CN105706925B - 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法 - Google Patents

一种紫花杯冠藤组培快繁的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105706925B
CN105706925B CN201610073227.8A CN201610073227A CN105706925B CN 105706925 B CN105706925 B CN 105706925B CN 201610073227 A CN201610073227 A CN 201610073227A CN 105706925 B CN105706925 B CN 105706925B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
tissue
reddish brown
pale reddish
seedling
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201610073227.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105706925A (zh
Inventor
孙国峰
李晓东
林秦文
王亮生
吴东启
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Botany of CAS filed Critical Institute of Botany of CAS
Priority to CN201610073227.8A priority Critical patent/CN105706925B/zh
Publication of CN105706925A publication Critical patent/CN105706925A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105706925B publication Critical patent/CN105706925B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明涉及一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，属于组织培养领域，包括以下步骤：外植体的选择及处理、外植体的消毒、接种培养、继代增殖培养、生根培养。本发明培养方法速度快，再生频率较高，扩繁系数高达40倍以上，并且变异率较低，周期相对较短，能较好地保持紫花杯冠藤的遗传稳定性。培养的组培苗移栽成活率高，达到85％以上。

Description

一种紫花杯冠藤组培快繁的方法
技术领域
本发明属于组织培养技术领域，具体涉及一种紫花杯冠藤组培快繁的方法。
背景技术
紫花杯冠藤(Cynanchum purpureum)是萝藦科鹅绒藤属的植物，分布在俄罗斯、朝鲜以及中国大陆的河北等地，生长于海拔100米至670米的地区，一般生长在山地林中，属于直立草本植物，略为分枝而互生，茎被疏长柔毛，干后中空。花期5-6月，果期6月。
绒藤属植物在抗肿瘤、免疫调节、抗氧化以及镇痛、镇静、抗炎等方面具有较高的药用价值，很早就有人从中分离出C21甾体类、甾体类生物碱、黄酮类、萜类、苯类衍生物以及脂肪烷和脂肪酸类化合物等多种化学成分；对开发新药和寻找新药源都具有很大的现实意义。目前对于紫花杯冠藤的研究较少，更没有关于紫花杯冠藤组织培养方面的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，能够快速建立起紫花杯冠藤的组培快繁体系，可以实现紫花杯冠藤的快速增殖。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择及处理：选用带有腋芽的野外植株，用干净的剪刀剪下带有2个腋芽的茎段，把茎段用干净的封口袋保存，保存时间不超过两天并且不能沾水；
(2)外植体的消毒：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入2～4滴洗洁精，再加水冲洗2～3次至无泡沫，冲洗时间不能过长以免造成二次污染，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸0.5～2分钟，无菌水冲洗2～4次，用加两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠溶液消毒3～7分钟后用无菌水洗4～6次；再用加两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒5～15分钟，后用无菌水洗5～6次；
(3)接种培养：将茎段剪成1cm左右的小段，每段带两个腋芽，将其接种到接种培养基上；
(4)继代增殖培养：接种成功后将分化的芽接种到继代增殖培养基上进行继代增殖，每次继代30天左右；
(5)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根。
步骤(3)所述的接种培养基为MS+6-BA 0.05mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L。
步骤(4)所述的继代增殖培养基为MS+6-BA 1mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L。
步骤(5)所述的生根培养基为1/2MS+IBA 0.1～0.2mg/L+糖20g/L。
步骤(4)所述的继代增殖培养，如在继代过程中苗有细弱现象，则用权利要求3所述的继代增殖培养基和MS+6-BA 0.05mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L培养基交替使用培养以达到壮苗目的，每30天更换一次。
优选地，步骤(3)、(4)和(5)的培养条件均为：23±1℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx左右，pH值为6.2。
优选地，还包括组培苗移栽，具体如下：
组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗2d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵1000倍液或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防止病害的发生，移栽到经消毒的栽培基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％左右，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
优选地，所述的栽培基质用腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成。
优选地，步骤(2)所述外植体的消毒方法为：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入3滴洗洁净，再加水冲洗3次至无泡沫，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸1分钟，无菌水冲洗2次，用加入两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠消毒5分钟后用无菌水洗5次；再用加入两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒10分钟，后用无菌水洗6次。
本发明的有益效果是：
本发明通过系统的研究，对紫花杯冠藤各个培养阶段的培养基进行了优选，首次建立了紫花杯冠藤的组织培养体系，提供了一整套的采用紫花杯冠藤的茎段作为外植体进行培养的方法，可以生产整齐一致的紫花杯冠藤幼苗，为紫花杯冠藤的快速繁殖提供了有效的支持，为紫花杯冠藤的开发利用提供了技术保证，也为进一步探索紫花杯冠藤的基因工程、拓宽外植体材料等奠定了基础。
并且本发明培养过程速度快，再生频率较高，扩繁系数高达40倍以上，并且变异率较低，周期相对较短，能较好地保持紫花杯冠藤的遗传稳定性。
培养的组培苗移栽成活率高，达到85％以上。
附图说明
图1是本发明紫花杯冠藤经过继代增殖培养出来的苗生长状况。
图2是本发明紫花杯冠藤的生根情况。
图3是生根培养基激素过量时紫花杯冠藤的生长状况。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择及处理：选用带有腋芽的野外植株，野外采集外植体应避免二次污染，用干净的剪刀剪下带有2个腋芽的茎段，把茎段用干净的封口袋保存，保存时间不超过两天并且不能沾水；
(2)外植体的消毒：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入3滴洗洁精，再加水冲洗3次至无泡沫，然后将其在超净台中先用体积浓度为70％的酒精浸1分钟，无菌水冲洗2次，用加入两滴吐温的有效氯浓度为5％的次氯酸钠消毒5分钟后用无菌水洗5次；再用加入两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒10分钟，后用无菌水洗6次。
(3)接种培养：将茎段剪成1cm左右的小段，每段带两个腋芽，将其接种到接种培养基(MS+6-BA0.05mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L)上；培养约2-5天左右开始生长；
(4)继代增殖培养：接种成功后将分化的芽接种到继代增殖培养基(MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L)上进行继代增殖，每次继代30天左右；生长情况见图1，从图1可以看出，经过继代增殖的紫花杯冠藤生长状况良好，增殖系数平均超过40。
(5)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基(1/2MS+IBA 0.1mg/L+糖20g/L)上诱导生根，约20天左右生根，经过30天左右，其生根情况如图2所示，从图2可以看出，其生根状况良好，可以继续进行组培苗的移栽。
(6)组培苗移栽：组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗2d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵1000倍液或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防治病害的发生，移栽到经消毒的栽培基质(腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成)中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％左右，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。最终的移栽成活率达89％。
上述紫花杯冠藤组培快繁的方法中，步骤(3)、(4)和(5)的培养条件均为：23±1℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx左右，pH值为6.2。
实施例2
一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择及处理：选用带有腋芽的野外植株，野外采集外植体应避免二次污染，用干净的剪刀剪下带有2个腋芽的茎段，把茎段用干净的封口袋保存，保存时间不超过两天并且不能沾水；
(2)外植体的消毒：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入2滴洗洁精，再加水冲洗3次至无泡沫，冲洗时间不能过长以免造成二次污染，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸2分钟，无菌水冲洗4次，用加两滴吐温的有效氯质量浓度5％的次氯酸钠消毒7分钟后用无菌水洗4次；再用加两滴吐温的质量浓度为0.1％的升汞消毒5分钟，后用无菌水洗5次；
(3)接种培养：将茎段剪成1cm左右的小段，每段带两个腋芽，将其接种到接种培养基(MS+6-BA0.05mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L)上；培养约2-5天左右开始生长；
(4)继代增殖培养：接种成功后将分化的芽接种到继代增殖培养基上进行继代增殖，在继代过程中如有苗有细弱现象，则采用MS+6-BA1mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L培养基和MS+6-BA0.05mg/L+IBA 0.1mg/L+糖30g/L培养基交替使用培养以达到壮苗目的，每30天更换一次；
(5)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基(1/2MS+IBA 0.2mg/L+糖20g/L)上诱导生根，约20天左右生根，当根生长到3cm左右时出瓶，根生长过长、生根时间过长都会影响移栽成活。
(6)组培苗移栽：组培苗根长出2cm时出瓶，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗2d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵1000倍液或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防治病害的发生，移栽到经消毒的栽培基质(腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成)中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％左右，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％，移栽成活率为85％。
上述紫花杯冠藤组培快繁的方法中，步骤(3)、(4)和(5)的培养条件均为：23±1℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx左右，pH值为6.2。
对比例1
除了生根培养基的激素IBA的用量为0.3mg/L外，其余同实施例1。最终培养得到的组培苗生长状况见图3。
发明人经研究发现，生根培养基的激素IBA的用量超过0.2mg/L时，会长出较大的愈伤组织，并且生根较少，即使生根，也是附着在愈伤组织上，当出瓶时，所生的根还是留在培养基上，相当于移栽的苗不具有根，发明人经过筛选，选择了激素IBA的用量为0.1～0.2mg/L，可以有效的促进生根。

Claims (6)

1.一种紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)外植体的选择及处理：选用带有腋芽的野外植株，用干净的剪刀剪下带有2个腋芽的茎段，把茎段用干净的封口袋保存，保存时间不超过两天并且不能沾水；
(2)外植体的消毒：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入2～4滴洗洁精，再加水冲洗2～3次至无泡沫，冲洗时间不能过长以免造成二次污染，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸0.5～2分钟，无菌水冲洗2～4次，用加两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠溶液消毒3～7分钟后用无菌水洗4～6次；再用加两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒5～15分钟，后用无菌水洗5～6次；
(3)接种培养：将茎段剪成1cm的小段，每段带两个腋芽，将其接种到接种培养基上，所述的接种培养基为MS+6-BA0.05mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L；
(4)继代增殖培养：接种成功后将分化的芽接种到继代增殖培养基上进行继代增殖，每次继代30天，所述的继代增殖培养基为MS+6-BA1mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L；
(5)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA0.1～0.2mg/L+糖20g/L。
2.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(4)所述的继代增殖培养，如在继代过程中苗有细弱现象，则用所述的继代增殖培养基和MS+6-BA0.05mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L培养基交替使用培养以达到壮苗目的，每30天更换一次。
3.根据权利要求1或2所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(3)、(4)和(5)的培养条件均为：23±1℃，光照时间12小时/天，光照强度2000Lx，pH值为6.2。
4.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，还包括组培苗移栽，具体如下：
组培苗根长出2～3cm时出瓶，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗2d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵1000倍液或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，防止病害的发生，移栽到经消毒的栽培基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％，15d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间适当遮光，使光照强度为自然光的50％。
5.根据权利要求4所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，所述的栽培基质用腐殖土、园土和沙按照1∶1∶1的体积比混合而成。
6.根据权利要求1所述的紫花杯冠藤组培快繁的方法，其特征在于，步骤(2)所述外植体的消毒方法为：把步骤(1)得到的茎段放在烧杯中，先加入3滴洗洁净，再加水冲洗3次至无泡沫，然后将其在超净台中先用体积浓度70％的酒精浸1分钟，无菌水冲洗2次，用加入两滴吐温的质量浓度为5％的次氯酸钠消毒5分钟后用无菌水洗5次；再用加入两滴吐温的质量浓度0.1％的升汞消毒10分钟，后用无菌水洗6次。
CN201610073227.8A 2016-02-03 2016-02-03 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法 Expired - Fee Related CN105706925B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610073227.8A CN105706925B (zh) 2016-02-03 2016-02-03 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610073227.8A CN105706925B (zh) 2016-02-03 2016-02-03 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105706925A CN105706925A (zh) 2016-06-29
CN105706925B true CN105706925B (zh) 2018-05-08

Family

ID=56154546

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610073227.8A Expired - Fee Related CN105706925B (zh) 2016-02-03 2016-02-03 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105706925B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117016395A (zh) * 2023-09-22 2023-11-10 江西省林业科学院 一种芫花外植体组培繁育方法及培养基

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1559193A (zh) * 2004-02-20 2005-01-05 江苏省农业科学院 白首乌通过组织培养的快速繁苗方法
CN104798686A (zh) * 2015-05-02 2015-07-29 冯文杰 一种白首乌组培快繁方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1559193A (zh) * 2004-02-20 2005-01-05 江苏省农业科学院 白首乌通过组织培养的快速繁苗方法
CN104798686A (zh) * 2015-05-02 2015-07-29 冯文杰 一种白首乌组培快繁方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
昆明杯冠藤的组织培养与植株再生;徐霞等;《植物生理学通讯》;20091031;第45卷(第10期);第1009-1010页，尤其是第1-4节 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105706925A (zh) 2016-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105145352B (zh) 一种白芨种苗高效组培快繁技术
CN103858762B (zh) 一种金线莲组织培养快速增殖方法
CN103380730B (zh) 一种杜梨组培快繁方法
CN106577273B (zh) 一种铁甲秋海棠叶片离体再生体系建立的方法
CN102150624A (zh) 半夏属植物的组培快繁方法
CN104429971B (zh) 广东崖豆藤的组培育苗方法
CN101116424B (zh) 高效诱导培养百合小鳞茎的方法
CN102144556A (zh) 瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法
CN107155898A (zh) 一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法
CN105706880A (zh) 一种紫薯脱毒苗水培快繁的方法
CN102090329A (zh) 大马士革玫瑰组培苗移栽方法
CN105265320B (zh) 一种绵毛马兜铃的组织培养繁殖方法
CN105309317B (zh) 大叶千斤拔的组织培养繁殖方法
CN104303745A (zh) 一种玉簪组培苗瓶外生根的方法
CN104145814B (zh) 一种高盆樱桃（原变种）茎段组织培养获得再生植株的方法
CN111657151A (zh) 一种元宝枫快速成苗方法
CN113331059B (zh) 一种以鸟王茶树胚轴为外植体建立高效再生体系的方法
CN108077071A (zh) 穗花牡荆组织培养用培养基及快速繁殖方法
CN101731149A (zh) 一种利用组织培养技术快速繁殖云南萝芙木的方法
CN103843664B (zh) Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法
CN103155869A (zh) 甜樱桃砧木Colt组织培养方法
CN102232359B (zh) 双瓣茉莉的离体快速繁殖方法
CN105706925B (zh) 一种紫花杯冠藤组培快繁的方法
CN103798139B (zh) 一种以花瓣为外植体建立百合胚性愈伤再生体系的方法
CN106577280A (zh) 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20180508

Termination date: 20200203