CN105707851A

CN105707851A - 杏鲍菇酵素及其制备方法

Info

Publication number: CN105707851A
Application number: CN201610169838.2A
Authority: CN
Inventors: 谢纯良; 彭源德; 洪益秋; 朱作华; 严理; 龚文兵; 龙济宇; 洪仁狄
Original assignee: Hunan Zhongshi Agricultural Biotechnology Co ltd; Institute of Bast Fiber Crops of CAAS
Current assignee: Hunan Zhongshi Agricultural Biotechnology Co ltd; Institute of Bast Fiber Crops of CAAS
Priority date: 2016-03-24
Filing date: 2016-03-24
Publication date: 2016-06-29
Anticipated expiration: 2036-03-24
Also published as: CN105707851B

Abstract

本发明公开了一种杏鲍菇酵素及其制备方法，其中杏鲍菇酵素采用以下方法制备得到：将杏鲍菇进行发酵得到杏鲍菇酵素原液；分别将苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液；将杏鲍菇酵素原液和苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液、西瓜酵素原液进行混合，发酵得到杏鲍菇酵素。本发明将杏鲍菇与苹果、葡萄、桃子、西瓜进行复配，制备得到的杏鲍菇酵素口感俱佳、营养价值极高，脂肪酶、SOD酶和胞外多糖含量高。

Description

杏鲍菇酵素及其制备方法

技术领域

本发明涉及酵素技术领域，尤其涉及一种杏鲍菇酵素及其制备方法。

背景技术

酵素也被称为酶，是一种生物催化剂，由蛋白质构成。酵素参与正常的新陈代谢、自体免疫、修复组织等人所有的生理活动。随着年龄增大，体内酵素相对减少，身体状况逐渐走下坡路。因此，需要补充适量的酵素。

研究发现，以一种或多种新鲜蔬菜、水果等为原料，经多种有益菌发酵可以产生酵素，且含有丰富的维生素、矿物质和次生代谢产物等营养成分具有抗衰老、抗菌、消炎、净化血液、增强机体免疫能力及解毒抗癌等多种保健功能。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种口感俱佳、营养价值极高的杏鲍菇酵素，还提供了一种杏鲍菇酵素的制备方法。

为解决上述技术问题，提供了一种杏鲍菇酵素的制备方法，包括以下步骤：

(1)将杏鲍菇进行发酵得到杏鲍菇酵素原液；

(2)分别将苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液；

(3)将所述步骤(1)中制备得到的杏鲍菇酵素原液和步骤(2)中苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液、西瓜酵素原液进行混合，发酵得到杏鲍菇酵素。

上述的制备方法，优选的，所述步骤(1)中所述发酵具体为：将杏鲍菇打浆，加入红糖和双蒸水得到杏鲍菇浆液，在杏鲍菇浆液中接种酵母菌发酵得到杏鲍菇酵素原液。

上述的制备方法，优选的，酵母菌的的接种量为5v/v％～8v/v％。

上述的制备方法，优选的，所述发酵的条件为：20～30℃下，避光发酵48h～72h。

上述的制备方法，优选的，所述步骤(2)具体为：分别在苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁中加入红糖、双蒸水和蛋白胨；然后接种酵母菌进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液。

上述的制备方法，优选的，所述步骤(2)中所述发酵的条件为：20～30℃下，避光发酵48h～72h。

上述的制备方法，优选的，所述步骤(3)具体为：将所述步骤(1)中制备得到的杏鲍菇酵素原液和步骤(2)中的苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液按照体积比为3∶1∶1∶1∶1混合得到混合液，进行发酵得到杏鲍菇酵素。

上述的制备方法，优选的，所述步骤(3)中所述发酵具体为：在混合液中接种嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的混合菌种，联合发酵2～3天。进一步优选的，所述混合菌种的接种量为8v/v％～10v/v％。

上述的制备方法，优选的，所述混合菌种中，所述嗜酸乳酸杆菌：保加利亚乳杆菌的体积比为1∶1。

作为一个总的技术构思，本发明还提供了一种上述制备方法制备得到的杏鲍菇酵素。

上述的杏鲍菇酵素，优选的，所述杏鲍菇酵素包括蛋白酶、脂肪酶、SOD酶和胞外多糖。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

(1)本发明提供了一种杏鲍菇酵素，在培养基中接入杏鲍菇，进行发酵培养，从而制成杏鲍菇酵素原液，与水果酵素原液进行复配，不仅可以增强发酵程度，减少发酵时间；还发挥了菇体降血脂、降胆固醇、增强机体免疫能力、防止心血管病等功效。制备得到的杏鲍菇酵素具有平衡内分泌，净化血液、补充能量、促进肠道消化吸收、排毒清肠、美容养颜、加速新陈代谢、排除多余热量、减脂控重等作用，广泛应用于农业、畜牧业、商业、

(2)本发明提供了一种杏鲍菇酵素的制备方法，将杏鲍菇、水果等浆液分别发酵，然后混合进行二次发酵，有效积累了其功能活性成分，提高了酵素中脂肪酶、蛋白酶等的活性和活菌的数量，有效提高酵素的各种保健功效和高附加值的效果。

(3)本发明提供了一种杏鲍菇酵素的制备方法，控制杏鲍菇酵素原液、苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液按照体积比为3∶1∶1∶1∶1混合进行发酵，使杏鲍菇酵素成品的营养价值更高、口感更佳，酵素气味更好。

附图说明

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。

图1为蛋白酶活力测定的标准曲线图。

图2为胞外多糖含量测定的标准曲线图。

具体实施方式

以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。

实施例

以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。本实施例采用的酵母菌为ATCC204508；嗜酸乳酸杆菌为CICC6243；保加利亚乳杆菌为ACCC10638，均购于中国微生物菌种保藏中心。

实施例1

一种本发明的杏鲍菇酵素，其制备方法包括以下步骤：

(1)制备杏鲍菇酵素原液：将500g的杏鲍菇子实体进行微波消毒处理后，在洁净条件下，打浆，加入30g红糖，加入双蒸水，混合均匀得到300mL的杏鲍菇浆液。调节杏鲍菇浆液的pH为6.4，然后分装于锥形瓶中，以5v/v％的接种量接种酵母菌，在30℃下避光发酵48h(发酵条件还可以在20℃下发酵72h)得到杏鲍菇酵素原液。

(2)制备水果酵素原液：选取苹果，葡萄，西瓜，桃子4种水果，分别对四种水果剥皮、打浆、过滤得到果浆。分别取100mL苹果果浆、葡萄果浆、西瓜果浆和桃子果浆，于每个果浆中均加入20g红糖，加入双蒸水至体积为300mL。然后加入2％的蛋白胨，经115℃高压灭菌20min，冷却至室温得到培养基A、B、C、D。调节培养基A、B、C、D的pH为6.4，分别在培养基A、B、C、D中接种5v/v％的酵母菌，在室温下避光发酵在30℃下避光发酵48h(发酵条件还可以在20℃下发酵72h)得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、西瓜酵素原液和桃子酵素原液。

(3)联合发酵：在洁净条件下，将步骤(1)中制得的杏鲍菇酵素原液，步骤(2)中制得的苹果酵素原液、葡萄酵素原液、西瓜酵素原液和桃子酵素原液，按照体积比为3∶1∶1∶1∶1混合得到混合液。调节混合液的pH为6.4。在混合液中接种10v/v％的嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的混合菌种(混合菌种中嗜酸乳酸杆菌∶保加利亚乳杆菌体积比为1∶1)，在30℃下避光发酵48h(发酵条件还可以在20℃下发酵72h)。待发酵完成后，灭活发酵菌，终止发酵过滤，得到杏鲍菇酵素成品。

实施例2

杏鲍菇酵素原液，苹果酵素原液、葡萄酵素原液、西瓜酵素原液和桃子酵素原液的体积比为1∶1∶1∶1∶1，其余步骤与实施例1一致。

实施例3

杏鲍菇酵素原液，苹果酵素原液、葡萄酵素原液、西瓜酵素原液和桃子酵素原液的体积比为3∶2∶1∶1∶2，其余步骤与实施例1一致。

对比例1

一种本发明的杏鲍菇酵素，其制备方法包括以下步骤：

(1)将500g的杏鲍菇子实体进行微波消毒处理后，在洁净条件下，打浆，加入30g红糖，加入双蒸水，混合均匀得到300mL的杏鲍菇浆液。

(2)选取苹果，葡萄，西瓜，桃子4种水果，分别对四种水果剥皮、打浆、过滤得到果浆。分别取100mL苹果果浆、葡萄果浆、西瓜果浆和桃子果浆，于每个果浆中加入20g红糖，加入双蒸水至体积为300mL得到苹果混合液、葡萄混合液、西瓜混合液和桃子混合液。

(3)将步骤(1)中的杏鲍菇浆液、步骤(2)中的苹果混合液、葡萄混合液、西瓜混合液和桃子混合液按照体积比为3∶1∶1∶1∶1混合得到混合液。调节混合液的pH为6.4。在混合液中接种10v/v％的酵母菌∶嗜酸乳酸杆菌∶保加利亚乳杆菌的体积比＝1∶1∶1的混合菌种，在30℃下避光发酵4天。待发酵完成后，灭活发酵菌，终止发酵过滤，得到杏鲍菇酵素成品。

分别考察实施例1和对比例1中杏鲍菇酵素成品中蛋白酶、脂肪酶、SOD酶和胞外多糖的含量。

1、酵素中蛋白酶活力的测定采用以下方法：将实施例1中制备得到的杏鲍菇酵素混合双蒸水配制浓度为2％的酵素待测溶液。规定1mL酵素，在40℃和pH为6.0时，酵素1min水解燕麦蛋白生成1μg氨基酸为一个酶活力单位，以μg(U/mL)表示。

标准曲线的制作：取12支试管，分为两组，每组6支试管；于每只试管中分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准氨基酸溶液，相当于氨基酸含量分别为0、200、400、600、800、1000μmol。然后于每只试管中分别加入1％茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在100℃沸水浴中加热15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混匀，于570nm处比色，以氨基酸含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线：y＝0.0126x+0.0115，R²＝0.9986。图1为蛋白酶活力测定的标准曲线图。本实施例使用的为赖氨酸(分析纯)。

蛋白酶活力的测定方法：首先将2％酵素待测溶液稀释成不同的浓度，然后进行如下操作：

空白组：取试管A，加入1mL胰蛋白酶液，在80℃下恒温10min；然后加入1mL燕麦蛋白，于40℃下反应10min；接着加入1％茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在100℃沸水浴中加热15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混匀，于570nm处比色得到Abs值。空白组做两个平行组。

实验组：取试管B，加入2％酵素待测溶液、1mL酶液和1mL燕麦蛋白，于40℃下反应10min；接着加入1％茚三酮溶液0.5mL，充分混匀，将试管口封住，在100℃沸水浴中加热15min，冷却后用双蒸水稀释至25mL，充分混匀，于570nm处比色得到Abs值。实验组做两个平行组。

计算公式：根据标准曲线和测得的y值(Abs)求出x值(氨基酸含量)。

式中：x为反应液中氨基酸的含量；

v为反应试剂的总体积，3mL；

n为酶液的稀释倍数；

t为反应时间，10min：

m为酶质量或酶体积，g或mL。

2、酵素中的脂肪酶活力测定采用以下方法：用0.025mol/L磷酸缓冲液(pH7.5)配制浓度为2％的酵素待测溶液。按照QB/T1803-1993A4方法对杏鲍菇酵素中的脂肪酶活性进行检测(其中检测过程中采用的NaOH溶液的浓度为0.005mol/L)。规定1g固体酶粉，于40℃，pH7.5的条件下，水解脂肪酶分钟产生1μmol的脂肪酸，即为一个脂肪酶国际单位,以U/g表示。

3、酵素中SOD酶活力的测定采用以下方法：按照碧云天的总SOD活性检测试剂盒(NBT法，产品编号S0109，包装100次)进行SOD酶活力测定。测定结果为：259.2U/mL。

4、酵素中胞外多糖的测定采用以下方法：取100mL杏鲍菇酵素成品，4000rpm下离心15min。取50mL离心后的上清液，加入250mL95％乙醇充分震荡后，于4000rpm下离心15min。取离心后的沉淀加入50mL水溶解得到胞外多糖待测液。取上述胞外多糖待测液采用苯酚一硫酸法测定多糖含量。

测定方法为：精密吸取葡萄糖标准溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，l.0mL(相当于葡萄糖0.0，100，200，300，400，500，600，700，800，1000μg)，及0.5mL胞外多糖待测液置于15mL比色管中，用蒸馏水补足1.0mL。于每个比色管中加入1.0mL5.0％苯酚水溶液，摇匀后静止2min，迅速加入5mL浓硫酸，静止10min后置30℃温度水浴中加热15min。取出置冷水中冷却，以空白管为对照，分光光度计在波长490nm处测定光密度。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线：y＝0.005x+0.0173，R²＝0.9999，图2为胞外多糖含量测定的标准曲线图。根据标准曲线计算出胞外多糖的含量。

表1为实施例1、2、3以及对比例1杏鲍菇酵素成品中蛋白酶、脂肪酶、SOD酶活性、胞外多糖含量的结果。

表1：杏鲍菇酵素成品中四种酶的含量结果表

从表1的可知：实施例1、2和3的杏鲍菇酵素中，蛋白酶、脂肪酶、SOD酶和胞外多糖含量均明显高于对比例1；其中实施例1的杏鲍菇酵素质量最佳，实施例2中杏鲍菇酵素原液的含量减少，胞外多糖含量也减少，仅为162mg/L；实施例3中，苹果和桃比例适当可以加大到2份，不影响口感，但蛋白酶、SOD酶以及胞外多糖的含量并没有增加，反而有所降低。

对比例2

在实施例1的配方中添加芒果酵素原液，其中杏鲍菇酵素原液、芒果酵素原液、西瓜酵素原液、桃酵素原液、葡萄酵素原液和苹果酵素原液的体积比为3∶1∶1∶1∶1∶1，其余步骤与实施例1相同。

对比例3

在实施例1的配方中添加木瓜酵素原液，其中杏鲍菇酵素原液、木瓜酵素原液、西瓜酵素原液、桃酵素原液、葡萄酵素原液和苹果酵素原液的体积比为3∶1∶1∶1∶1∶1，其余步骤与实施例1相同。

分别对实施例1～3，对比例2、3的杏鲍菇酵素进行口感评分，评分标准参见表2，评分结果列于表3中。

表2：杏鲍菇酵素的口感评分标准表

表3：杏鲍菇酵素的口感评分结果表

项目	实施例1	实施例2	实施例3	对比例2	对比例3
						组织状态(25分)	22	22	22	22	22
颜色及色泽(25分)	22	23	22	23	23
						滋味及口感(25分)	22	23	23	18	15
气味(25分)	20	20	20	15	15
						总分	86	88	87	78	75

从表3的口感评分结果可知：实施例1～3的口感评分明显高于对比例2、3，证明杏鲍菇酵素中添加的水果，以苹果，葡萄，西瓜，桃子4种水果最佳，如果再添加其他的水果，将会影响其滋味、口感和气味等。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims

1.一种杏鲍菇酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将杏鲍菇进行发酵得到杏鲍菇酵素原液；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将杏鲍菇打浆，加入红糖和双蒸水得到杏鲍菇浆液，在杏鲍菇浆液中接种酵母菌发酵得到杏鲍菇酵素原液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，酵母菌的的接种量为5v/v％～8v/v％。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件为：20～30℃下，避光发酵48h～72h。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：分别在苹果汁、葡萄汁、桃汁和西瓜汁中加入红糖、双蒸水和蛋白胨；然后接种酵母菌进行发酵得到苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液，所述酵母菌的的接种量均为5v/v％～8v/v％。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件为：20～30℃下，避光发酵48h～72h。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：将所述步骤(1)中制备得到的杏鲍菇酵素原液和步骤(2)中的苹果酵素原液、葡萄酵素原液、桃酵素原液和西瓜酵素原液按照体积比为3∶1∶1∶1∶1混合得到混合液，进行发酵得到杏鲍菇酵素。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述发酵具体为：在混合液中接种8v/v％～10v/v％嗜酸乳杆菌和保加利亚乳杆菌的混合菌种，联合发酵2天～3天。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述混合菌种中，所述嗜酸乳酸杆菌：保加利亚乳杆菌的体积比为1∶1。

10.一种权利要求1至9中任一项制备方法制备得到的杏鲍菇酵素。