CN105842357B - 同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物uf、dn残留量的方法 - Google Patents

同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物uf、dn残留量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，步骤如下：(1)提取：取待检测的粮谷样品，粉碎，加入乙酸，乙腈，超声波提取，加入无水硫酸镁，离心；(2)净化：取上层乙腈相，置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中，离心，取上清液，氮气吹干，流动相定容；(3)测定和结果计算：对样品液进行检测，测得色谱峰面积，代入标准曲线，得到呋虫胺或/和UF或/和DN的含量，然后计算得到残留量。本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速的样品前处理方法，呋虫胺及其代谢物UF、DN的检出限分别为0.002mg/kg、0.002mg/kg和0.01mg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。

Description

同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法
技术领域
本发明涉及一种同时检测呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，属于农药残留量的测定技术领域。
背景技术
呋虫胺，英文通用名dinotefuran，化学名称(RS)-1-甲基-2-硝基-3-(四氢-3-呋喃甲基)胍，是由日本三井公司研发的第三代烟碱类杀虫剂，结构式见图1，是烟碱类杀虫剂中唯一不含氯原子和芳环的化合物，具有3-四氢呋喃甲基的特征结构，其化学结构和性能与现有的烟碱类杀虫剂有很大不同，能克服一二代烟碱类杀虫剂引起的抗性风险。其主要机理是作用于昆虫的烟碱乙酰胆碱受体，使害虫麻痹致死。具有内吸、胃毒、触杀作用，杀虫谱广、杀虫活性高、持效期长、对动植物安全性高等特点，可用于小麦、水稻、果树、蔬菜、花卉等众多作物的害虫防治。在我国有着广泛的应用。
呋虫胺在粮食作物中的广泛使用，不可避免的在粮谷中产生残留，对人类的健康和生活质量产生影响，但目前我国尚未建立呋虫胺在食品中的残留限量制定。呋虫胺在环境中的代谢产物主要有UF、DN，UF化学名称1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)脲,DN化学名称1-甲基-3-(四氢-3-呋喃甲基)胍，代谢物UF、DN与母体呋虫胺毒性相当，但比呋虫胺移动性和持久性更强。呋虫胺的检测方法主要有液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法。呋虫胺在大米、豌豆、棉花、黄瓜等基质中的残留检测方法均已有大量报道，Md.Musfiqur Rahman等报道了呋虫胺及其代谢物在茶叶中的残留方法，ALAA KAMEL报道了呋虫胺及其代谢物在蜂蜜中的残留方法，Md.Musfiqur Rahma等报道了呋虫胺及其代谢物在瓜中的残留方法，但目前尚未有关呋虫胺及其代谢物在粮谷中的残留检测方法，因此，建立一种简便、快速、准确的粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量同时检测的方法非常必要。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，试验结果表明该方法操作简便、快速、分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、准确等优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，包括以下步骤：
(1)提取：取待检测的粮谷样品，粉碎机粉碎，过20目筛，置于离心管中，加入乙酸，混匀；加入乙腈，涡旋，超声波提取，静置分层，上层的上清液为提取液，下层为残渣，取残渣，再次加入乙腈，涡旋，超声波提取，静置分层，上层的上清液为提取液；合并两次的提取液，加入无水硫酸镁，涡旋，离心；
所述粮谷包括水稻、小麦、玉米、高粱、谷子等；
所述乙酸的加入比例为：粮谷：乙酸＝5:3(g：ml)；
所述乙腈的加入比例为：每1克粮谷样品加入2ml的乙腈/次(加入了两次乙腈，即乙腈的总加入量为：每1克粮谷样品加入4ml的乙腈)；
所述无水硫酸镁的加入比例为：每1克粮谷样品加入1克的无水硫酸镁；
优选的，所述涡旋的参数为：3000r/min涡旋1min；
优选的，所述超声波提取时间为15min；
优选的，所述离心的参数为3800r/min离心5min；
(2)净化：上述离心后，取上层乙腈相，置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中，混匀，离心，取上清液，氮气吹干，流动相定容，过0.22μm有机系滤膜，得样品液；
所述基质分散固相萃取剂由乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)、十八烷基硅烷键合相(C18)和无水硫酸镁组成，PSA、C18和无水硫酸镁三者的用量比例为15mg：15mg：100mg；每1ml乙腈相对应的PSA、C18和无水硫酸镁三者的用量分别为15mg：15mg：100mg；
所述离心的参数为：5000r/min离心5min；
所述流动相为甲酸甲酸铵水溶液(水溶液中，甲酸占0.1％，体积百分数，甲酸铵的浓度为10m mol/L)-甲醇混合液，其中，甲酸甲酸铵水溶液与甲醇的体积比为99:1(即表1中0分钟时所用的流动相)；
(3)测定和结果计算：进行定性或/和定量测定；
定性测定：采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对样品液进行检测，同时，在相同实验条件下对标准工作液进行检测；若样品检出的峰与呋虫胺或/和UF或/和DN标准工作液的峰的保留时间一致，且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子(呋虫胺所选的离子为113/203.1；129/203.1，UF所选离子为102.1/159.2；67.2/159.2，DN所选离子为57.1/158.2；102.1/158.2)均出现，且选择的离子丰度比与空白基质标准液的离子丰度比相一致，则可判断样品中存在呋虫胺或/和UF或/和DN；
所述标准工作液是指呋虫胺或/和UF或/和DN的标准工作液；
所述空白基质标准液是指不含呋虫胺、UF和DN的样品经步骤(1)(2)处理后得到的样品液；
定量测定：采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对样品液进行检测，测得样品液中呋虫胺或/和UF或/和DN的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中呋虫胺或/和UF或/和DN的含量，然后根据样品液所代表样品的质量计算得到待检测的粮谷样品中呋虫胺或/和UF或/和DN的残留量。
优选的，所述液相色谱-质谱/质谱联用仪为Agilent 1260-6420-Agilent，USA，色谱柱为Eclipse plus C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm。
所述液相色谱和质谱条件为：流速：0.4mL/min；柱温：35℃；进样量：2μL；离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子源；毛细管电压：4KV(-)；脱溶剂温度：300℃；脱溶剂气流量：10L/min；雾化器压力：35psi；所用流动相为甲酸甲酸铵水溶液(水溶液中，甲酸占0.1％，体积百分数，甲酸铵的浓度为10m mol/L)-甲醇(初始、结束时甲酸甲酸铵水溶液与甲醇的体积比均为99:1)，洗脱方式为梯度洗脱，具体洗脱方式见表1(表1中的百分数是指体积百分数)。
表1
所述检测方式为多重反应监测(MRM)，具体如表2所示。
表2
所述标准曲线是通过以下方法得到的：配制系列浓度的呋虫胺标准工作液、UF标准工作液和DN标准工作液，在与样品液的检测条件相同的条件下进行HPLC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线。
所述系列浓度的呋虫胺标准工作液的浓度依次为0.002、0.01、0.1、1、10μg/mL，由呋虫胺标准品配置而成。
所述系列浓度的UF标准工作液的浓度依次为0.002、0.01、0.1、1、10μg/mL，由UF标准品配置而成。
所述系列浓度的DN标准工作液的浓度依次为0.01、0.1、0.5、1、10μg/mL，由DN标准品配置而成。
本发明同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，优点为：本发明利用分散固相萃取技术，建立了简便、快速的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC-MS/MS应用于粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的同时检测，呋虫胺及其代谢物UF、DN的平均回收率分别为93.1％～103.1％、94.8～106.1％和91.8～97.7％，平均相对标准偏差(RSD)分别为1.8％～3.6％、1.7～4.3％和1.9～2.8％，检出限分别为0.002mg/kg、0.002mg/kg和0.01mg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。本发明的方法能满足我国、美国、欧盟对呋虫胺及其代谢物UF、DN在粮谷中安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
附图说明
图1：呋虫胺的化学结构式。
图2：50ng/mL呋虫胺呋虫胺及代谢物UF、DN大米基质标液的色谱图。
图3：不含呋虫胺及代谢物UF、DN的大米空白样品的色谱图。
图4：呋虫胺大米基质标准工作曲线示意图。
图5：UF大米基质标准工作曲线示意图。
图6：DN大米基质标准工作曲线示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
本发明的实施例中使用的仪器与试剂：
Agilent 1260-6420液相色谱仪-质谱/质谱联用仪(Agilent，USA)；VORTEX4基本型旋涡混合器(IKA，Germany)；Heraeus Multifuge X1R离心机(ThermoFisher，USA)；乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)吸附剂(40～60μm)、十八烷基硅烷键合相(C18)净化剂(40～60μm)均购于天津博纳艾杰尔科技有限公司。
试剂：乙腈(HPLC级，Merke，Germany)；氯化钠；无水硫酸镁为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。
标准物质：呋虫胺(纯度95.0％)，UF(纯度97.0％)，DN(纯度97.9％)，均由青岛中达农业科技有限公司提供。
实施例1：大米中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的检测
(1)样品前处理
称取经粉碎机粉碎过20目筛且混匀的大米5g于50mL离心管中，加入3ml乙酸混匀，10mL乙腈涡旋1min(3000r/min)，超声波提取15min，取上清液于50mL离心管中，残渣再加入10mL乙腈涡旋1min(3000r/min)，超声波提取15min,合并两次提取液(上清液)，加入5gMgSO4涡旋(3000r/min，1min)，3800r/min离心5min，取6mL上清液转移至加有0.09g PSA、0.09g C18和0.9g MgSO4的15mL离心管中涡旋(3000r/min，1min)，5000r/min离心5min，取4mL上清液，氮气吹干，用流动相(甲酸甲酸铵水溶液-甲醇混合液，其中，甲酸甲酸铵水溶液中，甲酸占0.1％，体积百分数，甲酸铵的浓度为10m mol/L，甲酸甲酸铵水溶液与甲醇的体积比为99:1)定容为1mL，过0.22μm滤膜，移入进样瓶中待HPLC-MS/MS测定。
(2)基质标准工作溶液的配制：
基质标准工作溶液的配制：分别准确称取100±0.1mg标准品(呋虫胺、UF、DN)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，分别定容得1000.0μg/mL标准储备液；分别移取1.0mL标准储备液置于10mL容量瓶中，用甲醇定容得到100.0μg/mL混合标准中间液；将混合标准中间液用大米基质空白逐步稀释配成浓度分别为0.002、0.01、0.1、0.5、1、10μg/mL的混合基质标准溶液(呋虫胺标准工作液、UF标准工作液、DN标准工作液)。基质标准溶液现配现用。0.05μg/mL呋虫胺及UF、DN大米基质标液的色谱图见图2。
大米基质空白：不含呋虫胺、UF和DN的大米样品，按大米前处理方法处理得到的待进样液。大米基质空白样品色谱图见图3。
(3)液相色谱-质谱/质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定：
将上述配制的不同浓度梯度的标准工作液分别注入HPLC-MS/MS，以外标法进行呋虫胺和UF、DN含量的定量分析，即以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；在相同条件下将样品液注入HPLC-MS/MS进行测定，测得样品液中呋虫胺和UF、DN的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中呋虫胺和UF、DN含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中呋虫胺和UF、DN残留量。其中，色谱条件为：色谱柱为Eclipse plusC18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm；流速：0.4mL/min；柱温：35℃；进样量：2μL。流动相采用梯度洗脱方式，见表3所示。
表3
质谱条件为：离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子源；毛细管电压：4KV(-)；脱溶剂温度：300℃；脱溶剂气流量：10L/min；雾化器压力：35psi。
所述检测方式为多重反应监测(MRM)，如表4所示。
表4
所得到的标准工作曲线如表5、图4、图5、图6所示。
表5呋虫胺、UF、DN的大米基质标准曲线
名称 保留时间(min) 回归方程 相关系数
呋虫胺 2.78 Y＝315656x-7473 0.9999
UF 2.60 Y＝307108x-11970 0.9998
DN 2.37 Y＝48991x-1698 0.9999
加标回收率和重复性：
在不含呋虫胺、UF、DN的大米中加入0.002、0.8和8mg/kg3个浓度水平的呋虫胺、UF标准溶液，加入0.01、0.8和8mg/kg3个浓度水平的DN标准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与农药理论添加浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定5次，得其相对标准偏差，测定结果见表6。
表6呋虫胺、UF、DN在大米中的回收率和重复性(n＝5)
从表6中可以看出，在3个加标水平上，呋虫胺的平均回收率为95.0％～101.6％，平均相对标准偏差(RSD)为1.8％～3.2％，UF的平均回收率为96.2％～103.1％，平均相对标准偏差(RSD)为1.8％～4.3％，DN的平均回收率为92.5％～97.7％，平均相对标准偏差(RSD)为1.9％～2.4％，说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
灵敏度：
以实际添加样品的最低检测浓度为检出限，本实施例呋虫胺、UF、DN在大米的检出限分别为0.002mg/kg、0.002mg/kg、0.01mg/kg。
实施例2小麦中呋虫胺及代谢物UF、DN残留量的检测
(1)样品前处理：
称取经粉碎机粉碎过20目筛且混匀的小麦5g于50mL离心管中，加入3ml乙酸混匀，10mL乙腈涡旋1min，超声波提提15min，取上清液于50mL离心管中，残渣再加入10mL乙腈涡旋1min，超声波提取15min,合并两次提取液，加入5gMgSO4涡旋，3800r/min离心5min，取6mL上清液转移至加有0.09g PSA、0.09g C18、0.9g MgSO4的15mL离心管中涡旋，5000r/min离心5min，取4mL上清液氮气吹干，用流动相定容为1mL，过0.22μm滤膜，移入进样瓶中待HPLC-MS/MS测定。
(2)标准工作溶液的配制：
基质标准工作溶液的配制：准确称取100±0.1mg标准品(呋虫胺、UF、DN)于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，分别定容得1000.0μg/mL标准储备液；分别移取1.0mL标准储备液置于10mL容量瓶中，用甲醇定容得到100.0μg/mL混合标准中间液；将混合标准中间液用小麦基质空白逐步稀释配成浓度分别为0.002、0.01、0.1、0.5、1、10μg/mL的混合基质标准溶液。基质标准溶液现配现用。
小麦基质空白：不含呋虫胺、UF、DN的小麦，按小麦的前处理方法处理得到的待进样液为小麦基质空白。
(3)液相色谱-质谱/质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定：
操作步骤、色谱和质谱条件与上述大米样品中呋虫胺和UF、DN的测定一致。
以小麦基质标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线如表7所示。
表7呋虫胺和UF、DN的小麦基质标准曲线
名称 保留时间(min) 回归方程 相关系数
呋虫胺 2.78 Y＝256529x-8035 0.9998
UF 2.60 Y＝229072x-4937 0.9999
DN 2.37 Y＝24657x+1860 0.9997
加标回收率和重复性：
在不含呋虫胺和UF、DN的小麦中加入0.002、0.8和8mg/kg3个浓度水平的呋虫胺、UF标准溶液，加入0.01、0.8和8mg/kg3个浓度水平的DN标准溶液，待农药添加30min后按上述处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与农药理论添加浓度进行比较，得到农药添加回收率，每个添加水平平行测定5次，得其相对标准偏差，测定结果见表8。
表8小麦中呋虫胺和UF、DN的回收率和重复性(n＝5)
从表8中可以看出，在3个加标水平上，呋虫胺的平均回收率为93.1％～103.1％，平均相对标准偏差(RSD)为2.1％～3.2％，UF的平均回收率为94.8％～106.1％，平均相对标准偏差(RSD)为2.1％～4.3％，DN的平均回收率为92.4％～96.5％，平均相对标准偏差(RSD)为2.2％～2.8％，说明本发明方法的回收率较高，重复性好。
灵敏度：
以实际添加样品的最低检测浓度为检出限，本实施例呋虫胺、UF、DN在小麦的检出限分别为0.002mg/kg、0.002mg/kg、0.01mg/kg。
实施例3玉米中呋虫胺及代谢物UF、DN残留量的检测
称取经粉碎机粉碎过20目筛且混匀的玉米5g于50mL离心管中，加入3ml乙酸混匀，10mL乙腈涡旋1min，超声波提提15min，取上清液于50mL离心管中，残渣再加入10mL乙腈涡旋1min，超声波提取15min,合并两次提取液，加入5gMgSO4涡旋，3800r/min离心5min，取6mL上清液转移至加有0.09g PSA、0.09g C18、0.9g MgSO4的15mL离心管中涡旋，5000r/min离心5min，取4mL上清液氮气吹干，用流动相定容为1mL，过0.22μm滤膜，移入进样瓶中待HPLC-MS/MS测定(检测方法同实施例1)。
对比实例1：样品前处理过程中加入500μL乙酸，其他步骤同实施例3。
对比实例2：样品前处理过程中加入3mL氨水代替乙酸，其他步骤同实施例3。
对比实例3：样品前处理过程中加入3mL蒸馏水代替乙酸，其他步骤同实施例3。
检测结果及比较如表9所示。
表9呋虫胺、UF、DN的回收率、重复性(n＝5)及检出限
从以上结果可以看出，实施例3呋虫胺、UF、DN在玉米中的最低检出浓度分别为0.002mg/kg、0.002mg/kg、0.01mg/kg，对比实例1、对比实例2和对比实例3呋虫胺、UF、DN在玉米中的最低检出浓度分别为0.01mg/kg、0.01mg/kg、0.1mg/kg。呋虫胺、UF在玉米添加浓度0.01mg/kg，实施例3呋虫胺、UF平均回收率为98.2％和97.5％，RSD为2.3％和1.7％，对比实例1呋虫胺、UF平均回收率为93.5％和86.8％，RSD为2.7％和2.1％，对比实例2呋虫胺、UF平均回收率为80.7％和71.3％，RSD为5.2％和3.9％，对比实例3呋虫胺、UF平均回收率为87.1％和82.2％，RSD为3.7％和2.8％。DN在玉米添加浓度0.1mg/kg，实施例3DN平均回收率为96.1％，RSD为1.4％，对比实例1、对比实例2和对比实例3DN平均回收率分别为58.3％、16.7％和21.4％，RSD为2.3％、4.5％和2.6％。说明本方法不但能完成呋虫胺及代谢物UF、DN的同时检测，且检出线低，回收率高，重复性好，具有简便快速、安全环保等优点。
以上的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)提取：取待检测的粮谷样品，粉碎机粉碎，过20目筛，置于离心管中，加入乙酸，混匀；加入乙腈，涡旋，超声波提取，静置分层，上层的上清液为提取液，下层为残渣，取残渣，再次加入乙腈，涡旋，超声波提取，静置分层，上层的上清液为提取液；合并两次的提取液，加入无水硫酸镁，涡旋，离心；
所述乙酸的加入比例为：粮谷：乙酸＝5g:3ml；
所述乙腈的加入比例为：每1克粮谷样品加入2ml的乙腈/次；
所述无水硫酸镁的加入比例为：每1克粮谷样品加入1克的无水硫酸镁；
(2)净化：上述离心后，取上层乙腈相，置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中，混匀，离心，取上清液，氮气吹干，流动相定容，过0.22μm有机系滤膜，得样品液；
所述基质分散固相萃取剂由乙二胺-N-丙基硅烷、十八烷基硅烷键合相和无水硫酸镁组成，每1ml乙腈相对应的乙二胺-N-丙基硅烷、十八烷基硅烷键合相和无水硫酸镁三者的用量分别为15mg：15mg：100mg；
所述流动相为甲酸/甲酸铵水溶液-甲醇混合液，其中，甲酸/甲酸铵水溶液中，甲酸占0.1％，甲酸铵的浓度为10m mol/L，甲酸/甲酸铵水溶液与甲醇的体积比为99:1；
(3)测定和结果计算：进行定性或/和定量测定；
定性测定：采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对样品液进行检测，同时，在相同实验条件下对标准工作液进行检测；若样品检出的峰与呋虫胺或/和UF或/和DN标准工作液的峰的保留时间一致，且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且选择的离子丰度比与空白基质标准液的离子丰度比相一致，则可判断样品中存在呋虫胺或/和UF或/和DN；呋虫胺所选的离子为113/203.1；129/203.1，UF所选离子为102.1/159.2；67.2/159.2，DN所选离子为57.1/158.2；102.1/158.2；
所述标准工作液是指呋虫胺或/和UF或/和DN的标准工作液；
所述空白基质标准液是指不含呋虫胺、UF和DN的样品经步骤(1)(2)处理后得到的样品液；
定量测定：采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对样品液进行检测，测得样品液中呋虫胺或/和UF或/和DN的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中呋虫胺或/和UF或/和DN的含量，然后根据样品液所代表样品的质量计算得到待检测的粮谷样品中呋虫胺或/和UF或/和DN的残留量；
所述步骤(3)中，定量测定时，所述液相色谱和质谱条件为：流速：0.4mL/min；柱温：35℃；进样量：2μL；离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子源；毛细管电压：-4KV；脱溶剂温度：300℃；脱溶剂气流量：10L/min；雾化器压力：35psi；所述流动相为甲酸甲酸铵水溶液-甲醇混合液，其中，甲酸甲酸铵水溶液中，甲酸占0.1％，甲酸铵的浓度为10m mol/L，初始、结束时甲酸甲酸铵水溶液与甲醇的体积比均为99:1；洗脱方式为梯度洗脱；
所述步骤(3)中，定量测定时，所述检测方式为多重反应监测，具体如表2所示；
表2
2.根据权利要求1所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述粮谷选自水稻、小麦、玉米、高粱、谷子。
3.根据权利要求1所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，定量测定时，所述液相色谱-质谱/质谱联用仪为Agilent 1260-6420-Agilent，USA，色谱柱为Eclipse plus C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm。
4.根据权利要求1所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：具体洗脱方式见表1，表1中的百分数是指体积百分数；
表1
5.根据权利要求1所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，定量检测时，所述标准曲线是通过以下方法得到的：配制系列浓度的呋虫胺标准工作液、UF标准工作液和DN标准工作液，在与样品液的检测条件相同的条件下进行HPLC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线。
6.根据权利要求5所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：所述系列浓度的呋虫胺标准工作液的浓度依次为0.002、0.01、0.1、1、10μg/mL，由呋虫胺标准品配置而成；所述系列浓度的UF标准工作液的浓度依次为0.002、0.01、0.1、1、10μg/mL，由UF标准品配置而成；所述系列浓度的DN标准工作液的浓度依次为0.01、0.1、0.5、1、10μg/mL，由DN标准品配置而成。
7.根据权利要求1所述的同时检测粮谷中呋虫胺及其代谢物UF、DN残留量的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述涡旋的参数为：3000r/min涡旋1min；所述超声波提取时间为15min；所述离心的参数为3800r/min离心5min。
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