CN105848677B - 在治疗尘螨过敏症中的肽组合及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及肽或其变体的组合，其中所述的肽或其变体衍生自房尘螨过敏原(例如过敏原Der p 1、Der f 1、Der p 2和/或Der f 2)的氨基酸序列的一部分。此类肽包含至少一种T细胞表位，并且在全世界的人群中，极大量的患者都具有潜在地与所述的肽的组合中的肽结合的HLA等位基因。本发明还涉及此类肽的组合在减轻由尘螨导致的免疫应答中的用途。

Description

在治疗尘螨过敏症中的肽组合及其用途
技术领域
本发明涉及由房尘螨过敏原衍生的肽的组合物，使用这种调控免疫应答的组合物的方法，用于治疗受试对象的过敏反应和/或在受试对象中诱导或促进免疫耐受，以及诊断方法和试剂盒。
背景技术
对尘螨的过敏症影响了世界大部分地区的人群。最普通的尘螨是欧洲房尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和美洲房尘螨(Dermatophagoides farinae)，它们分别包含主要过敏原Der p 1/Der p 2和Der f 1/Der f 2。其他普通的尘螨在世界的亚热带/热带地区发现，例如包含主要过敏原过敏原Blo t 1和Blo t 2的热带无爪螨(Blomiatropicalis)和包含主要过敏原过敏原Eur m 1和Eur m 2的埋内欧螨(Euroglyphusmaynei)。
目前，使用基于完全的、完整的或修饰的过敏原的过敏原特异性免疫疗法产品实施尘螨过敏症的治疗，其中所述的产品通常以由尘螨制得的复合提取物的形式施用。通常，通过皮下注射或通过舌下途径在延长的时期内(通常是几个月或几年)将所述的产品施用受试对象，并且目前认为所述的产品诱导了受试对象的“耐受”状态。认为其作用机制涉及IgG抑制抗体的诱导、巨细胞/嗜碱细胞反应性的抑制、T细胞应答的抑制、T细胞无反应性的促进、和/或克隆清除，并且就长期而言，降低过敏原特异性IgE的水平。
不幸的是，过敏原特异性免疫疗法具有IgE介导的不利事件的风险，包括严重的过敏反应。因此，与实际上已经证明所述的治疗的有利作用不同，该治疗并未广泛地提供给过敏受试对象。近年来，已经表明使用过敏原(例如主要过敏原)的一级氨基酸序列的较小的片段(肽)治疗过敏症，其中所述的片段包含被调控过敏反应的T细胞识别的一个或多个表位。这种概念被称为肽免疫疗法(PIT)，其中通过皮内注射将重复剂量的肽施用受试对象(Moldaver and Larche 2011)。
在分子水平上，更具体而言，肽被抗原提呈细胞(APC)表面上的II类人类白细胞抗原(HLA)结合。随后，这种肽-HLA复合物被T细胞的细胞表面上的特异性T细胞受体识别，其中所述的T细胞在于APC相互作用时被活化。肽基免疫疗法和基于全长过敏原的治疗的主要差异在于认为这种相互作用在未引起伴随的抗体介导的“危险信号”情况下发生。在更耐受的方向下，认为上述情况驱动了T细胞应答。
肽基免疫疗法(PIT)代表了过敏原提取物的潜在的有吸引力的备选方法，其比现有的治疗具有更有利的安全性/耐受性概况和明显更短的治疗方案。与基于完整的过敏原的治疗相反，由于肽比过敏原的尺寸更小而缺乏抗体的表位的原因，所以PIT单独地解决了免疫系统的T细胞隔间(compartment)，而不会引起现有的抗体应答。因此，预计没有IgE介导的不利事件，但是当使用传统的过敏原基免疫疗法产品治疗过敏症时经常见到这种不利事件。目前，肽免疫疗法处于临床研发中，并且似乎具有超过完全过敏原基疫苗的有利的安全性概况。
但是，使用包含T细胞表位的肽的缺点与各种肽仅结合人群中天然形成的II类HLA分子的子集的这种限制有关。因此，涵盖不同的II类HLA等位基因的多种肽的混合物强制性地形成广泛起作用的免疫疗法过敏症的治疗。由于这种II类HLA等位基因的清单在人与人之间以及一个种群与另一个种群之间是不同的，所以具有挑战的是提供可以向世界上任何地理区域的过敏受试对象提供肽基免疫疗法，而并非在疫苗中包含大量的肽。考虑到新疫苗的临床研发中的巨大成本和风险，以及管理结构对毒性检验、剂量调节、安全性和效力试验满足高标准的要求增加，理想的是提供包含尽可能较少的肽的肽疫苗，但是同时能够使用该免疫疗法产品治疗全世界人群中大多数的尘螨过敏受试对象。此类产品应该包含肽的组合，所述的肽能够以组合方式结合全世界的II类HLA等位基因清单，并且所得的肽-HLA复合物在受试对象中应该识别为T细胞表位，从而诱导耐受性免疫应答。近来，小鼠中的研究表明单独使用一种肽的肽免疫疗法不能降低过敏气道炎症的严重性，但是至少需要使用2种肽治疗小鼠，其中所述的肽与待治疗的小鼠的MHC分子匹配(Mackenzie KJ et al2013)。
各个国际专利申请WO93/08280、WO94/24281、WO95/28424、WO2009/022156、WO95/28424和WO2010/018384，以及美国申请US20130302338涉及房尘螨过敏原的肽，以及它们在治疗房尘螨过敏症中的用途。
发明概述
本发明人发现组装由几种肽(例如3种、4种、5种或6种肽)组成的肽组合是可行的，所述的肽组合具有覆盖极大部分世界人群的II类HLA等位基因清单，并且在对防尘满过敏的极大部分供者人群中还产生T细胞应答。
本发明提供了多种包含肽组合的组合物，其中所述的肽组合具有高的世界II类HLA等位基因覆盖率。如本文所公开，此类肽组合可以通过以下过程组装：首先提供一组包含T细胞表位的肽(例如如实施例3中所公开)，然后评估包含单个T细胞表位的肽(例如如实施例10中所公开)的II类HLA等位基因覆盖率，接着将多种肽与不同的HLA等位基因结合，从而覆盖世界人群的II类HLA等位基因清单(例如如实施例6中所公开)，然后在合格的供者人群中(例如实施例2中所公开)证实所提出的肽组合在大部分的人群中能够产生T细胞应答(例如实施例7中所公开)。
因此，本文提供了在对房尘螨过敏原的过敏症的治疗中，用作“过敏症疫苗”的肽的组合(在下文中还称为“肽组合”或“肽混合物”)，所述的肽的组合适合用于大部分的世界人群。针对本文公开的肽组合所选择的肽衍生自房尘螨过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和Der f 2、以及可任选的Der p 4中的一种或多种，并且显示在许多供者中产生T细胞应答，并具有令人满意的高的世界II类HLA覆盖率。应该理解的是本文公开的肽组合的肽主要是衍生自不同地区的房尘螨过敏原的不同的肽，可任选地其中一种不同的肽的氨基酸残基与另一种不同的肽的一些氨基酸残基重叠，例如与少于13个(例如少于12、11、10或9)氨基酸残基重叠。表9和10报告了显示在大部分的供者人群中产生T细胞应答的肽(“高应答者肽”—由图1至8得到)，并且其中多种肽由多组不同的肽中收集得到。
因此，在第一个方面中，本发明涉及包含至少3种肽的组合物，其中所述的组合物包含选自以下肽组的至少3个组的肽：
组26：氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)、269(pep-125)、70(pep-099)或253(pep-012)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:223、247、224、248)；
组24：氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)、67(pep-096)、79(pep-108)、256(pep-031)或270(pep-126)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:279、241)；
组14：氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)或22(pep-054)的亲本肽；或者其变体；
组1：氨基酸序列SEQ ID NO:90的亲本肽；或者其变体；
组2：氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:98)；
组3：氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:99)；
组4：氨基酸序列SEQ ID NO:10(pep-042)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID No:259、102、161、281、282)；
组5：氨基酸序列SEQ ID NO:11(pep-043)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:103、281、282)；
组6：氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:105、283、106)；
组7：氨基酸序列SEQ ID NO:42(pep-072)或249(pep-022)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:166)；
组8：氨基酸序列SEQ ID NO:15(pep-047)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:111、270、112)；
组9：氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)、255(pep-025)、46(pep-075)或17(pep-049)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:271、114、173、115、174)；
组10：氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)、258(pep-122)或267(pep-124)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:117、176)；
组11：氨基酸序列SEQ ID NO:120的亲本肽；或者其变体；
组12：氨基酸序列SEQ ID NO:20(pep-052)或49(pep-078)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:121、180)；
组13：氨基酸序列SEQ ID NO:21(pep-053)的亲本肽；或者其变体；
组15：氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)或23(pep-055、272)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID No:273、128、187、129、188)；
组16：氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:133、192、274、191)；
组17：氨基酸序列SEQ ID NO:29(pep-061)、58(pep-087)、251(pep-10)或252(pep-011)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:140、199)；
组18：氨基酸序列SEQ ID NO:71(pep-100)的亲本肽；或者其变体；
组19：氨基酸序列SEQ ID NO:72(pep-101)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:60(pep-089)、227)；
组20：氨基酸序列SEQ ID NO:61(pep-090)、73(pep-102)或276的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:277、205、229、206、230)；
组21：氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:208)；
组22：氨基酸序列SEQ ID NO:63(pep-092)或278的亲本肽；或者其变体(例如SEQID NO:222、210)；
组23：氨基酸序列SEQ ID NO:77(pep-106)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:238)；以及
组25：氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:221、245、246)。
在第二个方面中，本发明提供了包含本文所定义的组合物的药物组合物。
在第三个方面中，本发明提供了在有需要的受试对象中，减轻或降低(例如治疗)由尘螨(例如房尘螨)的过敏原免疫触发的应答的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的本文所述的组合物。
在另一个方面中，本发明提供了在有需要的受试对象中，减轻免疫由尘螨的过敏原触发的应答的一种或多种症状的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的本文所述的组合物。
在另一个方面中，本发明提供了诱导针对尘螨的过敏原的免疫耐受的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的本文所述的组合物。
在其他的方面中，本发明涉及本文所定义的组合物在本文所定义的方法中使用，例如本文所定义的组合物用于在有需要的受试对象中，减轻由尘螨的过敏原触发的免疫应答；用于在有需要的受试对象中，减轻由尘螨的过敏原触发的免疫应答的一种或多种症状；和/或用于在有需要的受试对象中，减轻针对尘螨的过敏原的免疫耐受。
在其他的方面中，本发明涉及本文所定义的组合物在制备药物中的用途，所述药物在本文所定义的方法中使用，例如本文所定义的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在有需要的受试对象中减轻由尘螨的过敏原触发的免疫应答的；用于在有需要的受试对象中减轻由尘螨的过敏原触发的免疫应答的一种或多种症状；和/或用于在有需要的受试对象中诱导针对尘螨的过敏原的免疫耐受的用途。
在其他的方面中，本发明涉及包含隔间和说明书的试剂盒，其中所述的隔间包含本文所述的组合物，并且其中所述的说明书用于治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症。
在其他的方面中，本发明涉及确定需要治疗的受试对象的T细胞是否识别本文所定义的组合物的方法，其包括将由所述的受试对象得到的T细胞与所述的组合物或其单一的肽接触；以及检测T细胞是否受到所述的组合物或单一肽的刺激。
在另一个方面中，本发明涉及包含本文所定义的组合物的诊断试剂盒。
附图简述
图1：该图显示由Der p 1衍生的重叠的20mers的T细胞识别。图1显示了对给定肽(x轴显示表2中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图2：该图显示由Der f 1衍生的重叠的20mers的T细胞识别。图2显示了对给定肽(x轴显示表2中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图3：该图显示由Der p 2衍生的重叠的20mers的T细胞识别。图3显示了对给定肽(x轴显示表3中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图4：该图显示由Der f 2衍生的重叠的20mers的T细胞识别。图4显示了对给定肽(x轴显示表3中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图5：该图显示由Der p 1衍生的重叠的15mers的T细胞识别。图5显示了对给定肽(x轴显示表4和6中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图6：该图显示由Der f 1衍生的重叠的15mers的T细胞识别。图6显示了对给定肽(x轴显示表4和6中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图7：该图显示由Der p 2衍生的重叠的15mers的T细胞识别。图7显示了对给定肽(x轴显示表5和6中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图8：该图显示由Der f 2衍生的重叠的15mers的T细胞识别。图8显示了对给定肽(x轴显示表5和6中找到的肽ID号)产生应答的供者的份数(y轴＝应答者％)。
图9a：该图显示如实施例3中所述，在体外T细胞增殖测定法中，对肽的组合(表14中所示)产生应答的供者的份数(供者％)。
图9b和9c：该图显示如实施例3中所述，在T细胞测定法中，与肽组合17相比，对肽组合17f产生应答的供者的份数(供者％)。还显示单一肽的T细胞应答，并将它们的累积的计算应答加入至针对肽的组合而测量的应答中。
图9d：该图显示在T细胞测定法中，分别对肽组合编号17f、17l、17p、17q、17s、17t、17u和17v产生应答的计算的应答者％。
图9e：该图显示在T细胞测定法中，对单一肽(pep-058,pep-075,pep-091,pep-110,pep-123,pep-130和pep-131)的子集的应答者％(测量的)，其中使用一小组世界上II类HLA的覆盖率为大约88％的31名供者。
图9f：该图显示在T细胞测定法中，分别对肽组合17p、17s、17f和8、以及仅由肽的pep-110、pep-130和pep-131组成的肽组合的应答者％。
图9g：该图显示对肽组合17p、17s、17f，110+130+131的3-pep-混合物，以及110和131的2-pep-混合物的应答者％(基于单一的肽而计算的)。
图9h：该图显示测试人群的供者能够产生应答的肽组合17p、17s、17f，110+130-131的3-pep-混合物，以及110+131的2-pep-混合物中，肽的平均数。
图9i：该图显示在T细胞测定法中，当使用一小组原始供者人群进行测试时，单一的肽058、075、110、123、130、131，以及肽的组合8的肽(HDM03W、HDM101A、HDM203B、HDM205、HDM26B和HDM35A)的应答者％。
图9j：该图显示在T细胞测定法中，对肽组合17f和8的应答者％。
图9k：该图显示基于使用一小组22名供者(具有大约78％的世界上II类HLA覆盖率)的T细胞测定法的应答者％(其是基于对单一肽至肽组合17p、17s、17f、8，3种肽的组合(110+130+131)，和2种肽组合(110+131)的应答者％而计算的)。
图9l：该图显示在T细胞测定法中，当使用一小组具有大约88％的世界上II类HLA覆盖率的31名供者进行分析时，显示对肽组合17p、17s、17f和8，以及仅由肽pep-110、pep-130和pep-131组成的肽组合产生应答的应答者％。
图10至19：这些图涉及根据实施例10中所公开的价的描述，多种肽组合的价的评估。该图显示患者的有效人群的份数(Y轴＝患者％)，所述的患者具有潜在地分别能够与组合中的0、1、2、3、4和5种肽结合(即，能够产生应答)的II类HLA等位基因(数据用柱显示)。针对以下肽，显示价数据：仅由第1组HDM过敏原Der p 1或Der f 1衍生得到的肽(在x轴上以Grp 1显示)；仅由第2组HDM过敏原Der p 2或Der f 2衍生得到的肽(在x轴上以Grp 2显示)；仅由Der p(即，过敏原Der p 1或Der p 2)衍生得到的肽(在x轴上以Der p显示)和仅由Der f(即，过敏原Der f 1或Der f 2)衍生得到的肽(在x轴上以Der f显示)。最后，针对组合中的所有的肽来评估价(在x轴上以“全部”显示)。该图还显示预测的患者的份数(患者％)，其中所述的患者具有潜在地能够与肽组合中的给定数量的肽或多种肽结合的HLA等位基因(数据点以X显示)。
图10a显示肽组合5的价，其中评估基于表8中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图10b显示肽组合5的价，其中评估基于表8中所示的等位基因的测量的HLA等位基因的覆盖率。
图11a显示肽组合17f的价，其中评估是基于表8中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图11b显示肽组合17f的价，其中评估是基于表8中所示的等位基因的测量的HLA等位基因的覆盖率。
图12a显示肽的组合8的价，其中评估是基于表8中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图12b显示肽的组合8的价，其中评估是基于表8中所示的等位基因的测量的HLA等位基因的覆盖率。
图13显示肽的组合9的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图14显示肽组合17d的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图15显示肽组合17f的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图16显示肽组合17p的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图17显示肽组合17s的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图18显示肽组合17x的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图19显示肽的组合23的价，其中评估是基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。
图20显示预测的肽的平均数，其中实施例10中所示的有效患者人群的患者可以潜在地对所示的肽组合产生应答(即，具有潜在地能够与组合中的肽结合的II类HLA等位基因)，其中评估基于表17中所示的等位基因的预测的HLA等位基因的覆盖率。图20显示患者人群平均能够对被称为“core 2”(肽pep-110+pep-131)的肽组合的1.8个肽产生应答。所述的患者人群平均能够对被称为核心3(肽pep-110,pep-131和pep-130)的肽组合的2.8个肽产生应答，而患者人群可以对被称为Core3_53的3肽组合的2.4个肽(肽pep-110、pep-131和pep-053)。Core 3的肽存在于编号为17f、17p和17s的肽组合中(包含5个肽)，其中所有的肽均包含患者人群可以产生应答的高平均数的肽(分别为3.5、4.6和3.8)。为了比较，所述的肽组合编号8具有患者人群可以产生应答的3种肽。
图21：该图显示由单一基因座得到的HLA等位基因的所选的子集(表8)，其中所述的等位基因独立地存在于15％至97％的世界人群中，并且这些等位基因总体存在于99％的世界人群中。
图22：该图是指多种肽的组合的累积的T细胞应答。该图显示肽组合的T细胞应答频率，其是由实际上单一肽的T细胞应答计算而来的，并与在肽组合上确定的实际的T细胞应答比较。发现在肽组合中的各种肽的累积的单一T细胞应答与肽组合的实际的T细胞应答之间具有高度的相关性，由此表明使用单一的肽应答可以评估其他的所提出的肽组合的T细胞应答具有高度的可能性。
发明详述
以下定义和术语如本文所用：
如本文所用，术语“肽”表示具有序列长度为大约12至30个氨基酸残基的单一的(例如分离的)氨基酸分子。本文所述的肽可以为线性肽，其不包含二级螺旋结构。如本文所用，肽可以为亲本肽或其变体。
如本文所用，术语“亲本肽”表示单一的肽，其代表了单一的肽起源的过敏原的区域，所述的区域包含至少一个T细胞表位，该T细胞表位在本文中报告为在大部分的供者人群中产生体外T细胞应答，并具有广泛的II类HLA覆盖率。在本发明的内容中，氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)、10(pep-042)、11(pep-043)、12(pep-044)、42(pep-072)、254(pep-022)、15(pep-047)、266(pep-123)、255(pep-025)、17(pep-049)、46(pep-075)、18(pep-050)、258(pep-122)、267(pep-124)、20(pep-052)、49(pep-078)、21(pep-053)、268(pep-130)、22(pep-054)、23(pep-055)、52(pep-081)、26(pep-058)、29(pep-061)、58(pep-087)、251(pep-010)、252(pep-011)、272、71(pep-100)、72(pep-101)、60(pep-089)、61(pep-090)、73(pep-102)、249(pep-002)、62(pep-091)、63(pep-092)、77(pep-106)、67(pep-096)、271(pep-131)、79(pep-108)、256(pep-031)、270(pep-126)、81(pep-109)、269(pep-125)、70(pep-099)和82(pep-110)的单一的肽被认为是亲本肽。如本文所示，由与亲本肽相同的过敏原的区域衍生得到的并且与亲本肽的至少15个相邻的氨基酸残基重叠的单一的肽在大部分的供者人群中产生T细胞应答。因此据信，所述的单一的肽属于与亲本肽相同的单一的肽的肽组。
因此，术语“一组肽”或者“肽组”是表示由过敏原的相同区域衍生得到的并且具有与本文定义的亲本肽的氨基酸序列重叠的至少大约14至15个相邻的氨基酸(可任选地具有1、2或3个修饰，例如在14至15个相邻的氨基酸中氨基酸残基的取代或删除)的单一的肽的集合。因此，一组肽包含本文所定义的一个或多个亲本肽及该亲本肽的变体。表9和10提供了亲本肽及其变体的实例。
如本文所用，“表位”是指当施用受试对象时会引起免疫应答的抗原的区域或部分，例如本文所公开的肽。表位可以是T细胞表位，即，引起、刺激、诱导、促进、增加或增强T细胞活性、功能或应答的表位。例如Th2细胞表位。可以分析所关注的任何肽或肽的组合，从而使用任意数量的测定法(例如T细胞增殖测定法、淋巴因子分泌测定法、T细胞非应答性研究等)来确定它们是否包含至少一个T细胞表位。
术语“过敏原”是指由暴露的动物(例如人类)的免疫系统的细胞引起、诱导、刺激或增强免疫应答的抗原。当特异性免疫应答为针对原的增强的敏感性或超敏性的发展时，则抗原为过敏原，但是抗原本身通常是天然有害的。因此，过敏原是特定类型的抗原，其在受试对象中可以导致增强的或增加的敏感性或超敏性的发展。例如过敏原在有倾向的受试对象中可以引起IgE抗体的产生。
本文公开的HLA等位基因使用了更简单的标记(例如DRB1_0101或DPA10102-DPB10101)，分别代表了法定HLA命名，如在网站“HLA Nomenclature”<url:http://hla.alleles.org/>上所示。表达的HLA等位基因的氨基酸序列可以确认为HLA-X*YY:ZZ，其中X表示特定的基因座，例如DRB1基因座。YY为指出等位基因组的2个数字，之前通过血清型定义。ZZ为定义特定HLA蛋白质的2个或3个数字(在本文中通常为2个数字)。因此，特定的β链可以称为例如HLA-DRB1*01:01，并且特定的α-β链对表示为HLA-DPA1*02:01-HLA-DPB1*01:01。
组合物(肽组合)
如本文所公开，本发明的组合物(例如肽组合)包含选自本文所公开的第1肽组至第26肽组的至少3组的至少3种肽。在其他的实施方案中，所述的组合物包含至少4种肽，其中所述的组合物包含选自肽组1至肽组26的至少3或4组的肽。在其他的实施方案中，所述的组合物包含至少5种肽，其中所述的组合物包含选自肽组1至肽组26的至少3、4或5组的肽。在本文所公开的组合物中的附加的肽优选地选自一个或多个肽组，其中在所述的组合物中不包含得自这些肽组的其他的肽。在一些优选的实施方案中，在本文公开的组合物中的肽均得自不同的肽组。在其他的实施方案中，本文公开的组合物包含选自3个不同肽组的各组的最多3种肽，选自4个不同肽组的各组的最多4种肽，选自5个不同肽组的各组的最多5种肽，选自6个不同肽组的各组的最多6种肽，或者选自7个不同肽组的各组的最多7种肽。因此，本发明的组合物可以包含最多3、4、5、6或7种肽。
通过本发明，提供了能够在大部分的供者人群中产生体外T细胞应答的多种肽组合(例如参见图9a，表14)。在某些实施方案中，使用得自肽组3、4、5、6、7、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、24、25和26的肽的集合来组装肽组合。因此，在一些实施方案中，至少3种肽选自以下肽组3、4、5、6、7、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、24、25和26的至少3种。
本发明的组合物可以但不是必须包含选自房尘螨物种美洲房尘螨和欧洲房尘螨的过敏原的肽。此外，本发明的组合物可以但不是必须包含衍生自房尘螨(HDM)第1组过敏原(例如Der p 1和/或Der f 1)和房尘螨(HDM)第2组过敏原(例如Der p 2和/或Der f 2)的单一的肽。在一些实施方案中，所述的组合物包含至少3种肽，其中一种肽衍生自Der p 1或Der f 1，并且另一种肽衍生自Der p 2或Der f 2。
因此，在一些实施方案中，至少一种肽选自肽组1-17的任意一种，这些组代表了衍生自Der p 1和/或Der f 1的肽，例如由选自以下任意一种的氨基酸序列组成的肽：SEQ IDNO:251(pep-010)、252(pep-011)、253(pep-012)、254(pep-022)、255(pep-025)、9(pep-041)、10(pep-042)、11(pep-043)、12(pep-044)、17(pep-049)、18(pep-050)、20(pep-052)、21(pep-053)、22(pep-054)、23(pep-055)、26(pep-058)、29(pep-061)、42(pep-072)、46(pep-075)、49(pep-078)、52(pep-081)、58(pep-087)、258(pep-122)、266(pep-123)、267(pep-124)、268(pep-130)、259(pep-203B)、90、98、99、280、102、161、281、282、103、105、106、283、111、112、284、114、115、173、174、285、117、176、120、121、180、128、129、272、187、188、273、191、133、274、140和199，或它们的变体。
在一些实施方案中，至少一种肽选自肽组18-26的任意一种，这些组代表了衍生自Der p 2和/或Der f 2的肽，例如由选自以下任意一种的氨基酸序列组成的肽：SEQ ID NO:249(pep-002)、253(pep-012)、256(pep-031)、238(pep-066)、60(pep-089)、61(pep-090)、62(pep-091)、63(pep-092)、67(pep-096)、70(pep-099)、71(pep-100)72(pep-101)、73(pep-102)、77(pep-106)、79(pep-108)、81(pep-109)、82(pep-110)、269(pep-125)、270(pep-126)、271(pep-131)、264(pep-26B)、226、275、227、205、206、229、230、192、276、277、208、233、278、210、234、242、243、279、221、245、246、283、223、247、224和248，或它们的变体。在一些实施方案中，至少一种肽选自肽组1-17的任意一组，并且至少一种肽选自肽组18-26的任意一组。
如本文所公开，本发明的组合物向世界人群提供了高的II类HLA的覆盖率。因此，在某些实施方案中，所述的肽组合的肽共同与表8或表17中公开的大部分等位基因结合。例如本发明的肽组合可以共同与28个HLA等位基因的至少20个结合，其中所述的28个HLA等位基因由DPA10201-DPB10101、DPA10103-DPB10201、DPA10103-DPB10301、DPA10103-DPB10401、DPA10103-DPB10402、DPA10202-DPB10501、DPA10201-DPB11401、DQA10501-DQB10201、DQA10501-DQB10301、DQA10301-DQB10302、DQA10401-DQB10402、DQA10101-DQB10501、DQA10102-DQB10602、DRB1_0101、DRB1_0301、DRB1_0401、DRB1_0405、DRB1_0701、DRB1_0901、DRB1_1101、DRB1_1201、DRB1_1302、DRB1_1501、DRB3_0101、DRB3_0202、DRB4_0101和DRB5_0101组成。为了增加II类HLA覆盖率，肽组合的肽可以共同结合28种等位基因的至少21、22、23、24、25、26、27或28个等位基因。在其他的项目中，本发明的肽组合可以共同结合HLA等位基因的至少70％，例如至少75％、80％、85％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％或98％，其中所述的HLA等位基因由DPA10201-DPB10101、DPA10103-DPB10201、DPA10103-DPB10301、DPA10103-DPB10401、DPA10103-DPB10402、DPA10202-DPB10501、DPA10201-DPB11401、DQA10501-DQB10201、DQA10501-DQB10301、DQA10301-DQB10302、DQA10401-DQB10402、DQA10101-DQB10501、DQA10102-DQB10602、DRB1_0101、DRB1_0301、DRB1_0401、DRB1_0405、DRB1_0701、DRB1_0901、DRB1_1101、DRB1_1201、DRB1_1302、DRB1_1501、DRB3_0101、DRB3_0202、DRB4_0101和DRB5_0101组成。
可以使用多种等位基因确定II类HLA覆盖率。例如，肽组合可以共同结合表17中公开的83种HLA等位基因的至少70％，例如HLA等位基因的至少75％、80％、85％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％或98％，其中所述的HLA等位基因由DRB1_0101、DRB1_0102、DRB1_0103、DRB1_0301、DRB1_0302、DRB1_0307、DRB1_0401、DRB1_0402、DRB1_0403、DRB1_0404、DRB1_0405、DRB1_0406、DRB1_0407、DRB1_0408、DRB1_0410、DRB1_0411、DRB1_0417、DRB1_0701、DRB1_0801、DRB1_0802、DRB1_0803、DRB1_0804、DRB1_0806、DRB1_0809、DRB1_0811、DRB1_0901、DRB1_1001、DRB1_1101、DRB1_1102、DRB1_1103、DRB1_1104、DRB1_1106、DRB1_1110、DRB1_1111、DRB1_1128、DRB1_1201、DRB1_1202、DRB1_1301、DRB1_1302、DRB1_1303、DRB1_1304、DRB1_1305、DRB1_1307、DRB1_1311、DRB1_1312、DRB1_1323、DRB1_1331、DRB1_1401、DRB1_1402、DRB1_1403、DRB1_1404、DRB1_1405、DRB1_1406、DRB1_1407、DRB1_1418、DRB1_1419、DRB1_1424、DRB1_1501、DRB1_1502、DRB1_1503、DRB1_1504、DRB1_1506、DRB1_1519、DRB1_1601DRB1_1602、DRB1_1607、DRB3_0101、DRB3_0202、DRB4_0101、DRB5_0101DPA10103-DPB10201、DPA10103-DPB10301、DPA10103-DPB10401、DPA10103-DPB1040、DPA10201-DPB10101、DPA10201-DPB11401、DPA10202-DPB10501、DQA10101-DQB10501、DQA10102-DQB10602、DQA10301-DQB10302、DQA10401-DQB10402、DQA10501-DQB10201和DQA10501-DQB10301组成。
为了组装具有高的II类HLA覆盖率的肽组合，人们可以认为将至少3种肽(独立地选自具有高的世界II类HLA覆盖率的肽，例如表12中显示评级为“A”的肽)相组合。认为这些肽为“高T细胞应答者”，并且还具有高的II类HLA覆盖率。
因此，在一些实施方案中，至少3种肽选自肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的至少3组。此类实施方案的示例性的肽组合示于表14(肽组3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、23、24、25、17、17a、17b、17c、17d、17f、17p、17l、17q、17s、17t、17u、17v和17x)中。如本文所示(例如图9a、9b、9f和9j)，这些肽组在高于65％的供者人群中具有T细胞应答者。特别地，肽组合编号21和22(其不包含单一的肽，该肽得自选自4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的肽组的至少3组)在相当少的供者中产生T细胞应答。肽组合编号22包含得自肽组7、20和17的各组的单一的肽。
因此，在一些实施方案中，所述的组合物不包含得自肽组7的肽，得自肽组20的肽或得自肽组17的肽。具体而言，所述的组合物不包含得自肽组7的肽和得自肽组20的肽作为所述肽中的2种。此外，在一些实施方案中，所述的组合物不包含得自肽组7的肽，得自肽组20的肽和得自肽组17的肽作为所述肽中的3种。
此外，一些肽在水性溶液中溶解性差，例如在目标pH的范围为pH4至8的溶液中，或者一些肽难以合成。因此，为了组装在溶解性和制备性方面不具有特定限制的本发明的肽组合，组合物可以包含至少3种肽，其选自表15中列出的“第一选择肽”的任意。因此，在一些实施方案中，所述的至少3种肽选自肽组9、10、13、14、16、17、20、21、24、25和26的至少3组。
组合物可以包含选自肽组1至26的至少4个、5个、6个或7个肽组的至少4种、5种、6种或7种肽。因此，包含至少3种肽的组合物可以包含选自肽组1-26的任意一组的附加的肽(例如1种、2种、3种或更多的肽)，优选地在所述的组合物中不包含得自所述的肽组的其他的肽。因此，附加的肽可以选自在所述的组合物中未提供的肽组1-26的任意一组。例如在一些实施方案中，组合物可以包含至少4种肽，其中所述的组合物包含选自肽组1至26的至少3个或4个肽组的肽，例如选自肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的至少3个或4个肽组，例如选自肽组9、10、13、14、16、17、20、21、24、25和26的至少3个或4个肽组。在一些实施方案中，组合物可以包含至少5种肽，其中所述的组合物包含选自肽组1至26的至少3个、4个或5个的肽，例如选自4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的至少3个、4个或5个肽组，例如选自肽组9、10、13、14、16、17、20、21、24、25和26的至少3个、4个或5个肽组。
例如可以通过选择得自表15中所公开的任意肽的第一、第二或第三肽来组装肽组合。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)作为所述肽中的1种。示例性的肽组合为表14中所示的组合编号3、4、5、9、10、13、16、18、19、20、23、25、17、17a、17b、17c、17d、17f、17p、17l、17q、17s、17t、17v和17x。此类组合物可以另外包含衍生自HDM的1类过敏原的肽作为所述肽中的1种，例如得自肽组1-17的任一种的肽。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)作为所述肽中的1种，并且包含选自肽组24、17、9和16的任意一组的肽作为所述肽中的1种。示例性的肽的组合为表14中所示的组合编号3、4、5、9、10、16、18、19、20、23、25、17、17a、17b、17c、17d、17f、17p、17l、17q、17s、17t、17v和17x。所述的组合物可以包含独立地选自肽组1-26的任意一组的一种或多种附加的肽，其中在所述的组合物中不包含选自所述的肽组的其他的肽，例如选自肽组3、4、6、9、10、16、17和21。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)以及得自肽组24的肽(例如亲本肽pep-131或其变体)作为所述肽中的2种。示例性的肽组合为表14中所示的组合编号3、5、9、17f、17p、17l、17q、17s、17v和17x。
在一些实施方案中，所述的组合物包含选自肽组1-17的任意一组的第三肽，例如选自肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16和17的任意一组。
如本文所示，包含3种肽的组合物可以在大部分的供者中产生T细胞应答(图9e)。因此，在一些实施方案中，第三肽得自肽组14(例如亲本肽pep-130或pep-054，或其变体)。示例性的肽的组合为表14中所示的组合编号17f、17p、17q、17s和17v。
除了得自肽组26、24和14的任意一组的3种肽以外，所述的组合物可以包含选自肽组1-13、15-23和25的任意一组的附加的肽，例如选自肽组9、16和21的任意一组。因此，在一些实施方案中，所述的组合物包含3、4、5、6或7种肽，其中所述组合物包含得自3个肽组26、24和14的各组的肽，并且额外包含选自肽组9、16和21的任意一组的肽。
在更具体的实施方案中，此类组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、24、14、9和16的各组的肽。例如肽组合17q(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体。
另一个实例为肽组合17f(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体。
在其他一些具体的实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含选自5个肽组26、24、14、9和21的各组的肽。例如所述的肽组17p(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
另一个实例为肽组合17s(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
在其他具体的实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、24、14、16和21的各组的肽。例如所述的肽组17v(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
如所提及的那样，在本发明的一些实施方案中，组合物包含得自肽组26的肽和得自肽组24的肽作为所述肽中的2种。在一些实施方案中，第三肽得自肽组9或者得自肽组21。示例性的肽组合为组合编号17f、17p、17l、17q、17s、17v和17x(表14中所示)。
在一些具体的实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、24、21、9和13的各组的肽。例如所述的肽组合编号17x(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:21(pep-053)的亲本肽或其变体。
在其他的实施方案中，组合物包含包含得自肽组26的肽和得自肽组24的肽作为所述肽中的2种以及得自肽组17的第三肽(例如pep-010或pep-011，或其变体)。示例性的组合物为肽组合编号3、5和9(表14中所示)。因此，组合物可以包含至少3种肽，其中所述的组合物包含得自3个肽组3、5和9的各组的肽。可任选地，附加的肽选自肽组1-16、18-23和25的任意一组，例如肽组3、4、6、9、10、14、16和21。在一些实施方案中，附加的肽选自肽组7和10的任意一组或两组。因此，组合物可以包含3种、4种、5种、6种或7种肽，其中所述的组合物包含得自肽组26、24和17的3组的肽，并且其中附加的肽选自肽组7和10的任意一组。在具体的实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合包含得自5个肽组26、24、17、7和10的各组的肽。示例性的组合物为肽组合编号5(表14中所示)和9(表14中所示)。例如肽组合编号5(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:252(pep-011)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:254(pep-022)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:258(pep-122)的亲本肽或其变体。
另一个实例为肽组合编号9(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:251(pep-010)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:254(pep-022)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:258(pep-122)的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自4个肽组26、24、17和10的各组的肽；以及氨基酸序列SEQ ID NO:117(pep-p4)的肽或其变体。例如肽组合编号3(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:252(pep-011)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:258(pep-122)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:117的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)和得自肽组17的肽(例如选自pep-087、pep-010、pep-011、pep-061的任意一者的亲本肽或其变体)作为所述肽中的2种。示例性的肽的组合为表14中所示的组合编号3、5、9、16、19和20。
在一些实施方案中，所述的组合物包含3种肽，其中所述的组合物包含得自3个肽组26、17和6的各组的肽。例如肽组合编号16(表14中所示)，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:251(pep-010)的亲本肽或其变体；以及
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)和得自肽组9的肽(例如选自pep-123、pep-025、pep-075或pep-049的任意一者的亲本肽或其变体)作为所述肽中的2种。示例性的肽的组合为表14中所示的组合编号10、18、23、25、17、17c、17f、17p、17l、17q、17s、17t和17x。在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、6、16和19的各组的肽。例如肽组合编号10(表14中所示)的组合物，其包含：a)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:60(pep-089)的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、6、18和20的各组的肽。例如肽组合编号23(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:71(pep-100)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:73(pep-102)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、6、12和21的各组的肽。例如肽组合编号25(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:17(pep-049)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:20(pep-052)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、16、3和25的各组的肽。例如肽组合编号17(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、16、14和25的各组的肽。例如肽组合编号17a(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:22(pep-054)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、16、3和21的各组的肽。例如肽组合编号17c(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、9、16、14和21的各组的肽。例如肽组合编号17t(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含得自肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)和得自肽组16的肽(例如亲本肽pep-058或其变体)作为所述肽中的2种。示例性的肽的组合为表14中所示的组合编号10、17a、17b、17c、17d、17f、17l、17q和17t。在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、16、3、15和25的各组的肽。例如肽组合编号17b(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽或其变体。
在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组26、16、14、15和21的各组的肽。例如肽组合编号17d(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:22(pep-054)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽或其变体。
如所理解的那样，本发明的组合物优选地包含得自本文所定义的肽组的唯一一种肽。但是，在某些实施方案中，所述的组合物可以包含相同肽组的2种肽，其中一种肽衍生自Der p，并且相同肽组的其他的肽衍生自Der f。此类组合物的实例为表14所示的肽的组合13、18、19和20，其包含得自肽组26的2种肽。
因此，在一些实施方案中，所述的组合物包含3种肽，其中所述的组合物包含得自肽组26的2种肽以及得自肽组6的一种肽。例如肽组合编号18(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；以及
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体。
而且，在一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自肽组26的2种肽以及得自3个肽组9、6和3的各组的一种肽。例如肽组合编号18(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:17(pep-049)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽或其变体。
在另外一些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自肽组26的2种肽以及得自3个肽组17、10和3的一组的一种肽。例如肽组合编号19(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:251(pep-010)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽或其变体。
在其他一些实施方案中，所述的组合物包含4种肽，其中所述的组合物包含得自肽组26的2种肽以及得自2个肽组17和10的各组的一种肽。例如肽组合编号20(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:251(pep-010)的亲本肽或其变体；以及
d)氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)的亲本肽或其变体。
在某些实施方案中，所述的组合物包含肽组26的肽作为所述肽中的1种，所述的组合物不包含肽组24、17、9和16的任意一组的肽，但是仍可以取得高的T细胞应答者比率和世界II类HLA覆盖率。例如表14的肽组合编号4的组合物。因此，在一些实施方案中，所述的组合物包含4种肽，其中所述的组合物包含得自4个肽组26、7、10和20的各组的肽。肽组合编号4(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:254(pep-022)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:258(pep-122)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:249(pep-002)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:257(pep-117)的亲本肽或其变体。
在某些实施方案中，所述的组合物包含肽组26的肽作为所述肽中的1种，但是所述的组合物不包含肽组24、17、9和16的任意一组的肽。对于肽组合编号24(表14中所示)而言，如图9a中所示，此类组合物仍可以取得高的T细胞应答者比率和世界II类HLA覆盖率。因此，在某些实施方案中，所述的组合物包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个肽组10、6、12、18和20的各组的肽。例如肽组合编号24(表14中所示)的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)的亲本肽或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:49(pep-078)的亲本肽或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:71(pep-100)的亲本肽或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:73(pep-102)的亲本肽或其变体。
应该理解的是，包含3种肽(例如4种肽、例如5种肽)的组合物可以包含选自肽组1至26的任意一组的附加的肽，其中可任选地，所述的附加的肽得自肽组，其中在所述的组合物中不包含得自所述的肽组的其他的肽，因此，所述的附加的肽为在所述的肽组合中不提供的肽组1至26的任意一组，例如得自肽组3、4、6、10、16和21。在某些实施方案中，附加的肽为得自相同的肽组作为所述的组合的另一个肽，其中附加的肽衍生自选自Der p和Der f的另一种过敏原物质。例如所述的组合物可以包含1种、2种、3种、4种或多种附加的肽。例如在某些实施方案中，所述的组合物可以包含至多4种肽、至多5种肽、至多6种肽、至多7种肽。
使用表14中所示的多种肽组合对本发明进行举例说明，但是多种其他的肽组合可以通过使用得自相同肽组的另一种肽取代表14中所示的肽组合的一种肽来提供，即，亲本肽的变体或者一种其他的亲本肽或其变体也包含在相同的肽组中。此外，可以使用得自另一个肽组的肽取代得自一个肽组的肽。例如得自肽组的肽可以被得自另一个具有相同功能性(例如取代的肽与相同的或基本相同的一组II类HLA等位基因(原始的肽与其结合)结合的功能性)的肽组的肽取代。可以通过竞争性II类MHC结合测定法(例如实施例9中所公开)来确定肽结合II类HLA等位基因的能力，其中所述的测定法确定肽替换由人类II类MHC同种异型(例如本文中表8或17所示的同种异型)得到的已知的对照结合剂的能力。因此，在一些实施方案中，取代的肽与相同的、基本相同的或者至少70％、75％、80％(例如至少85％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％或98％)或更高的等位基因(其与待取代的肽结合)结合，例如其中通过体外结合测定法或预测的与等位基因的结合来确定所述的结合，其中所述的等位基因由DPA10201-DPB10101、DPA10103-DPB10201、DPA10103-DPB10301、DPA10103-DPB10401、DPA10103-DPB10402、DPA10202-DPB10501、DPA10201-DPB11401、DQA10501-DQB10201、DQA10501-DQB10301、DQA10301-DQB10302、DQA10401-DQB10402、DQA10101-DQB10501、DQA10102-DQB10602、DRB1_0101、DRB1_0301、DRB1_0401、DRB1_0405、DRB1_0701、DRB1_0901、DRB1_1101、DRB1_1201、DRB1_1302、DRB1_1501、DRB3_0101、DRB3_0202、DRB4_0101和DRB5_0101，或者可任选地表17中列出的那些组成。
例如肽041(SEQ ID NO:9)能够与等位基因DRB1_1302、DRB3_0101、DRB3_0202、DQA10501-DQB10201和DQA10401-DQB10402结合，并且可以被肽011、010和075(分别为SEQID NO:252、251和46)(其与表16a中所示的肽041至少相同的等位基因结合)的任意替换。
按照相同的方式，可以存在以下情况：
·氨基酸序列SEQ ID NO:17(pep-058)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:22(pep-054)、255(pep-025)或49(pep-078)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:255(pep-025)、285、17(pep-049)、20(pep-052)、22(pep-054)、21(pep-053)、49(pep-078)或266(pep-123)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)、70(pep-099)、264(pep-HDM26B)、269(pep-125)、224或248的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:255(pep-025)、12(pep-044)、22(pep-054)或21(pep-053)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)、81(pep-109)或67(pep-096)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)、67(pep-096)或271(pep-131)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:17(pep-049)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:46(pep-075)或266(pep-123)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:22(pep-054)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:255(pep-025)、12(pep-044)、21(pep-053)、26(pep-058)、46(pep-075)或268(pep-130)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:67(pep-096)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)、81(pep-109)或271(pep-131)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-tide 044)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ IDNO:22(pep-054)、268(pep-130)或283的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:15(pep-050)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:254(pep-022)、26(pep-058)、274、52(pep-081)、258(pep-122)或267(pep-124)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)、271(pep-131)、67(pep-096)或270(pep-126)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:251(pep-010)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:252(pep-011)、58(pep-087)或29(pep-061)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO；258(pep-122)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)、52(pep-081)或267(pep-124)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:256(pep-031)、70(pep-099)、81(pep-109)、82(pep-110)、269(pep-125)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:73(pep-102)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:249(pep-002)、60(pep-089)、61(pep-090)、276、277或82(pep-110)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:70(pep-099)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:253(pep-012)、264(pep-26B)、82(pep-110)或269(pep-125)的亲本肽取代；
·氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)的亲本肽可以被氨基酸序列SEQ ID NO:250(pep-009)、254(pep-022)、10(pep-042)、18(pep-050)、258(pep-122)或23(pep-055)的亲本肽取代。
在具体的实施方案中，肽组9的亲本肽pep-075(SEQ ID NO:46)可以被亲本肽pep-123(SEQ ID NO:266)或其变体取代，并且亲本肽pep-054(SEQ ID NO:22)可以被亲本肽pep-091(SEQ ID NO:62)或其变体取代。亲本肽的变体(其变体)
本文所述的亲本肽可以包含一个或多个修饰，其可以可任选地得到或更高或更低的活性或功能，例如引起、刺激或诱导体外免疫应答(例如T细胞增殖或T细胞的细胞因子的产生)的能力；结合II类HLA等位基因的能力；诱导或增强对相关抗原(例如房尘螨过敏原，例如Der p1、Der f1、Der p 2和/或Der f 2)的免疫耐受的能力；或者溶解于溶剂(例如水性溶液)中的能力。
修饰可以包括由亲本肽的N-和/或C-末端的氨基酸残基的一个或多个删除，在亲本肽的N-和/或C-末端的氨基酸残基的一个或多个加入，和/或在亲本肽的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代、加入或删除。
通常，亲本肽的较长的变体的长度可以为至多60个氨基酸，例如长度至多55、50、45、40、35、30、28、25、24或22个氨基酸。更通常的是，更长的变体肽的长度为至多大约30个氨基酸，例如长度至多25个氨基酸。更长的变体可以包含本文所公开的亲本肽的氨基酸序列，或者在亲本肽或其片段的氨基酸序列的长度(例如在至少12个相邻的氨基酸上，例如在亲本肽的至少13、14、15、16、17、18、19、20个相邻的氨基酸上，或者在亲本肽的长度上)上具有至少65％一致性或相似性的氨基酸序列。通常，更长的变体包含在亲本肽的氨基酸序列的长度上或者在至少12个相邻的氨基酸(例如在亲本肽的至少13、14、15、16、17、18、19或20个相邻的氨基酸上)上具有至少70％、75％、80％、85％、90％或95％一致性或相似性的氨基酸序列。因此，在一些实施方案中，亲本肽的变体为长度至多30个氨基酸的更长的肽，其中所述的亲本肽的变体在N-和/或C-末端包含比亲本肽多一个或多个附加的氨基酸残基，或者在亲本肽的至少14个相邻的氨基酸(例如在亲本肽的至少15、16、17、18个相邻的氨基酸)上具有至少80％一致性的氨基酸序列。
亲本肽的变体还可以包含本文所公开的亲本肽的片段。亲本肽的片段可以具有比亲本肽少一个或多个氨基酸，或者在亲本肽的氨基酸序列内包含删除，和/或在亲本肽的N-和/或C-末端包含氨基酸删除。通常，片段具有至少12个氨基酸的长度，例如至少13、14、15、16或17个氨基酸，并且当与亲本肽比对时，在片段的长度上，或者在亲本肽的至少12个相邻的氨基酸的长度上具有至少65％一致性或相似性。在一些实施方案中，在片段的长度上，或者在亲本肽的至少12、13、14或15个相邻的氨基酸上，百分一致性或相似性为至少70％、75％、80％、85％、90％或95％。因此，在一些实施方案中，亲本肽的变体可以为更短的肽，其包含在亲本肽的至少14个相邻的氨基酸(例如在亲本肽的至少15、16、17、18个相邻的氨基酸上)上具有至少80％一致性的氨基酸序列。本文所公开的亲本肽的片段的实例可以选自SEQ ID NO:90、102、161、103、105、106、111、114、115、173、174、117、176、120、121、180、128、187、188、191、133、192、199、226、227、205、229、206、230、208、233、210、234、242、243、221、245、246、283、166、223、247、224和248。
如所提及的那样，亲本肽的变体可以包含附加的氨基酸，或者由亲本肽的变体组成。因此，亲本肽的变体可以由12-30个氨基酸组成，例如13-30、14-30、15-30、16-30、12-28、13-28、14-28、15-28、16-28、13-26、14-26、15-26、16-26、13-25、14-25、15-25、15-25、13-24、14-24、15-24、16-24、3-22、14-22、15-22、16-22、13-20、14-20、15-20、16-20个氨基酸，例如特别是12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸。
此外，亲本肽的变体可以包含在亲本肽序列的至少14个相邻的氨基酸上具有至少65％序列一致性或相似性的氨基酸序列，可任选地，其中在亲本肽序列的至少15个相邻的氨基酸(例如在亲本肽序列的至少16、17、18或20个相邻的氨基酸上)上，百分序列一致性或相似性为至少70％80％、85％、90％或95％。
在一些实施方案中，亲本肽的变体由14-30个氨基酸残基组成，并且包含在亲本肽的至少14个相邻的氨基酸上具有至少80％序列一致性或相似性的氨基酸序列。在其他的实施方案中，所述的变体由15-30个氨基酸残基组成，并且包含在亲本肽的至少15个相邻的氨基酸上具有至少80％序列一致性或相似性的氨基酸序列。例如百分一致性或相似性可以为至少85％，例如在亲本序列的至少14个相邻的氨基酸例如至少15、16、17或18个相邻的氨基酸上至少90％或95％。因此，在此类实施方案中，所述的变体由14-30个氨基酸残基(例如15-30个氨基酸残基)组成，其中在亲本肽的至少14(例如至少15、16、17或18个)个相邻的氨基酸中1个、2个或3个氨基酸残基被取代。
在特定的实施方案中，所述的变体为由17-30个氨基酸组成的肽，并且包含在亲本序列的至少14或15个相邻氨基酸上具有至少80％(例如至少85％、90％或95％)的一致性或相似性的氨基酸序列。
在其他特定的实施方案中，所述的变体为由15-25个氨基酸组成的肽，并且包含在亲本序列的至少14或15个相邻的氨基酸上具有至少80％的一致性或相似性的氨基酸序列。
在其他特定的实施方案中，所述的变体为由16-25个氨基酸组成的肽，并且包含在亲本序列的至少14或15个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性或相似性的氨基酸序列。
在其他的实施方案中，所述的至少80％一致性或相似性是在亲本肽序列的至少16、17、18或19个相邻的氨基酸上，并且所述的百分一致性或相似性可以为亲本肽序列的至少16、17、18或19个相邻的氨基酸上的至少85％，例如至少90％或95％。
如本文所用，术语“一致性”和“一致的”及其语法变体是指2个或多个参照实体是相同的(例如氨基酸序列)。因此，在2个肽是一致的情况下，它们具有相同的氨基酸序列。所述的一致性可以在所定义的区域上，例如在亲本肽序列的至少12、13、14、15或16个相邻的氨基酸上，可任选地，其中比对为与允许的空位的最佳拟合。
例如为了确定在亲本肽序列的至少15个相邻的氨基酸残基上，变体肽是否具有至少80％的相似性或一致性，可以将变体肽与亲本肽比对，并相对于在变体肽的氨基酸序列中发现的一致的氨基酸残基来计算百分一致性，其中所述的变体肽与亲本肽序列的15个相邻的氨基酸重叠。
可以通过比较比对序列中的各个位置来确定一致性。氨基酸序列之间的一致性的程度是多个序列共有的位置处(即，在特定的区域上)一致的或匹配的氨基酸数量的函数。可以使用多种算法来实施用于一致性比较的序列的最佳比对，其中所述的算法是本领域已知的，包括在URL:http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/上可利用的ClustalOmega程序；Smith and Waterman,1981,Adv.Appl.Math 2:482的局部同源性算法；Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443的同源性比对算法；Pearson andLipman,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444的类似方法的检索；以及这些算法的计算机执行(例如在the Wisconsin Genetics Software Package,Genetics Computer Group,Madison,WI,U.S.A.的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)。还可以使用Altschul et al.,1990,J.Mol.Biol.215:403-10中所述的BLAST算法(使用公开的缺省设置)来确定序列一致性。用于执行BLAST分析的软件可以通过the National Center for BiotechnologyInformation(通过URL,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/的互联网)获得。计算百分序列一致性(同源性)的这种算法通常考虑序列比较区域或范围上的空位和错配。例如BLAST(例如BLAST 2.0)检索算法(例如参见Altschul et al.,J.Mol.Biol.215:403(1990)，可通过NCBI公开获得)具有以下示例性检索参数：错配-2；空位开放5；空位延伸2。就多肽序列比较而言，BLASTP算法通常与评分矩阵结合使用，例如PAM100、PAM 250、BLOSUM 62或BLOSUM50。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)和SSEARCH序列比较程序还用于定量一致性的程度(Pearson et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)；Pearson,Methods MolBiol.132:185(2000)；和Smith et al.,J.Mol.Biol.147:195(1981))。还研发出使用Delaunay基拓扑映射定量蛋白质结构相似性的程序(Bostick et al.,Biochem BiophysRes Commun.304:320(2003))。
如本文所用，术语“相似性”或“相似的”及其语法变体是指与肽参照序列相比，氨基酸序列包含有限数量的保守氨基酸的取代，例如变体肽与亲本肽。许多标准可以用于表明肽中特定位置处的氨基酸是否是相似的。在形成变化时，可以根据侧链取代基的相对相似性(例如它们的尺寸、电荷、疏水性、亲水性等)来进行类似的氨基酸残基的取代，并且可以通过常规的检测，针对所述的取代对肽的功能的作用来测定这些取代。
取代可以是保守性的或非保守性的氨基酸取代。“保守性取代”为一个氨基酸被生物、化学或结构相似的残基替换。生物相似性是指所述的取代不能破坏生物活性，例如T细胞反应性或HLA覆盖率。结构相似性是指氨基酸具有相似长度(例如丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸)或相似尺寸的侧链。化学相似性是指所述的残基具有相同的电荷，或者是亲水性的或疏水性的。例如保守性的氨基酸取代为其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的一种，其中所述的相似侧链例如具有以下侧链的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)；非电荷极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、组氨酸)；非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)；β-支化的侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。具体的实例包括一种疏水性残基(例如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或蛋氨酸)取代另一种，或者一种极性残基取代另一种，例如精氨酸取代赖氨酸，谷氨酸取代天冬氨酸，谷氨酰胺取代天冬氨酸，丝氨酸取代苏氨酸等。被认为更难以分类的脯氨酸与具有脂肪族侧链(例如Leu、Val、Ile和Ala)的氨基酸共有一些性质。在某些环境中，谷氨酰胺取代谷氨酸、或者天冬酰氨取代天冬氨酸可以认为是相似的取代，因为谷氨酰胺和天冬酰胺为分别是谷氨酸和天冬氨酸的酰胺衍生物。
本文所公开的亲本肽衍生自过敏原过敏原同种型Der p 1.0105、Der f1.0101、Der p 2.0101或Der f 2.0103，然而典型的变体肽可以衍生自在表1所示的相同过敏原的另一种同种型中发现的相同的延展(stretch)。因此，由过敏原的一个同种型(例如同种型Der p 1.0105)衍生的亲本肽的氨基酸序列可以被衍生自相同的过敏原的另一个同种型(例如同种型Derp1.0101)的1个、2个、3个或4个氨基酸残基取代，其中所述的氨基酸残基在2种同种型中具有相同的位置编号。
如所提及的，本文所公开的亲本肽的变体可以在N-和/或C-末端可以包含比亲本肽多一个或多个附加的氨基酸残基。此类氨基酸残基可以是天然形成的氨基酸，或者非天然形成的氨基酸。在一些实施方案中，当将一种或多种附加的氨基酸与过敏原同种型(其中存在的、作为基础的或衍生得到的)的氨基酸序列比对，或者与相同的过敏原的另一种同种型比对时，所述的一种或多种附加的氨基酸是位于亲本肽的N-和/或C-末端侧翼的相同的氨基酸或氨基酸序列。因此，当将附加的氨基酸与Der p 1、Der f 1、Der p 2或Der f 2比对时，所述的附加的氨基酸可以是位于亲本肽的N-和/或C-末端的侧翼的氨基酸。例如其中肽衍生自Derp1.0105，当将附加的氨基酸与Derp1.0105或表1中列出的另一种Derp1.0105的同种型比对时，所述的附加的氨基酸可以为位于所述的肽的N-和/或C-末端的侧翼的氨基酸。类似的，当衍生自Derf1.0101,Derp2.0101或Derf2.0103的肽分别与Derf1.0101或其同种型、Derp2.0101或其同种型、Derf2.0103或其同种型比对时，所述的肽可以包含位于所述的肽的N-和/或C-末端的附加的氨基酸。多种同种型示于表1中。例如Der p 1的同种型可以选自氨基酸序列SEQ ID NO:287-311的任意同种型，Der f 1的同种型可以选自氨基酸序列SEQ ID NO:312-322的任意同种型，Der p 2的同种型可以选自氨基酸序列SEQ ID NO:323-337的任意一种同种型，以及Der f 2的同种型可以选自氨基酸序列SEQ ID NO:338-354的任意同种型。
例如为了增加或降低亲本肽的物理或化学性质，例如为了降低亲本肽抗氧化的能力，为了改善或增加在水性溶液中的溶解性，为了降低聚集，为了减少合成问题等，与亲本肽相比，变体肽可以包含多种修饰。
因此，在本发明的一些实施方案中，亲本肽的变体包含：
a)亲本肽序列中的一个或多个(例如1、2或3)氨基酸取代，例如亲本肽的N-末端的谷氨酸盐残基可以被焦谷氨酸盐替换，和/或亲本肽中一个或多个半胱氨酸残基可以被丝氨酸或2-氨基丁酸替换；和/或
b)一个或多个氨基酸(例如1、2、3、5、4、6、7、8)加入至亲本肽序列中，例如其中所述的变体包含一个或多个(例如1、2、3或4)赖氨酸残基和/或一个或多个(例如1、2、3或4)精氨酸残基和/或在亲本肽的N-和/或C-末端加入的或加入至亲本肽的片段中的一个或多个正电荷残基，其中所述的亲本肽的片段由亲本肽的至少14个相邻的氨基酸(例如至少15个相邻的氨基酸)组成；和/或
c)亲本肽的一个或多个氨基酸的删除，例如其中疏水性残基(由亲本肽的N-或C-末端得到的至多3个氨基酸)被删除；和/或包含序列Asp-Gly的2个保守性氨基酸至由亲本肽的N-或C-末端得到的至多4个氨基酸被删除。
此外，在一些实施方案中，亲本肽的变体可以包含加入至亲本肽的N-和/或C-末端的1个、2个、3个或更多个赖氨酸或精氨酸氨基酸残基(多个)，其中所述的亲本肽已经延伸了(可任选地)野生型序列(作为所述的肽的基础的)或另一种野生型同种型的一个或多个氨基酸残基，例如1、2、3、4或5个氨基酸残基。
亲本肽变体的典型实例示于表11a、11b和11c中。表11a显示将由野生型过敏原同种型得到的一个或多个氨基酸残基加入至亲本肽中的实例。表11b显示一个或多个精氨酸残基加入至N-和/或C-末端的亲本肽pep-058、pep-075、pep-123的实例，例如SEQ ID NO:274-278、279-282和283-286的变体。表11c显示亲本肽pep-058、pep-075、pep-110、pep-130、pep-091和pep-123的C-末端的酰胺化的实例。
亲本肽或其变体肽可以被衍生化。肽的衍生物(在本文中也称为“衍生化肽”)是指本文所公开的肽的修饰形式，包括其变体的修饰形式。通常，衍生物是通过氨基酸的功能侧基(例如氨基、硫氢基或羧基)与另一种分子反应，从而形成任何类型的分子(天然形成的或设计的，例如糖部分)的共价或非共价连接而形成。肽的衍生物的具体实例包括糖基化、酰基化(例如乙酰化)、磷酸化、酰胺化、甲酰化、泛素化以及由保护基团/封闭基团的衍生化，以及多种化学修饰中的任意。其他具体的非限定性实例为靶向肽，融合肽，嵌合肽，包括具有与所述的肽共价连接的一个或多个非氨基酰基基团(参看糖、脂质等)的肽。通常，衍生物包含例如选自以下任意中的一个或多个修饰：(a)N-末端酰基化(例如乙酰化或甲酰化)；(b)C-末端酰胺化(例如与氨或胺反应)；(c)在精氨酸和/或赖氨酸的侧链胺上的一个或多个氢被亚甲基替换；(d)糖基化；和/或(e)磷酸化。
在特定的实施方案中，所述的肽在C-末端被酰胺化，例如肽pept-130可以被酰胺化。
在特定的实施方案中，衍生物包含肽的融合(嵌合)序列，其可以可任选地包含以下氨基酸序列，其具有在与所述的肽氨基酸序列共价连接的参照(野生型)序列中通常不存在的一个或多个分子。术语“嵌合的”及其语法变体当用于指序列时，其是指所述的序列包含衍生自、得自或分离自，或者基于其他的物理或化学实体的一个或多个部分。
衍生物的另一个特定的实例是其中第二异源序列(即，异源功能结构域)与本文所公开的肽连接(共价或非共价结合)的一种衍生物，其中所述的异源序列可以赋予本文所公开的肽以不同的或互补的功能。异源功能结构域不限于氨基酸残基。因此，异源功能结构域可以由多种不同类型的小的或大的功能部分的任意组成。所述的部分包括核酸、肽、碳水化合物、脂质或小的有机化合物，例如药品(例如抗病毒)、金属(金、银)、或放射性同位素。
连接体(例如氨基酸或拟肽序列)可以插入在肽序列和加入物(例如异源功能结构域)之间，这样2个实体至少部分保持不同的功能或活性。连接体可以具有能够促进或者与其他结构域相互作用的一种或多种性质，其可以包括挠性构造，不能形成有序的二级结构或疏水性或电荷特征。通常在挠性蛋白质区域中发现的氨基酸包括Gly、Asn和Ser。在连接体序列中还可以使用其他接近中性的氨基酸，例如Thr和Ala。
在本发明的特定的方面中，肽组合的肽并非以单一的肽提供，但是所述的多种肽可以融合在一起，或者与载体分子融合，从而形成分离的分子。例如所述的肽可以与病毒的表面多肽的N-和C-末端融合，例如在国际专利申请WO12168487A1中公开的肝DNA病毒科的病毒。
亲本肽的变体肽或衍生物可以与亲本肽共有相同的功能性或活性，或者可以具有改善的功能性或活性。例如亲本肽的变体可以与亲本肽所结合的II类HLA等位基因的至少70％结合。因此，在一些实施方案中，变体肽与亲本肽所结合的相同的、基本相同的或者至少75％、80％(例如至少82％、85％、88％、90％、92％、95％、98％或更多)的II类HLA等位基因结合，可任选地，其中这是使用预测工具或体外结合测定法在相同的检测条件下确定的。可任选地，针对特定的一组II类HLA等位基因来确定II类HLA等位基因的结合，其中所述的特定的一组II类HLA等位基因例如为以下等位基因的一种、多种或全部：DPA1*02:01-DPB1*01:01、DPA1*01:03-DPB1*02:01、DPA1*01:03-DPB1*03:01、DPA1*01:03-DPB1*04:01、DPA1*01:03-DPB1*04:02、DPA1*02:02-DPB1*05:01、DPA1*02:01-DPB1*14:01、DQA1*05:01-DQB1*02:01、DQA1*05:01-DQB1*03:01、DQA1*03:01-DQB1*03:02、DQA1*04:01-DQB1*04:02、DQA1*01:01-DQB1*05:01、DQA1*01:02-DQB1*06:02、DRB1*01:01、DRB1*03:01、DRB1*04:01、DRB1*04:05、DRB1*07:01、DRB1*09:01、DRB1*11:01、DRB1*12:01、DRB1*13:02、DRB1*15:01、DRB3*01:01、DRB3*02:02、DRB4*01:01和DRB5*01:01，或者表8或表17中所公开的等位基因。用于测量体外II类HLA结合的测定法是本领域公知的，并且所述的测定法在本文的实施例9中描述。
此外，变体肽可以具有与亲本肽相同的一个或多个T细胞表位。这可以通过使用培养的PBMC(外周血单核细胞)诱导或刺激体外T细胞响应于变体肽(与亲本肽相比，其中可任选地使用相同的检测条件)的增殖的能力来确定，或者通过诱导或刺激T细胞(得自培养的PBMC)响应于变体肽(与亲本肽相比)而产生细胞因子(例如细胞因子、IL-5、IL-13和/或IL-10)的能力来确定，如本文的实施例3中所述。
因此，在一个特定的实施方案中，当亲本肽的变体与本发明的亲本肽比对时，其可以包括至少9个氨基酸残基的重叠，优选的是一致的残基。所述的重叠优选的是多于9个氨基酸残基，例如10、11或12个氨基酸残基或更多，例如13、14或15个氨基酸残基。已知MHC II分子的核心结合序列大约为9个氨基酸长，但是MHC II分子可以容纳10-30个残基的更长的肽(Murugan and Dai,2005)。因此，在某些实施方案中，与亲本序列的9个氨基酸或更多的重叠使得变体足以能够与亲本肽共有T细胞表位。
肽通常以盐的形式提供，例如药物可接受的和/或生理学可接受的盐。例如所述的盐可以为与无机酸形成的酸加成盐、与有机酸形成的酸加成盐、与碱性无机酸形成的盐、与碱性有机酸形成的盐、与酸性或碱性氨基酸形成的盐、或它们的混合物。与无机酸形成的酸加成盐的典型实例选自任意与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐。与有机酸形成的盐可以选自任意与甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐。与无机碱形成的盐可以选自碱金属盐的盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；以及铝盐和铵盐。与碱性有机碱形成的盐可以选自与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、N,N-二苯基乙二胺、咖啡因、哌啶和吡啶形成的任意的盐。与碱性氨基酸形成的盐可以选自与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的任意的盐。与酸性氨基酸形成的盐可以选自与天冬氨酸、谷氨酸等形成的任意的盐。
在本发明的特定的实施方案中，诸如药物可接受的盐之类的盐为乙酸盐。
亲本肽的变体的典型实例列出如下：
·肽组26的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)、269(pep-125)、70(pep-099)和253(pep-012)的亲本肽的任意的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:223、247、224或248的肽；
·肽组24的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)、67(pep-096)、79(pep-108)、256(pep-031)和270(pep-126)的亲本肽的任意的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:279或241的肽；
·肽组2的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:98的肽；
·肽组3的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:99的肽；
·肽组4的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:10(pep-042)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:259,102,161,281或282的肽；
·肽组5的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:11(pep-043)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:103、281或282的肽；
·肽组6的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:105、283或106的肽；
·肽组7的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:42(pep-072)或249(pep-022)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:166的肽；·肽组8的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:15(pep-047)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:111、270或112的肽；
·肽组9的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)、255(pep-025)、46(pep-075)和17(pep-049)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:271、114、173、115或174的肽；
·肽组10的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050),258(pep-122)和267(pep-124)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:117或176的肽；
·肽组12的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:20(pep-052)或49(pep-078)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:121或180的肽；
·肽组15的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:133、192、274或191的肽；
·肽组16的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)、23(pep-055)和272)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:273、128、187、129或188的肽；
·肽组17的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:29(pep-061)、58(pep-087)、251(pep-10)或252(pep-011)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:140或199的肽；
·肽组19的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:72(pep-101)和60(pep-089)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:227的肽；
·肽组20的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:61(pep-090)、73(pep-102)和276的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:277、205、229、206或230的肽；
·肽组21的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:208的肽；
·肽组22的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:63(pep-092)和278的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:222或210的肽；
·肽组23的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:77(pep-106)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:238的肽；
·肽组25的亲本肽的变体，例如氨基酸序列SEQ ID NO:SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽的变体可以为氨基酸序列SEQ ID NO:221、245或246的肽。
如本文所提及的那样，任何亲本肽或其变体都可以被酰胺化。因此，在一些实施方案中，亲本肽的变体在C-末端被酰胺化。
本文所公开的肽以及其变体、衍生物或盐通常是以合成方式制备。因此，在某些实施方案中，肽以及其变体、衍生物和盐是合成的。所述的肽、变体、衍生物和盐可以分离和/或纯化，例如通过人类的手工方式进行，例如通过肽的合成。通常，肽可以在合成后合并，并冻干或者溶解于水性溶液、DMSO、甘油等，或它们的混合物。通常，肽组合的各种肽以等摩尔浓度或基本等摩尔范围内存在。通常，肽是冻干的(冷冻干燥的)，从而提供储存稳定形势的以及再溶解的即用形式的肽。各种再溶解的肽的浓度为1至1000μM的摩尔浓度，例如10至800μM，例如20至500μM，例如20至300μM。
药物组合物
本发明的特征还在于包含本文所定义的组合物(例如肽组合)的药物组合物。该药物组合物可以为疫苗，例如用于实施免疫疗法的产品，包括但不限于用于治疗响应于房尘螨过敏原的过敏免疫的疫苗。
药物组合物除了包含肽组合，还包含无治疗活性的组分，例如药物可接受的或生理学可接受的赋形剂、载体和/或佐剂，它们是本领域的技术人员公知的，并且可以包括但不限于溶剂、乳化剂、润湿剂、塑化剂、增溶剂(例如增强溶解性的试剂)、着色物质、填料、防腐剂、抗氧化剂、抗微生物剂、粘性调节剂、缓冲剂、pH调节剂、等渗性调节剂、粘附物质等。配制策略的实例是本领域那些技术人员公知的。
在一些实施方案中，可以使用免疫调控剂(如同佐剂)配制(例如混合在一起)所述的肽。所述的佐剂可以为任何传统的佐剂，包括但不限于含氧的金属盐，例如氢氧化铝、壳聚糖、不耐热肠毒素(LT)、霍乱毒素(CT)、霍乱毒素B亚单位(CTB)、聚合脂质体、突变毒素(例如LTK63和LTR72)、微囊、白介素(例如IL-1BETA、IL-2、IL-7、IL-12、INFGAMMA)、GM-CSF、MDF衍生物、CpG寡核苷酸、LPS、MPL、MPL-衍生物、phosphophazenes、Adju-Phos(R)、葡聚糖、抗原配制物、脂质体、DDE、DHEA、DMPC、DMPG、DOC/Alum复合物、Freund不完全佐剂、ISCOM(R)、LT口服佐剂、胞壁酰二肽、单磷酰脂质A、胞壁酰肽和磷脂酰乙醇胺。例如在Powell、M.F.和Newman M所著的题为“Compendium of vaccine adjuvants and excipients”的“Vaccine Design--the subunit and adjuvant approach”(Edited by Powell、M.F.andNewman、M.J.；1995、Pharmaceutical Biotechnology、Plenum Press、New York andLondon、ISBN 0-306-44867-X)中描述了佐剂的其他实例。
在一些实施方案中，所述的药物组合物可以配制用于肠胃外施用，例如配制用于注射，例如皮下和/或皮内注射。因此，在一些实施方案中，所述的药物组合物可以是液体(例如配制成液体)，包括溶液、悬液、分散液和胶状液体。例如液体药物组合物可以通过将本文所述的肽的组合物的粉末、颗粒或冻干物溶解于合适的溶剂中来形成，然后将其施用受试对象。合适的溶剂可以为具有生理学可接受的性质的任何溶剂，并且能够溶解所需浓度的肽组合。所需的浓度可以取决于待施用(即，待注射的)的等分物，和所需的单一剂量。需要强调的是对于注射目的而言，等分物的范围为大约10至500微升，例如50至300微升或更低，并且所需的单一剂量的范围为1至1000纳摩尔。因此，合适的溶剂应该能够溶解所述的组合的任何的肽，从而使得各种肽的最终浓度为大约1至1000μM。因此，在一个实施方案中，液体组合物包含浓度为10至800μM(例如20至500μM，或者20至300μM)的所述的组合物的各种肽。通常，各种肽的浓度是相同的，例如等摩尔浓度，但是所述的组合的各种肽可以以不同的浓度存在。通常，所述的溶剂为水性溶液，可任选地与其他的溶剂混合。因此，溶剂可以包含至少60w/w％水，例如至少65w/w％,70w/w％、75w/w％、80w/w％、85w/w％、90w/w％、95w/w％、99w/w％的水，例如蒸馏水，例如无菌水。在一些实施方案中，所述的溶剂为无菌蒸馏水，例如注射用水。水性溶液可以包含除了水以外的其他溶剂，例如DMSO(二甲基亚砜)、甘油、乙醇、乙腈、植物油或合成油。所述的溶剂的水相的pH可以为生理学可接受的范围，通常范围为3至9，例如pH 3至8，pH 4至8，例如pH 5至8，例如pH 6至8。因此，液体配制物可以包含pH控制剂或缓冲剂(例如柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂)，可任选地，可以使用强碱的稀释液(例如氢氧化钠等)和/或羟酸的稀释液(例如盐酸)来调节pH。
通常，液体配制物可以是等渗的，并且可任选地是无菌的。因此，在一些实施方案中，所述的配制物包含生理盐水，例如等渗生理盐水。所述的液体可以包含其他的赋形剂，例如另一种溶剂，增溶剂(例如聚氧乙烯(20)失水山梨醇单月桂酸酯(
Figure BDA0001026395170000411
20))、离子和非离子乳化剂(例如泊洛沙姆(
Figure BDA0001026395170000412
))、分散剂、增稠剂、防腐剂、抗微生物剂和/或抗氧化剂。溶剂的非限定性示意性实例包括水、生理盐水、DMSO、甘油、乙醇、乙腈、植物油或合成油。
已知当一些肽长期暴露于水时，其倾向于氧化或不稳定。因此，为了获得储存稳定的组合物，药物组合物可以配制成仅包含有限量的水或水性溶液，例如包含低于10w/w％的水或水性溶液，例如低于9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5w/w％的水或水性溶液。具有有限水平的水的药物组合物的实例可以包含颗粒、粉末，例如冻干物，即，冻干的粉末。通常，冻干的组合物可以在使用前溶解，例如溶解于水性(可任选地无菌的)溶液中，例如pH范围为3-9的溶液，例如pH范围为3-8，例如pH范围为4至8。冻干物可以包含其他的组分，例如膨胀剂和冻干保护剂(例如蔗糖、乳糖、海藻糖、甘露糖、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、棉子糖、甘氨酸、组氨酸或其混合物)，缓冲剂(柠檬酸钠、磷酸钠、磷酸二钠、氢氧化钠、Tris碱、Tris乙酸盐、TrisHCl或其混合物)，抗氧化剂，抗微生物剂，增溶剂(例如聚氧乙烯(20)失水山梨醇单月桂酸酯(
Figure BDA0001026395170000421
20))。
冻干的组合物还可以配制成固体剂型，该固体剂型可以通过例如口服途径(例如口腔粘膜)施用。因此，在一些实施方案中，所述的药物组合物可以配制用于口服施用，例如用于舌下施用。因此，所述的药物组合物可以为固体剂型，例如冻干的固体剂型，通常为片剂、胶囊或小袋，其可以可任选地配制用于快速崩解。适用于本发明的组合物、方法和用途的药物配制物和传递系统是本领域已知的(例如参见Remington:The Science andPractice of Pharmacy(2003)20th ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA；Remington’sPharmaceutical Sciences(1990)18th ed.,Mack Publishing Co.,Easton,PA；The MerckIndex(1996)12th ed.,Merck Publishing Group,Whitehouse,NJ；PharmaceuticalPrinciples of Solid Dosage Forms(1993),Technonic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,Pa.；Ansel ad Soklosa,Pharmaceutical Calculations(2001)11th ed.,Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD；和Poznansky et al.,Drug DeliverySystems(1980),R.L.Juliano,ed.,Oxford,N.Y.,pp.253-315)。
如所提及的那样，药物组合物可以配制成与特定的施用途径相容的，例如通过皮内施用或通过舌下施用。因此，药物组合物可以包含适用于通过多种途径施用的载体、稀释剂或赋形剂。组合物可以可任选地配制用于接触或体内传递的示例性施用途径包括吸收、鼻内、口服、口腔、舌下、皮下、皮内、经皮、直肠、经皮吸收或淋巴管内。
对于口服、口腔或舌下施用而言，组合物可以采取例如片剂或胶囊的形式，可任选地配制成快速整合的片剂/胶囊、或者缓释的片剂/胶囊。在一些实施方案中，所述的片剂为冻干的，可任选地为适用于舌下施用的快速分解的片剂或胶囊。
所述的药物组合物还可以配制成“单位剂型”，其在本文中用于指物理分散的单元，其中每个单元均包含预定量的肽或肽的组合物，并可任选地结合药物载体(例如赋形剂、稀释剂、媒介物或填充剂)，当施用一个或多个剂量的所述的药物组合物时，其可以产生所需的作用。单位剂型还包括例如安瓿和小瓶，其可以包含例如在施用或体内传递之前加入的冻干的或冷冻干燥的状态(动冻干物)的组合物或无菌的液体载体。单位剂型另外包含例如具有本文提出的液体组合物的安瓿和小瓶。
多种肽在暴露于氧时，例如暴露于空气或包含空气的溶剂时，倾向于降解。因此，在一些实施方案中，所述的药物组合物包含惰性气体，例如氩气或氮气。
本发明的另一个方面涉及包括隔间和说明书的试剂盒，其中所述的隔间包含本文所述的药物组合物，并且其中所述的说明书用于治疗对尘螨例如房尘螨的敏感症。试剂盒可以进一步包括可以可任选地保持成分的无菌性的波纹状纤维、玻璃、塑料、箔、安瓿、小瓶、泡罩包装、预装载的注射器或管。试剂盒可以进一步包含含有印刷品或计算机可读介质的标签或插入物，其可任选地包含确认的成分、剂量、临床药理学、临床医生或受试对象使用一种或多种试剂盒成分的说明书、预后或治疗益处、不利的副作用或制备信息。
在一个实施方案中，所述的试剂盒额外包括容器，其含有用于在使用前溶解组合物的溶剂。合适的溶剂的实例如上文所述。可任选地，所述的试剂盒还可以包括用于肠胃外注射的装置，例如用于将所述的组合物(例如溶解的组合物)注射至皮下或皮内组织中。装置可以为用于所述的目的的任何合适的装置，例如适用于皮内或皮下递送所述的组合物的针或微针。例如所述的装置可以为微针或包含多个微针(设计用于皮内传递液体)的装置，例如在国际专利申请WO14064543 A1、WO05049107 A2、WO06054280 A2、WO07066341 A3和WO14188429 A1中所述。
治疗
本文所述的组合物(例如肽的组合)在有需要的受试对象中可以用于治疗对尘螨例如房尘螨的免疫应答或过敏症。对尘螨的过敏症在受试对象中在临床上可以呈现为特应性皮炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏反应和/或枯草热。因此，在本发明的一些方面，所述方法包括减少、降低、阻抑或抑制特应性皮炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏反应和/或枯草热。
短语“免疫应答的治疗”或“治疗免疫应答”可以涵盖预防、减轻、减缓、降低、抑制、减少或阻抑免疫应答，例如过敏性免疫应答，例如针对对小虫过敏原(例如房尘螨过敏原)的免疫应答。免疫应答的治疗还可以包括减少、抑制、组织或降低T细胞应答，其可以包括但不限于Th2细胞应答或记忆T细胞应答。此外，本文所述的免疫应答的治疗还可以包括诱导、促进、增加或增强调节型T细胞的增殖，通常可任选地减少、降低、抑制、阻抑或降低促炎淋巴因子/细胞因子的产生。
因此，在一些方面中，本发明涉及用于在有需要的受试对象中减缓对尘螨例如房尘螨的过敏原产生的免疫应答的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的本文所述的组合物(例如本文所述的肽的组合)。
在其他的方面中，本文所述的组合物的施用可以诱导针对所述的尘螨的过敏原(多种)的免疫耐受。
因此，本文所公开的组合物可以产生治疗或有利的作用，其可以可任选地客观或主观测量。治疗或有利作用可以但不必是对由过敏原导致的或与过敏原有关的所有的或任何免疫应答或者一种或多种症状的完全消除。因此，当由过敏原导致的或与过敏原有关的免疫应答或或者一种或多种症状发生渐进性的改善或部分降低时，或者当在短期或长期的持续时间(几小时、几天、几周、几个月等)内由过敏原导致的或与过敏原有关的一种或多种症状的恶化或进展受到抑制、降低、减少、阻抑、预防、限制或控制时，取得令人满意的临床结果。
因此，在其他的方面中，向受试对象施用治疗有效量的本文所述的组合物可以减轻免疫应答的一种或多种症状。例如所述的方法可以包括减轻与变应性鼻炎、变应性结膜炎、过敏性哮喘和/或变应性湿疹(例如特应性皮炎)有关的一种或多种症状。
在一些实施方案中，所述的一种或多种症状可以与变应性鼻炎有关。例如，所述的方法可以包括降低以下症状的一种或多种：鼻痒的强烈程度；在给定时间(例如每天、每周、每月)内打喷嚏的数量；鼻塞(例如阻塞)的强烈程度；鼻水的量；鼻水的嗜酸性粒细胞计数；鼻水或血清中特异性IgE抗体的水平(效价)；以及血液中嗜碱性粒细胞释放组胺。
在其他的实施方案中，一种或多种症状可以与变应性结膜炎有关。例如所述的方法可以包括降低以下症状的一种或多种：眼睛痒的强烈程度；眼白和/或泪溢的发红；结缔组织碎屑的嗜酸粒细胞的计数；结缔组织碎屑或血清的特异性IgE抗体的水平(效价)；以及血液中嗜碱性粒细胞释放组胺。
在一些实施方案中，一种或多种症状与过敏性哮喘有关。例如所述的方法可以包括降低以下症状的一种或多种：哮喘发作(可任选地需要医院治疗)的数量或频率；在给定的时间(例如每天、每周、每月)内咳嗽的强烈程度和/或数量；喘息的强烈程度；气促或阻塞的强烈程度(例如气促的改善)；降低用力呼气量(FEV1)；降低在肺液或血清中特异性IgE抗体的水平(效价)和降低血液中嗜碱性粒细胞释放组胺；或者所述的方法可以包括改善肺功能。
在一些实施方案中，所述的一种或多种症状可以是与特异性皮炎有关的症状。例如所述的方法可以包括降低以下症状的一种或多种：皮肤发痒的强烈程度；湿疹的得分；以及血液(外周血)嗜酸性粒细胞的数量。
治疗的或有利的作用还包括降低或消除用于治疗受试对象的第二治疗方法或治疗活性药品(例如抗炎药、解充血药或抗过敏剂)的需要、服药频率或量，其中所述的受试对象具有由过敏原导致的或与过敏原有关的免疫应答或一种或多种症状。例如施用本文所述的肽组合可以降低施用受试对象的辅助治疗的量，例如降低受试对象对使用速效或长效β2-激动剂、白细胞三烯调控药、皮质甾类或H1抗组胺(例如吸入的或口服的)的联合治疗的需要，从而降低、减轻或阻抑免疫应答的一种或多种症状。
如本文所用，术语“免疫应答”包括T细胞(细胞的)介导的和/或B细胞(体液)介导的免疫应答，或者细胞的和体液的应答。具体而言，术语“免疫应答”可以包括IgE介导的免疫应答(即，过敏免疫应答)。示意性的免疫应答包括T细胞应答，例如Th2应答，从而导致细胞因子产生和/或细胞的细胞毒性。此外，术语“免疫应答”包括受T细胞活化(例如抗体的产生(例如液体应答))和细胞因子反应性细胞的活化(例如嗜酸性粒细胞、巨噬细胞)间接影响的应答。与免疫应答有关的免疫细胞包括淋巴细胞，例如T细胞(CD4+、CD8+、Th1和Th2、记忆T细胞)和B细胞；抗原提呈细胞(例如专职抗原提呈细胞，例如树突状细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、Langerhans细胞；以及非专职抗原提呈细胞，例如角化细胞、内皮细胞、星形胶质细胞、成纤维细胞、少突细胞)；自然杀伤(NK)细胞；以及骨髓细胞，例如巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和粒细胞。特定的免疫应答为免疫球蛋白(Ig)同种型抗体的产生或减少IgE抗体。
因此，在一些实施方案中，所述的方法包括在受试对象中诱导或增加针对尘螨的过敏原的IgG抗体(例如特异性IgG)应答。在一些实施方案中，所述的方法包括在受试对象中降低针对尘螨的过敏原的IgE抗体(例如特异性IgE)应答。在一些实施方案中，所述的方法包括在受试对象中降低针对尘螨的过敏原的T细胞应答，例如降低响应于所述的过敏原的Th-2相关的细胞因子(例如IL-5,IL-4,IL-13)的产生。
术语“免疫应答调控”或“调控免疫应答”可以包括刺激、诱导、促进、增加或增强免疫应答，例如T细胞调节应答，或者可以包括抑制、减少、阻抑或降低T细胞应答，其可以包括但不限于Th2细胞应答。
不想受限于特定的作用机制，本发明的肽组合可以调控，例如阻抑T细胞或抗体应答。例如由尘螨过敏原(例如房尘螨过敏原)触发的T细胞应答和/或抗体应答可以通过本文所述的肽组合来被阻抑或阻抑。通常，T细胞应答与细胞因子应答有关，例如IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-22、IL-31或IFN-g应答。在特定的实施方案中，针对尘螨过敏原的T细胞应答可以导致细胞因子的子集的产生降低，例如与Th2介导的应答有关的细胞因子(例如IL-4、IL-5和/或IL-13)；并且还可以可任选地导致与Treg有关的细胞因子(例如IL-10)的产生增加。
如所提及的那样，本文所述的肽组合可以在针对尘螨过敏原的免疫应答方面提供有利效果。示例性的尘螨为尘螨属的房尘螨，其包括但不限于美洲房尘螨(American housedust mite)和欧洲房尘螨(European house dust mite)的物种；宇尘螨属的房尘螨，其包括但不限于梅氏嗜霉螨(Euroglyphus maynei)的物种；以及无爪螨属(Blomia)的房尘螨，其包括但不限于热带无爪螨(Blomia tropicalis)的物种。后面两个房尘螨物种主要在全世界的亚热带/热带地区发现，并且已知这两种物种均包含与响应于房尘螨的过敏原所产生的抗体发生交叉反应的过敏原。
尘螨过敏原可以为在房尘螨(例如尘螨属、宇尘螨属和/或无抓螨属)中检测的任何过敏原。美洲房尘螨的示例性尘螨过敏原为Der f 1、Der f2、Der f 3、Der f 6、Der f7、Der f 10、Der f 11、Der f 13、Der f 14、Der f 15、Der f 16、Der f 17、Der f 18和Der f 22；欧洲房尘螨的示例性尘螨过敏原为：Der p 1、Der p 2、Der p 3、Der p 4、Der p5、Der p 6、Der p7、Der p 8、Der p 9、Der p 10、Der p 11、Der p 14、Der p 20、Der p 21和Der p 23；热带无爪螨的示例性尘螨过敏原为：Blo t 1、Blo t 2、Blo t 3、Blo t 4、Blot 5、Blo t 6、Blo t 10、Blo t 11、Blo t 12、Blo t 13、Blo t 19和Blo t 21；梅氏嗜霉螨的示例性尘螨过敏原为：Eur m 1、Eur m 2、Eur m 3、Eur m 4和Eur m 14。
通常，尘螨过敏原为主要的尘螨过敏原，例如房尘螨1组过敏原，例如Der p 1和Der f 1，可任选地Blo t 1和Eur m 1；或者房尘螨2组过敏原，例如Der p 2和Der f 2，可任选地Blo t 2和Eur m 2。
通常，所述的治疗包括以每周、每两周、每月或每季度的间隔重复地施用所述的组合物。因此，在特定的实施方案中，所述的治疗包括使用重复施用的单一剂量的免疫疗法，直至取得持续性的作用。认为在进行免疫疗法的受试对象中免疫疗法会产生免疫耐受。因此，在其他的实施方案中，所述的组合物(例如肽组合)可以用于在有需要的受试对象中诱导免疫耐受。
如本文所用，术语“免疫耐受”是指：a)降低或减少特异性免疫应答的水平(其被认为至少部分是由抗原特异性T淋巴细胞、B淋巴细胞、抗体或它们的组合介导的)；b)特异性免疫应答的发作或进展的延迟；或c)特异性免疫应答(例如对房尘螨过敏原)的发作或进展的降低的风险。“耐受”的增加、改善、增强或诱导可以指在事先暴露于过敏原中，与对该过敏原的反应性相比，对该过敏原的特异性免疫反应性的降低、减少、抑制、阻抑、限制、控制或清除。因此，在某些实施方案中，所述的方法包括在受试对象中诱导对过敏原(例如房尘螨过敏原)的免疫耐受，从而阻抑对过敏原的过敏免疫应答。受试对象中对过敏原的免疫耐受还可以通过减少受试对象对过敏原的过敏反应的发生、频率、严重性、进展或持续时间来反应。可以通过本文所公开的或本领域的技术人员已知的方法来测量免疫耐受的诱导(还称为脱敏作用)和免疫耐受的相对的量。例如可以通过在受试对象或动物中在首次施用本文所述的肽的组合之前与之后的受调控的淋巴细胞因子和/或细胞因子水平来测量免疫耐受的诱导。受调控的细胞因子的水平可以为细胞因子水平的增加，例如淋巴细胞因子和/或细胞因子的水平相对于首次施用肽组合之前增加至少1.5、2、3、4、5、6、7、8、10、20、50倍或更高。备选地，调控可以为特定细胞因子的水平的降低，例如淋巴细胞因子和/或细胞因子的水平相对于首次施用肽的组合之前降低至少1.5、2、3、4、5、6、7、8、10、20、50倍或更多。选择用于测量的淋巴细胞因子/细胞因子可以得自任何相关的淋巴细胞因子/细胞因子，例如IL-2、IL-5、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、TNF-α、IFN-γ、TGF-β、MCP-1、RANK-L和Flt3L。因此，术语“诱导免疫耐受”可以包括引起、刺激、促进、增加或增强免疫耐受。免疫耐受可以涉及T细胞活性的调控，包括但不限于CD4+T细胞、CD8+T细胞、Th1细胞、Th2细胞调节型T细胞(Tregs)和记忆T细胞，包括T细胞产生的炎性淋巴细胞因子/细胞因子。
通常，通过注射施用肽组合，例如通过皮下或皮内施用，但是还可以包括其他的施用途径，例如经皮、直肠、舌下、口服、口腔、鼻内、呼吸和淋巴管内施用途径。
可以将肽组合施用任何有需要的受试对象，例如人类、宠物(例如狗或猫)、家畜(例如马)、或试验室动物(例如小鼠、豚鼠或兔)。所述的受试对象可以对尘螨的过敏原敏感(例如具有针对尘螨的过敏原的特异性IgE抗体和/或具有针对尘螨的过敏原的T细胞应答)。因此，有需要的受试对象可以产生针对房尘螨过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和/或Der f 2的特异性IgE抗体或T细胞应答，以及上文所述的其他的尘螨过敏原，包括房尘螨或房尘螨粪便的水性提取物。
可以以临床相关的剂量施用肽组合，例如治疗充分剂量。例如所述的组合物的各种肽的单一剂量范围为1至1000纳摩尔，例如1至500纳摩尔，例如1至250纳摩尔，例如5至250纳摩尔，可以每日、每周、每两周、每月或每季度一次重复施用单一剂量。通常，肽组合为以体积大约50至150微升施用的液体，例如通过皮内施用。
本文所述的组合物可以以过敏症免疫疗法(例如肽过敏症免疫疗法)领域中常用的剂量方案定量施用。例如在至少2-6个月或者甚至更长的时期内以每日、每周、每两周、每月或每季度的间隔施用单一剂量(例如一次注射)的组合物，直至取得更持续性的作用。术语“持续性的作用”是指当暴露于房尘螨过敏原时，与施用受试对象第一剂量之前相比，免疫应答的一种或多种临床相关的症状在受试对象中被降低。可以在受试对象停止治疗之后至少2个月(例如在至少3个、4个、5个、6个、9个或12个月之后)，评价持续性作用。还可以设想在一天内或者在每日、每周或每两周的间隔下使用肽组合(以增加的剂量施用)通过剂量提高的阶段来开始所述的治疗，直至取得目标的持续剂量。
施用本文所述的肽组合的受试对象还可以可任选地施用用于治疗针对尘螨过敏原的免疫应答的另一种治疗剂。但是，在一些实施方案中，所述的受试对象并非与另一种免疫原的肽组合共同施用的，例如过敏原提取物或过敏原，例如房尘螨的过敏原提取物或过敏原。因此，在某些实施方案中，本文所述的组合物可以不包含过敏原提取物。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属技术领域的任意普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文所述的那些相似或等价的方法和材料可以用于本发明的实施或检测，但是合适的方法和材料如本文所述。
尽管为了清楚地理解，已经通过示意和实例的方式较为详细地描述了上述发明，但是根据本发明的教导，对于本领域的那些普通技术人员而言容易显而易见的是在不脱离所附权利要求书的精神或范围的条件下，可以对其进行某些改变和修改。通过以下非限定性实例进一步举例说明本发明。
本发明的其他方面涉及确定需要治疗的受试对象的T细胞是否识别本发明所述的组合物的体外方法，其包括将由所述的受试对象得到的T细胞与所述的组合物或其单一的肽接触，以及检测所述的T细胞是否受到所述的组合物或单一的肽的刺激。体外方法可以用于确定所述的受试对象是否具有或者处于发展成尘螨过敏原的敏感症的风险。
通过以下实施方案1至119进一步描述本发明：
实施方案1.包含至少3种肽的组合物，其中所述的组合物包含选自以下肽组的至少3组的肽：
组26：氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)、269(pep-125)、70(pep-099)或253(pep-012)的亲本肽，或其变体；
组24：氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)、67(pep-096)、79(pep-108)、256(pep-031)或270(pep-126)的亲本肽，或其变体；
组14：氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)或22(pep-054)的亲本肽，或其变体；
组1：氨基酸序列SEQ ID NO:90的亲本肽，或其变体；
组2：氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽，或其变体；
组3：氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)的亲本肽，或其变体；
组4：氨基酸序列SEQ ID NO:10(pep-042)的亲本肽，或其变体；
组5：氨基酸序列SEQ ID NO:11(pep-043)的亲本肽，或其变体；
组6：氨基酸序列SEQ ID NO:12(pep-044)的亲本肽，或其变体；
组7：氨基酸序列SEQ ID NO:42(pep-072)或249(pep-022)的亲本肽，或其变体；
组8：氨基酸序列SEQ ID NO:15(pep-047)的亲本肽，或其变体；
组9：氨基酸序列SEQ ID NO:266(pep-123)、255(pep-025)、46(pep-075)或17(pep-049)的亲本肽，或其变体；
组10：氨基酸序列SEQ ID NO:18(pep-050)、258(pep-122)或267(pep-124)的亲本肽，或其变体；
组11：氨基酸序列SEQ ID NO:120的亲本肽，或其变体；
组12：氨基酸序列SEQ ID NO:20(pep-052)或49(pep-078)的亲本肽，或其变体；
组13：氨基酸序列SEQ ID NO:21(pep-053)的亲本肽，或其变体；
组15：氨基酸序列SEQ ID NO:52(pep-081)或23(pep-055,272)的亲本肽，或其变体；
组16：氨基酸序列SEQ ID NO:26(pep-058)的亲本肽，或其变体；
组17：氨基酸序列SEQ ID NO:29(pep-061)、58(pep-087)、251(pep-10)或252(pep-011)的亲本肽，或其变体；
组18：氨基酸序列SEQ ID NO:71(pep-100)的亲本肽，或其变体；
组19：氨基酸序列SEQ ID NO:72(pep-101)的亲本肽，或其变体；
组20：氨基酸序列SEQ ID NO:61(pep-090)、73(pep-102)或276的亲本肽，或其变体；
组21：氨基酸序列SEQ ID NO:62(pep-091)的亲本肽，或其变体；
组22：氨基酸序列SEQ ID NO:63(pep-092)或278的亲本肽，或其变体；
组23：氨基酸序列SEQ ID NO:77(pep-106)的亲本肽，或其变体；以及
组25：氨基酸序列SEQ ID NO:81(pep-109)的亲本肽，或其变体。
实施方案2.根据实施方案1所述的组合物，其中至少一种肽选自所述的肽组1-17的任意一组。
实施方案3.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中至少一种肽选自所述的肽组18-26的任意一组。
实施方案4.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的至少三种肽选自所述的肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的三组。
实施方案5.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的至少三种肽选自所述的肽组9、10、13、14、16、20、21、24、25和26的三组。
实施方案6.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含选自所述的肽组1-26的任意一组的附加的肽，其中在所述的组合物中不包含得自所述的肽组的其他的肽。
实施方案7.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物不包含选自肽组7和/或肽组20的肽。
实施方案8.根据实施方案7所述的组合物，其中所述的组合物不包含得自所述的肽组7、20和17的各组的肽作为所述肽中的3种。
实施方案9.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)作为所述肽中的1种。
实施方案10.根据实施方案9所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组1-17的任意一组的肽作为所述肽中的1种。
实施方案11.根据之前的实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽pep-110)作为所述肽中的1种，并且包含选自肽组24、17、9或16的任意一组的肽作为所述肽中的1种。
实施方案12.根据实施方案11所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽pep-110)和得自所述的肽组24的肽(例如亲本肽pep-131)作为所述肽中的2种。
实施方案13.根据实施方案12所述的组合物，其中所述的第三肽选自所述的肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16和17的任意一组。
实施方案14.根据实施方案12和13的任意一项所述的组合物，其中所述的第三肽选自所述的肽组14。
实施方案15.根据实施方案14所述的组合物，其中所述的附加的肽选自所述的肽组1-13、15-23和25的任意一组。
实施方案16.根据实施方案14所述的组合物，其中所述的附加的肽选自所述的肽组9、16和21的任意一组。
实施方案17.根据实施方案12至16的任意一组所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的5个所述的肽组26、24、14、9和16的各组的肽。
实施方案18.根据实施方案17所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266的亲本肽(pep-123)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体。
实施方案19.根据实施方案17所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266的亲本肽(pep-123)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体。
实施方案20.根据实施方案12至16的任意一组所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的5个所述的肽组26、24、14、9和21的各组的肽。
实施方案21.根据实施方案20所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266的亲本肽(pep-123)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案22.根据实施方案20所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案23.根据实施方案12至16的任意一组所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的5个所述的肽组26、24、14、16和21的各组的肽。
实施方案24.根据实施方案23所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案25.根据实施方案12和13的任意一组所述的组合物，其中所述的第三肽得自所述的肽组9或得自所述的肽组21。
实施方案26.根据实施方案25所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的5个肽组26、24、21、9和13的各组的肽。
实施方案27.根据实施方案26所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的亲本肽(pep-131)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266的亲本肽(pep-123)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:21的亲本肽(pep-053)或其变体。
实施方案28.根据实施方案12和13的任意一组所述的组合物，其中所述的第三肽包含得自所述的肽组17。
实施方案29.根据实施方案28所述的组合物，其包含选自所述的肽组1-16、18-23和25的任意一组的附加的肽。
实施方案30.根据实施方案28和29的任意一项所述的组合物，其中附加的肽选自所述的肽组7和10的任意一组或两组。
实施方案31.根据实施方案30所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的5个肽组26、24、17、7和10的各组的肽。
实施方案32.根据实施方案31所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253的亲本肽(pep-012)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256的亲本肽(pep-031)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:252的亲本肽(pep-011)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:254的亲本肽(pep-022)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:258的亲本肽(pep-122)或其变体。
实施方案33.根据实施方案31所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253的亲本肽(pep-012)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256的亲本肽(pep-031)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:251的亲本肽(pep-010)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:254的亲本肽(pep-022)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:258的亲本肽(pep-122)或其变体。
实施方案34.根据实施方案30所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自所述的4个肽组26、24、17和10的各组的肽；以及氨基酸序列SEQ ID NO:117的肽(pep-p4)或其变体。
实施方案35.根据实施方案34所述的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:253的亲本肽(pep-012)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:256的亲本肽(pep-031)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:252的亲本肽(pep-011)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:258的亲本肽(pep-122)或其变体；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:117亲本肽或其变体。
实施方案36.根据实施方案11所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽110)和得自所述的肽组17的肽(例如亲本肽pep-058、pep-010、pep-011或pep-061)作为所述肽中的2种。
实施方案37.根据实施方案36所述的组合物，其包含3种肽，其中所述的组合物包含得自3个所述的肽组26、17和6的各组的肽。
实施方案38.根据实施方案37所述的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:70的亲本肽(pep-099)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:251的亲本肽(pep-010)或其变体；以及
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽(pep-044)或其变体。
实施方案39.根据实施方案11所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽110)和得自所述的肽组9的肽(例如亲本肽pep-123、pep-025、pep-075或pep-049)作为所述肽中的2种。
实施方案40.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、6、16和19的各组的肽。
实施方案41.根据实施方案40所述的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:70的亲本肽(pep-099)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽(pep-044)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:60的亲本肽(pep-089)或其变体。
实施方案42.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、6、18和20的各组的肽。
实施方案43.根据实施方案42所述的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽(pep-044)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:71的亲本肽(pep-100)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:73的亲本肽(pep-102)或其变体。
实施方案44.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、6、12和21的各组的肽。
实施方案45.根据实施方案44所述的组合物，其包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:17的亲本肽(pep-049)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽(pep-044)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:20的亲本肽(pep-052)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案46.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、16、3和25的各组的肽。
实施方案47.根据实施方案46所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:9的亲本肽(pep-041)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81的亲本肽(pep-109)或其变体。
实施方案48.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、16、14和25的各组的肽。
实施方案49.根据实施方案48所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:22的亲本肽(pep-054)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81的亲本肽(pep-109)或其变体。
实施方案50.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、16、3和21的任意一组的肽。
实施方案51.根据实施方案50所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:9的亲本肽(pep-041)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案52.根据实施方案39所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、9、16、14和21的各组的肽。
实施方案53.根据实施方案52所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:46的亲本肽(pep-075)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:268的亲本肽(pep-130)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案54.根据实施方案11所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽(例如亲本肽pep-110或其变体)和得自所述的肽组16的肽(例如亲本肽pep-058或其变体)作为所述肽中的2种。
实施方案55.根据实施方案54所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、16、3、15和25的各组的肽。
实施方案56.根据实施方案55所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:9的亲本肽(pep-041)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:52的亲本肽(pep-081)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:81的亲本肽(pep-109)或其变体。
实施方案57.根据实施方案54所述的组合物，其包含5种肽，其中所述的组合物包含得自5个所述的肽组26、16、14、15和21的各组的肽。
实施方案58.根据实施方案57所述的组合物，其中所述的组合物包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的亲本肽(pep-110)或其变体；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽(pep-058)或其变体；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:22的亲本肽(pep-054)或其变体；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:52的亲本肽(pep-081)或其变体；
以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽(pep-091)或其变体。
实施方案59.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中在所述的组合物中的肽均选自不同的肽组，例如选自3个不同肽组的各组的最多3种肽，选自4个不同肽组的各组的最多4种肽，选自5个不同肽组的各组的最多5种肽，选自6个不同肽组的各组的最多6种肽，选自7个不同肽组的各组的最多7种肽。
实施方案60.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体为以下的肽，其包含比所述的亲本肽多一个或多个附加的氨基酸，并且长度包含至多30个氨基酸残基，可任选地其中所述的变体肽包含在所述的亲本肽的至少14个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性的氨基酸序列。
实施方案61.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体为以下的肽，其包含比所述的亲本肽少几个氨基酸，并且其中所述的氨基酸序列包含在所述的亲本肽的至少14个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性。
实施方案62.根据上述实施方案60和61的任意一项所述的组合物，其中所述的变体由14至30个氨基酸组成，并且包含在所述的亲本肽的至少15个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性的氨基酸序列。
实施方案63.根据上述实施方案60和61的任意一项所述的组合物，其中所述的变体由15至30个氨基酸组成，并且包含在所述的亲本肽的至少15个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性的氨基酸序列。
实施方案64.根据上述实施方案60和61的任意一项所述的组合物，其中所述的变体由15至25个氨基酸组成，并且包含在所述的亲本肽的至少15个相邻的氨基酸上具有至少80％一致性的氨基酸序列。
实施方案65.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体包含加入到所述的亲本肽的N-或C-末端上、或者所述的亲本肽的片段上的一个或多个(例如1、2、3或4)精氨酸残基(R)、一个或多个赖氨酸残基(K)、一个或多个谷氨酸残基(E)和/或一个或多个天冬氨酸残基(D)，其中所述的亲本肽的片段由所述的亲本肽的至少14个相邻的氨基酸组成。
实施方案66.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体包含加入到所述的亲本肽的N-和/或C-末端上的一个或多个附加的氨基酸残基，其中当将所述的一个或多个附加的氨基酸残基与其中存在有、作为基础的或可以衍生所述的氨基酸残基的所述的野生型氨基酸序列比对时，或者与所述的相同的野生型氨基酸序列的另一种同种型比对时，所述的一个或多个附加的氨基酸序列与位于所述的亲本肽的N-和/或C-末端的侧翼的氨基酸或氨基酸序列是相同的。
实施方案67.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体包含由距所述的亲本肽的N-或C-末端的至多3个氨基酸处删除疏水性残基；和/或由距所述的亲本肽的N-或C-末端的至多4个氨基酸处删除包含序列Asp-Gly的任何2个连续的氨基酸。
实施方案68.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中包含肽的变体的组合物的肽含有至少一个T细胞表位，可任选地Th-2细胞表位。
实施方案69.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的变体与所述的亲本肽结合的II类HLA等位基因组的至少70％结合。
实施方案70.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的亲本肽或其变体是衍生化的。
实施方案71.根据实施方案70所述的组合物，其中所述的亲本肽或其变体在所述的C-末端是酰胺化的。
实施方案72.根据实施方案70所述的组合物，其中所述的衍生物包含(a)N-末端乙酰化；(b)C-末端酰胺化；(c)被亚甲基替换的精氨酸和/或赖氨酸的侧链胺上的一个或多个氢；(d)糖基化；和/或(e)磷酸化。
实施方案73.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的亲本肽或其变体、或者所述的亲本肽或其变体的衍生物为盐。
实施方案74.根据实施方案73所述的组合物，其中所述的盐为乙酸盐。
实施方案75.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的肽为合成制备的。
实施方案76.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的肽是冻干的。
实施方案77.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物中的各种肽以等摩尔浓度或者以基本的等摩尔浓度存在。
实施方案78.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物中的各种肽以1至1000μM的摩尔浓度存在。
实施方案79.根据实施方案1至78的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物为药物组合物。
实施方案80.根据实施方案79所述的药物组合物，其进一步包含药物可接受的载体、赋形剂和/或佐剂，可任选地是无菌的。
实施方案81.根据实施方案79和80的任意一项所述的、被配制成用于肠胃外施用的疫苗的药物组合物。
实施方案82.根据实施方案79至81的任意一项所述的药物组合物，其中所述的药物组合物为粉末。
实施方案83.根据实施方案79至82的任意一项所述的药物组合物，其中所述的组合物被配制成在使用前再次溶解。
实施方案84.根据实施方案79至83的任意一项所述的药物组合物，其中所述的组合物是等渗的。
实施方案85.包含隔间和说明书的试剂盒，其中所述的隔间包含根据实施方案1至84的任意一项的组合物，并且其中所述的说明书用于治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症。
实施方案86.根据实施方案85所述的试剂盒，其中所述的试剂盒进一步包含包装材料，其包括波纹状的纤维、玻璃、塑料、箔、安瓿、小瓶、泡罩包装、预装载的注射器或管，其可任选地所述的包装材料保持成分的无菌性。
实施方案87.根据实施方案85至86的任意一项的试剂盒，其中所述的试剂盒进一步包含含有印刷品或计算机可读介质的标签或插入物，其可任选地包含确认的成分、剂量、临床药理学、临床医生或受试对象使用一种或多种试剂盒成分的说明书、预后或治疗益处、不利的副作用或制备信息。
实施方案88.一种用于在有需要的受试对象中减缓或降低(例如治疗)由尘螨(例如房尘螨)的过敏原触发的免疫应答的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的根据实施方案1至84的任意一项所述的组合物。
实施方案89.一种用于在有需要的受试对象中减缓由尘螨(例如房尘螨)的过敏原触发的免疫应答的一个或多个症状的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的根据实施方案1至84的任意一项所述的组合物。
实施方案90.一种用于诱导(发展)针对尘螨例如房尘螨的过敏原的免疫耐受的方法，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的根据实施方案1至84的任意一项所述的组合物。
实施方案91.根据实施方案88至90的任意一项所述的方法，其中所述的方法包括减缓与变应性鼻炎、变应性结膜炎、过敏性哮喘和/或变应性湿疹(例如特应性皮炎)有关的一种或多种症状。
实施方案92.根据实施方案91所述的方法，其中所述的一种或多种症状为与变应性鼻炎有关的症状。
实施方案93.根据实施方案92所述的方法，其中所述的方法包括降低鼻痒的强烈程度；减少在给定时间(例如每天、每周、每月)内打喷嚏的数量；降低鼻塞(例如阻塞)的强烈程度；减少鼻水的量；减少鼻水的嗜酸性粒细胞计数；减少鼻水或血清中特异性IgE抗体的水平(效价)和/或降低血液中嗜碱性粒细胞释放组胺。
实施方案94.根据实施方案91所述的方法，其中所述的一种或多种症状为与变应性结膜炎有关的症状。
实施方案95.根据实施方案94所述的方法，其中所述的方法包括降低眼睛痒的强烈程度；降低眼白和/或泪溢的发红；减少结缔组织碎屑中的嗜酸粒细胞的计数；降低结缔组织碎屑或血清的特异性IgE抗体的水平(效价)和/或降低血液的嗜碱性粒细胞组胺释放。
实施方案96.根据实施方案91所述的方法，其中所述的一种或多种症状为与过敏性哮喘有关的症状。
实施方案97.根据实施方案96所述的方法，其中所述的方法包括降低在给定的时间(例如每天、每周、每月)内咳嗽的强烈程度和/或数量；降低喘息的强烈程度；改善气促；改善肺功能；降低在肺液或血清中特异性IgE抗体的水平(效价)和/或降低血液中嗜碱性粒细胞释放组胺。
实施方案98.根据实施方案91所述的方法，其中所述的一种或多种症状为与特应性皮炎有关的症状。
实施方案99.根据实施方案98所述的方法，其中所述的方法包括降低皮肤发痒的强烈程度；降低湿疹的得分和/或减少(外周)血液嗜酸性粒细胞的数量。
实施方案100.根据实施方案88至99的任意一项所述的方法，其中所述的方法包括降低受试对象对使用皮质甾类或H1抗组胺进行联合治疗，从而降低、减轻或阻抑免疫应答的一种或多种症状的需要。
实施方案101.根据实施方案88至100的任意一项所述的方法，其中所述的尘螨过敏症在临床上呈现为特应性鼻炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性反应和/或枯草热。
实施方案102.根据实施方案88至101的任意一项所述的方法，其中所述的方法降低、减轻、阻抑或抑制特应性皮炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏反应和/或枯草热。
实施方案103.根据实施方案88至102的任意一项所述的方法，其中所述的方法包括在所述的受试对象中诱导或增加对尘螨的过敏原的IgG抗体的应答。
实施方案104.根据实施方案88至103的任意一项所述的方法，其中所述的方法包括在所述的受试对象中降低对尘螨的过敏原的IgE抗体的应答。
实施方案105.根据实施方案88至105的任意一项所述的方法，其中所述的方法包括在所述的受试对象中降低对尘螨的过敏原的T细胞的应答。
实施方案106.根据实施方案88至105的任意一项所述的方法，其中所述的受试对象对尘螨的过敏原敏感(例如具有针对尘螨的过敏原的特异性IgE抗体和/或具有针对尘螨的过敏原的T细胞应答)。
实施方案107.根据实施方案88至106的任意一项所述的方法，其中所述的尘螨为房尘螨属。
实施方案108.根据实施方案88至107的任意一项所述的方法，其中所述的尘螨的过敏原为Der p 1、Der p 2、Der f 1和/或Der f 2。
实施方案109.根据实施方案88至108的任意一项所述的方法，其中所述的治疗包括在每周、每两周、每月或每季度的间隔下重复施用所述的组合物。
实施方案110.根据实施方案88至109的任意一项所述的方法，其中所述的治疗为通过免疫疗法。
实施方案111.根据实施方案88至110的任意一项所述的方法，其中所述的组合物的各种单一肽的单一剂量范围为1至1000纳摩尔。
实施方案112.根据实施方案88至111的任意一项所述的方法，其中所述的施用包括施用体积为大约50至150微升的所述的组合物(例如通过皮内施用)。
实施方案113.根据实施方案88至112的任意一项所述的方法，其中所述的施用是通过选自以下任意一种的施用途径：皮下、皮内、经皮、直肠、局部、舌下、口服、口腔、鼻内、呼吸和淋巴管内。
实施方案114.根据实施方案88至113的任意一项所述的方法，其中所述的受试对象为人类、宠物(例如狗或猫)、或者家畜(例如马)。
实施方案115.根据实施方案1-84的任意一项所述的组合物用于根据实施方案88至114的任意一项所述的方法中。
实施方案116.根据实施方案1-84的任意一项所述的组合物在制备根据实施方案88-114的任意一项所述的方法中使用的药物中的用途。
实施方案117.一种确定需要治疗的受试对象的T细胞是否识别实施方案1至784的任意一项中所定义的组合物的体外方法，其包括将由所述的受试对象得到的T细胞与所述的组合物或其单一肽接触，以及检测所述的T细胞是否被所述的组合物或单一肽所刺激。
实施方案118.实施用于确定受试对象是否具有或者处于发展成对尘螨的过敏原产生过敏症的风险的实施方案117所述的方法。
实施方案119.一种包含根据实施方案1-84的任意一项所述的组合物的诊断试剂盒。
通过以下实施方案A1至A191进一步描述本发明：
实施方案A1.一种包含肽组合的组合物，其包含3种肽或更多，其中所述的组合的各种肽独立地选自：
(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:249(肽002)、251(肽010)、252(肽011)、253(肽012)、254(肽022)、255(肽025)、256(肽031)、9(肽041)、10(肽042)、11(肽043)、12(肽044)、15(肽047)、17(肽049)、18(肽050)、20(肽052)、21(肽053)、(肽054)、23(肽055)、26(肽058)、29(肽061)、238(肽066)、42(肽072)、46(肽075)、49(肽078)、52(肽081)、58(肽087)、60(肽089)、61(肽090)、62(肽091)、63(肽092)、67(肽096)、70(肽099)、71(肽100)、72(肽101)、73(肽102)、77(肽106)、79(肽108)、81(肽109)、82(肽110)、257(肽117)、258(肽122)、266(肽123)、267(肽124)、269(肽125)、270(肽126)、268(肽130)、271(肽131)、259(肽203B)、264(肽26B)、90、98、99、280、102、161、281、282、103、105、106、166、111、112、284、114、115、173、174、285、117、176、120、121、180、128、129、272、187、188、273、191、133、192、274、140、199、226、275、227、205、206、229、230、276、277、208、233、278、210、234、242、243、279、221、245、246、166、223、247、224或248组成的任意肽；或者(b)在(a)中任意肽的变体序列、衍生物或盐。
实施方案A2.根据实施方案A1所述的组合物，其中所述的肽组合的至少一种肽为过敏原der p 1或过敏原der f 1的肽，并且选自：
(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽011)、253(肽012)、254(肽022)、255(肽025)、9(肽041)、10(肽042)、11(肽043)、12(肽044)、17(肽049)、18(肽050)、20(肽052)、21(肽053)、22(肽054)、23(肽055)、26(肽058)、29(肽061)、42(肽072)、46(肽075)、49(肽078)、52(肽081)、58(肽087)、258(肽122)、266(肽123)、267(肽124)、268(肽130)、259(肽203B)、90、98、99、280、102、161、281、282、103、105、106、283、166、111、112、284、114、115、173、174、285、117、176、120、121、180、128、129、272、187、188、273、191,133、274、140或199组成的任意肽；或者(b)在(a)中任意肽的变体序列、衍生物或盐。
实施方案A3.根据上述实施方案A1至A2的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的至少一种肽为过敏原der p 2或过敏原der f 2的肽，并且选自：
(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:249(肽002)、253(肽012)、256(肽031)、238(肽066)、60(肽089)、61(肽090)、62(肽091)、63(肽092)、67(肽096)、70(肽099)、71(肽100)、72(肽101)、73(肽102)、77(肽106)、79(肽108)、81(肽109)、82(肽110)、269(肽125)、270(肽126)、285(肽131)、264(肽26B)、226、275、227、205、206、229、230、276、277、208、233、192、278、210、234、242、243、279、221、245、246、166、223、247、224或248组成的任意肽；或者(b)在(a)中任意肽的变体序列、衍生物或盐。
实施方案A4.根据上述实施方案A1至A3的任意一项所述的组合物，其中至少3种肽独立地选自表12中列出的使用评级“A”表示的任意肽。
实施方案A5.根据实施方案A4所述的组合物，其中至少3种肽独立地选自：
(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:249(肽002)、251(肽010)、252(肽011)、253(肽012)、256(肽031)、10(肽042)、11(肽043)、12(肽044)、17(肽049)、18(肽050)、21(肽053)、22(肽054)、26(肽058)、29(肽061)、52(肽081)、58(肽087)、61(肽090)、62(肽091)、67(肽096)、70(肽099)、73(肽102)、81(肽109)、82(肽110)、258(肽122)、266(肽123)、267(肽124)、269(肽125)、270(肽126)、268(肽130)、271(肽131)、259(肽203B)、264(肽26B)、280、281、282、166、284、285、272、273、274、275、276或277组成的任意肽；或者(b)在(a)中任意肽的变体序列、衍生物或盐。
实施方案A6.根据上述实施方案A1至A5的任意一项所述的组合物，其中至少3种肽选自表15中列出的任意“第一选择肽”。
实施方案A7.根据实施方案A6所述的组合物，其中至少3种肽独立地选自：
(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:253(肽012)、256(肽031)、270(肽126)、17(肽049)、266(肽123),18(肽050)、267(肽124)、21(肽053)、22(肽054)、268(肽130)、26(肽058)、52(肽081)、61(肽090)、62(肽091)、67(肽096)、271(肽131)、70(肽099)、269(肽125)、73(肽102)、81(肽109)或82(肽110)组成的任意肽；或者(b)在(a)中任意肽的变体序列、衍生物或盐。
实施方案A8.根据上述实施方案A1至A7的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A9.根据上述实施方案A1至A8的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A10.根据上述实施方案A1至A9的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、256(肽031)、270(肽126)、242或279中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A11.根据上述实施方案A1至A10的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A12.根据上述实施方案A1至A11的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、SEQ ID NO:46(肽075)、SEQID NO:173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A13.根据上述实施方案A1至A12的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A14.根据上述实施方案A1至A13的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽11)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A15.根据上述实施方案A1至A14的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A16.根据上述实施方案A1至A15的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A17.根据上述实施方案A1至A16的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A18.根据上述实施方案A1至A17的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:10(肽042)、259(HDM203B)、102、161、281或282中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A19.根据上述实施方案A1至A18的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:11(肽043)、SEQ ID NO:103、281或282中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A20.根据上述实施方案A1至A19的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:42(肽072)、254(肽022)或166中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A21.根据上述实施方案A1至A20的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:15(肽047)、111、112或284中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A22.根据上述实施方案A1至A21的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:265(肽025)、115、173或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A23.根据上述实施方案A1至A22的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:20(肽052)、49(肽078)、121或180中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A24.根据上述实施方案A1至A23的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的1种肽由选自SEQ ID NO:21(肽053)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A25.根据上述实施方案A1至A24的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:23(肽055)、52(肽081)、128、129、272、187、188或273中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A26.根据上述实施方案A1至A25的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:61(肽090)、73(肽102)、205、206、229、230、276或277中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A27.根据上述实施方案A1至A26的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:249(肽002)、206或230中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A28.根据上述实施方案A1至A27的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:63(肽092)、233、210、234或278中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A29.根据上述实施方案A1至A28的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的至少1种肽由选自SEQ ID NO:81(肽109)、221或245中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A30.根据上述实施方案A1至A29的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；并且所述的组合的第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A31.根据上述实施方案A1至A29的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的任意的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；并且所述的组合的第二肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)105或106中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A32.根据上述实施方案A1至A29的任意一项所述的组合物，其中所述的组合的第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；并且所述的组合的第二肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽011)、58(肽087)29(肽061)、140或199的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A33.根据实施方案A31所述的组合物，其中所述的肽的组合包含至少3种肽，其中所述的组合的第一肽和第二肽选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的任意，或者其变体序列、衍生物或盐；并且所述的组合的第三肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)105、106或283的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号13中的肽)。
实施方案A34.根据实施方案A33所述的组合物，其中所述的肽的组合包含至少3种肽，这3种肽分别由SEQ ID NO:12(肽044)、70(肽099)和82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号13中的肽)。
实施方案A35.根据实施方案A31或32的任意一项所述的组合物，其中所述的肽的组合包含至少3种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)105、106或283中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；并且第三肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽11)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号16中的肽)。
实施方案A36.根据实施方案A35所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少3种肽，这3种肽分别由SEQ ID NO:12(肽044)、82(肽110)和251(肽010)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号16中的肽)。
实施方案A37.根据实施方案A32所述的组合物，其中所述的肽的组合包含至少4种肽，其中第一肽和第二肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽11)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；并且第四肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号20中的肽)。
实施方案A38.根据实施方案A37所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少4种肽，这4种肽分别由氨基酸序列SEQ ID NO:18(肽050)、82(肽110)、251(肽010)和70(肽070)，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列举的肽组合编号20中的肽)。
实施方案A39.根据实施方案A30至A38的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽包含选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐。
实施方案A40.根据实施方案A30至A39的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A41.根据实施方案A30至A40的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、256(肽031)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A42.根据实施方案A30至A41的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A43.根据实施方案A30至A42的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A44.根据实施方案A30至A43的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A45.根据实施方案A30至A44的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽11)、58(肽087)、30(肽061)、140或199中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A46.根据实施方案A30至A45的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A47.根据实施方案A30至A46的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A48.根据实施方案A30至A47的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A49.根据实施方案A30至A48的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:10(肽042)、259(HDM203B)、102、161、281或282中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A50.根据实施方案A30至A49的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:11(肽043)或SEQ ID NO:103中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A51.根据实施方案A30至A50的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:42(肽072)、254(肽022)或166中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A52.根据实施方案A30至A51的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:15(肽047)、111、112或284中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A53.根据实施方案A30至A52的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:265(肽025)、115、173或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A54.根据实施方案A30至A53的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:20(肽052)、49(肽078)、121或180中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A55.根据实施方案A30至A54的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:21(肽053)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A56.根据实施方案A30至A55的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:23(肽055)、52(肽081)、128、129、272、187、188或273中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A57.根据实施方案A30至A56的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:61(肽090)、73(肽102)、205、206、229、230、276或277中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A58.根据实施方案A30至A57的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:249(肽002)、206或230中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A59.根据实施方案A30至A58的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合的其他肽由选自SEQ ID NO:63(肽092)、233、210、234或278中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A60.根据实施方案A30至A59的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含由衍生自过敏原Der p 4的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成的至少1种肽；例如由选自SEQ ID NO:257(肽117)的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成的肽。
实施方案A61.根据上述实施方案的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合由肽组合的肽、或者其变体序列、衍生物或盐组成或者包含肽组合的肽、或者其变体序列、衍生物或盐，其中所述的肽组合选自表14中列出的肽组合编号3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、23、24、25、17、17a、17b、17c、17d、17f和17p，其中所述的肽的氨基酸序列在表12中列出。
实施方案A62.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:81(肽109)、221或245中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17中的肽)。
实施方案A63.根据实施方案A62所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:82(肽110)、26(肽058)、9(肽041)、46(肽075)和81(肽109)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17中的肽)。
实施方案A64.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:81(肽109)、221或245中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17a中的肽)。
实施方案A65.根据实施方案A64所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:22(肽054)、26(肽058)、46(肽075)、81(肽109)和82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17a中的肽)。
实施方案A66.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:23(肽055)、52(肽081)、128、129、272、187、188或273中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:81(肽109)、221或245中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17b中的肽)。
实施方案A67.根据实施方案A66所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:9(肽041)、26(肽058)、52(肽081)、81(肽109)和82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17b中的肽)。
实施方案A68.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17c中的肽)。
实施方案A69.根据实施方案A68所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:9(肽041),26(肽058),46(肽075),62(肽091)和82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17c中的肽)。
实施方案A70.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:23(肽055)、52(肽081)、128、129、272、187、188或273中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17d中的肽)。
实施方案A71.根据实施方案A70所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:22(肽054)、26(肽058)、52(肽081)、SEQ ID NO:62(肽091)和SEQID NO:82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17d中的肽)。
实施方案A72.根据实施方案A30、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:256(肽031)、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17f中的肽)。
实施方案A73.根据实施方案A72所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:26(肽058)、46(肽075)、82(肽110)、268(肽130)和271(肽131)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17f中的肽)。
实施方案A74.根据实施方案72所述的组合物，其中由选自SEQ ID NO:26(肽058)133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成的所述的第二肽被由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成的肽所取代。
实施方案A75.根据实施方案A74所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:22(肽054)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:256(肽031)、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17p中的肽)。
实施方案A76.根据实施方案A75所述的组合物，其中所述的肽组合由至少5种肽组成或者包含至少5种肽，所述5种肽分别由SEQ ID NO:62(肽091)、82(肽110)、266(肽123)、268(肽130)和271(肽131)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号17p中的肽)。
实施方案A77.根据实施方案A31、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由SEQ ID NO:71(肽100)、226或275的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:62(肽090)、73(肽102)、60(肽089)、205、206、229、230、276或277中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号23中的肽)。
实施方案A78.根据实施方案A77所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:82(肽110)、12(肽044)、73(肽102)、46(肽075)和71(肽100)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号23)。
实施方案A79.根据实施方案A31、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽和第二肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号18中的肽)。
实施方案A80.根据实施方案A80所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:9(041)、12(044)、17(049)、SEQ ID NO:70(肽099)和82(110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号18中的肽)。
实施方案A81.根据实施方案A31、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:62(肽091)或208中氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:20(肽052)、49(肽078)、121或180中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号25中的肽)。
实施方案A82.根据实施方案A83所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:82(肽110)、12(肽044)、17(肽049)、62(肽091)和20(肽052)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号25中的肽)。
实施方案A83.根据实施方案A31、或者A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:26(肽058)、133、192或274中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自ID NO:17(肽049)、266(肽123)、46(肽075)、173、174或285中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:61(肽090)、73(肽102)、60(肽089)、205、206、229、230、276或277中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号10中的肽)。
实施方案A84.根据实施方案A84所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:70(肽099)、12(肽044):26(肽058)、46(肽075)和60(肽089)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号10中的肽)。
实施方案A85.根据实施方案A32、以及A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中所述的肽组合的第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；所述的肽组合的第二肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽011)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:256(肽031)、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由SEQID NO:257(肽117)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号3中的肽)。
实施方案A86.根据实施方案A87所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:252(肽011)、253(肽012)、256(肽031)、257(肽117)和258(肽122)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号3中的肽)。
实施方案A87.根据实施方案A32、以及A33至A61的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中所述的组合的第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；所述的肽组合的第二肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽011)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:256(肽031)、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:42(肽072)、254(肽022)或166中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号5中的肽)。
实施方案A88.根据实施方案A88所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:252(肽011)、253(肽012)、254(肽022)、256(肽031)和258(肽122)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号5中的肽)。
实施方案A89.根据实施方案A88所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:251(肽010)、253(肽012)、254(肽022)、256(肽031)和SEQ ID NO:258(肽122)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号9中的肽)。
实施方案A90.根据实施方案A32、以及A33至A63的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽和第二肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:251(肽010)、252(肽011)、58(肽087)、29(肽061)、140或199中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由选自SEQ ID NO:256(肽031)、7(肽096)、271(肽131)、79(肽108)、270(肽126)、242或279中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:9(肽041)、98、99或280中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ IDNO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号19中的肽)。
实施方案A91.根据实施方案A91所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其分别由SEQ ID NO:251(肽010)、9(肽041)、SEQ ID NO:18(肽050)、SEQ ID NO:70(肽099)和SEQ ID NO:82(肽110)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号19中的肽)。
实施方案A92.根据实施方案A1至A29的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:12(肽044)、105、106或283中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:20(肽052)、49(肽078)、121或180中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由SEQ ID NO:71(肽100)、226或275的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ IDNO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由选自SEQ ID NO:61(肽090)、73(肽102)、60(肽089)、205、206、229、230、276或277中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号24中的肽)。
实施方案A93.根据实施方案A93所述的组合物，其中所述的肽组合由以下5种肽组成或包含以下5种肽，其分别由SEQ ID NO:12(肽044)、18(肽050)、49(肽078)、71(肽100)和73(肽102)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号24中的肽)。
实施方案A94.根据实施方案A1至A29的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少5种肽，其中第一肽由选自SEQ ID NO:70(肽099)、269(肽125)、82(肽110)、264(肽26B)、253(肽012)、166、246、223、247、224或248中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第二肽由选自SEQ ID NO:249(肽002)、206或230中的氨基酸序列、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第三肽由氨基酸序列SEQ ID NO:42(肽072)、254(肽022)或166、或者其变体序列、衍生物或盐组成；第四肽由选自SEQ ID NO:18(肽050)、258(肽122)、267(肽124)、117或176中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成；以及第五肽由氨基酸序列257(肽117)，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号4中的肽)。
实施方案A95.根据实施方案A95所述的组合物，其中所述的肽组合由以下5种肽组成或包含以下5种肽，所述的5中肽分别由SEQ ID NO:249(肽002)、253(肽12)、254(肽022)、257(肽117)和258(肽122)的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成(表14中列出的肽组合编号4中的肽)。
实施方案A96.根据实施方案A62至A95的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含由SEQ ID NO:264(肽HDM 203B),281或282的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成的肽。
实施方案A97.根据实施方案A62至A96的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含由氨基酸序列SEQ ID NO:259(肽HDM 26B)，或者其变体序列、衍生物或盐组成的肽。
实施方案A98.根据实施方案A62至A97的任意一项所述的组合物，其中所述的组合包含选自以下肽的至少一种附加的肽，或者其变体序列、衍生物或盐：SEQ ID NO:249(肽002)、251(肽010)、252(肽011)、253(肽012)、254(肽022)、255(肽025)、256(肽031)、9(肽041)、10(肽042)、11(肽043)、12(肽044)、15(肽047)、17(肽049)、18(肽050)、20(肽052)、21(肽053)、22(肽054)、23(肽055)、26(肽058)、29(肽061)、238(肽066)、42(肽072)、46(肽075)、49(肽078)、52(肽081)、58(肽087)、60(肽089)、61(肽090)、62(肽091)、63(肽092)、67(肽096)、70(肽099)、72(肽101)、73(肽102)、77(肽106)、79(肽108)、81(肽109)、82(肽110)、257(肽117)、258(肽122)、266(肽123)、267(肽124)、269(肽125)、270(肽126)、268(肽130)、271(肽131)、259(肽203B)、264(肽26B)、90、98、99、280、102、161、281、282、103、105、106、283、111、112、284、114、115、173、174、117、176、120、121、180、128、129、272、187、188、273、191、133、192、274、140、199、226、227、205、206、229、230、276、277、208、233、278、210、234、242、243、279、221、245、246、223、247、224或248。
实施方案A99.根据上述实施方案A1至A99的任意一项所述的组合物，其中由表12中列出的氨基酸序列组成的肽被指定用于表12中所述的肽的取代肽，或者其变体序列、衍生物或盐所替换。
实施方案A100.根据上述实施方案A1至A100的任意一项所述的组合物，其中由氨基酸序列SEQ ID NO:17(肽058)组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:22(肽054)、255(肽025)、49(肽078)、133、192或274中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A101.根据上述实施方案A1至A101的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:46(肽075)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:255(肽025)、271、17(肽049)、20(肽052)、22(肽054)、21(肽053)、49(肽078)或266(肽123)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A102.根据上述实施方案A1至A101的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:82(肽110)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:253(肽012)、70(肽099)、264(肽26B)、269(肽125)、224或248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A103.根据上述实施方案A1至A102的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:268(肽130)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:255(肽025)、285、12(肽044)、283、22(肽054)或21(肽053)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A104.根据上述实施方案A1至A103的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:271(肽131)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:256(肽031)、81(肽109)或67(肽096)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A105.根据上述实施方案A1至A104的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:81(肽109)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:256(肽031)、67(肽096)或271(肽131)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A106.根据上述实施方案A1至A105的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:17(肽049)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，根据上述实施方案的任意一项的组合物，其中所述的肽由选自SEQ ID NO:46(肽075)、266(肽123)或174中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A107.根据上述实施方案A1至A106的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:22(肽054)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:255(肽025)、285、12(肽044)、283、21(肽053)、26(肽058)、274、46(肽075)或268(肽130)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A108.根据上述实施方案A1至A107的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:67(肽096)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:256(肽031)、81(肽109)或271(肽131)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A109.根据上述实施方案A1至A108的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:12(肽044)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:22(肽054)、268(肽130)或283中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A110.根据上述实施方案A1至A109的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:15(肽050)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:254(肽022)、26(肽058)、274、52(肽081)、258(肽122)或267(肽124)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A111.根据上述实施方案A1至A110的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:256(肽031)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:81(肽109)、271(肽131)、67(肽096)或270(肽126)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A112.根据上述实施方案A1至A111的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:251(肽010)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:252(肽011)、58(肽087)或29(肽061)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A113.根据上述实施方案A1至A112的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:258(肽122)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:18(肽050)、52(肽081)或267(肽124)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A114.根据上述实施方案A1至A113的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:253(肽012)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:256(肽031)、70(肽099)、81(肽109)、82(肽110)或269(肽125)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A115.根据上述实施方案A1至A114的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:73(肽102)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:249(肽002)、60(肽089)、61(肽090)、276、277或82(肽110)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A116.根据上述实施方案A1至A115的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:70(肽099)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:253(肽012)、264(肽26B)、82(肽110)或269(肽125)中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A117.根据上述实施方案A1至A116的任意一项所述的组合物，其中由SEQID NO:52(肽081)的氨基酸序列组成的肽被取代肽替换，其中所述的取代肽由选自SEQ IDNO:250(肽009)、254(肽022)、10(肽042)、18(肽050)、258(肽122)、23(肽055)、128、129、272、187、188或273中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐的组成。
实施方案A118.根据上述实施方案A1至A117的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，这种肽由衍生自过敏原Der p1的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A119.根据上述实施方案A1至A118的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，这种肽由衍生自过敏原Der p2的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A120.根据上述实施方案A1至A119的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，这种肽由衍生自过敏原Der f1的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A121.根据上述实施方案A1至A120的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，这种肽由衍生自过敏原Der f2的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成。
实施方案A122.根据上述实施方案A119至A122的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，其衍生自过敏原Der p 1和Der p 2的每一种。
实施方案A123.根据上述实施方案A119至A122的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，其衍生自过敏原Der p 1和Der f 2的每一种。
实施方案A124.根据上述实施方案A119至A122的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含至少一种肽，其衍生自过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和Der f 2的每一种。
实施方案A125.根据上述实施方案A1至A124的任意一项所述的组合物，其中所述的过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和Der f 2分别由表1中列出的氨基酸序列组成。
实施方案A126.根据上述实施方案A1至A125的任意一项所述的组合物，其中所述的肽组合包含3、4、5、6、7、8、9或10，或则更多种肽，优选地不超过5、6或7种肽。
实施方案A127.根据上述实施方案A1至A126的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列在N-和/或C-末端包含附加的氨基酸残基。
实施方案A128.根据上述实施方案A127所述的组合物，其中当将所述的附加的氨基酸与其中存在的、作为基础的或衍生得到的过敏原比对时，所述的附加的氨基酸选自位于所述的N-和/或C-末端侧翼的氨基酸。
实施方案A129.根据实施方案A128所述的组合物，其中所述的过敏原选自表1中列出的过敏原，例如过敏原Derp1.0105或其同种型，Derf1.0101或其同种型，Derp2.0101或其同种型，Derf2.0103或其同种型。
实施方案A130.根据上述实施方案A1至A129的任意一项所述的组合物，其中所述的肽的变体序列为长度至多60个氨基酸的更长的肽，这种更长的肽包含在所述的肽的氨基酸序列的长度上具有至少65％一致性或同源性的氨基酸序列。
实施方案A131.根据上述实施方案A1至A130的任意一项所述的组合物，其中所述的肽的变体序列为长度至多60、55、50、45、40、35、30、28、25、24或22个氨基酸的更长的肽，这种更长的肽包含在所述的肽的氨基酸序列的长度上具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％一致性或同源性的氨基酸序列。
实施方案A132.根据实施方案A131和A132的任意一项所述的组合物，其中所述的肽的变体序列为长度至多30个氨基酸的更长的肽，这种更长的肽包含在所述的肽的氨基酸序列的长度上具有至少80％一致性或同源性的氨基酸序列。
实施方案A133.根据上述实施方案A1和A132的任意一项所述的组合物，其中所述的肽的变体序列为长度包含至少15个氨基酸的肽的片段，当这种片段与所述的肽比对时，其在所述的片段的长度上具有至少65％一致性或同源性。
实施方案A134.根据上述实施方案A1和A133的任意一项所述的组合物，其中所述的变体序列为包含长度至少为15(例如16、17或18)个氨基酸的肽的片段，当该肽的片段与所述的肽比对时，其在所述的片段的长度上具有至少65％(例如至少70％、75％、80％、85％、90％、95％)一致性或同源性。
实施方案A135.根据实施方案A134和A135的任意一项所述的组合物，其中所述的片段由选自SEQ ID NO:90、102、161、103、105、106、111、114、115、173、174、117、176、120、121、180、128、187、188、191、133、192、199、226、227、205、229、206、230、208、233、210、234、242、243、221、245、246、283、223、247、224、248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐组成，或者包含选自SEQ ID NO:90、102、161、103、105、106、111、114、115、173、174、117、176、120、121、180、128、187、188、191、133、192、199、226、227、205、229、206、230、208、233、210、234、242、243、221、245、246、283、223、247、224、248中的氨基酸序列，或者其变体序列、衍生物或盐。
实施方案A136.根据上述实施方案A1和A135的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列在所述的肽的至少15个相邻的氨基酸上具有至少65％一致性或同源性。
实施方案A137.根据上述实施方案A1和A136的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列在所述的肽的至少15个(例如至少16、17、18、19、20个)相邻的氨基酸上具有至少65％(例如至少70％、75％、80％、85％、90％、95％)一致性或同源性。
实施方案A138.根据上述实施方案A1和A137的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列包含在肽的N-末端存在的谷氨酸盐残基被焦谷氨酸盐替换。
实施方案A139.根据上述实施方案A1和A138的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列在所述的肽的N-或C-末端包含一个或多个赖氨酸氨基酸残基或精氨酸氨基酸残基的加入。
实施方案A140.根据上述实施方案A1和A139的任意一项所述的组合物，其中所述的其变体序列包含选自以下的一个或多个修饰：(a)在所述的肽的天然序列中，任何半胱氨酸残基都被丝氨酸或2-氨基丁酸替换；(b)在所述的肽的天然氨基酸序列的N或C末端，在至多3个氨基酸中的疏水性残基被删除；(c)在所述的肽的天然序列的N或C末端中，在至多4个氨基酸中，包含序列Asp-Gly的任意2个保守性氨基酸被删除；和/或(d)在N-和/或C-末端处加入一个或多个正电荷残基。
实施方案A141.根据上述实施方案A1和A140的任意一项所述的组合物，其中所述的其衍生物包含选自以下的一个或多个修饰：(a)N末端乙酰化；(b)C末端酰胺化；(c)在精氨酸和/或赖氨酸的侧链胺上的一个或多个氢被亚甲基基团替换；(d)糖基化；和/或(e)磷酸化。
实施方案A142.根据上述实施方案A1和A141的任意一项所述的组合物，其中所述的盐为药物可接受的和/或生理学可接受的盐。
实施方案A143.根据上述实施方案A1和A142的任意一项所述的组合物，其中所述的盐为使用无机酸的酸加成盐，使用有机酸的酸加成盐，使用碱性无机酸的盐，使用碱性有机酸的盐，使用酸性或碱性氨基酸的盐，或它们的混合物。
实施方案A144.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用无机酸的酸加成盐选自使用盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等的盐。
实施方案A145.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用有机酸的酸盐选自使用甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等的盐。
实施方案A146.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用无机碱的盐选自碱金属盐的盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；以及铝盐和铵盐。
实施方案A147.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用碱性有机碱的盐选自使用三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、N,N-二苯基乙二胺、咖啡因、哌啶和吡啶的任何盐。
实施方案A148.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用碱性氨基酸的盐选自使用精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等的任何盐。
实施方案A149.根据实施方案A144所述的组合物，其中使用酸性氨基酸的盐选自使用天冬氨酸、谷氨酸等的任何盐。
实施方案A150.根据实施方案A144所述的组合物，其中所述的盐为乙酸盐。
实施方案A151.根据上述实施方案A1至A150的任意一项所述的组合物，其中所述的肽是合成制备的。
实施方案A152.根据上述实施方案A1至A151的任意一项所述的组合物，其中所述的肽是冻干的。
实施方案A153.根据上述实施方案A1至A152的任意一项所述的组合物，其中每种肽以等摩尔浓度或者以基本的等摩尔浓度存在。
实施方案A154.根据上述实施方案A1至A153的任意一项所述的组合物，其中每种肽以1至1000μM的摩尔浓度存在，例如10至800μM，例如20至500μM，例如20至300μM。
实施方案A155.一种包含根据实施方案A1至A154的任意一项所述的组合物的药物组合物。
实施方案A156.根据实施方案A155的药物组合物，其进一步包含药物可接受的载体、赋形剂和/或佐剂，可任选地是无菌的。
实施方案A157.根据实施方案A155至A156的任意一项所述的药物组合物，其被配制成疫苗，可任选地是无菌的。
实施方案A158.根据实施方案A155至A157的任意一项所述的药物组合物，其中所述的药物组合物为粉末，例如冻干形式，可任选地是无菌的。
实施方案A159.根据实施方案A155至A158的任意一项所述的药物组合物，其中所述的组合物适用于在使用前再次溶解，例如在水性的，可任选地是无菌的溶液中，例如具有范围为3至9的pH，例如pH 3至8，例如pH 4至8的溶液。
实施方案A160.根据实施方案A155至A159的任意一项所述的药物组合物，其中所述的组合物包含生理盐水，可任选地是无菌的，并且可任选地进一步包含pH控制或缓冲剂、润湿剂、分散剂、增稠剂、防腐剂或抗微生物剂。
实施方案A161.一种包含隔间和说明书的试剂盒，其中所述的隔间包含实施方案A1至A160的任意一项所述的组合物的一种或多种，并且其中所述的说明书用于治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症。
实施方案A162.实施方案A161所述的试剂盒，其中所述的试剂盒进一步包含包装材料，其包括波纹状的纤维、玻璃、塑料、箔、安瓿、小瓶、泡罩包装、预装载的注射器或管，其可任选地所述的包装材料保持成分的无菌性。
实施方案A163.实施方案A161或A162所述的试剂盒，其中所述的试剂盒进一步包含含有印刷品或计算机可读介质的标签或插入物，其可任选地包含鉴定成分、剂量、临床药理学、临床医生或受试对象使用一种或多种试剂盒成分的说明书、预后或治疗益处、不利的副作用或制备信息。
实施方案A164.一种用于在有需要的实施方案中治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症的方法，其包括施用治疗有效量的根据实施方案A1至A160的任意一项所述的组合物。
实施方案A165.根据实施方案A1至A160的任意一项所述的组合物，用于在有需要的受试对象中治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症。
实施方案A166.根据实施方案A1至A160的任意一项所述的组合物在制备用于在有需要的受试对象中治疗对尘螨例如房尘螨的过敏症的药物中的用途。
实施方案A167.根据实施方案A164至A166的任意一项所述的方法和用途，其中对尘螨例如房尘螨的过敏症的治疗是通过免疫疗法进行的。
实施方案A168.根据实施方案A164至A167的任意一项所述的方法和用途，其中所述的房尘螨过敏症在临床上呈现为特异性皮炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性反应和/或枯草热。
实施方案A169.根据实施方案A164至A167的任意一项所述的方法和用途，其中所述的方法或用途降低、减少、阻抑或抑制特应性皮炎、荨麻疹、接触性皮炎、变应性结膜炎、变应性鼻炎、过敏性哮喘、过敏反应和/或枯草热。
实施方案A170.根据实施方案A164至A167的任意一项所述的方法和用途，其中所述的方法或用途包括调控、降低、减少、阻抑或抑制T细胞或抗体应答。
实施方案A171.根据实施方案A170所述的方法和用途，其中所述的T细胞应答为IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL17、IL-22、IL-31或IFN-g应答。
实施方案A172.根据实施方案A164至A171的任意一项所述的方法和用途，其中所述的方法或用途包括重复施用所述的组合物(肽组合)。
实施方案A173.根据实施方案A164至A172的任意一项所述的方法和用途，其中所述的施用是通过选自以下的施用途径进行的：皮下、皮内、经皮、直肠、局部、舌下、口服、口腔、鼻内、呼吸和淋巴管内途径。
实施方案A174.根据实施方案A164至A173的任意一项所述的方法和用途，其中所述的有需要的受试对象为人类、宠物例如狗或猫、或者家畜例如马。
实施方案A175.根据实施方案A164至A174的任意一项所述的方法和用途，其中所述的房尘螨为尘螨属，例如美洲房尘螨和/或欧洲房尘螨的物种。
实施方案A176.根据实施方案A164至A175的任意一项所述的方法和用途，其中所述的对尘螨的过敏症的治疗为治疗对尘螨过敏原的过敏症，例如房尘螨过敏原，例如过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和/或Der f 2；或者房尘螨属的另一种过敏原(例如Der p4)；或者美洲房尘螨和/或欧洲房尘螨物种的另一种过敏原。
实施方案A177.根据实施方案A164至A176的任意一项所述的方法和用途，其中所述的有需要的受试对象具有针对Der p 1、Der p 2、Der f1和/或Der f 2的特异性IgE抗体。
实施方案A178.根据实施方案A164至A177的任意一项所述的方法和用途，其中所述的有需要的受试对象具有对所述的组合物，例如所述的肽组合或其单一的肽的T细胞应答。
实施方案A179.根据实施方案A164至A178的任意一项所述的方法和用途，其中所述的组合物的各单一的肽的单一剂量为1至1000纳摩尔，例如1至500纳摩尔，例如5至250纳摩尔。
实施方案A180.根据实施方案A164至A179的任意一项所述的方法和用途，其中是通过例如皮内施用而施用例如大约50至150微升的量。
实施方案A181.一种确定需要治疗的受试对象的T细胞是否识别实施方案A1至A160的任意一项中所定义的组合物的体外方法，其包括将由有需要的受试对象得到的所述的T细胞与所述的肽组合或其单一的肽接触；以及测定所述的T细胞是否受到所述的肽的刺激。
实施方案A182.根据实施方案A181所述的方法，实施该方法以确定受试对象是否患有或处于发展成对尘螨过敏症的过敏症的风险。
实施方案A183.根据上述实施方案A1至A182的任意一项所述的方法和用途，其中T细胞为辅助性T细胞，例如Th2细胞。
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实施例
实施例1-房尘螨的肽的文库
本实施例包括肽的文库的描述，其中所述的肽的文库用于绘制主要的房尘螨过敏原的T细胞表位。
重叠的20mer肽(由过敏原proDer p 1、proDer f 1、Der p 2和Der f2的完整长度氨基酸序列衍生得到)的完整组购自Thermo Scientific Custom Biopolymers、Germany，其纯度>95％。对于本研究而言，过敏原的以下同种型用于肽的设计：Der p 1.0105(UniProt编号P08176的变体)、Der f 1.0101(UniProt编号Q58A71)、Der p 2.0101(UniProt编号P49278)和Der f 2.0103(UniProt编号Q00855的变体)。通过质谱分析(LC-MS/MS)，证明这些同种型在房尘螨提取物中是丰富的同种型，但是备选地，可以使用这些过敏原的其他同种型(对于同种型的完整的最新列表，参见www.allergen.org)。Der p 1、Derf 1、Der p 2和Der f 2的同种型的实例示于表1中。为了避免通过半胱氨酸残基之间分子内和分子间二硫键的肽的二聚化和聚合，在重叠的20mer肽的组别中，通过丝氨酸残基一贯地取代所述的氨基酸。20mer肽的组别示于表2和3中。
小规模(1mg)的重叠的15mer肽(由相同的同种型proDer p 1、proDer f 1、Der p2和Der f 2衍生得到)的完整组购自A and A(San Diego、CA)作为原材料。在15mer肽的文库中，半胱氨酸残基并未被丝氨酸取代。15mer肽的组别示于表4和5中。
通过选择之前本领域显示的房尘螨过敏原1组或2组的肽，将附加的肽加入至所述的肽的文库中，从而在房尘螨过敏供者人群中诱导T细胞活化。根据附加的肽的广泛的II类HLA等位基因覆盖率来选择附加的肽。表6显示10种附加的肽(SEQ ID NO:249-258)以及7种肽(SEQ ID NO:259-265)，这些肽之前表明用于治疗房尘螨过敏症的肽的组合中(国际专利申请WO2009022156)。
表1-房尘螨过敏原Der p 1、Der f 1、Der p 2和Der f 2的同种型的序列
Figure BDA0001026395170000981
Figure BDA0001026395170000991
Figure BDA0001026395170001001
Figure BDA0001026395170001011
Figure BDA0001026395170001021
Figure BDA0001026395170001031
Figure BDA0001026395170001051
Figure BDA0001026395170001061
表2-Der p 1和Der f 1的肽的文库(20mer肽)
表2显示了过敏原Der p 1(同种型1.0105)和过敏原Der f 1(同种型1.0101)的重叠的20mer肽。带下划线的氨基酸S表示半胱氨酸残基被丝氨酸替换。
Figure BDA0001026395170001062
Figure BDA0001026395170001071
表3-Der p 2和Der f 2的肽文库(20mer肽)
表3显示Der p 2(同种型2.0101)和Der f 2(同种型2.0103)的重叠的20mer肽。
Figure BDA0001026395170001072
Figure BDA0001026395170001081
表4-Der p 1和Der f 1的肽文库(15mer肽)
表4显示Der p 1(同种型1.0105)和Der f 1(同种型1.0101)的重叠的15mer肽。
Figure BDA0001026395170001091
Figure BDA0001026395170001101
表5-Der p 2和Der f 2的肽文库(15mer肽)
表5显示Der p 2(同种型2.0101)和Der f 2(同种型2.0103)的重叠的15mer肽。
Figure BDA0001026395170001102
表6-附加的肽的文库
表6显示建议用于本发明的肽组合的附加的肽。
Figure BDA0001026395170001111
实施例2-组成供者人群
本实施例包括如何构成房尘螨过敏个体的供者人群的描述，其中对于II类HLA等位基因清单而言，所述的个体代表了全世界的人群。
通过测定对房尘螨过敏原提取物的免疫反应性，并通过证明符合房尘螨过敏症的临床史，募集来自哥本哈根地区的供者(n＝59)。其中包括对Der p(提取物)或Der f(提取物)具有可检测的特异性IgE水平的供者。
由供应商Proimmune通过Tier 1方法使用PCR扩增对各个供者的HLA基因座DRB1、DRB3、DRB4、DRB5、DP和DQ进行基因表型。简言之，PCR-序列特异性的寡核苷酸(PCR-SSOP)用于将主要的等位基因组分成4种数字，并且在高度相关的等位基因之间具有一定程度的简并性。PCR-SSOP：使用PCR扩增基因组DNA，然后与一组不同的寡核苷酸探针温育，这些探针对不同类型的HLA具有不同的反应性。表7显示了初始供者人群的II类HLA等位基因清单，并且该供者人群代表了23种不同的HLA-DRB1等位基因。
为了计算全世界供者人群的HLA覆盖率，选择一部分表7所示的初始检测的等位基因(28个等位基因)，因为这部分等位基因可以用于确定所述的肽能够结合哪种HLA等位基因。表8显示有限的一组28个等位基因的全世界HLA等位基因的频率(计算得到)(表8)。该频率代表了跨越7个世界人群的平均频率。详细而言：对于单个HLA-DRB1等位基因的平均单倍型和表现型频率是基于在The Allele Frequency Net Database(AFND)<URL:http://www.allelefrequencies.net上获得的MHC数据。由4个主要的种族(拉丁美洲人、高加索人、非洲裔美国人和亚洲人)得到的频率用作估算的全世界等位基因分布。所述的频率分别计算为由人群ID、1514、1513、2419和2420得到的频率的简单的平均值。各种族由超过1000个个体得到的数据组成。对于其他等位基因的平均单倍型和表现型频率是基于在dbMHC(在以下互联网上获得：<URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gv/mhc/)上得到的MHC数据。dbMHC数据主要考虑欧洲、北非、东北亚、南太平洋(澳大利亚和澳洲)、西班牙北部、南美洲、美国印地安人、东南亚、西南亚和撒哈拉以南的非洲的人群。考虑到DRA链在很大程度上是单形的，并且DPA中的差异并未假定为显著地影响结合，所以DP和DRB3/4/5频率仅考虑β链的频率。对于DRB3/4/5没有频率数据。然而，由于与DRB1等位基因存在关联，所以可以按照以下假设这些特异性的覆盖率：DRB3与DR3、DR11、DR12、DR13和DR14；DRB4与DR4、DR7和DR9；DRB5与DR15和DR16。在各个B3/B4/B5基因座处的特异性等位基因频率是基于各种DRB1等位基因的公开相关性，并且在所示的基因座处仅假设有限的改变。
在表8中所示的HLA等位基因频率用于计算可以被等位基因的子集所覆盖的全世界人群的部分。如图21所示，由各个单一的基因座得到的所选等位基因的子集单独地代表了全世界人群的15至97％，并且累积人群的覆盖率共计大约100％。
在供者人群中发现21种不同的HLA-DRB1等位基因，并示于表7中。根据表8所示的频率，这些等位基因存在于89％的全世界人群中。然后，收集47名个体的最终的供者人群，并且发现由该组人群得到的HLA-DRB1等位基因为全世界人群的85％，而非89％。最终供者人群(n＝47)具有表8中所示的28个等位基因中的25个，并且估计全球人群HLA覆盖率为大约100％。因此，对于最频繁的II类HLA等位基因，该供者人群可以代表全球供者人群。
表7-在初始供者人群中发现的II类HLA等位基因
该表显示了初始供者人群的II类HLA等位基因清单。
Figure BDA0001026395170001131
Figure BDA0001026395170001141
Figure BDA0001026395170001142
表8-在全世界人群中HLA的频率
表8显示对于在初始供者人群中发现的一部分等位基因(28个HLA等位基因)，在全世界人群中的HLA等位基因的频率。这些等位基因的频率用于预测图18中所示的供者HLA全世界的覆盖率。
Figure BDA0001026395170001151
实施例3-T细胞反应性的筛选
本实施例包括在供者人群中针对T细胞反应性筛选肽(单一的或组合中)的方式的描述。
通过测量对所研究的过敏原具有特异性的T细胞系的T细胞增殖，或者通过测量由培养的PBMC得到的过敏原特异性T细胞的细胞因子的产生来确定对本文公开的肽的T细胞反应性。
建立培养的PBMC和T细胞系(TCL)：由各个供者的外周血单核细胞(PBMC)建立分别对6种过敏原rproDer p 1、rproDer f 1、rDer p 2、rDer f 2、Der p 4和Der p 7具有特异性的或者对所有6种过敏原的组合具有特异性的TCL。
由新抽取的肝素化血液来分离PBMC，通过在淋巴细胞分离液(Nycomed,Norway)上进行梯度离心，洗涤2次，并再次悬浮于具有HEPES和焦谷氨酰胺(Cambrex,Belgium)的RPMI1640培养基中，其中补充有5％v/v AB-血清(Cambrex,Belgium)、100单位/ml青霉素、和0.1mg/ml链霉素(Sigma,St Louis,USA)(称为AB-培养基)。根据制造商提供的说明书(Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany)，通过Macs磁珠去除分选方法，对分离的PBMC进行CD8去除。在24孔板(Nunc,Denmark)中，在AB培养基中，在1ml大批培养物中，使用重组过敏原：rDer p1、rDer f1、r Derp2、rDerf2、rDerp4、rDerp7(均为1μg/ml)将去除CD8的PBMC(2x 106/ml)刺激14天。分别在第5、6和7天，向每孔加入量为65U、30U和30U的重组IL-2(Chiron、USA)。
在14天后，分离T细胞，洗涤，并将一个份等分物用于确定细胞因子(例如IL-5)的产生，通过下文所述的ELISpot测试(Enzyme-Linked ImmunoSpot)。在AB-培养基中，使用自体同源PBMC(106/孔，2500Rad照射的)，上述过敏原(1μg/ml)以及PHA-P(0.5μg/ml,Difco,Detroit,MI,USA)再次刺激剩余的T细胞。在第3、4和5天加入rIL-2。在再次刺激后的10天，分离、洗涤T细胞并用于下文所述的T细胞增殖测试。将剩余的细胞冷冻，以用于后期的解冻和再次刺激。在每10天使用同种异型的EBV B细胞(105/孔，3500Rad照射的)、同种异型的PBMC(106/孔，2500Rad照射的)、和0.5μg/ml PHA-P再次刺激并在第3-5天加入rIL-2的情况下，将所述的细胞系保持在培养物中。在5周后，终止细胞系培养，这样在培养14天后获得所有的ELISpot数据，而在24或34天后，在培养物中获得增殖应答。
备选地，按照以下方式获得过敏原特异性T细胞；将PBMC解冻，并在24孔培养板(BDBiosciences,San Jose,CA)中，在补充有5％人类AB血清(Cellgro,Herndon,VA)的RPMI1640(ΩScientific,Tarzana,CA)中以密度2x 106个细胞/ml进行培养，再使用重组过敏原：rDer p1、rDer f1、r Derp2、rDerf2、rDerp4、rDerp7(各为1μg/ml)的混合物刺激。将细胞保持在37℃、5％CO2下，并在初始抗原刺激后，每3天加入另外的IL-2(10U/ml、eBioscience、San Diego、CA)。在第14天，收获细胞，并针对选自Der p1、Der f1、Der p2、Der f2、Der p4或Der p7、或者肽汇集物(平均由20个肽组成)中的肽的反应性进行筛选。在第17天，单独检测由阳性池得到的肽，从而确认反应性表位。
ELISpot测试。按照Oseroff C et al、2010所述，通过ELISpot测量由上述培养的PBMC响应于表位所述的肽的刺激而得到的IL-5和IFN-γ的生产。简言之，根据制造商提供的说明书制备平底96孔硝酸纤维素平板(Millipore、Bedford、MA)，并涂敷10μg/ml抗人IL-5和抗人IFN-γ。第二天，洗涤并封闭平板，将细胞(1x 105细胞/孔)平铺于平板上，并与Derp和Der f的单一的肽、肽汇集物或混合物温育(分别为10μg/ml、5μg/ml和5μg/ml)。在24小时后，除去细胞，并在37℃下将平板与2μg/ml生物素化的抗人IL-5Ab(克隆5A10；Mabtech)和抗人IFN-γ-HRP(克隆7-B6-1-HRP；Mabtech)温育。在2小时后，洗涤平板，并在RT下在1h内加入亲和素-碱性磷酸酶-复合物(Vector Laboratories、Burlingame、CA)。使用VectorBlue Substrate Kit(Vector Labs、Burlingame、CA)使碱性磷酸酶缀合的斑点显影。使用3-氨基-9-乙基咔唑溶液(Sigma-Aldrich、St.Louis、MO)使辣根过氧化物酶缀合的斑点显影。肽阳性的标准为20SFC/106PBMC，刺激的细胞与背景相比p≤0.05，并且刺激指数(SI)≥2。
T细胞增殖测试：如Henmar H et al.、Clin Exp Immunol 2008；153(3):316-23中所述，在标准的72h T细胞增殖测定法中分析不同的肽刺激过敏原特异性T细胞的能力。
细胞因子的测量：作为ELISpot测试的备选方法，可以在ELISpot测定法过程的第1天时或者在用于增殖测定法过程的第2天时收获的细胞培养物上清液中，通过MesoScale或MagPix分析来分析上清液，从而测量T细胞的细胞因子的产生。上述2种测定法的设计将ELISA测定法与96孔板(Mesoscale、#144259)的各孔中形成斑点的多种不同特异性的捕获抗体或者附着在珠子上的单一的捕捉抗体组合，其中所述的珠子可以与最终的测定法试剂(MagPix#230608)混合，并且所述的2种测定法研发用于分析单一样品中多种不同的细胞因子或细胞介质。可以通过Mesoscale测量细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、IL-13和IFN-g，而且可以通过MagPix测量IL-4、IL-5、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-22、IL-31。
在本实施例的构建中，针对细胞因子IL-5评价细胞因子的产生，该细胞因子主要由Th2细胞产生，但是还可以针对其他的Th2细胞因子(例如IL-4、IL-13等)来进行评价。最后，可以使用IL-10评价细胞因子的产生，其可以是调节型T细胞传代的指示。可以使用FluoroSpot技术替换ELISpot来实施上述过程。
此外，在对之前未经过任何过敏原刺激的PBMC进行肽刺激后而诱导的细胞因子进行Ex-Vivo FluoroSpot或EliSpot分析，可以对由肽混合物导致的细胞因子的产生进行未来的评价。
结果
图1至4显示了当T细胞在体外暴露于表2和3中的20mer肽时，在T细胞增殖测定法中产生应答的供者的百分率。图5至8显示当T细胞在体外暴露于表4和5中的15mer肽时，在T细胞增殖测定法中产生应答的供者的百分率。更高份数(例如高于20％、25％、30％、40％、50％供者人群产生应答)的供者人群产生应答的肽可以由附图中选取出来，并列于下文所述的表9和10中。这些肽在本文中称为“高应答者肽”。在2种重叠的15mer肽被认为是高应答者肽的情况下，长度为20个氨基酸的多余的氨基酸序列被组装，并且也示于表9和10中(SEQID NO:272-285)。所述的2个表还显示了针对肽的组合的初始筛选而选择的、从而组装具有高覆盖率的肽组合的肽。这些肽在本文中称为“亲本肽”(亲本肽在表9和10中以粗体字显示它们的Pep ID或SEQ ID)。在由Der p 1和Der f 1筛选的肽中，认为以下肽为“亲本肽”：具有氨基酸序列SEQ ID NO:9(pep-041)、10(pep-042)、11(pep-043)、12(pep-044)、42(pep-072)、254(pep-022)、15(pep-047)、266(pep-123)、255(pep-025)、17(pep-049)、46(pep-075)、18(pep-050)、258(pep-122)、267(pep-124)、20(pep-052)、49(pep-078)、21(pep-053)、268(pep-130)、22(pep-054)、23(pep-055)、52(pep-081)、26(pep-058)、29(pep-061)、58(pep-087)、251(pep-010)、252(pep-011)和272的肽。
在由Der p 2和Der f 2筛选的肽中，认为以下肽为“亲本肽”：SEQ ID NO:71(pep-100)、72(pep-101)、60(pep-089)、61(pep-090)、73(pep-102)、249(pep-002)、62(pep-091)、63(pep-092)、77(pep-106)、67(pep-096)、271(pep-131)、79(pep-108)、256(pep-031)、270(pep-126)、81(pep-109)、269(pep-125)、70(pep-099)和82(pep-110)的肽。
表9-由Der p 1和Der f 1得到的在T细胞测定法中具有“高”应答者频率的肽
Figure BDA0001026395170001191
Figure BDA0001026395170001201
Figure BDA0001026395170001211
表10-由Der p 2和f 2得到的在T细胞测定法中显示高应答者频率的肽
Figure BDA0001026395170001212
Figure BDA0001026395170001221
实施例4-亲本肽的修饰
本实施例描述了亲本肽的修饰，从而改善水溶性，特别是增加在具有生理学可接受范围的pH(例如6至8)的水性溶液中的溶解性。溶解性与亲和性氨基酸残基和疏水性氨基酸残基之间的比例以及所述的肽的静电荷状态密切相关。肽在pH＝pI下具有0静电荷，并且预计在该pH下显示最低的溶解性。表11b证明通过向亲本肽pep-058、pep-075和pep-130中加入一个或多个精氨酸残基，pI(理论估计)会随着静电荷而增加，并且可以将pI增加至8以上。表11b还显示通过将一个或多个精氨酸残基加入至N-和/或C-末端中，会增加一些修饰的肽在pH7下的溶解性(通过目测评价)。在生理学范围以外的pH值下，这些肽的溶解性增加(数据未显示)。
表11a显示关于如何通过将由野生型过敏原得到的一个或多个氨基酸残基加入至肽pep-049、pep-054、pep-031、pep-096、pep-075和pep-130的N-和/或C-末端中来修饰pI和静电荷的其他实例。使用本领域已知的工具来评估pI和静电荷。表11a还显示了为了避免pep-050中N-末端“Q”氨基酸残基并避免在pep-099序列中2个相邻的氨基酸“DG”而进行的修饰。
通过将N-末端氨基酸残基进行乙酰化，其除去一个正电荷(＝静电荷减少1)，或者通过将C-末端氨基酸残基酰胺化，其除去一个负电荷(＝静电荷增加1)可以改变肽的静电荷。表11c显示关于关于肽pep-058、pep-075(在N-末端，随着RG氨基酸残基的加入)、pep-110、pep-130、pep-091和pep-123的C-末端酰胺化的实例，其证实了pI和静电荷的增加。
针对肽在不同的pH值下溶解于水性溶液中的能力来检测这些肽。简言之，将各种肽分别溶解于水(pH大约5-6)，pH 2的盐酸溶液(10mM HCl)，pH 5的乙酸缓冲液(20mM乙酸盐和140mM氯化钠)，pH 7的磷酸盐缓冲液(20mM磷酸盐和140mM氯化钠)或pH 9的双三羟基丙烷缓冲液(20mM双三羟基甲氨基丙烷和140mM氯化钠)中，从而产生最终摩尔浓度为大约0.25mM或1mM的肽。可任选地，大约20％的DMSO可以为溶液的一部分。为了比较，还将肽溶解于乙腈或DMSO中。在离心前和离心后，针对浑浊度、颗粒/聚集物的存在情况目测检查所述的溶液。此外，通过光密度(OD)检测浑浊度/颗粒/聚集物的存在情况，但是还可以通过分子排阻色谱来检测。还可以通过动力学光散射(DLS)分析来检测视觉不可视的颗粒。还使用HPLC，例如RP-HPLC来研究各种肽的可溶性和稳定性。例如将各种溶液注射至HPLC中，并将各种肽的峰高或峰面积与溶解于乙腈或DMSO中的肽的色谱的相应的肽比较—其中假设这些肽在这些溶剂中完全溶解并且是稳定的。
表11a至11c–溶解性改变的肽的实例
Figure BDA0001026395170001241
Figure BDA0001026395170001242
Figure BDA0001026395170001243
Figure BDA0001026395170001251
实施例5-选择用于肽组合的候选物
本实施例包括如何组装肽组合(pep-混合物)的描述，其中所述的肽组合以高的可能性覆盖全世界(WW)II类HLA等位基因清单，并且其将在全世界的人口中探究令人满意的高频率的T细胞的识别。此类肽组合适用于提供给世界上任何地理区域的受试对象的肽疫苗，并且预计免疫系统识别所述的肽的组合中的至少一种肽。
如果肽满足具有高的WW HLA覆盖率的第一标准(优选高于0.4，WW人口的40％)，则其可以适用于本发明的肽组合。由肽提供的潜在的WW人口覆盖率取决于所预测的结合一组83种不同的HLA DR、DQ和DP分子的能力(表17)。按照之前的文献所述(Bui et al.2006；Sidney et al.1996；Sidney et al.2010a；Sidney et al.2010b)，基于在dbMHC处获得的MHC数据(在以下互联网上获得<URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gv/mhc/(Meyer et al.2007)和http://www.allelefrequencies.net/(Middleton et al.2003))基本上计算所述的覆盖率。这些数据库主要考虑澳大利亚、欧洲、北非、北美洲、东北亚、大洋洲、南美洲、东南亚、西南亚和撒哈拉以南的非洲等。这些人群另外包含多个亚人群。在HLA基因座,HLA-DRB1,HLA-DQ和HLA-DP中，针对30个最普遍的等位基因/单倍型进行预测和覆盖率计算。对于HLA-DQ和HLA-DP基MHC分子，α链和β链是主要的多形态的，并且因此完整的分子的肽的特异性通过所述的等位基因确定。关于遗传相关的α链和β链(分别用于HLA-DQ和HLA-DP基因座)之间的偶联，由于精确的单倍型数据是不可用的，所以在最终的单倍型的频率计算中，假设它们并非是遗传相关的。83种所考虑的等位基因和相应的频率数据显示于表17中。使用在互联网<URL:http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCIIpan-3.0>处可得的工具NetMHCIIpan-3.0(Karosiene,Edita,Michael Rasmussen,Thomas Blicher,Ole Lund,
Figure BDA0001026395170001262
Buus,and Morten Nielsen."NetMHCIIpan-3.0,a Common Pan-specificMHC Class II Prediction Method Including All Three Human MHC Class IIIsotypes,HLA-DR,HLA-DP and HLA-DQ."Immunogenetics)来进行HLA-肽结合的预测。如果所述的肽对给定等位基因的亲和性预计低于300nM，并且通过预测工具所报告，分位数得分(fractile score)低于30％，则认为所述的肽对给定的等位基因是阳性的。对于各种肽而言，对于各基因座，计算各预测阳性等位基因的频率的总和，并计算最终预测的人群覆盖率。
根据第二标准，适用于本发明的肽组合的肽可以在供者人群中具有高频率的T细胞识别，其可以在表9和10所示的亲本肽或其变体中找到。
表12列举了根据上文所述的第一和第二标准，以及它们预测的全世界II类HLA覆盖率，用于组装肽组合最初选择的亲本肽的实例。各种肽还被评级为A、B、C或D。评级A表示所述的肽具有高于0.4的预测的WW HLA覆盖率(WW人群的40％)并且在供者人群中以高的频率被T细胞识别。评级B是指尽管预测的低HLA WW覆盖率，但是所述的肽在所研究的供者人群中给出高的T细胞应答频率。评级C是指具有高的HLA预测、但是在T细胞识别中似乎得到低的频率的肽。评级D是指所述的肽具有分界线处的令人满意的WW HLA覆盖率和T细胞识别频率。
表13显示了肽组合中的7种肽的每一种的预测WW HLA覆盖率，其中所述的肽组合建议用于治疗房尘螨过敏症(国际专利申请WO2009022156)。
表12-候选物肽的实例
Figure BDA0001026395170001261
Figure BDA0001026395170001271
Figure BDA0001026395170001281
表13-已知的肽组合中的肽的列表
Figure BDA0001026395170001282
*肽HDM03W与肽组8的亲本肽具有低于15个氨基酸残基的重叠，因此并非为肽组8的亲本肽的变体肽。
实施例6-组装肽的组合
由表12中选择的肽组装具有预测的高的WW II类HLA覆盖率的多种肽组合(表14)。可以使用由相同的肽组得到的另一种肽(取代肽，即，由表9和10中所示的相同的肽组得到的另一种肽)来组装相似的肽组合。
表14-肽组合
表14显示了具有预测的广泛的WW II类HLA覆盖率的肽组合的实例(“X”表示所述的肽存在于所述的肽组合中)。肽组合的编号8包含包13中的7种肽。
Figure BDA0001026395170001291
Figure BDA0001026395170001301
*肽组合的编号17x还包含pep-053(表12中所示)。
实施例7-肽组合的T细胞应答
如上文中单一的肽中所述，针对体外T细胞应答进行初始检测表14中的肽组合编号3、4、5、8、9、10、13、16-25。如图9a中所示，大部分的肽组合在大部分的供者人群中产生T细胞应答，例如超过大约60％至70％的供者人群。2种肽组合(组合编号17(5-肽混合物)和组合编号23(5-肽混合物))比其他的肽组合在更高份数的供者人群(例如高于80％的供者人群)中产生T细胞应答。另外值得注意的是2种肽组合仅包含3种肽(肽组合编号13和16)，但是在大部分的人群(超过70％的供者人群)中仍产生T细胞应答。这种肽组合可以被改善，从而在甚至更大部分的供者人群中产生T细胞应答(例如通过加入表12中列举的肽)。
在T细胞应答测定法中，使用全世界II类HLA覆盖率为大约88％的22名供者的子集来测试附加的肽组合以及肽组合编号17。图9b显示与肽组合编号17的85％供者应答相比(图9c)，肽组合编号17f在所检测的大约100％的供者人群中产生T细胞应答。图9b还显示了组合17f的单一肽的T细胞应答，并且表明肽编号110(肽组26的肽)、131(肽组24的肽)和054(肽组14的肽)比肽组合17f的其他肽(图9c)产生更高百分率的供者应答。各种肽的单一的数据可以用于计算响应于肽组合17和17f的供者的百分率，这是因为如果对所述的组合中的至少一种肽产生应答，则存在阳性供者应答。如本文所示，所计算的响应于肽组合17和17f(基于单一的肽的数据)的供者的部分与响应于相同的肽组合(在T细胞测定法中检测的)的供者的部分相关。因此，可以使用关于单一的肽(其在各种检测供者中均产生体外T细胞应答)的信息来计算识别肽组合的应答者的百分率。
这允许计算对其他的肽组合的应答者百分比，其中所述的肽组合包含肽组合17f和17中的肽。图9d显示针对肽组合17l、17p、17q、17s、17t、17u和17v(表14中所示的组合物)所计算的供者应答百分比，并显示它们在大约80％至90％的供者人群中产T细胞应答。
使用肽的子集(pep-058、pep-075、pep-091、pep-110、pep-123、pep-130和pep-131)和具有全世界II类HLA覆盖率为大约88％的31名供者的子集来评价其他的肽组合。图9f显示在T细胞测定中分析时，对肽组合17p、17s、17f和8、以及仅由肽pep-110、pep-130和pep-131组成的肽组合产应答的应答供者的百分率。图9g显示基于单一的肽的数据对肽组合17p、17s、17f、110+130+131的3-pep-混合物、以及110和131的2-pep-混合物的应答者的计算的百分率，其中所述的数据表明图9g中提出的所有肽组合在大约相同部分的供者人群中均产生T细胞应答，例如80％至90％的供者人群。
还可以使用关于供者能够产生应答的肽组合中的肽的数量的信息来计算供者人群中供者平均产生应答的肽的数量。图9h显示测试人群中的供者能够产生应答的肽组合17p、17s、17f、110+130-131的3-pep-混合物和110+131的2-pep-混合物中的肽的平均数量。数据表明混合物17p、17s和17f中的肽的平均数量为2.5至3，而肽的平均数量随着组合中更少的肽而降低。
在另一个实施方案中，在T细胞测定法中，使用初始供者人群的子集来检测单一的肽058、075、110、123、130、131，以及肽的组合8(HDM03W、HDM101A、HDM203B、HDM205、HDM26B和HDM35A)中的肽。图9i显示相应于所测试的各种肽的供者的百分率。在相同的T细胞测定法中，再次分析肽组合17f和8(图9j中所示)。图9k显示使用肽的子集(pep-058、pep-075、pep-091、pep-110、pep-123、pep-130和pep-131)以及具有全世界II类HLA的覆盖率为大约78％的22名供者的子集来评价相应于其他的肽的组合的计算的供者百分比。图9l显示在使用全世界II类HLA覆盖率为大约88％的31名供者的子集在T细胞测定法中进行分析时，显示响应于肽组合17p、17s、17f和8，以及仅由肽pep-110、pep-130和pep-131组成的肽组合的响应供者的百分比。
实施例8-第一选择肽
本实施例列出了可以用于组装肽组合的“第一选择”肽，其中所述的肽组合在大部分的供者中产生T细胞应答。已经显示这些肽在T细胞测定法中具有中等至高的II类HLA覆盖率和/或中等至高的百分比应答者，而且还显示具有合适的药物性质(例如在pH 4至9的水性溶液中令人满意的溶解性)以及可制备性。
表15-第一选择肽的列表
Figure BDA0001026395170001331
*用星号标记的肽可以导致一些溶解性问题，在这种情况下，可以替代使用所述的肽的变体，例如在N-和/或C-末端包含一个或多个赖氨酸或精氨酸残基的修饰或酰胺化。
实施例9-肽的体外II类HLA结合分析
本实施例描述了如何确定本发明的肽的II类HLA结合。所用的测定法为竞争性II类MHC结合测定法，其中针对替代表8中所示的各种人类II类MHC同种异型的已知对照结合剂来分析各种肽。由于竞争性测定法的本性，各种肽的数据确定为其本身的IC50与对照肽的IC50的比值。因此，IC50值与对照肽对等的肽具有抑制的结合亲和性，而比值低于1的肽具有更高的亲和性，而比值大于1的肽具有更低的亲和性。可以在不同的临界值浓度(例如300或1000nM)下确定IC50的比值。
定量地测量肽结合纯化的II类MHC分子的测定法是基于对高亲和性的放射性标记的肽结合纯化的MHC分子的抑制，并且基本如其他处详细描述的那样实施(Sidney etal.2008；Sidney et al.2010b,a；Greenbaum et al.2011；Sidney et al.2001,Sidney etal 2013,McKinney et al 2013)。简言之，在蛋白酶抑制剂的混合物存在下，将0.1-1nM放射性标记的肽在室温或37℃与纯化的MHC共同温育。在2至4天的温和后，通过在单克隆Ab涂敷的Lumitrac 600平板(Greiner Bio-one,Frickenhausen,Germany)上，捕获MHC/肽复合物，并使用TopCount(Packard Instrument Co.,Meriden,CT)闪烁计数器测量结合cpm来确定MHC结合的放射活性，在竞争性测定法的情况下，计算对放射性标记的肽的结合抑制达到50％的肽的浓度。在所用的条件下，其中[label]<[MHC]和IC50≥[MHC]，测量的IC50值为真Kd值的合理的近似值(Cheng and Prusoff 1973；Gulukota et al.1997)。在3个或多个独立的试验中，在涵盖100,000倍剂量的6种不同的浓度下检测各种肽。作为阳性对照，还在各试验中检测未标记形式的放射性标记的探针。
表16a显示II类HLA等位基因，其中已经测量所选肽与所述的等位基因的HLA结合亲和性。阳性结合在表中以“x”表示，其是指结合亲和性IC50<1000nM。
表16b显示被每种肽结合的等位基因的最小数量，以及基于所发现的与每种肽结合的等位基因，在全世界人群中II类HLA表现型的覆盖率。这些等位基因可以用于计算肽或肽组合的HLA表现型覆盖率。
表16a-一些肽的体外II类HLA结合分析
Figure BDA0001026395170001351
Figure BDA0001026395170001361
N：表示数据不可得
表16b-一些肽的II类HLA表现型覆盖率
Figure BDA0001026395170001362
实施例10-肽组合的II类HLA表现型覆盖率的预测和计算
本实施例描述了如何针对本文所公开的肽和肽的组合来测定II类HLA等位基因覆盖率。
为了引起T细胞应答，在给定的个体中，给定的肽必须能够结合至少一种II类HLA分子。每个个体表达多种HLA分子，并且全世界存在几千种不同的等位基因。每种HLA分子可以结合有限数量的不同的肽，并且并非所有的HLA都能结合相同的肽。为了评估给定人群中肽的潜在覆盖率，人群中存在的不同的II类HLA分子的频率以及肽与这些分子的每一种的结合亲和性必须是可利用的。例如如实施例9中所述，可以测量肽与特异性HLA分子的结合，或者使用例如NetMHCII和NetMHCIIpan的计算机算法来预测(如实施例2中公开的，或者如Nielsen et al 2010or Nielsen et al 2009中所述)。
用于免疫应答所需的确切亲和性是未知的，但是通常假设为300nM-1000nM。使用表16a中提供的300nM或1000nM呈现经确定与每种肽结合的等位基因的计算表现型覆盖率。300nM的结合阈值以及预测算法所报告的百分评级得分(至少30分)用于预测的亲和性。
本实施例还描述了如何针对供者的平均份数(患者的％)来比较肽组合，其中所述的供者具有能够潜在地结合本文公开的肽组合中的给定数量的肽(0、1、2、3、4或5种肽，在下文中称为肽组合的价)II类HLA等位基因。
可以使用在全世界人群或其子集(例如表16a中所示的等位基因的子集)中所代表的II类HLA等位基因来评估HLA覆盖率和价。
为了评估价，创建产生虚拟患者(VP)的系统。使用由表17得到的83个等位基因频率作为在每个具有该特定等位基因的基因座处的概率而形成各VP。由于并非考虑了世界上所有的等位基因，所以一些所形成的VP将缺乏一个或多个HLA。为了评估针对某些肽产生反应的患者的平均份数，形成1000名VP。使用预测方法和本文中之前描述的HLA结合亲和性阈值(300nM和30％(分位数))预测平均VP可以发生反应的肽的数量。此外，基于预测的HLA结合，与测量的HLA结合亲和性相比，计算分别与0、1、2、3、4和5种肽发生反应的VP数量的整体份数。
图10a、11a、12a显示基于所述的肽(相对于表16a中所示的HLA等位基因而预测的HLA等位基因覆盖率)，肽组合5、17f和8的评估的价，而图10b、11b和12b显示基于所述的肽(相对于相同的等位基因而测量的HLA等位基因覆盖率)，所述的肽组合的评估的价。所述的数据表明基于预测的HLA等位基因覆盖率的价数据与基于测量的HLA等位基因覆盖率的价数据之间高度的相关性。
图13至19显示虚拟患者人群中的患者可以产生应答的肽组合9、17d、17f、17p、17s、17x和23的评估价，其中所述的评估基于与表17中所示的83个HLA等位基因的预测的结合。所述的评估可以包括以下方面：对于每种肽或肽组合，发现与给定的肽结合或者与所述的肽组合中的至少一种肽结合的等位基因被考虑用于覆盖率的计算。假设在不同基因座的等位基因是独立分布的(这种情况并非完全真实，但是所合理的估计)，现在可以使用本领域标准的方法来计算结合等位基因的表现型覆盖率。例如对于每种HLA基因座(DRB1、DRB3、DRB4、DRB5)或基因座的组合(DQA1-DQB1、DPA1-DPB1)，计算所有等位基因(由发现与给定的肽结合的给定基因座得到)的HLA等位基因频率的总和(fsum,locus)。对于各基因座，总的表现型覆盖率n(Cn)计算为(2x fsum,locus)-(fsum,locus)2。
由n基因座得到的所有结合等位基因的总的表现型覆盖率可以计算为：
其中K0＝0。
图10a至19显示虚拟患者的份数(Y轴＝患者％)，其中所述的虚拟患者具有分别潜在地与所述的组合中的0、1、2、3、4和5种肽结合(即，能够产生应答)的II类HLA等位基因(数据以柱表示)。针对仅由第1组HDM过敏原Der p 1或Der f 1衍生得到的肽(在x轴上用Grp 1表示)；仅由第2组HDM过敏原Der p 2或Der f 2衍生得到的肽(在x轴上用Grp 2表示)；仅由Der p(即，过敏原Der p 1或Der p 2)(在x轴上用Der p表示)衍生得到的肽；以及仅由Derf(即，过敏原Der f 1或Der f 2)(在x轴上用Der f表示)衍生得到的肽显示价数据。最终，还显示所述的组合中的所有肽的价(在x轴上用“所有”表示)。所述的附图还显示患者的预测的份数(患者％)，其中所述的患者能够潜在地与所述的肽的组合中的给定数量的肽或多种肽结合的HLA等位基因(数据点以X显示)。
例如5-肽组合17f的测量价数据(图11b)显示对于所述的组合，20％的患者能够潜在对5种肽产生应答，40％的人群能够潜在地与4种肽产生应答(数据以柱显示)，60％的人群能够潜在地与至少4种肽结合(由曲线得到数据点)，并且大约95％的患者能够潜在地与5种肽中的至少2种结合。
7-肽组合8的测量价数据(图12b)显示对于由Der p 1、Der p1、Der f1或Der f2衍生得到的组合，的大约10％的患者能够潜在地对5种肽产生应答，25％的人群能够潜在地对4种肽产生应答(数据用柱表示)，35％的人群能够潜在地与至少4种肽结合(由曲线得到数据点)，以及大约82％的患者能够潜在地与6种肽中的至少2种结合。肽的组合8包含衍生自Der p7的肽(HDM35A)，其具有较差的HLA等位基因覆盖率(表16a)。
表17-用于HLA覆盖率预测的83个II类HLA等位基因及它们的频率
Figure BDA0001026395170001401
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Figure IDA0001026395240000751

Claims (13)

1.一种组合物，包含：
a)氨基酸序列SEQ ID NO:82的肽；
b)氨基酸序列SEQ ID NO:271的肽；
c)氨基酸序列SEQ ID NO:268的肽；
d)氨基酸序列SEQ ID NO:266的肽；以及
e)氨基酸序列SEQ ID NO:62的肽。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述的组合物包含最多5种肽。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中a)至e)的肽独立地是在C-末端酰胺化的。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中a)至e)的肽独立地为盐。
5.根据权利要求1至4的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物为药物组合物。
6.根据权利要求5所述的组合物，其进一步包含药物可接受的载体、赋形剂和/或佐剂。
7.根据权利要求6所述的组合物，其是无菌的。
8.根据权利要求5的组合物，其是粉末。
9.根据权利要求5的组合物，其是冻干物。
10.根据权利要求1至9的任意一项所述的组合物用于制备药物的用途，所述药物用于在有需要的受试对象中减轻或降低由尘螨的过敏原触发的免疫应答，其包括向所述的受试对象施用治疗有效量的根据权利要求1至9的任意一项所述的组合物。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述尘螨是房尘螨属(Dermatophagoides)。
12.根据权利要求10或11所述的用途，其中减轻或降低由尘螨的过敏原触发的免疫应答包括减缓与变应性鼻炎、变应性结膜炎、过敏性哮喘和/或变应性湿疹有关的一种或多种症状。
13.根据权利要求10或11所述的用途，其中所述组合物通过皮内施用或通过舌下施用。
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