CN105838766A - 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法 - Google Patents

一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105838766A
CN105838766A CN201610311392.2A CN201610311392A CN105838766A CN 105838766 A CN105838766 A CN 105838766A CN 201610311392 A CN201610311392 A CN 201610311392A CN 105838766 A CN105838766 A CN 105838766A
Authority
CN
China
Prior art keywords
inhibitory peptide
ace inhibitory
konjak
fry starch
chymotryptic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610311392.2A
Other languages
English (en)
Inventor
毛跟年
贺磊
周亚丽
曹晴
许牡丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shaanxi University of Science and Technology
Original Assignee
Shaanxi University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi University of Science and Technology filed Critical Shaanxi University of Science and Technology
Priority to CN201610311392.2A priority Critical patent/CN105838766A/zh
Publication of CN105838766A publication Critical patent/CN105838766A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25‑45℃、pH值为3‑8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。本发明对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本发明方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。

Description

一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法
技术领域
本发明属于ACE抑制肽制备领域，具体涉及一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法。
背景技术
高血压是一种以动脉血压持续升高为主要表现的慢性疾病，常引起心、脑、肾等重要器官的病变并出现相应的后果。高血压患者一般需要长期服用降血压药物，这可能会导致出现咳嗽、肾功能减退、蛋白尿、肝功能异常、血管神经性水肿等不良反应。因此天然、有效、无副作用、可长期服用的ACE抑制肽成为高血压药物方面研究的热点。目前，在ACE抑制肽来源研究方面，仅是从豆粕、大豆、酪蛋白、牛乳、麦胚蛋白、牡蛎等原料中发现了ACE抑制肽。而有关以魔芋为原料制备ACE抑制肽的研究甚少。
我国是魔芋生产大国，全国年产魔芋飞粉1500-2000吨。魔芋飞粉含蛋白质20％左右，目前对魔芋的利用主要集中于魔芋精粉(葡甘聚糖)，而魔芋飞粉大多以低价作为饲料或干燥剂出售，利用价值低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，提高魔芋飞粉的利用价值，同时拓宽了ACE抑制剂的来源。
为实现上述目的，本发明所采取得技术方案是：
一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：
1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25-45℃、pH值为3-8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。
步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。
步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。
步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10％。
步骤1)中每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000-8000U。
步骤1)中酶解的时间为120-300min。
步骤1)中离心的速率为3000-4000rpm，时间20-40min。
步骤2)中灭酶具体是在90℃下保温至少10min。
步骤2)中离心的转速为8000-10000rpm，时间为15-30min。
将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明以魔芋飞粉为原料，经胰凝乳蛋白酶进行酶解后，得到酶解液，将酶解液灭酶后得到ACE抑制肽，本发明得到的ACE抑制肽的抑制率高达65％以上，说明制备得到了ACE抑制肽，并且活性较高，可制成各种制剂。本发明利用魔芋飞粉制备了ACE抑制肽，一方面将低价值的魔芋飞粉转化为具有较高价值的ACE抑制肽，变废为宝，充分利用了资源，拓宽了魔芋飞粉的开发利用领域，另一方便也拓宽了ACE抑制肽的来源；本发明制备方法简单，利于大量生产，并且成本低。本发明对实现魔芋飞粉有效利用，生产其高附加值产品具有重要意义。本发明方法工艺路线简单易行，操作简单，所使用的设备为成熟设备，投资成本较低，ACE抑制肽回收率高。
进一步的，将得到的酶解液加热至90℃，保温至少10min，以使其中的胰凝乳蛋白酶灭活，再进行离心。
进一步的，将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化，可以得到高纯度的ACE抑制肽。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
本发明所采用的ACE抑制活性的测定，具体步骤为：
按要求配制所需试剂，如表1所示，将各试剂加入到试管中，于37℃水浴中反应30min，反应结束后，加入1mol/L盐酸终止反应(样品C需要提前加入盐酸)，然后向试管中加入1.9mL的乙酸乙酯，震荡15s，静置5min，吸取1mL的乙酸乙酯层，于100℃的烘箱内蒸干，40min后取出冷却，再将其重新溶解于3mL的去离子水中，于波长228nm处测定吸光度。
表1ACE抑制率检测方法
ACE抑制率计算公式为：
式中：
Aa：是反应中ACE抑制剂及ACE同时存在的吸光度；
Ab：是反应中不加ACE抑制剂的吸光度；
Ac：是ACE和HHL空白反应的吸光度。
实施例1
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液(浓度为1.0mol/L)，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3000rpm下离心40min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为1％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为30℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至7，加入胰凝乳蛋白酶，酶解180min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心20min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞60％。
实施例2
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在4000rpm下离心20min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为10％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为35℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至7.5，加入胰凝乳蛋白酶，酶解210min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为4000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在10000rpm离心15min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞55％。
实施例3
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3500rpm下离心35min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为4％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为40℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至8，加入胰凝乳蛋白酶，酶解240min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为6000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在9000rpm离心30min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞65％。
实施例4
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在3000rpm下离心40min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为7％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为37℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至3，加入胰凝乳蛋白酶，酶解300min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为8000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在9500rpm离心25min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞60％。
实施例5
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在4000rpm下离心30min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为9％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为37℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至5，加入胰凝乳蛋白酶，酶解210min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为7000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在8000rpm离心25min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。经ACE抑制活性的测定，其对ACE活性的抑制率＞50％。
实施例6
1)将魔芋飞粉与水按照质量比例1：50进行混合溶解，边搅拌边滴加盐酸溶液，使混合液的pH值达到3.8，魔芋蛋白进行沉淀，然后采用低速离心机在4000rpm下离心30min后，弃去上清液，得魔芋蛋白沉淀；
2)将所得蛋白沉淀加水溶解，得到质量浓度为9％的魔芋蛋白溶液；采用磁力加热搅拌器进行搅拌，温度为37℃，搅拌速度为800rpm，边搅拌边滴加盐酸溶液调pH值至5，加入胰凝乳蛋白酶，酶解120min，得到酶解液；其中，每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为7000U。
3)将酶解液置于90℃恒温水浴锅中保持10min灭酶活，之后自然冷却至室温，将酶解液调至pH值为3.8，在8000rpm离心25min，收集上清液；
4)取上清液过滤，将滤液冷冻干燥，即得到ACE抑制肽。
将本发明制得的ACE抑制肽经DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化，可以提高纯度。

Claims (10)

1.一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将魔芋飞粉加入到水中，溶解后调节pH值至等电点，离心得魔芋蛋白沉淀；再将魔芋蛋白沉淀加水溶解后，得到魔芋蛋白溶液，调节魔芋蛋白溶液的温度为25-45℃、pH值为3-8，然后加入胰凝乳蛋白酶进行酶解，得到酶解液；
2)将酶解液灭酶后调节pH值为3.8后离心，收集上清液；将上清液经超滤装置后收集滤液，冷冻干燥，得到ACE抑制肽。
2.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中将魔芋飞粉加入到水中时，魔芋飞粉与水的质量比为1:50。
3.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)和2)中pH值均是采用盐酸调节的。
4.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中魔芋蛋白溶液的质量浓度为1-10％。
5.根据权利要求4所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中每克魔芋蛋白溶液重加入胰凝乳蛋白酶的量为3000-8000U。
6.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中酶解的时间为120-300min。
7.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤1)中离心的速率为3000-4000rpm，时间20-40min。
8.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤2)中灭酶具体是在90℃下保温至少10min。
9.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，步骤2)中离心的转速为8000-10000rpm，时间为15-30min。
10.根据权利要求1所述的一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，将步骤2)得到ACE抑制肽还经过DA-201大孔吸附树脂脱盐纯化。
CN201610311392.2A 2016-05-11 2016-05-11 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法 Pending CN105838766A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610311392.2A CN105838766A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610311392.2A CN105838766A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105838766A true CN105838766A (zh) 2016-08-10

Family

ID=56591769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610311392.2A Pending CN105838766A (zh) 2016-05-11 2016-05-11 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105838766A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106591405A (zh) * 2016-09-28 2017-04-26 福建农林大学 一种c末端为酪氨酸的海带小分子ace抑制肽制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007080894A1 (ja) * 2006-01-11 2007-07-19 Seiya Sakurai コンニャク流動材料およびその製造方法と用途
CN103436582A (zh) * 2013-07-10 2013-12-11 马杰坤 一种魔芋多肽提取物、制备方法及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007080894A1 (ja) * 2006-01-11 2007-07-19 Seiya Sakurai コンニャク流動材料およびその製造方法と用途
CN103436582A (zh) * 2013-07-10 2013-12-11 马杰坤 一种魔芋多肽提取物、制备方法及其用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.坎太罗 B.歇伯兹: "《生物化学》", 31 January 1964, 上海科学技术出版社 *
徐怀德等: "酶解魔芋飞粉蛋白制备ACE 抑制肽", 《食品科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106591405A (zh) * 2016-09-28 2017-04-26 福建农林大学 一种c末端为酪氨酸的海带小分子ace抑制肽制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104789629A (zh) 一种鹰嘴豆低聚肽及其制备方法
CN108813615B (zh) 具有抗氧化活性的绿豆提取液的制备方法
CN102838686B (zh) 一种制备高纯度姬松茸多糖的方法
CN102146142B (zh) 一种黄芪多糖的制备方法
CN104829734A (zh) 一种利用干香菇生产色素、蛋白、多糖及膳食纤维的方法
CN102212144B (zh) 一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法
CN104725284B (zh) 一种天然牛磺酸制备方法
CN106046192A (zh) 一种从茯苓中提取多糖的工艺
CN103652307A (zh) 从构树叶干粉中提取叶蛋白并对废弃物综合利用的方法
CN105524183B (zh) 一种荸荠多糖的提取方法
CN103342668B (zh) 一种从鲍鱼内脏中提取天然牛磺酸的简易方法
CN103087169A (zh) 一种小麦胚芽抗肿瘤蛋白的制备方法
CN105838766A (zh) 一种胰凝乳蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法
CN103725031A (zh) 一种干红枣皮提取枣红色素的工艺
CN102633764A (zh) 利用黑豆皮同时制备花青素和果胶的生产工艺
CN102070724B (zh) 一种中性龙眼多糖级分的分离方法
CN104744601B (zh) 一种阿魏菇多糖提取与纯化的方法
CN107232613B (zh) 一种超声辅助热碱法联合提取大豆纤维和豆渣蛋白的方法
CN104844721B (zh) 一种茶树菇多糖的提取分离方法
CN110540973A (zh) 一种刺梨中sod的提取方法
CN104402970A (zh) 一种从食用菌多糖提取醇沉上清液中回收蛋白的方法
CN105838767A (zh) 一种酶解魔芋飞粉制备ace抑制肽的方法
CN101985440B (zh) 一种胡椒碱的生产方法
CN110367370A (zh) 一种从废弃烟叶中提取可溶性蛋白的方法
CN115594773A (zh) 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160810