CN105842365B - 利用高效液相色谱分析他达拉非的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用高效液相色谱分析他达拉非含量的方法，所述高效液相色谱：采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；以及采用乙腈作为流动相B，其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。方法可以很好的分离他达拉非与其异构体，并且灵敏度高，专属性强，从而可以提高他达拉非含量测定的可靠性。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，涉及他达拉非的分析方法，具体而言，本发明涉及一种利用高效液相色谱分析他达拉非的方法。
背景技术
他达拉非(结构式如式1所示)由礼来公司研制，是环磷酸鸟苷(cGMP)特异性磷酸二酯酶5(PDE5)的选择性可逆抑制剂，临床用于治疗男性勃起功能障碍和肺动脉高血压。
现有技术虽然报道对他达拉非的分析，但是采用该方法他达拉非片与其异构体(结构式如式2所示)分离度未达到要求。因此，对于他达拉非的分析方法有待进一步改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种利用高效液相色谱分析他达拉非的方法，该方法可以显著提高他达拉非与其异构体的分离效果，并且灵敏度高，专属性强。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析他达拉非的方法，所述高效液相色谱：
采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；以及
采用乙腈作为流动相B，
其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。
由此，根据本发明实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法可以很好的分离他达拉非与其异构体，并且灵敏度高，专属性强，从而可以提高他达拉非含量测定的可靠性和准确性。
另外，根据本发明上述实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，检测波长为283～285nm。由此，可以显著提高检测灵敏度。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱的柱温为35～42摄氏度。由此，可以显著提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述色谱柱的柱温为40摄氏度。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，进样流速为1.0ml/min。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述辛烷基键合硅胶柱为Venusil ASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的VenusilASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65)：(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的VenusilASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为283nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为58:42，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65)：(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
在本发明的一些实施例中，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为285nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为65:35，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL，任选地，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是他达拉非的紫外扫描图；
图2采用本发明实施例2所得他达拉非的HPLC图谱示意图；
图3是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得他达拉非的HPLC图谱示意图；
图4是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得的他达拉非与杂质混合溶液的HPLC图谱示意图；
图5是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得的氧化破坏降解溶液的HPLC图谱示意图；
图6是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得的酸降解溶液的HPLC图谱示意图；
图7是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得的碱降解溶液的HPLC图谱示意图；
图8是采用本发明一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得他达拉非的HPLC图谱示意图；
图9是采用本发明又一个实施例的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法所得他达拉非的HPLC图谱示意图。
具体实施方式
下面通过参考本发明的实施例对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。除非特殊说明，在实施例中所进行的操作均为按照《中华人民共和国药典》以及本领域中公知的方法进行的。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种利用高效液相色谱分析他达拉非的方法。根据本发明的实施例，该高效液相色谱分析可以采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；以及采用乙腈作为流动相B，其中，进样流速为0.90～1.10ml/min。
发明人惊奇的发现，该方法中通过采用0.90～1.10ml/min的进样流速可以有效实现他达拉非与其异构体的有效分离，并且检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，同时较传统的采用1.5ml/min的进样流速相比，采用本发明所述的他达拉非分析方法所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且本发明所述方法可以很好的分离他达拉非与其异构体，分离度达到测定要求。另外，采用本发明的进样流速不仅可以降低进样量，而且显著降低检测时间，从而可以显著提高检测效率。
根据本发明的实施例，利用高效液相色谱分析他达拉非的方法采用的检测波长并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，可以采用的检测波长为283～285nm。发明人通过大量实验意外发现，该检测波长下他达拉非具有最大吸收，且峰型好。
根据本发明的又一个实施例，色谱柱的柱温并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，色谱柱的柱温可以为35～42摄氏度。发明人发现，该温度下他达拉非与其异构体的分离效果好，从而提高他达拉非检测数据的可靠性和准确性。根据本发明的具体示例，色谱柱的柱温为40摄氏度。由此，可以进一步提高他达拉非检测数据的可靠性和准确性。
根据本发明的再一个实施例，色谱柱中填料的粒径并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的一个实施例，色谱柱中填料的粒径可以为4～6微米。发明人发现，该条件下可以显著提高他达拉非与其异构体的分离效果，从而进一步提高他达拉非检测数据的可靠性。根据本发明的具体实施例，色谱柱中填料的粒径可以为5微米。由此，可以进一步提高他达拉非检测数据的可靠性。
根据本发明的实施例，辛烷基键合硅胶柱的具体类型并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的具体实施例，辛烷基键合硅胶柱为Venusil ASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。发明人发现，选择Venusil ASB Ti C8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱较其他色谱柱可以显著提高他达拉非与其异构体的分离效果，从而进一步提高他达拉非检测数据的可靠性。
根据本发明的再一个实施例，进样流速可以为1.0ml/min。发明人发现，该流速下可以显著提高他达拉非与其异构体的分离效果，较传统方法中采用1.5ml/min的进样流速相比，采用本发明的流速，不仅能得到图谱基线平稳且峰形对称的他达拉非图谱，而且可以很好的分离他达拉非与其异构体，分离度达到测定要求，还可以降低进样量，而且灵敏度高，专属性强，从而显著提高他达拉非检测数据的可靠性，进而显著提高检测效率。
根据本发明的实施例，本发明的利用高效液相色谱分析他达拉非的方法具体可以采用以下步骤：
(1)将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液(以下简称乙腈水溶液)，取他达拉非原料药适量，用乙腈水溶液振摇他达拉非使溶解，并用乙腈水溶液定量稀释配制成1ml含他达拉非0.25mg的供试品溶液，即得到浓度为0.25mg/ml的他达拉非溶液作为供试品溶液，乙腈水溶液作为空白溶剂；
(2)色谱条件：采用高效液相色谱法，配备紫外检测器；采用辛烷基键合硅胶柱作为色谱柱，采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A，采用乙腈作为流动相B，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL，进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为(50～65):(50～35)；
(3)取供试品溶液10μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按他达拉非峰计算应不低于3000，按外标法以峰面积计算，得到样品中他达拉非原料药及其制剂的含量。由此，能够有效测定他达拉非原料药及其制剂的含量，且准确度高、专属性强。
根据本发明的实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为(50～65):(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以有效实现他达拉非与其异构体的有效分离，并且检测结果具有显著的精密度、稳定性和重复性，同时较传统的方法相比，采用本发明测定方法所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称。
根据本发明的另一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASBTi C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASBTi C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为283nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASBTi C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为58:42，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASBTi C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为(50～65):(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为285nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为65:35，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
根据本发明的又一个实施例，高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。由此，可以进一步提高他达拉非与其异构体的分离效果。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
检测波长的确定：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，然后用乙腈水溶液与他达拉非原料药振摇使其溶解，得到浓度为40μg/ml的他达拉非溶液，然后将他达拉非溶液在紫外-可见分光光度计在190～400nm进行全扫描，他达拉非的紫外扫描图分别见图1所示。由图可知，他达拉非的最大吸收波长均为284nm，故选择283～285nm作为检测波长。
实施例2
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为55:45；流速：1.5mL/min；检测波长：285nm；柱温：40℃；进样体积：20μL。
实验步骤：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，取他达拉非原料药适量，用乙腈水溶液振摇他达拉非使溶解，并用乙腈水溶液定量稀释配制成1ml含他达拉非0.4mg的供试品溶液，即得到浓度为0.4mg/ml的他达拉非溶液作为供试品溶液，乙腈水溶液作为空白溶剂；然后将10μL供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图2所示。
由图2可知，他达拉非溶液与异构体杂质未达到基线分离，且杂质峰型对称性较差。
实施例3
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为55:45；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：40℃；进样体积：10μL；
实验步骤：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，取他达拉非原料药适量，用乙腈水溶液振摇他达拉非使溶解，并用乙腈水溶液定量稀释配制成1ml含他达拉非0.25mg的供试品溶液，即得到浓度为0.25mg/ml的他达拉非溶液作为供试品溶液，乙腈水溶液作为空白溶剂；，然后将供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图3所示。
由图3可知，在本发明的等度洗脱条件下，分析时间为10min，基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例4
检测条件的验证
(1)检测限
精密称取他达拉非对照品(结构式如式2所示)适量，加体积比为1:1的乙腈水溶液逐步稀释得到对照品溶液，取对照品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图，当信噪比为3时，他达拉非的最小检出浓度为15mg/ml。
(2)线性
精密称取他达拉非对照品适量，加体积比为1:1的乙腈水溶液分别定量稀释成0.1777mg/ml，0.2031mg/ml，0.2285mg/ml，0.2539mg/ml，0.2793mg/ml，0.3047mg/ml，0.3301mg/ml的溶液，然后各取10μL溶液注入色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，该条曲线的线性回归方程为Y＝18823.6863X-29.1143，R2＝0.9999，线性范围为0.1777～0.3301mg/ml。
(3)耐用性
对照品溶液的配制：精密称取他达拉非对照品12.5mg置50ml量瓶中，加体积比为1:1的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
供试品溶液的配制：精密称取他达拉非原料12.5mg置50ml量瓶中，加体积比为1:1的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
分别测定供试品溶液在实验例3色谱条件下供试品的含量，当色谱条件有微小变动(柱温变化范围为35～42摄氏度，所述有机相变化即流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65):(50～35)，流速变化±0.10ml/min，即流速为0.90～1.10ml/min)，更换色谱柱。在上述色谱条件下，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，计算供试品的含量。该方法在柱温变化范围为35～42摄氏度时，含量测定RSD为0.2％；该方法在有机相变化即流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65):(50～35)时，含量测定RSD为0.2％；该方法在流速变化±0.10ml/min，即流速为0.90～1.10ml/min时，含量测定RSD为0.3％；更换色谱柱(ZORBAX SB-C85μm 4.6*250mm)，含量测定RSD为0.6％，均符合对药物含量测定的要求。
实施例5
色谱条件：同实验例3；
实验步骤：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，取他达拉非与乙腈水溶液混合，得到浓度为0.25mg/ml的他达拉非溶液作为供试品溶液，乙腈水溶液作为空白溶剂，分别取他达拉非的异构体(结构式如式2所示)对照品适量，用乙腈水溶液溶解并用乙腈水溶液定量稀释制成浓度为0.25mg的杂质对照品溶液，然后分别取他达拉非溶液和杂质对照品溶液各1ml置同一100ml量瓶中，用乙腈水溶液稀释至刻度，得到他达拉非和杂质对照品混合溶液，然后将混合溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图4所示。
由图4可知，他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到较好的分离，且峰形好。
实施例6
色谱条件：同实验例3；
实验步骤：
将乙腈与水按照体积比为1:1制成乙腈水溶液，取他达拉非原料适量，加乙腈水溶液溶解并稀释制成2.5mg/ml的样品溶液作为溶液A；
(1)氧化降解的样品溶液配制：
精密量取溶液A 1ml置10ml量瓶中，然后移取1.0ml的30％双氧水(根据供试品破坏难以程度选择)置上述容量瓶中，45℃水浴破坏2h，用乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀即得，作为氧化破坏降解溶液，然后将所得氧化破坏降解溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图5所示。
(2)酸降解的样品溶液配制：
精密量取溶液A 1ml置10ml量瓶中，加1mol/L的盐酸溶液2ml，99℃水浴破坏1h，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml，用乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀即得，作为酸降解溶液，然后将所得酸降解溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图6所示。(3)碱降解的样品溶液配制：
精密量取溶液A 1ml置10ml量瓶中，加1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，室温放置40min，加1mol/L盐酸溶液2ml，用乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀即得，作为碱降解溶液，然后将所得碱降解溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，样品溶液HPCL图谱如图7所示。
由图5-7可知，采用本发明的方法的测定氧化破坏降解溶液、酸降解溶液和碱降解溶液中他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且基线平稳，峰形对称。
实施例7
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为50:50；流速：0.90mL/min；检测波长：283nm；柱温：35℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
由图8可知，在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例8
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，6μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为58:42；流速：1.05mL/min；检测波长：285nm；柱温：38℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例9
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：Venusil ASB Ti C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为60:40；流速：1.10mL/min；检测波长：284nm；柱温：42℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例10
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为50:50；流速：0.90mL/min；检测波长：285nm；柱温：35℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例11
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为55:45；流速：1.0mL/min；检测波长：284nm；柱温：40℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例12
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，6μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为65:35；流速：1.05mL/min；检测波长：285nm；柱温：38℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
由图9可知，在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
实施例13
色谱条件：
高效液相色谱仪，配紫外检测器，色谱柱：ZORBAX SB-C8，4.6×250mm，5μm；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；采用乙腈作为流动相B进行等度洗脱，流动相A与流动相B的体积比为60:40；流速：1.10mL/min；检测波长：285nm；柱温：42℃；进样体积：10μL；
实验步骤：同实施例3
在本发明条件下，所得他达拉非的图谱基线平稳且峰形对称，并且与实验例2相比，采用本发明的方法所得他达拉非色谱峰中主峰与异构体杂质可以达到良好的分离，且峰型好。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (15)
1.一种利用高效液相色谱分析他达拉非的方法，其特征在于，所述高效液相色谱：
采用辛烷基键合硅胶柱为色谱柱；
采用重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液作为流动相A；以及
采用乙腈作为流动相B，
其中，进样流速为0.90～1.10ml/min，
所述色谱柱的柱温为35～42摄氏度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为283～285nm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为40摄氏度。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述进样流速为1.0ml/min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辛烷基键合硅胶柱为Venusil ASB TiC8色谱柱或ZORBAX SB-C8色谱柱。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65)：(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为283nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为58:42，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的Venusil ASB Ti C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(50～65)：(50～35)，柱温为35～42摄氏度，检测波长为283～285nm，流速为0.90～1.10ml/min，进样体积为10μL。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为55:45，柱温为40摄氏度，检测波长为284nm，流速为1.0ml/min，进样体积为10μL。
13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为50:50，柱温为35摄氏度，检测波长为285nm，流速为0.90ml/min，进样体积为10μL。
14.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为65:35，柱温为38摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.05ml/min，进样体积为10μL。
15.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用4.6×250mm，5μm的ZORBAX SB-C8色谱柱，重量百分比为0.1％的三氟乙酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行等度洗脱，其中，流动相A与流动相B的体积比为60:40，柱温为42摄氏度，检测波长为285nm，流速为1.10ml/min，进样体积为10μL。
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| Isolation and structural characterization of two tadalafil analogs found in dietary supplements;Valerie M. Toomey et al;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20111006;第59卷;50-57 * |
| 保健食品中非法添加化学药物的检测方法;张圆等;《中国执业药师》;20140731;第11卷(第7期);35-39 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105842365A (zh) | 2016-08-10 |
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