CN105695554B - 一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法 - Google Patents

一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，包括：1)将水稻内生泛菌和小球藻在光照下进行第一轮菌藻共培养，培养结束后，得到第一轮菌藻共培养液；2)在第一轮菌藻共培养液中再补加水稻内生泛菌，在光照下进行第二轮菌藻共培养，培养结束后，得到第二轮菌藻共培养液；3)对第二轮菌藻共培养液经离心后得到菌藻细胞沉淀，之后经后处理得到菌藻细胞干品；4)将小球藻细胞干品粉碎，得到菌藻粉，之后采用有机溶剂提取液提取叶黄素，得到叶黄素。本发明通过应用水稻内生泛菌和小球藻进行菌藻共培养提高小球藻细胞的生长速率和生物量，同时提高藻细胞的叶黄素含量，在小球藻的应用开发方面效益显著，前景广阔。

Description

一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法
技术领域
本发明涉及叶黄素制备提取领域，具体涉及一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法。
背景技术
叶黄素(lutein)，又名黄体素，是含氧类胡萝卜素——类叶黄素(xanthophyl)中的一种，广泛存在于花卉、水果蔬菜等植物中，作为一种天然黄色素，叶黄素可用作食品、医药和化妆品的色素添加剂。此外，叶黄素能激发免疫反应，提高机体免疫力，防治年龄相关性视黄斑退化引起的视力下降和失明等生理活性(吴正云,等,微藻生物合成叶黄素的研究进展.食品科学,2010,31(01):268-273)。美国从20世纪70年代起开始从万寿菊中提取叶黄素，1995年美国食品药品监督管理局(FDA)批准了叶黄素作为食品补充剂用于食品和饮料。我国卫生部也于2007年批准叶黄素用于焙烤食品、饮料、果冻、果酱以及冷冻食品。目前具有生物功能活性的叶黄素均来自植物。但植物种植占地面积大，成本高，周期长，受气候条件影响大，导致叶黄素的生产成本较高。
小球藻是一种单细胞绿藻，其环境适应性强，易于大规模培养，细胞中含有丰富的营养物质，特别是蛋白核小球藻具有长期安全食用的历史，其中人工培养的蛋白核小球藻已被批准作为新食品资源。小球藻尤以富含叶黄素(lutein)而受到关注(吴正云，等，小球藻异养生长及叶黄素合成量影响因子的优化研究.上海交通大学学报(农业科学版)，2007,25(1)：6-11)
新兴的菌藻共生技术有望突破当前小球藻开发方面存在的产率低、收获难、成本高等技术限制，大大拓宽小球藻的生产应用范围。已有研究表明微藻和微生物之间存在从寄生到共生等广泛的互作现象，某些微生物能通过分泌生长激素和信号调节物质促进藻细胞生长，提高藻细胞生物量和生化组分的积累[Ueda H,et al.Bacterial communitiesconstructed in artificial consortia of bacteria and Chlorellavulgaris.Microbes Environment,2010,25(1):36-40.]。但不同种类的细菌对小球藻生长和代谢的影响不同，有的促进，有的抑制，效果差别很大。通过筛选获得优良菌株作为小球藻的共生菌，人工构建菌藻共生体系一方面有望使藻细胞生长速率大幅提高(Park Y,etal.Growth promotion of Chlorella ellipsoidea by co-inoculation withBrevundimonas sp.isolated from the microalga.Hydrobiologia,2008,598(1):219-228；Kim B H,et al.Role of rhizobium,a plant growth promoting bacterium,inenhancing algal biomass through mutualistic interaction.Biomass andBioenergy,2014,69(3):95-105.)，并可能通过利用共生菌分泌产生的生物絮凝剂的作用提高藻细胞的絮凝率，大幅降低藻细胞的采收成本(Lee J,et al.Microalgae-associatedbacteria play a key role in the flocculation of Chlorellavulgaris.Bioresource Technology,2013,131(2):195-201；施春阳,等.微生物絮凝剂的研究和应用进展[J].污染防治技术,2013,26(3):48-51.)。
植物内生菌是能够定殖在健康植物内，并与宿主植物建立和谐共生关系的一类微生物。水稻植株含有许多内生微生物，是重要的内生细菌资源，来源于水稻植株的内生泛菌可以显著促进宿主水稻的生长，提高其生物量、叶绿素及磷含量的生物学作用(FengY,etal.Rice endophyte Pantoea agglomeransYS19promotes hostplant growth andaffects allocations of hostphotosynthates.Journal of Applied Microbiology,2006,100(5):938-945.刘佳,等.内生成团泛菌HAUM1对宿主水稻的定殖及促生作用.湖北农业科学,2011,50(23):4820-4824.)。由于小球藻与植物细胞一样具有叶绿体，能够进行光合作用，其生化代谢特征与植物具有相似性，理论上，对植物具有代谢调节作用的植物内生菌也能影响小球藻的生长和代谢活动，但迄今国内外未见采用包括水稻内生菌在内的植物内生菌促进小球藻生长及生化组分合成积累的技术研究和应用。
已有研究表明，通气量和葡萄糖浓度等对小球藻比生长速率和细胞的叶黄素含量的影响趋势大体相同，即有利于提高小球藻比生长速率的条件也同时有利于增加细胞的叶黄素含量，这可能是由于叶黄素为初级类胡萝卜素，其合成在很大程度上与细胞生长相关(Zhang D H,et al.Composition and accumulation of secondary carotenoids inChlorococcum sp.[J].J Appl Phycol,1997,9(2):147-155；吴正云，等，小球藻异养生长及叶黄素合成量影响因子的优化研究.上海交通大学学报(农业科学版)，2007,25(1)：6-11)。
本发明针对当前小球藻工业化生产中藻细胞生产效率低，叶黄素制备成本较高的关键技术限制，开发一种应用水稻内生泛菌促进小球藻生长速率和提高叶黄素产量的人工菌藻共培养技术。
发明内容
本发明提供了一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，通过应用水稻内生泛菌和小球藻进行菌藻共培养提高小球藻细胞的生长速率和生物量，同时提高藻细胞的叶黄素含量。
一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，包括以下步骤：
1)将第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻在光照下进行第一轮菌藻共培养，培养结束后，得到第一轮菌藻共培养液；
2)在第一轮菌藻共培养液中再补加第二次加入的水稻内生泛菌，在光照下进行第二轮菌藻共培养，培养结束后，得到第二轮菌藻共培养液；
3)对第二轮菌藻共培养液经离心后得到菌藻细胞沉淀，之后经后处理得到菌藻细胞干品；
4)将小球藻细胞干品粉碎，得到菌藻粉，之后采用有机溶剂提取液提取叶黄素，得到叶黄素。
以下作为本发明的优选技术方案：
步骤1)中，所述的第一轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为6～12天。进一步优选，所述的第一轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀4次直至培养周期结束，培养周期为8天。
所述的第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻的菌藻比为1～10000：1，在一定范围内，水稻内生泛菌的比例越高，越能够促进小球藻的生长，越能够提高藻细胞的叶黄素含量。进一步优选，所述的第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻的菌藻比为10～1000：1。再进一步优选，所述的第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻的菌藻比为100～1000：1。
所述的水稻内生泛菌可采用市售产品，可采用中国农业微生物保藏中心(ACCC)出售的编码为10454的水稻内生泛菌菌种。
所述的小球藻可以为蛋白核小球藻，也可采用市售产品，可采用中国科学院野生生物种质库淡水藻种库(FACHB)市售的编号为FACHB-1222的蛋白核小球藻。
步骤2)中，所述的第二轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为2～12天。进一步优选，所述的第二轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀4次直至培养周期结束，培养周期为4～8天。
所述的第二次加入的水稻内生泛菌和第一次加入的水稻内生泛菌的比为0.25～4：1。进一步优选，所述的第二次加入的水稻内生泛菌和第一次加入的水稻内生泛菌的比为1：1，能够更好地促进小球藻的生长，越能够提高提高藻细胞的叶黄素含量。
步骤3)中，所述的离心为：6000～10000r/min离心5～20min，进一步优选，所述的离心为：8000r/min离心10min。作为优选，所述的后处理包括：洗涤、离心和干燥，将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经6000～10000r/min离心5～20min后收集，之后在30℃～50℃低温条件下烘干，得到小球藻藻细胞干品。进一步优选，将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经8000r/min离心10min后收集，之后在37～40℃低温条件下烘干，得到菌藻细胞干品。
步骤4)中，所述的有机溶剂提取液为甲醇-二氯甲烷提取液，所述的甲醇-二氯甲烷提取液由体积比1～3：1的甲醇和二氯甲烷组成。进一步优选，所述的甲醇-二氯甲烷提取液由体积比2：1的甲醇和二氯甲烷组成。
所述的菌藻粉的质量与有机溶剂提取液的体积为1g：25～60m1。进一步优选，所述的菌藻粉的质量与有机溶剂提取液的体积为1g：40m1。
本发明补菌增藻技术的机理在于：在菌藻互作的共培养过程中，由于采用的是小球藻适合的培养基和培养条件，共生细菌能够促进微藻的生长，相反，微藻可能产生细菌生长抑制物质，如绿藻素等抑制菌细胞的增殖(Choi O,et al.Nitrifying bacterialgrowth inhibition in the presence of algae and cyanobacteria.Biotechnologyand Bioengineering,2010,107(6):1004-1011.)，如此随着培养周期的延长，菌藻培养液中藻细胞呈逐渐增长趋势，而菌细胞数量则逐渐衰减，会越来越少，最后菌藻培养体系中只有极少量的菌细胞存活(Guo Z,Tong Y W.The interactions between Chlorellavulgaris and algal symbiotic bacteria under photoautotrophic andphotoheterotrophic condition.Journal of Applied Phycology,2014,26(3):1483-1492.)。因此，菌对藻的增殖促进作用在一定范围内随接种菌藻比的增大而增大，而且在补菌初期的增藻效果比后期更为明显。作为优选，本发明初始接种菌藻比为1000：1，首轮培养周期为8天，补菌后培养周期为4-8天，以达到最佳技术效果。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明中，由于水稻内生泛菌属植物内生菌，安全无毒，采用本发明技术获得的水稻内生泛菌-小球藻的混合细胞产品能直接作为原料应用于叶黄素的提取和产品制备，从而达到降低小球藻制备叶黄素的工业生产成本。菌藻共培养周期结束后，离心收集菌藻细胞沉淀，洗涤干燥后用于叶黄素提取制备。本发明技术操作简单，成本低廉，具有快速增加小球藻细胞生长量和提高叶黄素产率的显著效果，以蛋白核小球藻藻种和两轮加菌共培养为例，周期分别为12和16天时，所收获的菌藻共培养液中藻细胞浓度分别同比对照增加93.97倍和103.93倍，菌藻细胞干重产率分别同比纯藻培养对照组增加65.55和72.36倍，菌藻细胞叶黄素产率分别同比纯藻培养对照组增加68.67和75.00倍，提高幅度极为显著。本发明所述的方法能通过快速小球藻生长速率而达到提高小球藻的叶黄素产率的技术效果，在小球藻的应用开发方面效益显著，前景广阔。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。给出的实施例仅为了阐释本发明，而不是为了限制本发明的应用范围。以下出现的百分数，如没有特别说明，均为质量百分数。
实施例一：
1)采用水稻内生泛菌菌种购自中国农业微生物保藏中心(ACCC)，编码为10454，菌种按常规方法活化挑单菌落后，接种到含10mL LB液体培养基的三角瓶中，进行扩增培养,将扩增培养16h后处于对数生长期的菌液按菌液：液体LB培养基体积比＝1：10接种后进行二次扩培，培养条件为37℃，200rpm恒温摇床中黑暗培养。连续扩培三次，培养条件为37℃，200rpm恒温摇床中黑暗培养。第三次扩培10h至OD600＝1作为菌藻共培养的种子细胞，根据生长曲线，菌生长处于对数期，采用常规平板计数法测定培养液中的有效活菌数(CFU，Colony-Forming Units)，此时菌液浓度约为2×108CFU/mL。根据菌藻共培养所需菌细胞数量，取适量种子菌液于室温25℃、8000r/min离心10min，沉淀用3倍体积无菌水洗涤两次，再离心10min收集菌体细胞，加入与种子菌液等体积的BG11液体培养基悬浮备用。
2)采用蛋白核小球藻藻种购自中国科学院野生生物种质库淡水藻种库(FACHB)，具体为，编号为FACHB-1222。取蛋白核小球藻原藻液，按10-2，10-3，10-4进行梯度稀释，取稀释藻液100μL涂布于BG11固体培养基(为BG11液体培养基中添加2％琼脂)，培养皿置于光照培养箱中培养，7天后，BG11培养基中长出深绿色的单藻落，用无菌枪头挑取单藻落到含10mL BG11液体培养基的三角瓶中，进行扩增培养。将扩增培养7天后处于对数生长期的藻细胞按藻液：液体BG11培养基体积比＝1：10接种后进行二次扩培，如此共扩培3次，每次培养7天。培养条件为：28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，每天早晚各摇动一次。第3次扩增培养结束后，应用常规血球板计数法计算细胞培养液中的小球藻细胞浓度为2.6×107个cell/mL，作为小球藻种子细胞培养液。
3)同时设定菌藻共培养组和纯藻培养对照组，其中菌藻共培养组蛋白核小球藻种子细胞初始接种浓度为2×105个cell/mL，水稻内生泛菌种子细胞初始接种浓度为2×108CFU/mL，如此菌藻细胞接种比为1000:1，混匀后进行首轮菌藻共培养，菌藻共培养组设A和B两个试验组，每组500ml×3瓶。纯藻培养对照组仅接种蛋白核小球藻种子细胞，初始接种浓度为2×105个cell/mL。纯藻培养对照组(Control)设CA和CB两个试验组，每组为500ml×3瓶，培养条件均为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀4次，培养周期为8天。
4)共培养第9天，按菌藻共培养初始接种的水稻内生泛菌细胞浓度2×108CFU/mL补接种入水稻内生泛菌种子细胞，进行第二轮菌藻共培养，培养条件均为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀4次，其中：步骤3)中菌藻共培养试验组A和纯藻培养对照组CA的第二轮培养周期设定为4天；菌藻共培养试验组B和纯藻培养对照组CB的第二轮培养周期设定为8天。
5)两轮菌藻共培养结束后，取培养液1ml采用血球计数板法测定培养液中的蛋白核小球藻细胞数目，计算蛋白核小球藻的藻细胞浓度(个cell/mL)。
结果见表1：
6)将各组培养液8000r/min离心10min，收集菌藻细胞沉淀，按菌藻细胞沉淀体积和无菌蒸馏水体积比(1g:10mL)加入无菌蒸馏水震荡重悬充分洗涤后，再次8000r/min离心10min，如此重复洗涤3次，最后收集干净的菌藻细胞沉淀，并于37-40℃低温烘干得到菌藻细胞干品，对菌藻细胞干品进行称重，计算菌藻细胞干重得率(mg/L)和菌藻细胞干重产率(mg/L·d)。
结果见表1：
表1菌藻共培养对蛋白核小球藻藻细胞生长速率和干重产率的影响
注：表中数据为三组数据平均值。
菌藻细胞干重产率(mg/L·d)＝纯藻(菌藻)细胞干重得率(mg/L)/培养总天数(d)；
由此实施例可知，采用本发明的提高叶黄素产量的人工菌藻共培养技术，按水稻内生泛菌与蛋白核小球藻的菌藻接种比为1000:1时，经过两轮加菌共培养，培养周期分别为12和16天时，所收获的菌藻共培养液中藻细胞浓度分别同比对照增加93.97倍和103.93倍，菌藻细胞干重产率分别同比纯藻培养对照组增加65.55和72.36倍，虽然菌藻细胞干重指标中包含部分水稻内生泛菌的质量，但本实施例中藻细胞浓度指标证实了菌藻共培养组藻细胞确实大幅增加，可见水稻内生泛菌共培养对促进蛋白核小球藻的生长和提高细胞收获量效果极为显著。其中第二轮培养周期越长，技术效果越明显。
实施例二：
为了验证本发明的人工菌藻共培养技术对提高小球藻叶黄素产量的技术效果，按如下步骤操作：
1)将上述实施例一纯藻培养对照组(CA和CB)和相应菌藻共培养试验组(A和B)收获的藻细胞和菌藻细胞干品，各准确称取藻粉0.1g，按料液比(g:ml)＝1：40加入提取液(甲醇：二氯甲烷体积比＝2:1)4ml,室温25℃条件下，置于槽式超声波发生器水槽中于320W功率水浴处理破碎细胞10分钟，间歇5分钟，再破碎细胞10分钟，然后静置于40℃恒温水槽中提取10分钟，然后6000r/min离心10min，分别收集上清叶黄素提取液和细胞碎渣沉淀。对细胞碎渣沉淀加入提取液重复提取两次，合并三次提取上清即得总叶黄素提取液，量取提取液总体积。
2)采用高效液相色谱法测定提取液中叶黄素的含量，具体实验操作方法参照文献(桂林，等.高效液相色谱法测定蛋白核小球藻中的叶黄素.食品与发酵工业，2005,31(11)：95-97)，根据标准曲线回归方程计算藻细胞和菌藻细胞叶黄素得率(mg/L)、含量(mg/g)和产率(mg/L·d)，结果见表2：
表2
注：表中数据为三组数据平均值。
采用本发明的提高叶黄素产量的人工菌藻共培养技术，按水稻内生泛菌与蛋白核小球藻的菌藻接种比为1000:1时，经过两轮加菌共培养，培养周期分别为12和16天时，所收获的菌藻细胞叶黄素含量同比对照有所增加，增加幅度分别为14.26％和12.31％，与对照差异不显著；但菌藻细胞叶黄素产率分别同比纯藻培养对照组增加68.67和75.00倍，提高幅度极为显著，这主要是由于藻细胞收获生物量增加的结果，其中第二轮培养周期越长，藻叶黄素产率越高，技术效果越明显。

Claims (8)

1.一种通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻在光照下进行第一轮菌藻共培养，培养结束后，得到第一轮菌藻共培养液；所述的第一次加入的水稻内生泛菌和小球藻的菌藻比为1～10000：1；
2)在第一轮菌藻共培养液中再补加第二次加入的水稻内生泛菌，在光照下进行第二轮菌藻共培养，培养结束后，得到第二轮菌藻共培养液；所述的第二次加入的水稻内生泛菌和第一次加入的水稻内生泛菌的比为0.25～4：1；
3)对第二轮菌藻共培养液经离心后得到菌藻细胞沉淀，之后经后处理得到菌藻细胞干品；
4)将小球藻细胞干品粉碎，得到菌藻粉，之后采用有机溶剂提取液提取叶黄素，得到叶黄素。
2.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的小球藻为蛋白核小球藻。
3.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的第一轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为6～12天。
4.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤2)中，所述的第二轮菌藻共培养的条件为：培养条件均为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为2～12天。
5.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的离心为：6000～10000r/min离心5～20min。
6.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的后处理包括：将小球藻细胞沉淀加入蒸馏水重悬洗涤后，经6000～10000r/min离心5～20min后收集，之后在30℃～50℃低温条件下烘干，得到小球藻藻细胞干品。
7.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤4)中，所述的有机溶剂提取液为甲醇-二氯甲烷提取液，所述的甲醇-二氯甲烷提取液由体积比1～3：1的甲醇和二氯甲烷组成。
8.根据权利要求1所述的通过菌藻共培养提高叶黄素产量的方法，其特征在于，步骤4)中，所述的菌藻粉的质量与有机溶剂提取液的体积为1g：25～60m1。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN106399111B (zh) * 2016-11-22 2019-06-07 福州大学 一种同步提高自养微藻的叶黄素和碳水化合物产量的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103194459A (zh) * 2013-04-08 2013-07-10 国家海洋局第三海洋研究所 高生物量和/或高叶黄素产量转基因小球藻及其制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103194459A (zh) * 2013-04-08 2013-07-10 国家海洋局第三海洋研究所 高生物量和/或高叶黄素产量转基因小球藻及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bacterial communities constructed in artificial consortia of bacteria and Chlorella vulgaris;H Ueda等;《Microbes & Environments》;20100101;第25卷(第1期);全文 *
不同氮源形态和植物激素对小球藻USTB01生长及叶黄素含量的效应;王素琴等;《科技导报》;20050630;第23卷(第12期);第2.2、2.4段 *
小球藻与优势共栖异养细菌间的相互作用及其对细菌群体感应信号分子的响应;毕相东;《中国优秀博士学位论文基础科学辑》;20140115;第36页3.3、第59页最后1行-第60页第1行、第55页2.1 *

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