CN106172018A - 一种美叶柯组培苗生根诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种美叶柯组培苗生根诱导方法,选取经常规组培中壮芽培养35~40d的美叶柯继代芽,进一步选取修剪后接种于预生根培养基中,经过30~35d预生根培养后再转入生根培养基中进行培养。本发明缩短了美叶柯继代芽生根周期,生根率高,根系多,质量好,生根组培苗移栽成活率高,可实现美叶柯组培产业化育苗,为人工无性系林的建设提供优质种苗,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
Description
技术领域
本发明涉及美叶柯无性繁殖技术,尤其是一种美叶柯组培苗生根诱导方法。
背景技术
美叶柯(Lithocarpus calophyllus)又名红叶橼(江西)、硬叶椆、黄椆、黄背栎(广东)、者锥(广西),系壳斗科(Fagaceae)柯属(Lithocarpus)乔木,乔木,高达28米,胸径1米,新生枝的上段被早脱落的疏微柔毛,二年生枝褐黑色,有皮孔。叶硬革质,宽椭圆形,卵形或长椭圆形,长8-15厘米,宽4-9厘米,顶部渐尖或短突尖,尾状,基部近于圆或浅耳垂状,有时一侧略短或偏斜,侧脉每边7-11条,在叶面凹陷,在叶缘附近急向上弯而隐没,支脉甚纤细,彼此近于平行,叶背无毛,但有甚厚的棕黄色至红褐色、可抹落的甚短的毡毛状、粉末状鳞秕层,二年生叶的叶背灰白色或稍带苍灰色,蜡鳞层紧实;叶柄长2.5-5厘米,花和花序与星毛柯的相同;壳斗厚木质,高5-10毫米,宽15-25毫米;坚果高15-20毫米,宽18-26毫米,顶部平坦中央微凹陷或甚短尖,常有淡薄的灰白色粉霜,果脐口径10-14毫米,深2-4毫米。花期6-7月,果次年8-9月成熟。树皮暗褐黑色,不开裂或浅纵裂,树高约15米的树皮厚约12毫米,内皮淡红褐色,脊棱甚突出,高达3毫米,木材淡灰褐色,颇坚重,不甚耐腐。果实含淀粉。产江西、福建二省西南部、湖南南部、广东、广西、贵州南部。生于海拔500-1 200米山地常绿阔叶林中。
目前,美叶柯资源仍处于野生分布状态,但随着保护植物多样性的需求,规模化人工栽培美叶柯资源势在必行。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术,选择美叶柯优良家系或者无性系为材料,通过组织培养方法繁殖苗木,既可以满足生产上的数量要求,又可保持母本性状。然而在组培过程中,常常出现生根率低、生根不统一、根系数量少以及根系不粗壮的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能提高美叶柯组培苗的生根率,根系数量以及根系萌发整齐度的美叶柯组培苗生根诱导方法。
为了实现上述发明目的,本发明的技术方案如下:
一种美叶柯组培苗生根诱导方法,选取增殖继代美叶柯小苗,先进行预生根培养,然后再进行生根培养,置于适宜环境中培养,获得带根组培苗,主要操作步骤如下:
(1)取材:选取经常规组培中壮芽培养35~40d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄,备用;
(2)预生根培养:将步骤(1)修剪后的单芽接种于预生根培养基中,在特定的光温环境中进行预生根培养;
(3)生根培养:待步骤(2)中的单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,在特定的光温环境中进行生根培养。
以上所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 1.0~2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 1.0~2.0mg/L+ABT2#0.5~2.0 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
以上步骤(2)和步骤(3)所述的光温环境为:温度20±1℃,湿度40~45%,光照强度2000~2500lux,光照15~16h/d。
本发明具有的优点及有益效果如下:
1、本发明采用1/2改良MS培养基作为基本培养基,同时重点调整了与美叶柯生根的相关的微量元素和有机成分,使得培养基更科学,更有针对性,更易促使美叶柯继代芽生根,效果显著。
2、本发明在生根诱导前采用低浓度NAA和抗坏血酸(VC)对继代单芽进行预生根培养,然后再进行生根培养,可使组培苗发根统一,发根速度快,根系粗壮且数量较多。
3、本发明在增殖继代单芽经过30~35d时间预生根培养后转入生根培养,即可达到预生根培养效果,又避免了小苗在预生根培养阶段长出根系而使后期生根培养发根不整齐。
4、本发明的在特定的光温条件下进行预生根和生根培养,适应美叶柯组培苗的生长特性,促进苗木的生长。
5、本发明缩短了美叶柯继代芽生根周期,生根率高,根系多,质量好,生根组培苗移栽成活率高,可实现美叶柯组培产业化育苗,为人工无性系林的建设提供优质种苗,具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:
选取经常规组培中壮芽培养35~36d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃,湿度40%,光照强度2000lux,光照16h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 1.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,置于温度20±1℃,湿度40%,光照强度2000lux,光照16h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 1.0mg/L+ABT2#0.5 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
实施例2:
选取经常规组培中壮芽培养36~37d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃,湿度40%,光照强度2500lux,光照15h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 1.5mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,置于温度20±1℃,湿度40%,光照强度2500lux,光照15h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 1.0mg/L+ABT2#1.0 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
实施例3:
选取经常规组培中壮芽培养37~38d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃,湿度45%,光照强度2000lux,光照16h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,置于温度20±1℃,湿度45%,光照强度2000lux,光照16h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 2.0mg/L+ABT2#1.5 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
实施例4:
选取经常规组培中壮芽培养39~40d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄。将修剪后的单芽接种于预生根培养基中,置于温度20±1℃,湿度45%,光照强度2500lux,光照15h/d的条件下进行预生根培养。其中所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,置于温度20±1℃,湿度45%,光照强度2500lux,光照15h/d的条件下进行生根培养。所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 2.0mg/L+ABT2#2.0 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
Claims (5)
1.一种美叶柯组培苗生根诱导方法,其特征在于:选取增殖继代美叶柯小苗,先进行预生根培养,然后再进行生根培养,置于适宜环境中培养,获得带根组培苗,主要操作步骤如下:
(1)取材:选取经常规组培中壮芽培养35~40d的美叶柯继代芽,消毒瓶子外表后,在超净工作台上的无菌空间内,选取继代芽丛中生长健壮、高度1~2cm的单芽,于节下2~3mm处剪切,清除基部叶片和叶柄,备用;
(2)预生根培养:将步骤(1)修剪后的单芽接种于预生根培养基中,在特定的光温环境中进行预生根培养;
(3)生根培养:待步骤(2)中的单芽经过30~35d预生根培养后,将单芽转接入生根培养基,在特定的光温环境中进行生根培养。
2.根据权利要求1所述的一种美叶柯组培苗生根诱导方法,其特征在于:所述的预生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+NAA 1.0~2.0mg/L+维生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
3.根据权利要求1所述的一种美叶柯组培苗生根诱导方法,其特征在于:所述的生根培养基其原料含量为:1/2改良MS培养基+IAA 1.0~2.0mg/L+ABT2#0.5~2.0 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5.0g/L。
4.根据权利要求2或3任一所述的一种美叶柯组培苗生根诱导方法,其特征在于:所述的改良MS培养基的基本组成为:KNO3 830 mg/L;NH4NO3 810 mg/L;CaCl2·2H2O 260 mg/L;MgSO4·7H2O 350 mg/L;Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L;KH2PO4 360 mg/L;MnSO4·H2O 22.3 mg/L;ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L;CuSO4·5H2O 0.025 mg/L;H3BO3 6.2 mg/L;Na2MoO4·2H2O 0.025mg/L;KI 0.83 mg/L;CoCl2·6H2O 0.025 mg/L;维生素B1 1.0 mg/L;维生素B6 0.5 mg/L;烟酸 0.5 mg/L;甘氨酸 2.0 mg/L;肌醇 75 mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种美叶柯组培苗生根诱导方法,其特征在于:步骤(2)和步骤(3)所述的光温环境为:温度20±1℃,湿度40~45%,光照强度2000~2500lux,光照15~16h/d。
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