CN105830923B - 一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法，选取经常规组培中壮芽培养35‑40d的黄樟油素型樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入抗坏血酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。本发明通过对组培芽的预处理，降低切口处的黄樟油含量，缩短生根周期，生根率高，根系多，质量好，组培生根苗移栽成活率高，可实现组培产业化育苗，为天然香料人工无性系林的建设提供优质种苗，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
Description
技术领域
本发明属于植物繁殖技术领域，涉及樟树组织培养技术，尤其是涉及一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法。
背景技术
黄樟油素型樟树是樟科樟树属樟树类的一种化学型樟树（Cinnamomum camphora(L.)Presl）又名香樟，国家Ⅱ级保护植物，主要分布于江西、湖南、广东、福建、海南、广西、四川、台湾等地，越南、韩国及日本也有分布。生长于丘陵及低山地带。是一种集材用、油用、香精香料、药用、风景园林等于一体的多用途优良树种。黄樟油素具有树木特有的香气，是一种极为有用的天然香，是合成洋茉莉醛( Heliotropine) 、胡椒基丁醚( Piperonylbutoxide，PB) 、胡椒基丙酮( Ducinylrecryst) 、香兰素( Vanillin) 等产品的理想原料，也是重要制药中间体，广泛用于轻化、香料、医药等工业生产中。随着社会经济的水平提高，生活质量的提升，人们回归大自然意识的加强，以天然黄樟油素为原料合成的绿色原生态产品价格一路盘升，市场发展前景看好。传统的黄樟油素从树根、树干中提取, 大量伐树，挖根提油。这种“杀鸡取卵，挖根取料”的方法，一方面破坏了生态环境，另一方面使资源不断匮乏，不符合国家对自然资源特续利用的要求。开发留主干，砍伐樟树枝叶提取黄樟树油素的方法，既可避免掠夺式利用黄樟树油素原料资源，又有利于林地水土保持，培育樟树珍贵大径材，资源最大化的利用，天然香料人工无性系林的建设，优质种苗的提供显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的是针对现有材油两用黄樟油型樟树组织继代芽生根困难，生根率低，始根时间长，发根数少，根系容易发黑等问题,提供一种生根快、效果好的黄樟油素型樟树组培芽的生根方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法，其特征在于：选取经常规组培中壮芽培养35-40d的黄樟油素型樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入抗坏血酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木；具体操作步骤如下：
（1）取材：选取经常规组培中壮芽培养35-40d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，备用；
（2）预处理：将步骤（1）得到的单芽插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡1.5-2h；
（3）生根培养：将经过步骤（2）预处理的单芽垂直插入生根培养基中；在特定的光温环境中进行生根培养；
（4）炼苗：经步骤（3）生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。
以上所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L +抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉 5.8g/L。
以上将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
以上所述的改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L +CaCl2.2H2O 440mg/L + MgSO4..7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L +MnSO4..4H2O 22.3mg/L + ZnSO4.4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4.H2O 0.025mg/L +CuSO4..5H2O 0.0025mg/L + CoCl2.6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA37.3mg/L + 肌醇 50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L+。
以上步骤（2）中单芽插入抗坏血酸（VC）无菌溶液的深度为芽茎下端基部0.4-0.5cm处。
以上步骤（3）所述的特定光温条件先为20-22℃，光照强度2000-3000lux，光照15-16h/d,培养5-7d；然后在28-30℃，光照强度4000-6000lux，光照12-14h/d，培养10-12d形成根点；继续培养18-20d，86%以上的单芽长出根系，3-5条/株。
相对于现有技术，本发明具有的优点和积极效果如下：
1、本发明筛选出一个适宜黄樟油素型樟树组培芽生根技术方法，将组培继代壮芽丛转瓶时将高≥2cm的单芽剪下经过处理后插入生根培养基中形成再生植株，芽苗壮健，活力旺盛，生根率及移栽成活率显著提高；同时可以将剩余小芽接入增殖扩繁，再转入壮苗培养基中，进行生根，从而有效的完成组培苗快繁的培养过程。
2、本发明对ER基本培养基进行了改良，同时重点调整了与黄樟油素型樟树出芽壮芽相关锌微量元素和有机成分肌醇，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使黄樟油素型樟树继代芽生根，效果显著。
3、本发明的在特定的光温条件下生根培养，适应黄樟油素型樟树组培苗的生长特性，促进苗木的生长。
4、本发明通过对组培芽的预处理，降低切口处的黄樟油含量，缩短生根周期，生根率高，根系多，质量好，组培生根苗移栽成活率高，可实现组培产业化育苗，为天然香料人工无性系林的建设提供优质种苗，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
附图说明
图1为本发明取用的黄樟油素型樟树继代芽。
图2为本发明黄樟油素型樟树继代芽生根培养情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
选取经常规组培中壮芽培养35d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。然后将单芽的芽茎下端基部0.4-0.5cm处插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡1.5h，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中。所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L + 抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉5.8g/L。其中，改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L + CaCl2.2H2O440mg/L + MgSO4..7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L + MnSO4..4H2O22.3mg/L + ZnSO4.4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4.H2O 0.025mg/L + CuSO4..5H2O0.0025mg/L + CoCl2.6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA 37.3mg/L + 肌醇50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
将插好的生根瓶苗置于特定的光温条件下培养：初始条件为20℃，光照强度2000-3000lux，光照16h/d，培养5d；然后在28℃，光照强度5000-6000lux，光照14h/d，培养10d形成根点；继续培养18d，86%的单芽长出根系，3-5条/株。
待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。
实施例2：
选取经常规组培中壮芽培养36d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。然后将单芽的芽茎下端基部0.4-0.5cm处插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡1.5h，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中。所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L + 抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉5.8g/L。其中，改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L + CaCl2.2H2O440mg/L + MgSO4..7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L + MnSO4..4H2O22.3mg/L + ZnSO4.4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4.H2O 0.025mg/L + CuSO4..5H2O0.0025mg/L + CoCl2.6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA 37.3mg/L + 肌醇50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
将插好的生根瓶苗置于特定的光温条件下培养：初始条件为22℃，光照强度2000-3000lux，光照15h/d，培养6d；然后在28℃，光照强度5000-6000lux，光照12h/d，培养10d形成根点；继续培养18d，88.5%的单芽长出根系，3-5条/株。
待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。
实施例3：
选取经常规组培中壮芽培养38d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。然后将单芽的芽茎下端基部0.4-0.5cm处插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡2h，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中。所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L + 抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉5.8g/L。其中，改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L + CaCl2.2H2O440mg/L + MgSO4..7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L + MnSO4..4H2O22.3mg/L + ZnSO4.4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4.H2O 0.025mg/L + CuSO4..5H2O0.0025mg/L + CoCl2.6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA 37.3mg/L + 肌醇50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
将插好的生根瓶苗置于特定的光温条件下培养：初始条件为22℃，光照强度2000-3000lux，光照16h/d，培养7d；然后在29℃，光照强度4000-5000lux，光照13h/d，培养11d形成根点；继续培养19d，87.5%的单芽长出根系，3-5条/株。
待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。
实施例4：
选取经常规组培中壮芽培养40d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄。然后将单芽的芽茎下端基部0.4-0.5cm处插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡2h，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中。所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L + 抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉5.8g/L。其中，改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L + CaCl2.2H2O440mg/L + MgSO4..7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L + MnSO4..4H2O22.3mg/L + ZnSO4.4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4.H2O 0.025mg/L + CuSO4..5H2O0.0025mg/L + CoCl2.6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA 37.3mg/L + 肌醇50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
将插好的生根瓶苗置于特定的光温条件下培养：初始条件为21℃，光照强度2000-3000lux，光照16h/d，培养5d；然后在30℃，光照强度4000-5000lux，光照12h/d，培养12d形成根点；继续培养20d，88%的单芽长出根系，3-5条/株。
待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木。
Claims (3)
1.一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法，其特征在于：选取经常规组培中壮芽培养35-40d的黄樟油素型樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入抗坏血酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木；具体操作步骤如下：
（1）取材：选取经常规组培中壮芽培养35-40d的黄樟油素型樟树继代芽，消毒瓶子外表后，在超净工作台上的无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，备用；
（2）预处理：将步骤（1）得到的单芽插入抗坏血酸（VC）50mg/L无菌溶液中浸泡1.5-2h；
（3）生根培养：将经过步骤（2）预处理的单芽垂直插入生根培养基中；在特定的光温环境中进行生根培养；所述的特定光温条件先为20-22℃，光照强度2000-3000lux，光照15-16h/d,培养5-7d；然后在28-30℃，光照强度4000-6000lux，光照12-14h/d，培养10-12d形成根点；继续培养18-20d，86%以上的单芽长出根系，3-5条/株；
（4）炼苗：经步骤（3）生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到黄樟油素型樟树苗木；
所述的生根培养基的配方为：改良ER + NAA 2-3mg/L + ABT1 0.5-1mg/L + 抗坏血酸（ VC）30mg/L + 蔗糖 15g/L + 琼脂粉 5.8g/L；
所述的改良ER培养基的配方为：NH4NO3 1200mg/L + KNO3 1900mg/L + CaCl2·2H2O440mg/L + MgSO4·7H2O 370mg/L + KH2PO4 340mg/L + H3BO3 0.63mg/L + MnSO4·4H2O22.3mg/L + ZnSO4·4H2O 8.64H2Omg/L + Na2MoO4·H2O 0.025mg/L + CuSO4·5H2O0.0025mg/L + CoCl2·6H2O 0.0025mg/L + FeSO4 27.8mg/L + NaEDTA 37.3mg/L + 肌醇50mg/L + 烟酸 0.5mg/L + 盐酸吡哆醇 0.5mg/L + 甘氨酸 2mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法，其特征在于：将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
3.根据权利要求1所述的一种黄樟油素型樟树组培芽的生根方法，其特征在于：步骤（2）中单芽插入抗坏血酸（VC）无菌溶液的深度为芽茎下端基部0.4-0.5cm处。
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