CN110540973A - 一种刺梨中sod的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种刺梨中超氧化物歧化酶（SOD）的提取方法。其处理步骤包括：a.将金刺梨在冰浴环境下用研钵，研磨充分；b.研磨后，将物料至于烧杯中，用0.5mol/L NaCl溶液于4℃下浸泡过夜，过滤，将滤液在10000 r/min的条件下高速冷冻离心15min，离心液通过滤纸过滤，制成SOD粗酶液；c.将所得粗酶液在50~70℃条件下水浴25min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；d.将上清液中加入NaOH和磷酸配置制成pH3~7的溶液，迅速摇匀后放于4℃冰箱中沉淀30min，倒入离心管中进行10000 r/min冷冻离心20min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；e.取d中上清液加入丙酮，摇匀后立即放于4℃冰箱中沉淀30min，10000 r/min冷冻离心20min，去除沉淀杂蛋白，取上清液。本发明具有成本低、纯度高、选用试剂毒性较低等诸多优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种刺梨中SOD的提取方法，属于食品有效成分提取领域。
背景技术
刺梨为蔷薇科植物缫丝花的果实，又名茨梨、木梨子，文先果，是滋补健身的营养珍果。果表布满肉刺、青中透黄，果实形圆饱满、梨香浓郁，口感果肉柔滑、酸甜适中，其果实在各类梨果品种中属药用价值最高，刺梨每百克果肉中含维生素就高达2000毫克。
超氧化物歧化酶（SOD）是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果，具有极高的药用价值。刺梨现阶段是发现的SOD含量最高的水果，SOD的提取工艺研究也越来越受到重视。目前，常用的提取方法有浸提法、索氏提取法、双水相体系提取法、乙醇-氯仿法及超声波辅助提取法等。
与超声波辅助提取法相比，利用热变性、等电点和丙酮沉淀处理，可以提取纯度较高的SOD，并且工艺成本低，安全性较高，提取出的SOD无毒副作用，是一条从植物中提取较纯净SOD的低成本工艺路线，可以直接用于食品、医药等领域。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，旨在提供一种提取纯度高，工艺成本低的刺梨中SOD的提取方法，该SOD具有抗衰老、防癌等治疗、保健作用。
本发明的技术方案按照下列步骤进行：
a.原材料处理：将刺梨在冰浴环境下用研钵，研磨充分；
b.粗酶液制备：研磨后，将物料至于烧杯中，用0.5mol/L NaCl溶液于4℃下浸泡过夜，过滤，将滤液置于10000r/min高速冷冻离心15min，离心液通过滤纸过滤，制成SOD粗酶液；
c.热变性处理：将所得粗酶液在水浴25min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；
d.等电点沉淀处理：将c中上清液中加入NaOH和磷酸配制的溶液，迅速摇匀后放于4℃冰箱中沉淀30min，倒入离心管中进行10000 r/min冷冻离心20min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；
e.丙酮沉淀处理：取d中上清液加入丙酮，摇匀后立即放于4℃冰箱中沉淀30min，10000r/min冷冻离心20min，去除沉淀杂蛋白，取上清液，将上清液于4℃冰箱保存，得到SOD。
步骤c中所述的水浴温度为50~70℃，时间25min。
步骤d中所述的NaOH和磷酸配制的溶液pH为3~7。
步骤e中所述的丙酮加入量与酶液的体积比为1:1。
本发明的优点在于：
1.本发明利用SOD热稳定性极好，80℃以下短暂加热对其活性影响不大，而一般蛋白质却在温度高于55℃时便变性沉淀，从而达到初步提取的目的。
2.本发明利用由于蛋白质溶液中加入一些弱极性的有机溶剂可改变溶液介电常数，使不同蛋白质产生不同程度的沉淀，因此，可用来纯化蛋白质。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
实施例1：
将刺梨在冰浴环境下研磨充分，研磨后至于烧杯中，用0.5mol/L NaCl溶液于4℃下浸泡过夜，过滤，将滤液置于10000r/min高速冷冻离心15min，离心液通过滤纸过滤，制成SOD粗酶液；将所得粗酶液在65℃水浴25min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；将上清液中加入pH5的NaOH和磷酸配制溶液，迅速摇匀后放于4℃冰箱中沉淀30min，倒入离心管中进行10000 r/min冷冻离心20min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；加入等体积丙酮，摇匀后立即放于4℃冰箱中沉淀30min，10000 r/min冷冻离心20min，去除沉淀杂蛋白，取上清液，将上清液于4℃冰箱保存，得到SOD。
实施例2：
将刺梨在冰浴环境下研磨充分，研磨后至于烧杯中，用0.5mol/L NaCl溶液于4℃下浸泡过夜，过滤，将滤液置于10000r/min高速冷冻离心15min，离心液通过滤纸过滤，制成SOD粗酶液；将所得粗酶液在55℃水浴25min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；将上清液中加入pH4的NaOH和磷酸配制溶液，迅速摇匀后放于4℃冰箱中沉淀30min，倒入离心管中进行10000 r/min冷冻离心20min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；加入等体积丙酮，摇匀后立即放于4℃冰箱中沉淀30min，10000 r/min冷冻离心20min，去除沉淀杂蛋白，取上清液，将上清液于4℃冰箱保存，得到SOD。
Claims (4)
1.一种刺梨中SOD的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
a.原材料处理：将刺梨在冰浴环境下用研钵，研磨充分；
b.粗酶液制备：研磨后，将物料至于烧杯中，用0.5mol/L NaCl溶液于4℃下浸泡过夜，过滤，将滤液置于10000r/min高速冷冻离心15min，离心液通过滤纸过滤，制成SOD粗酶液；
c.热变性处理：将所得粗酶液在水浴25min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；
d.等电点沉淀处理：将c中上清液中加入NaOH和磷酸配制的溶液，迅速摇匀后放于4℃冰箱中沉淀30min，倒入离心管中进行10000 r/min冷冻离心20min后，去除沉淀杂蛋白，取上清液；
e.丙酮沉淀处理：取d中上清液加入丙酮，摇匀后立即放于4℃冰箱中沉淀30min，10000r/min冷冻离心20min，去除沉淀杂蛋白，取上清液，将上清液于4℃冰箱保存，得到SOD。
2.根据权利要求1所述的一种刺梨中SOD的提取方法，其特征在于，步骤c中所述的水浴温度为50~70℃，时间25min。
3.根据权利要求1所述的一种刺梨中SOD的提取方法，其特征在于，步骤d中所述的NaOH和磷酸配制的溶液pH为3~7。
4.根据权利要求1所述的一种刺梨中SOD的提取方法，其特征在于，步骤e中所述的丙酮加入量与酶液的体积比为1:1。
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| CN201810527134.7A Pending CN110540973A (zh) | 2018-05-29 | 2018-05-29 | 一种刺梨中sod的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110540973A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111575253A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-08-25 | 宁夏医科大学 | 一种米邦塔仙人掌sod的提取方法 |
| CN114149982A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-08 | 西安全奥生物科技有限公司 | 一种刺梨超氧化物歧化酶的提取方法 |
| CN114591925A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-06-07 | 西安全奥生物科技有限公司 | 一种刺梨超氧岐化酶的提取方法 |
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2018
- 2018-05-29 CN CN201810527134.7A patent/CN110540973A/zh active Pending
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