CN105770207B - 紫花地丁提取物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药技术领域，涉及一种紫花地丁提取物，该提取物由以下方法制备而成的：乙醇提取、减压浓缩、大孔吸附树脂纯化、浓缩和干燥等。与现有技术相比，本发明紫花地丁提取物总香豆素和秦皮乙素含量大幅提高，其中总香豆素含量由药材中的1.7％提高到40％以上，秦皮乙素含量由0.5％提高到15％以上。药理学试验表明，本发明紫花地丁提取物对单纯疱疹病毒的TI为8，表明该提取物具有较强的抑制单纯疱疹病毒的作用。

Description

紫花地丁提取物及其用途

技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及一种紫花地丁提取物及其用途。

背景技术

紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁Viola yedoensis Makino的干燥全草。春、秋二季采收，除去杂质，洗净、切碎，鲜用或干燥生用。紫花地丁为治疗疔毒之要药，《本草纲目》记载：“紫花地丁主治一切痈疽发背，疔肿瘰疬，无名肿毒，恶疮”；《本草正义》记载：“为痈肿疔毒通用之药”。紫花地丁味苦、辛，性寒，归心、肝经，具有清热解毒、凉血消肿之功效，用于疔疮肿毒，痈疽发背，丹毒，蛇毒咬伤等。

紫花地丁的主要有效成分为香豆素类，全草含秦皮乙素、菊苣苷、早开堇菜苷、山奈酚-3-O-鼠李吡喃糖、芹菜素、木犀草素、棕榈酸、反式对羟基桂皮酸、丁二酸、软脂酸、二十四酰对羟基苯乙胺等化合物。现代药理学试验表明，紫花地丁具有抑菌、抗炎、抗病毒、抗内毒素等生物活性。体外抑菌试验表明紫花地丁香豆素类成分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌等均有不同程度的抑菌和杀菌活性(孙艺方，杜利利，周乐，等.紫花地丁抗菌活性成分研究[J].中国中药杂志，2011，36(19)：2666-2671)；紫花地丁水提物和醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致小鼠足肿胀均具有显著的抑制作用，可不同程度降低角叉菜胶致炎小鼠血清TNF-α、IL-1β及炎性组织中PGE₂的含量(李艳丽，胡彦武.紫花地丁抗炎作用及机制研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(24)：244-247)；紫花地丁水浸出物在体外和体内试验中均有抗HBV活性作用(王玉，吴中明，敖弟书.紫花地丁抗乙型肝炎病毒的实验研究[J].中药药理与临床，2011，27(5)：70-74)。在临床应用方面，紫花地丁以单方或复方形式治疗急性感染性疾病，例如，张氏自拟柴胡二丁汤，以柴胡、紫花地丁、黄花地丁为主药，随症加减药物，临床应用多年，用于治疗多种急性感染性疾病，对急性扁桃腺炎、咽喉炎、颌下腺炎、淋巴结炎、支气管炎等有显著疗效(张秋才.柴胡二丁汤在急性感染性疾病中的应用[J].北京中医学院学报，1989，(1)：32)。此外，CN102210787A公开了紫花地丁总酚提取物治疗高尿酸血症的用途；中CN103417749A公开了一种紫花地丁提取物制备及其在降糖药物中的作用；CN101601780A公开了紫花地丁在抗糖尿病及防治相关代谢性疾病中的应用。可见，紫花地丁具有多种药理作用和广泛的临床用途，具有很高的研究价值和广阔开发前景。

中药的作用特点之一就是多成分起作用，紫花地丁中多种成分如香豆素类、黄酮类、有机酸类等皆有明显的药效作用。目前，紫花地丁药效成分的分离、纯化主要以单一成分做指标，紫花地丁总有效提取物甚少。中国专利CN102060822A公开了一种从紫花地丁中提取七叶内酯的方法，具体包括乙醇回流提取，减压浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂，水洗除杂，再用乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后调酸放置，滤出沉淀，乙酸乙酯回流溶解，过氧化铝柱，经过结晶和重结晶，即得七叶内酯提取物。但该方法仅以七叶内酯为目标化合物，舍弃了大量的其它有效成分，造成资源的浪费；且该方法使用了大孔吸附树脂柱纯化，调酸后又经过氧化铝柱进行纯化，使用了乙酸乙酯回流溶解，同时又经过结晶和重结晶操作，操作步骤繁多，不适合大生产。中国专利CN102526357A公开了一种紫花地丁中提取总黄酮和七叶内酯的方法，即取药材，粉碎，用乙醇回流提取，滤过，减压浓缩，浓缩液稀释后上大孔吸附树脂吸附，醇溶液梯度洗脱，洗脱液减压浓缩，盐酸溶液调pH后放置沉淀，滤出沉淀物，再用乙醇回流溶解过滤，固体物干燥得总黄酮，滤液浓缩至小体积，放置结晶，乙酸乙酯回流溶解重结晶，结晶物干燥得七叶内酯。但该方法的目的是分别分离总黄酮和七叶内酯而非总提取物，且该方法操作过程过于繁琐，工艺中涉及乙酸乙酯等有害溶剂，不适合实际大生产，同时基于紫花地丁药材中各黄酮单体化合物的实际含量很低，以总黄酮作为目标提取物是否欠妥有待商榷。中国专利CN10341749A公开了一种紫花地丁提取物的制备方法，具体包括药材粉碎、乙醇浸泡、回流提取、滤过浓缩、大孔吸附树脂柱分离纯化和浓缩干燥等步骤，得紫花地丁总黄酮。但该方法所得的目标成分为总黄酮而非总有效提取物，同时紫花地丁药材中黄酮类的实际含量很低，以总黄酮作为目标提取物是否合适有待进一步研究。中国专利CN102210787A公开了一种紫花地丁总酚提取物的制备方法，包括如下步骤：乙醇提取或渗滤提取，减压浓缩，大孔吸附树脂柱纯化，得紫花地丁总酚提取物。但是该制备方法的目标产物为总酚提取物，非有效成分总提取物。张玲等对紫花地丁中总黄酮类组分的提取工艺进行了研究，得到的最佳提取工艺参数为乙醇体积分数64％，超声波功率161W，提取温度72℃，提取时间32min(张玲，李继昌，许薇，等.响应曲面优化紫花地丁总黄酮提取工艺研究[J].东北农业大学学报，2013，44(6)；150-155)，但是本方法没有进一步提供有效部位分离纯化的方法。

以上都是关于紫花地丁中七叶内酯、黄酮类或酚酸类成分的提取、分离，且现有技术，在提取、纯化紫花地丁过程中仅以单一的七叶内酯、黄酮或酚酸作为目标提取物的评价指标，并不能全面体现紫花地丁提取物的药效作用。

鉴于现有技术的以上不足，有必要发明一种新的紫花地丁提取物，使之既能提高多种 药效成分在提取物中含量，减少无效杂质的在提取物中的比例，又能简化提取物制备操作过程，在最大程度上少用或不用有害溶剂，使之更加适宜于工业化大生产，从而使该药材得到进一步地开发和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫花地丁提取物，以克服现有紫花地丁提取物药效成分单一、有效成分含量低、无效杂质比例过高以及提取物的制备纯化工艺繁琐等的不足。利用本发明提取纯化工艺得到的新的紫花地丁提取物，其总香豆素含量由药材中的1.7％提高到40％以上，秦皮乙素含量由0.5％提高到15％以上。药理实验证明，本发明提取物对单纯疱疹病毒的TI为8，可有效地抑制单纯疱疹病毒，达到抗病毒的作用。

本发明紫花地丁提取物由以下方法制备而成：乙醇提取、滤过、减压浓缩、大孔吸附树脂纯化、浓缩和干燥等步骤。具体如下：

1)取紫花地丁药材，乙醇提取，滤过，滤液减压浓缩，得浓缩液；

2)步骤1)浓缩液加水调节至相当于0.5-2倍药材重量，加入大孔吸附树脂柱进行吸附，然后用1-3BV纯化水以1-3BV/h的流速进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用1-3BV50％-60％乙醇以1-3BV/h的流速进行洗脱，最后用1-3BV 70％-80％乙醇以1-3BV/h的流速进行洗脱。

3)合并步骤2)乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得紫花地丁提取物。

优选地，步骤1)所述提取所加乙醇量为8-14倍药材重量，提取次数为2次，每次1小时，提取用乙醇浓度为70％-80％。

优选地，步骤2)所述的大孔吸附树脂为HPD826、HPD750、HPD100和D101中的一种，最优为HPD750。

优选地，步骤3)所述浓缩液加水稀释至相当于0.5倍药材重量，梯度洗脱用乙醇浓度分别为50％和70％。

与现有紫花地丁提取物相比，，本发明紫花地丁提取物中总香豆素含量由药材中由1.7％提高到40％以上，秦皮乙素含量由0.5％提高到15％以上；本发明紫花地丁提取物中总香豆素和秦皮乙素的转移率超过95％，可保证药材纯化前后药效成分的“等效性”，能大幅降低服用量，利于制剂，可提高患者用药的顺应性。且制备本发明提取物的提取纯化工艺具有如下显著的进步：

1、工艺简单可行，具有良好的可重复性，所使用的大孔吸附树脂可重复利用，制备成本低且环境污染小，适合产业化；

2、本发明使用乙醇作为提取溶剂，有效成分提取率高，其中总香豆素和秦皮乙素提取率要明显高于水提法；作为提取及洗脱溶剂的乙醇，廉价易得，所制备的提取物无有害溶剂残留，安全性高；

3、用本发明方法制备的紫花地丁提取物药效成分更全，不仅含有以秦皮乙素为代表的香豆素类成分，也保留了黄酮类等成分，可最大程度保证药材的原有功效。

本发明的另一个目的是公开紫花地丁提取物在制备抗病毒药物中的应用。

本发明通过病毒毒理测定、药物细胞毒性测定和体外抗病毒试验等，考察紫花地丁提取物抗病毒的药效作用。根据提取物半数中毒浓度(TC₅₀)及半数有效浓度(EC₅₀)，获得其抑毒指数(TI)，结果表明，紫花地丁提取物对单纯疱疹病毒的TI为8，提示本发明紫花地丁提取物具有明显的抗单纯疱疹病毒的作用。

附图说明

附图1、Hep2细胞。

附图2、Hep2细胞感染HSV-1后的病变形态。

具体实施方式

以下通过紫花地丁提取物抗病毒试验及制备紫花地丁提取物的具体实施方式对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1紫花地丁提取物抗病毒试验

一、实验材料

(一)受试物

紫花地丁提取物(为本发明最佳实施例3所制备的提取物，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为48％和21％)棕黑色，气香，味苦，质地干脆。试验时，粉碎后过筛，取50mg，溶于2mL磷酸盐生理盐水中，过滤除菌，备用。

阳性药物：抗病毒口服液(江西青峰药业有限公司提供)，批号为Z20044129，生产日期为2014年07月21日。过滤除菌，备用。

(二)病毒株

单纯疱疹病毒HSV-1F株，1996年引自山东医科大学微生物学教研室。

(三)细胞株

人喉癌上皮细胞Hep2。

二、试验方法与结果

(一)细胞复苏与传代

将液氮冻存的Hep2细胞在37℃水浴1min内迅速融化，1000rpm离心3min，吸弃上清，悬浮于细胞培养液中，于细胞培养瓶中37℃、5％CO₂静止培养，3d后长成单层，用0.25％胰酶消化，按1：3传代，细胞长成单层时用于试验。

(二)病毒活化

将保存的HSV-1毒种0.1mL接种于已经长成单层的Hep2细胞上，35℃、5％CO₂培养，镜下观察细胞病变(CPE)，当CPE达到90％，收集。收获的病毒冻融3次，吹打离心(10000r/min，20min)，定量分装，–80℃冰箱冻存备用。

(三)病毒毒力测定

1.制备多孔板内单层细胞

将细胞培养瓶内Hep2细胞消化，以10⁵/mL细胞浓度接种96孔板，37℃、5％CO₂培养，待长成单层，备用。

2.病毒毒力测定

用维持液将上述所得病毒液做10倍比系列稀释，纵向重复3孔，横向依次接种在96孔板内单层细胞上，35℃、5％CO₂培养，细胞出现病变者判为药物毒性，终止培养，中性红染色，读取A₅₄₀值。首先以如下公式(1)、公式(2)计算获得细胞病变率：

公式(2)········细胞病变率＝1-细胞存活率

然后用Reed-Muench两氏法，即公式(3)、(4)，计算各病毒的半数细胞感染量TCID₅₀。

公式(3)········

公式(4)········TCID50＝Antilog(logC+pd×logCm)

其中：pd＝细胞比距；p₁＝高于50％病变百分数；p₂＝低于50％病变百分数；C＝高于50％病变率的稀释度；C_m倍比稀释系数。

根据上述公式，计算HSV-1的TCID₅₀为10^-6.29/mL。

(四)药物细胞毒性测定

1.制备多孔板内单层细胞

将细胞培养瓶内Hep2细胞消化分散，分别以10⁵/mL细胞浓度接种96孔板，5％CO₂、37℃培养，待长成单层，备用。

2.药物细胞毒力测定

将受试药物用细胞维持液从1﹕2开始倍比稀释12个浓度，接种于多孔板中已经长成单层的Hep2细胞上，每个稀释度设重复3孔，37℃、5％CO₂培养，每日镜下观察其CPE，连续3d观察药物毒性。当CPE大于50％视为毒性。得到其半数中毒浓度(TC₅₀)。结果见表1。

(五)体外抗病毒试验

1.制备多孔板内单层细胞

将细胞培养瓶内Hep2细胞消化分散，分别接种96孔板，5％CO₂、37℃培养，待长成单层，备用。

2.药物体外抗HSV-1试验

将受试药物用细胞维持液做2倍比稀释共12个浓度，依次加入96孔板内的单层Hep2细胞上(50μL/孔)，设细胞对照、病毒对照，每个稀释度设重复3孔。除细胞对照外，各孔加100个半数细胞感染量TCID₅₀的病毒50μL。35℃、5％CO₂培养，每日显微镜下观察细胞病变，待病毒对照出现90％细胞病变后终止培养。镜下观察其CPE，当CPE发生50％的稀释度视为药物半数有效浓度EC50)。结果见表1。

3.计算抑毒指数(TI)

根据上述药物半数中毒浓度(TC₅₀)及药物半数有效浓度(EC₅₀)，获得药物抑毒指数(TI)。结果见表1。

表1抑制病毒效果

注：TI＝TC₅₀/EC₅₀，TI大于4者判为有效。

三、结论

从表1可以看出，紫花地丁提取物对HSV-1的TI为8，提示该提取物具有抑制HSV-1的作用。

实施例2紫花地丁提取物

(1)紫花地丁提取物的制备

取紫花地丁药材5kg，用8倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于0.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD100型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用1BV纯化水以1BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用1BV50％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用1BV70％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物98g。

(2)紫花地丁提取物中总香豆素和秦皮乙素含量测定

1)总香豆素含量测定

对照品溶液制备：取秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含44μg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取紫花地丁提取物约10mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，然后在348nm处测定吸光度，得回归方程为C＝0.0148A+0.000234，相关系数r＝0.9996。

含量测定：取供试品溶液经适当稀释后，在348nm处测定其吸光度，根据回归方程计算供试品中总香豆素含量，得提取物中总香豆素含量为42％。

2)秦皮乙素含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸水(12：88)为流动相；检测波长为352nm。

对照品溶液制备：取秦皮乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL约含40μg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本品约5mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

含量测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，得紫花地丁提取物中秦皮乙素含量为15％。

实施例3紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用12倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于0.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD750型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用2BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV50％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用2BV70％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物98g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为48％和21％。

实施例4紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用12倍80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD826型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用2BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV60％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用2BV80％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物106g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为43％和16％。

实施例5紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用9倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用2BV纯化水以1BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用3BV50％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用1BV70％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物97g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为45％和15％。

实施例6紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用12倍80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD100型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用3BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV50％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用1BV80％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物100g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为43％和18％。

实施例7紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用10倍80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于0.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD826型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用1BV纯化水以3BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV60％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用2BV80％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物101g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为41％和17％。

实施例8紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用11倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用2BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用1BV50％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用3BV80％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物107g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为47％和20％。

实施例9紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用12倍80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD750型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用1BV纯化水以3BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用1BV60％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用2BV70％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物96g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为46％和17％。

实施例10紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用8倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于2倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD100型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用3BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV50％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用3BV80％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物102g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为42％和16％。

实施例11紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用9倍80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于2倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用2BV纯化水以1BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用3BV50％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用1BV70％乙醇以1BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物108g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为45％和19％。

实施例12紫花地丁提取物

取紫花地丁药材5kg，用10倍70％乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，加水调节至相当于1倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD100型大孔吸附树脂柱上，树脂用量为药材量的1/3，先用3BV纯化水以2BV/h的流速洗脱，弃去水洗脱液，然后用2BV60％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，最后用3BV80％乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物99g。

按实施例2所述总香豆素和秦皮乙素含量测定方法，测得总香豆素和秦皮乙素的含量分别为42％和17％。

Claims (1)

1.一种紫花地丁提取物，其特征在于由以下方法制备而成：

1）取紫花地丁药材，用12倍70%的乙醇提取2次，每次1小时，滤过，滤液减压浓缩，得浓缩液；

2）步骤1）浓缩液加水调节至相当于0.5倍药材重量，以0.5BV/h流速加于预处理好的HPD750型大孔吸附树脂柱进行吸附，树脂用量为药材用量的1/3，然后用2BV纯化水以2BV/h的流速进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用2BV 50%乙醇以3BV/h的流速进行洗脱，最后用2BV 70%乙醇以3BV/h的流速进行洗脱；

3）合并步骤2）乙醇洗脱液，减压浓缩至相对密度为1.15-1.30，真空干燥，得紫花地丁提取物。

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