CN106550874A - 一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，选取经组培中壮芽培养30‑35d的桉叶油素型油樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入L‑半光氨酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。本发明解决了桉叶油素型油樟树组织继代芽生根困难，生根率低，始根时间长，发根数少，根系容易发黑等问题，本发明生根周期短，生根率高，根系多，质量好，组培生根苗移栽成活率高，可实现组培产业化育苗，为天然香料人工无性系林的建设提供优质种苗，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

Description

一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法
技术领域
本发明属于植物繁殖技术领域，涉及樟树组织培养技术，尤其是涉及一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法。
背景技术
桉叶油（cineole,C10H18O）素型油樟是樟科樟树属樟树类的一种化学型樟树（Cinnamomum camphora (L.)Presl）又名香樟，为国家Ⅱ级保护植物，主要分布于国内的江西、湖南、广东、福建、海南、广西、四川、台湾等地，国外的越南、韩国及日本也有分布。生长于丘陵及低山地带。是一种集材用、油用、风景园林等于一体的多用途优良树种。桉叶油素为无色透明具挥发性油状液体，具有樟脑气息和辛辣凉味，主要存在于桉树和油樟等芳香植物的挥发油中，已广泛用于香料、食品、医药、化工和国防等各领域。油樟挥发油中的桉叶油素含量达585.5g/kg，比从桉树枝叶中提取的桉叶油素香气更纯郁，被称为“中国桉叶油”，已畅销日本、德国、法国、美国等50多个国家和地区，其绿色原生态天然香料更是+分紧俏，价格一路盘升，市场发展前景看好。桉叶油素从樟树枝叶、树干中提取,并且含量低，需大量伐树，一方面破坏了生态环境，另一方面使资源不断匮乏，不符合国家对自然资源永续利的要求。开发留主干，砍伐油樟树枝叶提取桉叶油素的方法，既可避免掠夺式利用桉叶油素原料资源，又有利于林地水土保持，培育樟树珍贵大径材，资源最大化的利用。
发明内容
本发明的目的是针对现有材油两用桉叶油素型油樟树组织继代芽生根困难，生根率低，始根时间长，发根数少，根系容易发黑等问题,提供一种生根快、效果好的桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
1、一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入L-半光氨酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木；主要操作步骤如下：
（1）取材：选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代瓶苗，消毒瓶子外表后，在超净工作台无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，备用；
（2）预处理：将步骤（1）剪切得到的单芽插入L-半光氨酸20mg/L无菌溶液中侵泡15-20min；
（3）生根培养：将经过步骤（2）预处理的单芽垂直插入生根培养基中；在特定的光温环境中进行生根培养；
（4）炼苗：经步骤（3）生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。
以上所述的生根培养基的配方为：改良LS培养基+IBA 1-2 mg/L+ABT1 1.5-2.0mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂粉5.8 g/L。
将以上配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30 ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20min。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100mg/L。
以上步骤（2）中单芽插入L-半光氨酸无菌溶液的深度为芽茎下端基部0.4-0.5 cm处。
以上步骤（3）所述的特定光温条件为：温度26-28℃，光照强度3000—6000 lux，光照12-14 h/d的条件下培养12-13 d，形成根点，继续培养18-20d，85 %以上的单芽长出根系，生根3-5条/株。
相对于现有技术，本发明具有的优点和积极效果如下：
1、本发明筛选出一个适宜桉叶油素型油樟树培芽生根技术方法，将组培继代壮芽丛转瓶时将高≥2cm的单芽剪下经过处理后插入生根培养基中形成再生植株，芽苗壮健，活力旺盛，生根率及移栽成活率显著提高；同时可以将剩余小芽接入增殖扩繁，再转入壮苗培养基中，进行生根，从而有效的完成组培苗快繁的培养过程。
2、本发明对LS基本培养基进行了改良，同时重点调整了与桉叶油素型油樟树生根相关微量元素和有机成分，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使桉叶油素型油樟树代芽生根，效果显著。
3、本发明的在特定的光温条件下生根培养，适应桉叶油素型油樟树组培苗的生长特性，促进苗木的生长。
4、本发明通过对组培芽的预处理，降低切口处的桉叶油含量，缩短生根周期，生根率高，根系多，质量好，组培生根苗移栽成活率高，可实现组培产业化育苗，为天然香料人工无性系林的建设提供优质种苗，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例1：
选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代瓶苗，消毒瓶子外表后，在超净工作台无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，将修剪得到的单芽茎下端基部0.4-0.5 cm处插入L-半光氨酸20mg/L无菌溶液中侵泡15-20min，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中，生根培养基的配方为：改良LS培养基+IBA 1.0 mg/L+ABT1 1.5 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂粉5.8 g/L。其中所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0，分装至250 ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30 ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20 min。
在温度26-28℃，光照强度3000 lux，光照14 h/d的条件下培养13 d，形成根点，继续培养20d，85 %以上的单芽长出根系，生根3-4条/株。待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。
实施例2：
选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代瓶苗，消毒瓶子外表后，在超净工作台无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，将修剪得到的单芽茎下端基部0.4-0.5 cm处插入L-半光氨酸20mg/L无菌溶液中侵泡18min，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中，生根培养基的配方为：改良LS培养基+IBA 1.5 mg/L+ABT1 1.5 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂粉5.8 g/L。其中所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.2，分装至250 ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30 ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20 min。
在温度26-28℃，光照强度5000 lux，光照12 h/d的条件下培养12 d，形成根点，继续培养18d，85 %以上的单芽长出根系，生根4-5条/株。待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。
实施例3：
选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代瓶苗，消毒瓶子外表后，在超净工作台无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，将修剪得到的单芽茎下端基部0.4-0.5 cm处插入L-半光氨酸20mg/L无菌溶液中侵泡20min，进行生根预处理。
将经过预处理的单芽垂直插入生根培养基中，生根培养基的配方为：改良LS培养基+IBA 2.0 mg/L+ABT1 2.0 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂粉5.8 g/L。其中所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L。将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.5，分装至250 ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30 ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20 min。
在温度26-28℃，光照强度6000 lux，光照12 h/d的条件下培养12 d，形成根点，继续培养19d，85 %以上的单芽长出根系，生根4-5条/株。待生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。

Claims (6)

1.一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代芽，剪切继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，插入L-半光氨酸无菌溶液中浸泡进行预处理，再将预处理后的单芽垂直插入生根培养基中，并在特定的光温环境中进行生根培养，最后搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木；主要操作步骤如下：
（1）取材：选取经组培中壮芽培养30-35d的桉叶油素型油樟树继代瓶苗，消毒瓶子外表后，在超净工作台无菌空间内，选取继代芽丛中生长健壮、高度≥2cm的单芽，于节下1-2mm处剪切，清除基部叶片和叶柄，备用；
（2）预处理：将步骤（1）剪切得到的单芽插入L-半光氨酸20mg/L无菌溶液中侵泡15-20min；
（3）生根培养：将经过步骤（2）预处理的单芽垂直插入生根培养基中；在特定的光温环境中进行生根培养；
（4）炼苗：经步骤（3）生根培养后的单芽长出根系后，搬至自然环境条件下的育苗棚中炼苗，得到桉叶油素型油樟树苗木。
2.根据权利要求1所述的一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：所述的生根培养基的配方为：改良LS培养基+IBA 1.0-2.0 mg/L+ABT1 1.5-2.0 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂粉5.8 g/L。
3.根据权利要求1或2任一所述的一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：将配制好的生根培养基用1N盐酸和氢氧化钠调至pH值为6.0-6.5，分装至250 ml的广口玻璃瓶内，每瓶分装30 ml的生根培养基，使用前，在1.1帕压/121℃下高压灭菌20 min。
4.根据权利要求2所述的一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：步骤（2）中单芽插入L-半光氨酸无菌溶液的深度为芽茎下端基部0.4-0.5 cm处。
6.根据权利要求1所述的一种桉叶油素型油樟树组培芽的生根方法，其特征在于：步骤（3）所述的特定光温条件为：温度26-28℃，光照强度3000—6000 lux，光照12-14 h/d的条件下培养12-13 d，形成根点，继续培养18-20d，85 %以上的单芽长出根系，生根3-5条/株。
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