CN105753860A - β-咔啉类生物碱及其在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明为药物化学领域,公开了一种β-咔啉类生物碱及其在制备抗肿瘤药物中的应用,如式(Ⅰ)表示。本发明的β-咔啉类生物碱对细胞周期蛋白依赖性激酶4有抑制作用,可用于制备抗肿瘤药物,为治疗肿瘤提供了更多的药物选择。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域,涉及一种β-咔啉类生物碱及其在制备抗肿瘤药物的中的应用,特别是作为细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂的用途。
背景技术
细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)是一类丝氨酸(Ser)/苏氨酸(Thr)激酶,其分子量约为35-40kD,最早发现于裂殖酵母菌和栗酒酵母菌,其中基因序列的同源性超过40%并被命名为Cdc28和Cdc2。在哺乳动物中,已发现10个成员,Cdc2(CDK1),CDK2-10。CDKs在细胞周期调控网络中处于中心地位。普遍认为CDKs中的CDK2、CDK4和CDK6与肿瘤发生密切相关,在肿瘤细胞中常有过度表达,如乳腺癌、食管癌和原发性肝癌等。细胞周期G1/S期限制点的调控至关重要,在G1/S限制点的调控网络中,cyclinD1激活CDK4和CDK6并与其结合成激酶复合物,使Rb蛋白磷酸化,高度磷酸化的pRb促进转录因子E2F的释放,引起基因转录,从而推动细胞越过G1/S检测点进入S期。考虑到CDK4在细胞周期调控中的重要作用,因此选择性的CDK4抑制剂是当今CDKs抑制剂研究的主要方向。Fascaplysin是1988年由犹他大学的Ireland小组和康奈尔大学的Clardy小组共同发现和报道的一种红色五环天然季铵盐,它是从斐济海绵Fascaplysinopsissp.分离出的一种12H-吡啶[1,2-a;3,4-b’]吲哚类化合物,属于吲哚类生物碱。Fascaplysin是一种选择性的CDK4抑制剂(CDK4/cyclinD1IC50=0.35μM),Fascaplysin可以与CyclinD1竞争CDK4,当与CDK4结合后,CDK4的活性即被抑制,从而阻止细胞分裂,达到抗肿瘤的效果。因此,具有较广阔的研究前景。然而,fascaplysin是一种平面结构的化合物,可以嵌入DNA分子,其作用类似于DNA嵌入剂白叶藤碱和椭圆玫瑰树碱,这种嵌合使fascaplysin具有较高细胞毒性,毒副作用大,严重限制了其临床应用。
发明内容
本发明研究了大量国内外文献的基础上,以具有特异选择性的CDK4小分子抑制活性的天然产物Fascaplysin(母核为平面五环结构)为先导化合物,设计了一系列Fascaplysin的衍生物,降低其DNA嵌入能力,并保留CDK4抑制剂的药效作用,药理实验证明,本发明的化合物具有优异的CDK4抑制活性。
本发明公开了一种如(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱:
式中,A-为酸根离子,R1表示甲氧基羰基,苄基;R2表示苯基,苄基,4-甲氧基-苄基。
其中,所述生物碱为药学上可接受的盐,成盐形式为可接受的酸与生物碱的季铵盐阳离子成盐。
所述可接受的酸为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
所述如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱优选为:2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、1,2-二苄基-9H-β-咔啉盐。
所述如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱的制备方法,包含以下步骤:
试剂条件:a)HCOCOOH,KOH,PH3-4;b)SOCl2,CH3OH;c)Pyridine,KMnO4;d)rf,24h
具体步骤为:
(1)色胺溶于盐酸溶液,与乙醛酸和KOH反应得到1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉(Ⅰ-1);
(2)1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉与甲醇和二氯亚砜反应得1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐(Ⅰ-2);
(3)1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐溶于吡啶,加入KMnO4和甲醇,反应得1-甲酸甲酯-β-咔啉(Ⅰ-3);
(4)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,分别与苯基溴、苄基溴、4-甲氧基-苄基溴、苄基溴反应,得到2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4),2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-5),2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-6)和1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-7);
(5)将与适量酸反应得到
所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱的制备方法,包含以下步骤:
试剂条件:a)HCOCOOH,KOH,PH3-4;b)SOCl2,CH3OH;c)Pyridine,KMnO4,;d)rf,24h
具体步骤为:
(1)取色胺和水,搅拌下加入浓盐酸至固体全部溶解,室温下交替滴加乙醛酸的水溶液和10%(m/v)的KOH溶液,调节反应液的pH使其保持在3-4,室温下搅拌4小时,抽滤,用水洗两次,干燥,甲醇重结晶得1,2,3,4-四氢-β-咔啉-1-甲酸(Ⅰ-1);
(2)加入1,2,3,4-四氢-β-咔啉-1-甲酸和无水甲醇,冰水浴下缓慢滴加二氯亚砜,回流6小时,TCL监测反应,反应结束冷却至室温,减压蒸去溶剂,经体积比为1:1的甲醇-乙酸乙酯重结晶得1-甲酸甲酯1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐(Ⅰ-2);
(3)取1-甲酸甲酯1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐,溶于吡啶,冰水浴下分批加入KMnO4固体,加完室温搅拌过夜,减压蒸干溶剂,加入甲醇搅拌,过滤,经柱色谱分离得1-甲酸甲酯-β-咔啉(Ⅰ-3);
(4)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,然后分别加入苯基溴、苄基溴、4-甲氧基-苄基溴,室温搅拌24小时,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得目标产物2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4),2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-5),2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-6);
(5)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,然后加入苄基溴,回流搅拌24h,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得到目标产物1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-7);
(6)将与适量酸反应得到
含有如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱的药物组合物,所述药物组合物还含有赋形剂。
所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的疾病的药物中的应用。
所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的疾病的药物中的应用。
药理测试结果表明,如式(1)表示的β-咔啉类生物碱对体外细胞周期蛋白依赖性激酶4均有不同程度的抑制作用,因此,如式(1)表示的β-咔啉类生物碱可在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的临床病症的药物中应用。所述与CDK4有关的疾病是黑色素瘤、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌等。
通过计算机药物设计软件模拟的数据可知,本发明所设计的化合物结构较fascaplysin的平面性有所降低,fascaplysin的平面结构使其可以嵌入DNA,具有较高的细胞毒性,而本发明的化合物结构平面性降低,则其DNA嵌入能力也会有所下降,细胞毒性随之降低。
本发明公开的β-咔啉类生物碱具有较高的体外细胞周期蛋白依赖性激酶4的抑制作用,与fascaplysin相比,具有较低的毒性,可用于制备治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的临床病症的药物。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案,但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1如式(Ⅰ)表示的咔啉类生物碱的制备
1.仪器
(1)熔点用WRS-2型微机熔点测定仪(上海声彦超声波仪器有限公司)测定;
(2)IR×谱用NicoletImpact410型红外光谱仪测定,KBr压片;
(3)1HNMR用JEOLFX90Q型傅立叶变换核磁共振仪测定;
(4)MS用Nicolet2000型傅立叶变换质谱仪和MAT-212型质谱仪测定。
2.制备方法
式(Ⅰ)的咔啉类生物碱的制备过程如下:
(1)1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉(Ⅰ-1)
称取色胺5.00g置于250mL三颈瓶中,水60.00mL,搅拌下加入适量浓盐酸至固体全部溶解,室温下缓慢滴加乙醛酸(4eq)的水溶液和10%(m/v)的KOH溶液,调节反应液的pH使其保持在3-4左右。滴加完毕,室温下搅拌4小时,有大量固体析出,抽滤,用水洗两次,干燥,甲醇重结晶得1,2,3,4-四氢-β-咔啉-1-甲酸6.41g。
收率94.65%;m.p.:208-209;℃1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.68(1H,s,COOH),8.94(1H,s,NH),7.44(1H,d,J=8.0Hz),7.37(1H,d,J=7.6Hz),7.03(1H,t,J=7.2Hz),6.95(1H,t,J=7.2Hz),4.67(1H,s,CH),3.42(1H,q,J=5.2Hz),3.30(1H,q,J=5.6Hz),3.26(1H,t,J=7.2Hz),2.93(1H,t,J=8.0Hz),2.80(1H,s,NH);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.6,136.2,132.4,127.4,122.2,120.1,119.0,111.1,108.3,64.0,42.7,23.0.
(2)1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐(Ⅰ-2)
在250mL圆底烧瓶中,加入1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉2.00g,然后加入50.00mL无水甲醇,冰水浴下缓慢滴加二氯亚砜(1.2eq),滴加完毕升温回流6小时。TCL监测反应,反应结束冷却至室温,减压蒸去溶剂,粗品经甲醇-乙酸乙酯(1:1)重结晶得1-甲酸甲酯1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐1.67g。
收率67.82%;m.p.:200-202℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.16(s,1H,NH),8.49(1H,d,J=4.8Hz),8.43(1H,d,J=4.8Hz),8.31(1H,d,J=8.0Hz),7.89(1H,d,J=8.0Hz),7.62(1H,t,J=7.6Hz),7.31(1H,t,J=7.6Hz),4.03(3H,s,CH3);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:166.5,136.6,125.4,122.9,122.3,119.2,118.2,111.8,107.2,53.5,53.5,52.7,52.7;HRMS(ESI):(M+)231.1128(calculated231.1186),error=0.4ppm.
(3)1-甲酸甲酯-β-咔啉(Ⅰ-3)
称取1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐1.67g,溶于30.00mL吡啶,冰水浴下分批加入KMnO4固体1.49g(1.5eq),加完室温搅拌过夜,减压蒸干溶剂,加入甲醇搅拌,过滤,粗品经柱色谱分离得中间体1-甲酸甲酯-β-咔啉1.30g。
收率91.88%;m.p.:166-167℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.68(s,1H,NH),7.48(1H,d,J=8.0Hz),7.44(1H,d,J=8.0Hz),7.16(1H,t,J=7.6Hz),7.80(1H,t,J=7.6Hz),5.70(1H,s,CH),3.82(3H,s,CH3),3.47(2H,t,J=7.6Hz),3.12(1H,t,J=7.0Hz),2.99(2H,t,J=7.2Hz);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:165.8,141.4,137.9,137.1,136.0,130.8,130.2,129.1,121.9,120.1,118.9,112.8,52.2;HRMS(ESI):(M+H)227.0815(calculated227.0866),error=0.9ppm.
(4)2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4)
在100mL圆底烧瓶中,将合成的中间体1-甲酸甲酯-β-咔啉(0.50mmol)溶于30.00mL乙腈,然后加入苯基溴(0.50mmol),高温搅拌24小时,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐。
可以将2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4)与适量的酸反应得到目标产物
所反应的酸可以为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸。苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
收率21.62%;m.p.:169-170℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.66(s,1H,NH),9.11(1H,d,J=6.4Hz),9.06(1H,d,J=6.4Hz),8.55(1H,d,J=8.0Hz),7.76(2H,d,J=7.2Hz),7.55(1H,d,J=7.2Hz),7.51(3H,t,J=7.2Hz),7.35(2H,t,J=7.6Hz),4.03(3H,s,CH3);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:160.3,136.2,135.9,135.3,134.6,133.9,133.0,130.1,129.5,128.9,128.6,128.3,127.9,127.4,123.9,121.9,119.3,113.9,53.5.
(5)2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-5)
在100mL圆底烧瓶中,将合成的中间体1-甲酸甲酯-β-咔啉(0.50mmol)溶于30.00mL乙腈,然后加入苄基溴(0.50mmol),室温搅拌24小时,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得目标产物2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐。
可以将2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-5)与适量的酸反应得到目标产物
所反应的酸可以为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸。苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
收率31.76%;m.p.:175-176℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.67(s,1H,NH),9.09(1H,d,J=6.4Hz),9.05(1H,d,J=6.4Hz),8.57(1H,d,J=8.0Hz),7.86(2H,d,J=7.2Hz),7.53(1H,d,J=7.2Hz),7.50(3H,t,J=7.2Hz),7.35(2H,t,J=7.6Hz),6.24(2H,s,CH2),4.03(3H,s,CH3);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:160.3,136.2,135.9,135.3,134.6,133.9,133.0,130.1,129.5,128.9,128.6,128.3,127.9,127.4,123.9,121.9,119.3,113.9,61.5,54.5.
(6)2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-6)
以1-甲酸甲酯-β-咔啉为原料,4-甲氧基-苄基溴代替苄基溴,得目标产物2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐。
可以将2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-6)与适量的酸反应得到目标产物
所反应的酸可以为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸。苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
收率45.65%;m.p.:139-141℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.67(s,1H,NH),9.05(2H,d,J=4.8Hz),8.57(1H,d,J=8.0Hz),8.50(1H,d,J=8.4Hz),7.83(2H,d,J=7.2Hz),7.58(1H,d,J=8.4Hz),7.50(2H,t,J=7.2Hz),7.28(1H,d,J=8.0Hz),7.01(1H,d,J=8.4Hz),6.21(2H,s,CH2),4.03(3H,s,CH3),4.75(3H,s,CH3);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:160.3,159.5,136.1,135.9,135.7,135.2,134.9,133.9,133.2,129.8,129.6,127.0,123.9,122.1,119.4,119.1,114.3,113.7,61.2,61.2,55.2,54.7.
(7)1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-7)
在100mL圆底烧瓶中,将合成的中间体1-甲酸甲酯-β-咔啉(0.50mmol)溶于30.00mL乙腈,然后加入苄基溴(2.50mmol),回流搅拌24小时,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得目标产物1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐。
可以将1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-7)与适量的酸反应得到目标产物
所反应的酸可以为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸。苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
收率71.07%;m.p.:265-266℃;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.09(1H,s,NH),8.94(2H,d,J=6.4Hz),8.57(1H,d,J=8.0Hz),7.95(1H,d,J=8.4Hz),7.86(1H,t,J=7.2Hz),7.58(3H,d,J=6.4Hz),7.52(3H,t,J=7.6Hz),7.42(4H,t,J=7.6Hz),7.30(1H,d,J=7.2Hz),5.99(2H,s,CH2),5.94(2H,s,CH2);13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ:144.2,144.1,137.8,137.5,136.6,136.0,135.3,133.1,132.6,132.4,132.0,129.6,129.1,128.8,128.4,127.9,127.5,127.1,124.0,122.1,119.3,118.5,111.7,63.3,63.3.
实施例2如式(Ⅰ)表示的咔啉类生物碱的毒性评估
选取本发明化合物中平面性最大的2-苯基-1-甲酸甲酯基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4)(R1=甲氧基羰基,R2=苯基)和fascaplysin(式(Ⅱ))通过chem3D软件对其进行二面角数据模拟,进而比较其平面性。
表1Fascaplysin和2-苯基-1-甲酸甲酯基-9H-β-咔啉溴盐的二面角数据比较
通过计算机药物设计软件模拟的数据可知,本发明化合物中平面性最大的2-苯基-1-甲酸甲酯基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4)(R1=甲酸甲酯,R2=苯基)结构较fascaplysin的平面性有所降低,而fascaplysin的平面结构使其可以嵌入DNA,具有较高的细胞毒性。
因此,本发明所设计的化合物,较2-苯基-1-甲酸甲酯基-9H-β-咔啉溴盐(Ⅰ-4)(R1=甲氧基羰基,R2=苯基)平面性小的化合物的平面也均低于fascaplysin。
总之,本发明所设计的化合物的结构较fascaplysin的平面性有所降低,fascaplysin的平面结构使其可以嵌入DNA,具有较高的细胞毒性,而本发明的化合物结构平面性降低,则其DNA嵌入能力也会有所下降,细胞毒性随之降低。
实施例3如式(Ⅰ)表示的咔啉类生物碱的CDK4抑制活性验证实验
1.材料
仪器TECANSafire2测度仪,黑壁黑底384孔板(美国CORNING公司),平板摇床(江苏省光明实验仪器厂),试剂CDK4/clyclinD,pRb蛋白底物,DMSO(Sigma)
2.实验方法
(1)取133ul5×缓冲液加入到367ul水中得到500ul1.33×激酶缓冲液;
(2)取0.2ulCDK4/clyclinD和0.8ul底物加入到199ul1.33×激酶缓冲液中得到200ul激酶/底物混合物;
(3)取6ul10mMATP加入144ul1.33激酶缓冲液中得到150ul4×ATP液;
(4)取0.2ul磷酸化肽加入到49.8ul的1.33×激酶缓冲液中得到50ul磷酸化肽液;
(5)取合成化合物Ⅰ-1——Ⅰ-7配置成2ul10-2M的水溶液,即为测试母液;
(6)取2ul10-2M测试母液加入到498ul水中得到500ul4×测试液;
(7)按下表加样:
(8)用平板振荡器将样品混匀,室温放置1h;
(9)取0.1ul显影液加入到100ul水中,得显影液;每孔加5ul,平板振荡器将样品混匀,室温放置1h;
(10)每孔加入5ul终止液,平板振荡器将样品混匀;
(11)用TECANSafire2测度仪,设定激发波长为400nm,检测发射波长520nm荧光值,并通过下面公式计算抑制率。
抑制百分率=100%×(1—测试组磷酸化率/对照组磷酸化率)
3.实验结果
药理实验表明,本发明的如式(Ⅰ)表示的咔啉类生物碱具有细胞周期蛋白依赖性激酶4的抑制活性,活性与fascaplysin相近,又由于本发明如式(Ⅰ)表示的咔啉类生物碱结构的平面性较fascaplysin有所降低,故其细胞毒性也会低于fascaplysin。因此,本发明化合物可以在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂有关的疾病的药物中应用,其中与CDK4抑制剂有关的疾病是黑色素瘤、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌等。
Claims (9)
1.如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱:
式中,A-为酸根离子,R1表示甲氧基羰基,苄基;R2表示苯基,苄基,4-甲氧基-苄基。
2.如权利要求1所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱,其特征在于,所述生物碱为药学上可接受的盐,成盐形式为可接受的酸与生物碱的季铵盐阳离子成盐。
3.如权利要求2所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱,其特征在于,所述可接受的酸为:盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、萘磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、马来酸、苯磺酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸、含有碱性金属阳离子、碱土金属阳离子、铵阳离子盐。
4.如权利要求1所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱,其特征在于,所述如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱为:2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉盐、1,2-二苄基-9H-β-咔啉盐。
5.如权利要求1所述如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱的制备方法,包含以下步骤:
试剂条件:a)HCOCOOH,KOH,PH3-4;b)SOCl2,CH3OH;c)Pyridine,KMnO4;d)rf,24h
具体步骤为:
(1)色胺溶于盐酸溶液,与乙醛酸和KOH反应得到1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉;
(2)1-甲酸-1,2,3,4-四氢-β-咔啉与甲醇和二氯亚砜反应得1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐;
(3)1-甲酸甲酯-1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐溶于吡啶,加入KMnO4和甲醇,反应得1-甲酸甲酯-β-咔啉;
(4)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,分别与苯基溴、苄基溴、4-甲氧基-苄基溴、苄基溴反应,得到2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐,2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐,2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐和1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐;
(5)将与适量酸反应得到
6.如权利要求1所述结构式为式(1)的β-咔啉类生物碱的制备方法,包含以下步骤:
试剂条件:a)HCOCOOH,KOH,PH3-4;b)SOCl2,CH3OH;c)Pyridine,KMnO4;d)rf,24h
具体步骤为:
(1)取色胺和水,搅拌下加入浓盐酸至固体全部溶解,室温下交替滴加乙醛酸的水溶液和10%(m/v)的KOH溶液,调节反应液的pH使其保持在3-4,室温下搅拌4小时,抽滤,用水洗两次,干燥,甲醇重结晶得1,2,3,4-四氢-β-咔啉-1-甲酸;
(2)加入1,2,3,4-四氢-β-咔啉-1-甲酸和无水甲醇,冰水浴下缓慢滴加二氯亚砜,回流6小时,TCL监测反应,反应结束冷却至室温,减压蒸去溶剂,经体积比为1:1的甲醇-乙酸乙酯重结晶得1-甲酸甲酯1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐;
(3)取1-甲酸甲酯1,2,3,4-四氢-β-咔啉盐酸盐,溶于吡啶,冰水浴下分批加入KMnO4固体,加完室温搅拌过夜,减压蒸干溶剂,加入甲醇搅拌,过滤,经柱色谱分离得1-甲酸甲酯-β-咔啉;
(4)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,然后分别加入苯基溴、苄基溴、4-甲氧基-苄基溴,室温搅拌24小时,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得目标产物2-苯基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐,2-苄基-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐和2-(4-甲氧基-苄基)-1-甲氧基羰基-9H-β-咔啉溴盐;
(5)将1-甲酸甲酯-β-咔啉溶于乙腈,然后加入苄基溴,回流搅拌24h,蒸干溶剂,乙腈-乙酸乙酯重结晶得到目标产物1,2-二苄基-9H-β-咔啉溴盐;
(6)将与适量酸反应得到
7.含有如权利要求1所述β-咔啉类生物碱的药物组合物。
8.如权利要求1所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的疾病的药物中的应用。
9.如权利要求8所述的如式(Ⅰ)表示的β-咔啉类生物碱在制备用于预防或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶4有关的疾病的药物中的应用,其特征在于,所述的与细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂有关的疾病是:黑色素瘤、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃肠道癌。
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