CN105746355B - 一种角蒿高效离体再生的方法 - Google Patents
一种角蒿高效离体再生的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105746355B CN105746355B CN201610151822.9A CN201610151822A CN105746355B CN 105746355 B CN105746355 B CN 105746355B CN 201610151822 A CN201610151822 A CN 201610151822A CN 105746355 B CN105746355 B CN 105746355B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- culture mediums
- adventitious bud
- cotyledon
- seeded
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：步骤一、取角蒿种子，用剪刀将种皮两端剪开接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶；步骤二、将子叶剪切并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽；MS培养基Ⅱ含有6‑BA和NAA，或者含有KT和NAA；步骤三、待不定芽长至4‑5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，不定芽生根后经炼苗移栽至土壤中；1/2MS培养基Ⅲ含NAA、IBA和间苯二酚，或者含NAA、IBA脯氨酸和核黄素。本发明不经过愈伤组织直接产生不定芽，在含有间苯二酚的培养基中生根，生根率高，能够实现角蒿快繁。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种角蒿高效离体再生的方法。
背景技术
紫葳科角蒿属植物角蒿是我国北部广泛生长的野生植物，角蒿全草入药，用于祛风湿，活血，止痛，在中药中的功能主要是祛风除湿，活血止痛，解毒；在蒙药中主要有止咳，止痛，镇“赫依”，燥“希日乌素”，润肠，通便的功效。从角蒿全草中可分离得到多种单萜生物碱和大环精胺类生物碱。其中单萜生物碱之一角蒿酯碱具有很强的镇痛活性，且作用机理不同于吗啡。角蒿酯碱已成为开发新型非麻醉性镇痛新药的重要先导化合物。角蒿的花大而颜色鲜艳，具有极高的观赏价值，可以用作园林或庭院美化，也可以当作盆栽花卉，已经在一些欧洲国家的园林中应用。但是角蒿主要是种子繁殖，野生资源很少，且不同年份因气候变化而波动，很难满足大规模开发的需求。组织培养是一种重要的现代生物技术，可以在较短时间内获得大量的无性系，因此组织培养对于角蒿的大规模化开发具有重要意义。关于角蒿的离体快繁，目前仅有李娜等通过愈伤组织得到再生植株。为了快速增加和提高角蒿的种质资源，满足角蒿大规模开发的需要，本研究以角蒿子叶为外植体，建立了角蒿不经过愈伤组织，从外植体直接获得再生植株的高频再生体系。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种角蒿高效离体再生的方法，该方法不经过愈伤组织直接产生不定芽，在含有间苯二酚的培养基中生根，生根率高，能够实现角蒿快繁。
本发明所采用的技术方案是：一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：
步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；
步骤二、将子叶剪切并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，备用；所述的MS培养基Ⅱ含有1.0-2.0mgL-16-BA和0.2-0.5mg/LNAA，或者含有1.0 -2.0 mgL-1KT和0.2 - 0.5 mg/LNAA；
步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，不定芽生根后第28-32天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2mg/LNAA、0.2 mg/LIBA和5mg/L间苯二酚，或者含0.2 mg/L NAA、0.2 mg/LIBA、100mg/L脯氨酸和1mg/L核黄素。
作为本发明一种角蒿高效离体再生的方法的进一步优化，步骤二所述的子叶接种在MS培养基Ⅱ上进行培养分化不定芽时，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。
作为本发明一种角蒿高效离体再生的方法的进一步优化，步骤三所述的不定芽接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根时，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。
作为本发明一种角蒿高效离体再生的方法的进一步优化，步骤二所述的将子叶剪切成0.5×0.5cm大小进行接种。
与现有技术相比，本发明至少具有下述优点及有益效果：
一、本发明提供的角蒿高效离体再生的方法使角蒿子叶在植物生长调节剂6-BA或者KT和NAA刺激下，不经过愈伤组织直接产生不定芽，不定芽的分化频率可达84%或91%。
二、不定芽在含有NAA和IBA及间苯二酚、脯氨酸、核黄素的(1/2）MS培养基上，生根率达86%或92%，实现高效生根。本发明的方法适合角蒿快繁，为角蒿单萜生物碱及其衍生物和突变、转基因等遗传操作诱导新品种。
附图说明
图1为角蒿子叶接种后膨大的子叶边缘长出的不定芽；
图2为角蒿不定芽在含间苯二酚的培养基中生长的粗壮的根；
图3为角蒿不定芽在含脯氨酸和核黄素的培养基中生长的细长的根。
具体实施方式
为使本发明的内容更明显易懂，以下结合具体实施例，对本发明进行详细描述。
一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：
步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；
步骤二、将子叶剪切成0.5×0.5cm大小并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，角蒿不定芽的分化频率分别可达可达84%或91%（见表1和图1），备用；所述的MS培养基Ⅱ含有1.0-2.0mgL-16-BA和0.2-0.5mg/LNAA，或者含有1.0 -2.0 mgL-1KT和0.2 - 0.5 mg/LNAA；
步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。不定芽生根后第28-32天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/LNAA、0.2 mg/LIBA和5mg/L间苯二酚，则其生根率可达到86%，不定根生长的多且粗壮（见表2，图2）；或者1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/L NAA、0.2 mg/LIBA、100mg/L脯氨酸和1mg/L核黄素，则生根率可达到92%，且根部细长（见表2，图3）。
本发明中6-BA是指6-苄氨基腺嘌呤，NAA是指a-萘乙酸 ，KT是指酮咯酸，IBA是指吲哚乙酸。
表1 不同植物生长调节剂对角蒿不定芽分化的影响a
表2 不同植物生长调节剂和化学物质对再生苗根再生的影响
实施例1：
一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；步骤二、将子叶剪切成0.5×0.5cm大小并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，备用；所述的MS培养基Ⅱ含有2.0mgL-16-BA和0.5mg/LNAA；步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。不定芽生根后第28天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/LNAA、0.2 mg/LIBA和5mg/L间苯二酚。
实施例2：
一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；步骤二、将子叶剪切成0.5×0.5cm大小并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，备用；所述的MS培养基Ⅱ含有2.0 mgL-1KT和0.5 mg/LNAA；步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。不定芽生根后第30天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/LNAA、0.2 mg/LIBA和5mg/L间苯二酚。
实施例3：
一种角蒿高效离体再生的方法，包括以下步骤：步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；步骤二、将子叶剪切成0.5×0.5cm大小并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，备用；所述的MS培养基Ⅱ含有1.0mgL-16-BA和0.2mg/LNAA；步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。不定芽生根后第28-32天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/L NAA、0.2 mg/LIBA、100mg/L脯氨酸和1mg/L核黄素。
Claims (4)
1.一种角蒿高效离体再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、取角蒿种子，灭菌后，用剪刀将种皮两端剪开，接种在1/2MS培养基Ⅰ上，种子萌发后取其子叶，备用；
步骤二、将子叶剪切并接种在MS培养基Ⅱ上进行培养，培养2周后，从子叶膨大的切口处直接分化出不定芽，备用；所述的MS培养基Ⅱ含有1.0 -2.0 mgL-1KT和0.2 - 0.5 mg/LNAA；
步骤三、待不定芽长至4-5cm时，从不定芽根部切下，接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根，不定芽生根后第28-32天，经炼苗移栽至土壤中；所述的1/2MS培养基Ⅲ含0.2 mg/LNAA、0.2 mg/LIBA和5mg/L间苯二酚，或者含0.2 mg/L NAA、0.2 mg/LIBA、100mg/L脯氨酸和1mg/L核黄素。
2.如权利要求1所述的一种角蒿高效离体再生的方法，其特征在于：步骤二所述的子叶接种在MS培养基Ⅱ上进行培养分化不定芽时，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。
3.如权利要求1所述的一种角蒿高效离体再生的方法，其特征在于：步骤三所述的不定芽接种在1/2MS培养基Ⅲ上进行培养生根时，培养条件为每天采用16小时2000lx光照处理、8小时黑暗处理，培养温度为25±2℃。
4.如权利要求1所述的一种角蒿高效离体再生的方法，其特征在于：步骤二所述将子叶剪切成0.5×0.5cm大小进行接种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610151822.9A CN105746355B (zh) | 2016-03-17 | 2016-03-17 | 一种角蒿高效离体再生的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610151822.9A CN105746355B (zh) | 2016-03-17 | 2016-03-17 | 一种角蒿高效离体再生的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105746355A CN105746355A (zh) | 2016-07-13 |
| CN105746355B true CN105746355B (zh) | 2017-12-08 |
Family
ID=56332095
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610151822.9A Expired - Fee Related CN105746355B (zh) | 2016-03-17 | 2016-03-17 | 一种角蒿高效离体再生的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105746355B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106613997B (zh) * | 2017-02-23 | 2018-08-10 | 河南科技大学 | 一种牡丹离体再生组培方法 |
| CN108990802B (zh) * | 2018-09-13 | 2019-12-06 | 四川七彩林科股份有限公司 | 一种毛子草的组培快繁方法 |
-
2016
- 2016-03-17 CN CN201610151822.9A patent/CN105746355B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105746355A (zh) | 2016-07-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104686345A (zh) | 一种甘草的组织培养快繁方法 | |
| CN102144555B (zh) | 一种葛根的快速繁殖方法 | |
| CN102907323A (zh) | 一种白及种子无菌生产微型种茎的方法 | |
| CN103404438B (zh) | 一种鸡爪槭种子组织培养方法 | |
| CN101803571B (zh) | 一种水半夏的组培快繁法 | |
| CN103299806B (zh) | 一种柳枝稷扦插无性繁殖方法 | |
| CN106172016A (zh) | 一种五加皮组培快繁方法 | |
| CN106508661B (zh) | 一种创建金线莲多倍体资源的方法 | |
| CN105746355B (zh) | 一种角蒿高效离体再生的方法 | |
| CN103270948A (zh) | 多倍体积雪草品种及其培育方法 | |
| CN107484666A (zh) | 一种白芍的组织培养快繁方法 | |
| CN104620868A (zh) | 古侧柏嫁接繁殖方法 | |
| CN105580737A (zh) | 一种百蕊草组培瓶苗的育苗方法 | |
| CN111789027B (zh) | 以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法 | |
| CN102668985A (zh) | 一种明日叶快速繁殖方法 | |
| CN102870676B (zh) | 一种龙山百合高效脱毒工艺 | |
| CN108142281A (zh) | 一种杜仲组织培养方法 | |
| CN107410033B (zh) | 民族香料植物麻根的快速繁殖方法 | |
| CN103004437B (zh) | 一种黑荆成年母树复幼扦插育苗方法 | |
| CN109247147A (zh) | 一种茶树快速扦插生根的方法 | |
| CN109588312A (zh) | 一种虾脊兰植株再生体系建立的方法 | |
| CN104285816A (zh) | 一种文冠果的组织培养快繁方法 | |
| CN102090336B (zh) | 一种杜衡组织培养的繁殖方法 | |
| CN107593444A (zh) | 一种青木香的组织培养快繁方法 | |
| CN104255498A (zh) | 一种楤木的种苗快速繁殖的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191128 Address after: 211300 No. 6 Ecological Road, Yaxi Town, Gaochun District, Nanjing City, Jiangsu Province Patentee after: Nanjing Kangzhiyuan Agricultural Science and Technology Development Co., Ltd. Address before: 471000 Xiyuan Road, Jianxi District, Henan, No. 48, No. Patentee before: Henan University of Science and Technology |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171208 Termination date: 20200317 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |