2記載の方法。
- 対照生物学的サンプルが、被験体に由来するサンプルを含む、請求項3記載の方法。
- 対照生物学的サンプルが、被験体に由来しないサンプルを含む、請求項3記載の方法。
- 被験体が黒色腫を有するかどうかを決定する方法であって、以下:
(i)被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(ii)被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを、1つ以上の対照生物学的サンプルからのBPTFの平均レベルと比較するステップ、及び、
(iii)対照におけるBPTFの平均レベルと比較して、BPTFについて有意により高いレベルを有することに基づいて、被験体が黒色腫を有するかどうかを決定するステップ
を含む、前記方法。 - 被験体の生物学的サンプルが、組織生検からのものである、請求項6記載の方法。
- 1つ以上の対照生物学的サンプルが、良性母斑の組織生検からのものである、請求項6又は7記載の方法。
- 対照生物学的サンプルが、被験体に由来するサンプルを含む、請求項8記載の方法。
- 対照生物学的サンプルが、被験体に由来しないサンプルを含む、請求項8記載の方法。
- 被験体における黒色腫が進行中であるか又は寛解期にあるかを決定する方法であって、以下:
(i)第一の時点からの被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(ii)第二の時点からの被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)第一の時点のBPTFのレベルを、第二の時点のBPTFのレベルと比較するステップ、及び、
(iv)2つの時点のBPTFのレベルにおける変化に基づいて、黒色腫が進行中であるか又は回復期にあるかを決定するステップであって、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける減少によって、黒色腫が寛解期にあることが示され、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける増加によって、黒色腫が進行中であることが示される、ステップ
を含む、前記方法。 - 生物学的サンプルが、組織生検からのものである、請求項11記載の方法。
- 第一の時点と第二の時点との間で、被験体は抗ガン治療剤の投与を受けている、請求項11又は12記載の方法。
- 第一の時点と第二の時点との間でBPTFレベルが増加した場合に、被験体にBPTF阻害剤を投与することの判定を補助するステップをさらに含む、請求項11〜13のいずれか1項記載の方法。
- 黒色腫を有する被験体の生存率の予後の決定を提供する方法であって、以下:
(i)第一の時点からの被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(ii)第二の時点からの被験体の生物学的サンプル中のBPTFのレベルを測定するステップ、
(iii)第一の時点のBPTFのレベルを、第二の時点のBPTFのレベルと比較するステップ、及び、
(iv)2つの時点のBPTFのレベルにおける変化に基づいて、被験体の生存率の予後の決定を提供するステップであって、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける増加によって、被験体について低い生存率が示され、第一の時点と第二の時点との間のBPTFレベルにおける減少によって、被験体についてより良好な生存率が示される、ステップ
を含む、前記方法。 - 生物学的サンプルが、組織生検からのものである、請求項15記載の方法。
- 被験体における黒色腫の治療において使用するための薬剤であって、前記薬剤がBPTFの発現を阻害する有効量のBPTF阻害性核酸である、前記薬剤。
- BPTFの発現を阻害する薬剤が、ガン細胞の増殖若しくは移動を阻害又は阻止する、請求項17記載の薬剤。
- 1つ以上の追加の抗ガン治療剤と組み合わせて使用される、請求項17又は18記載の薬剤。
- 1つ以上の追加の抗ガン治療剤が、白金類似体、アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アンドロゲン、抗副腎剤、抗アンドロゲン剤、抗生物質、抗エストロゲン剤、アロマターゼ阻害4(5)-イミダゾール、代謝拮抗物質、葉酸類似体、エチレンイミン及びメチラメラミン、葉酸補給薬、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、プリン類似体、ピリミジン類似体、トポイソメラーゼ阻害剤、チミジル酸合成酵素阻害剤、抗ガン抗体、化学療法剤、脱メチル化剤及び標的化治療剤から成る群より選択される、請求項19記載の薬剤。
- 前記薬剤がBPTF阻害性核酸を含むベクターである、請求項17〜20のいずれか1項記載の薬剤。
- ベクターが発現ベクターを含む、請求項21記載の薬剤。
- ベクターが、複製可能なレトロウイルスベクターを含む、請求項21記載の薬剤。
- RNAi分子を含むBPTF阻害剤と第一選択抗ガン治療剤とを含む、黒色腫の治療のための組成物。
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