CN105794640B - 一种黄金百香果组织培养育苗的方法 - Google Patents
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Abstract
一种黄金百香果组织培养育苗的方法，包括获取外植体、丛生芽诱导培养、继代增殖培养、炼苗、分割试管苗、试管苗消毒、试管苗移植和生根管理等步骤；本发明育苗速度快，生根率高，种苗成活率大于95%，种苗无病虫害，且操作简单，成本低廉，适于大规模推广，经济效益显著。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养方法，具体涉及一种黄金百香果组织培养育苗的方法。
背景技术
百香果具有消炎止痛、活血强身、降脂降压、滋阴补肾、提神醒酒、消除疲劳、排毒养颜、增强免疫力等神气保健作用，其作用机理如下：1、深度清理机理：超纤维能够深入肠胃的最细微部份，通过其活性基因吸收体内有害物质将其彻底排出，并可改善肠道内的菌群构成，起到保护肠胃不吸收有害物质的屏壁作用。百香果可抑制有害微生物在消化道的生长，二者结合对排除体内毒素、整肠健胃、改善机体的营养吸收功能具有显著作用，对结肠炎、肠胃炎、痔疮有特殊消除作用。2、排毒养颜机理：净化机体，避免有害物质在体内沉积，进而达到改善皮肤、美化容颜的作用。3、塑造体态机理：食用百香果可以增加胃部饱腹感，减少余热量的摄入，还可以吸附胆固醇和胆汁之类有机分子，抑制人体对脂肪的吸收。因此，长期食用有利于改善人体营养吸收结构，降低体内脂肪，塑造健康优美体态。
传统的百香果繁殖方法主要有两种，一种是用种子直接播种繁殖，另一种则是用蔓条扦插繁殖。种子播种容易造成杂种分离，导致丧失杂种优势；扦插繁殖容易传播病虫害，导致品种退化。植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。组织培养育苗已成为经济作物的重要育苗方法，具有繁殖速度快、种苗无病毒、成活率高等优点。
黃金百香果原产巴西，在广西适应性良好，成熟时果实成金黄色，果实大、香气佳、酸度低。无论是香味、甜度都比紫色百香果高，在市场上十分畅销，经济价值较高。目前没有较好的黄金百香果组织培养育苗方法，无法大面积推广黄金百香果的种植。因此，开发一种黄金百香果的组织培养育苗方法，对扩大黄金百香果的种植及提高果农经济收入有重要意义。
发明内容
本发明的目的是克服传统百香果繁殖方法的不足，提供一种黄金百香果的组织培养育苗方法。
本发明是通过如下方式实现的：
一种黄金百香果组织培养育苗的方法，包括以下步骤：
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸、萘乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸、萘乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000 lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
优选的，所述生长促进剂Ⅰ含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L。
优选的，所述生长促进剂Ⅱ含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L。
优选的，所述生长促进剂Ⅲ含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80 mg/L和甘油8-12 g/L。
优选的，所述诱导培养基为MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L。
优选的，所述继代增殖培养基为MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L +蔗糖15 g/L。
优选的，所述有机栽培土为废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物。
优选的，所述废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的重量比为2:1.5:3。
优选的，所述有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
本发明的有益效果是：
1. 育苗速度快，适于大规模种植需求。
2. 生根率高，种苗成活率大于95%。
3. 种苗无病虫害，可有效提高植株生长能力，增加产量。
4. 将农村废弃物资源化利用，变废为宝。
5. 操作简单，成本低廉，适于大规模推广，经济效益显著。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用范围。
实施例1
一种黄金百香果组织培养育苗的方法，包括以下步骤：
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到含MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L的诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到含MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L + 蔗糖15 g/L的继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80mg/L和甘油8-12 g/L的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
其中，有机栽培土为重量比为2:1.5:3的废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物，有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
种植第14天对试管苗进行统计，种植100株，存活99株，存活率为99%。
实施例2
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到含MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L的诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到含MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L + 蔗糖15 g/L的继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80mg/L和甘油8-12 g/L的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
其中，有机栽培土为重量比为2:1.5:3的废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物，有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
种植第14天对试管苗进行统计，种植100株，存活98株，存活率为98%。
实施例3
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到含MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L的诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到含MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L + 蔗糖15 g/L的继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80mg/L和甘油8-12 g/L的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
其中，有机栽培土为重量比为2:1.5:3的废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物，有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
种植第14天对试管苗进行统计，种植100株，存活98株，存活率为98%。
实施例4
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到含MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L的诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到含MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L + 蔗糖15 g/L的继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80mg/L和甘油8-12 g/L的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
其中，有机栽培土为重量比为2:1.5:3的废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物，有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
种植第14天对试管苗进行统计，种植100株，存活98株，存活率为98%。
实施例5
（1）获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5%的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
（2）丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸0.05-0.35 mg/L、L-亮氨酸12-22 mg/L和甘油1.5-3.5 g/L的生长促进剂Ⅰ中浸泡1-5分钟，然后接种到含MS + 2,4-二氯苯氧乙酸3 mg/L + 蔗糖10 g/L的诱导培养基中，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度3000-4000 lux下培养；
（3）继代增殖培养：当丛生芽长度大于1 cm后，将丛生芽切下接种到含MS + 细胞分裂素0.5 mg/L + 赤霉素1.5 mg/L + 蔗糖15 g/L的继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸0.2-0.55 mg/L、萘乙酸0.5-3 mg/L、L-亮氨酸15-50 mg/L和甘油2.5-5 g/L的生长促进剂Ⅱ，在温度20-30℃，湿度70-85%，光照强度5000-6000 lux下培养；
（4）炼苗：当不定芽长度大于1.5 cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸1.2-4.5 mg/L、萘乙酸1.5-4 mg/L、L-亮氨酸35-80mg/L和甘油8-12 g/L的生长促进剂Ⅲ，在温度20-30℃，湿度80-90%，光照强度6000-10000lux下，炼苗24-60小时；
（5）分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2 cm的试管苗单株分割，长度小于2 cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
（6）试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5%高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
（7）试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
（8）生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为25-30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度80-90%，光照强度2000-4000 lux；4-6天，湿度70-80%，光照强度4000-6000 lux；7-9天，湿度60-70%，光照强度6000-8000 lux；10-12天，湿度50-60%，光照强度8000-10000 lux；13天后，当95%以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园。
其中，有机栽培土为重量比为2:1.5:3的废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物，有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
种植第14天对试管苗进行统计，种植100株，存活98株，存活率为98%。
Claims (1)
1.一种黄金百香果组织培养育苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)获取外植体：挑选健壮无病虫害的黄金百香果植株，用消毒后的剪刀剪取2-4cm的小段外植体，用无菌水冲洗干净，放入0.3-0.5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水冲洗干净，晾干；
(2)丛生芽诱导培养：将晾干的外植体放入含吲哚乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅰ中浸泡3分钟，然后接种到诱导培养基中，在温度22℃，湿度70％，光照强度4000lux下培养；
(3)继代增殖培养：当丛生芽长度大于1cm后，将丛生芽切下接种到继代增殖培养基中，喷施含吲哚乙酸、萘乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅱ，在温度25℃，湿度80％，光照强度6000lux下培养；
(4)炼苗：当不定芽长度大于1.5cm时，将含继代增殖培养基的无根苗瓶放于阴凉、避风处，打开瓶盖，喷施含吲哚丁酸、萘乙酸、L-亮氨酸和甘油的生长促进剂Ⅲ，在温度28℃，湿度85％，光照强度8000lux下，炼苗36小时；
(5)分割试管苗：取出试管苗，将长度大于2cm的试管苗单株分割，长度小于2cm的试管苗按2-3株连体分割，用无菌水清洗去除继代增殖培养基；
(6)试管苗消毒：将试管苗用0.3-0.5％高锰酸钾溶液浸泡消毒2-5分钟，无菌水清洗，晾干；
(7)试管苗移植：将消毒后的试管苗移植于填充有机栽培土的种植盆中，压实，浇足定根水；
(8)生根管理：将含有试管苗的种植盆移入带遮阳网的温室，控制温度为30℃，按以下条件调节温室育苗环境：1-3天，湿度85％，光照强度4000lux；4-6天，湿度80％，光照强度6000lux；7-9天，湿度70％，光照强度8000lux；10-12天，湿度60％，光照强度10000lux；13天后，当95％以上的试管苗长出新叶后，将试管苗移栽到果园；
所述生长促进剂Ⅰ含吲哚乙酸0.05mg/L、L-亮氨酸12mg/L和甘油1.5g/L；
所述生长促进剂Ⅱ含吲哚乙酸0.55mg/L、萘乙酸0.5mg/L、L-亮氨酸15mg/L和甘油2.5g/L；
所述生长促进剂Ⅲ含吲哚丁酸1.2mg/L、萘乙酸4mg/L、L-亮氨酸35mg/L和甘油12g/L；
所述诱导培养基为MS+2,4-二氯苯氧乙酸3mg/L+蔗糖10g/L；
所述继代增殖培养基为MS+细胞分裂素0.5mg/L+赤霉素1.5mg/L+蔗糖15g/L；
所述有机栽培土为废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的混合物；
所述废弃蘑菇菌包、有机肥和风干塘泥的重量比为2:1.5:3；
所述有机肥由动物粪便、餐厨垃圾和豆粕粉按重量比3:1:1.5发酵而成。
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