CN105661491A - 一种桃胶保健品及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种桃胶保健品及其制备方法和应用。本发明提供的桃胶保健品包括冠突散囊菌和/或块菌发酵液，所述冠突散囊菌和/或块菌发酵液通过将冠突散囊菌和/或块菌接种于含有葡萄糖10-100g/L，桃胶10-100g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，维生素B1？20-80mg/L的发酵培养基中发酵制得。本发明提供的桃胶保健品的制备方法简易、稳定、高效，本发明将桃胶加入培养基中，并采用真菌进行发酵制成保健产品；药理实验表明，所述桃胶保健品将具有防治糖尿病、抑制肝癌细胞增生、增强免疫力的作用，具有极高的经济价值和使用价值。
Description
技术领域
本发明涉及食品保健领域，具体涉及一种桃胶保健品及其制备方法和应用。
背景技术
桃胶(peachresin)，是桃树(蔷薇科植物)的树干受机械损伤(如虫咬、切伤等)或致病后分泌出来的胶质半透明物质。其主要成分是多糖、蛋白质等，其他物质含量极少。其多糖由半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸等成分组成。以多糖为主要成分的桃胶对糖尿病患者具有降血糖和降血脂的作用，还可以明显提高胰岛素敏感性，可作为辅助糖尿病治疗的口服类药物。近几年来，半乳聚糖尤其是硫酸酯化半乳聚糖因其展现出独特的流变学特性及抗凝血、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗菌、抗哮喘等生物学活性以及具有细胞损伤或感染分子信号功能备受关注，成为糖生物学新的研究热点。
块菌(Truffle)，又称块菇、松露，属于子囊菌亚门，是一类与树木共生的外生菌根型珍稀名贵的食用菌，具有极高的使用价值和经济价值。有文献报道显示，可以从块菌中提取蛋白结合多糖，即块菌多糖，具有抗肿瘤(包括肝癌)、降血糖和调节免疫功能的作用。
冠突散囊菌为灰绿曲霉菌，是茯砖黑茶生产过程中的优势菌，其子囊孢子金黄色，形似米兰，在成品茯砖中肉眼可见，俗称“金花”。研究表明，冠突散囊菌丝体富含多糖和各种氨基酸，其中包括所有的必需氨基酸，具有抗氧化、促消化、降脂减肥、抑菌、抗癌等作用。目前，见报道的关于冠突散囊菌的应用研究多是用于提升黑茶的品质和价值，冠突散囊菌用于生产发酵型保健饮料的相关报道比较少。
综上所述，块菌、冠突散囊菌以及桃胶都具有多糖成分，具有降血糖的作用，单独的块菌、冠突散囊菌已证明具有抗肿瘤的作用，而桃胶多糖用于抗肿瘤的报道比较少，特别是将桃胶与上述两种真菌中的有益于人体健康的成分融合为一体，制成保健产品，进一步提升其保健功能，还尚未见到报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种桃胶保健品及其制备方法和应用。所述桃胶保健品的制备方法简易、稳定、高效，获得的桃胶保健品具有提高免疫力、降血糖的作用，其具有极高的使用价值和经济价值。
第一方面，本发明提供了一种桃胶保健品，所述桃胶保健品包括冠突散囊菌和/或块菌发酵液，所述冠突散囊菌和/或块菌发酵液为将冠突散囊菌和/或块菌接种于含有桃胶的培养基中发酵制得，其中，所述的有桃胶的培养基包括：葡萄糖10-100g/L，桃胶10-100g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，维生素B120-80mg/L。
优选地，所述冠突散囊菌和/或块菌发酵液中，按重量百分比计，多糖含量为0.8-6％。
优选地，所述桃胶包括但不限于通过将原桃胶晒干，粉碎后制得桃胶粉。
第二方面，本发明提供了一种桃胶保健品的制备方法，包括如下步骤：
将冠突散囊菌和/或块菌接种于下述发酵培养基：葡萄糖10-100g/L，桃胶10-100g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，维生素B120-80mg/L，调节pH值为4.0-6.5，在18-30℃条件下培养1-3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得桃胶保健品。
优选地，所述桃胶保健品中，按重量百分比计，多糖含量为0.8-6％。
优选地，所述桃胶包括但不限于通过将原桃胶晒干，粉碎后制得。
优选地，本发明第一方面所述的桃胶保健品为采用如第二方面所述的桃胶保健品的制备方法所制备。
第三方面，本发明提供了一种如第一方面所述的桃胶保健品或如第二面所述的桃胶保健品的制备方法在制备防治糖尿病药物中的应用。
第四方面，本发明提供了一种如第一方面所述的桃胶保健品或如第二面所述的桃胶保健品的制备方法在制备防治肝癌药物中的应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为本发明的几个具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。
下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖85g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁1.5g/L，蛋白胨5g/L，调pH值为5.5，在28℃条件下培养3天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖30g/L，桃胶70g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁3g/L，维生素B150mg/L，调节pH值为5.5，在25℃条件下培养2天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法(二硝基水杨酸法)测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为4％。
实施例2
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖20g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，蛋白胨1g/L，调pH值为4.0，在20℃条件下培养1天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和/或块菌的种子培养物；
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖10g/L，桃胶10g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1g/L，维生素B120mg/L，调节pH值为4.0，在18℃条件下培养1天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为2.4％。
实施例3
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖70g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，蛋白胨5g/L，调pH值为5.0，在25℃条件下培养2天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖100g/L，桃胶100g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁2g/L，维生素B160mg/L，调节pH值为5.5，在27℃条件下培养2天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为6％。
实施例4
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖120g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁5g/L，蛋白胨10g/L，调pH值为6.0，在30℃条件下培养4天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖20g/L，桃胶70g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁1g/L，维生素B140mg/L，调节pH值为6.0，在22℃条件下培养1天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为4.3％。
实施例5
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖100g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁2g/L，蛋白胨7g/L，调pH值为5.5，在23℃条件下培养2天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖40g/L，桃胶60g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁5g/L，维生素B180mg/L，调节pH值为6.5，在30℃条件下培养3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为3.1％。
实施例6
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖50g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁2.5g/L，蛋白胨3g/L，调pH值为4.5，在21℃条件下培养2天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖60g/L，桃胶100g/L，磷酸二氢钾4g/L，硫酸镁4g/L，维生素B150mg/L，调节pH值为5.5，在25℃条件下培养2天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为4.6％。
实施例7
一种原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌和块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖85g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁1g/L，蛋白胨4g/L，调pH值为5.5，在28℃条件下培养3天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌和块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖80g/L，桃胶50g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁3g/L，维生素B150mg/L，调节pH值为6.0，在27℃条件下培养3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌和块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为3.8％。
实施例8
一种原料含块菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将块菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖85g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁1.5g/L，蛋白胨5g/L，调pH值为5.5，在28℃条件下培养3天，过滤，灭菌，获得块菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖30g/L，桃胶70g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁3g/L，维生素B150mg/L，调节pH值为5.5，在25℃条件下培养2天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含块菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含块菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为3.7％。
实施例9
一种原料含冠突散囊菌的桃胶保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将冠突散囊菌接种于下述液体种子培养基：蔗糖85g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁1.5g/L，蛋白胨5g/L，调pH值为5.5，在28℃条件下培养3天，过滤，灭菌，获得冠突散囊菌的种子培养物。
(2)将步骤(1)所得的种子培养物接种于下述发酵培养基：葡萄糖30g/L，桃胶70g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁3g/L，维生素B150mg/L，调节pH值为5.5，在25℃条件下培养2天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含冠突散囊菌的桃胶保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌的桃胶保健饮料中，多糖含量为3.5％。
实施例10
为了进一步说明本发明的有益效果，重复实施例8的步骤，将桃胶替换成蛋白胨，制得原料含块菌的保健饮料。经DNS法测定，所述原料含块菌的保健饮料中，多糖含量为1.2％。
实施例11
为了进一步说明本发明的有益效果，重复实施例9的步骤，将桃胶替换成蛋白胨，制得原料含冠突散囊菌的保健饮料。经DNS法测定，所述原料含冠突散囊菌的保健饮料中，多糖含量为0.8％。
实施例12
药理实验--糖尿病
药物制备：分别将实施例1-11所制备的桃胶保健饮料浓缩至浓度为0.5g/ml(即，1ml中含有0.5g干物质，干物质为饮料干燥后的干燥物，含水量不超过5％)，分装与灭菌试管中，4℃冰箱保存备用。
实验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重20-24g，5-6周龄，由山西医科大学实验动物中心提供。
糖尿病实验动物造模：采用高脂饲料喂养，适应一周后，禁食12h，用生理盐水将四氧嘧啶新鲜配制成2％四氧嘧啶溶液(冰上操作)，按120mg/kg分3天进行腹腔注射，72h后尾静脉针刺取血，采用罗康全活力血糖仪测小鼠禁食12h空腹血糖，挑选血糖值在11.1-25mmol/L之间的小鼠为糖尿病小鼠130只。
分组实验：将上述糖尿病小鼠分为13组，每组10只，雌雄各半，作为造模组，造模组中，其中十二组为实验组，一组为对照组，分笼饲养，自由摄食与饮水；另外，选取10只正常小鼠，雌雄各半，作为正常组，分笼饲养，自由摄食与饮水。采用灌胃口服给药，每日两次，三周后，尾静脉针刺取血，采用罗康全活力血糖仪检测小鼠的禁食12h的血糖浓度，并观察小鼠生活状态，包括小鼠外部特征变化及死亡情况；计算出小鼠平均血糖浓度，分组实验操作如表1所示。
表1实验分组
实验结果如表2所示，由表2可知，与对照组2相比，实施例1-11饮料制备的药物以及含70g/L桃胶的生理盐水对糖尿病均能显著降低血糖，这表明桃胶饮料所制的药物具有降血糖的作用；其中，实施例1-7饮料所制药物(原料含桃胶、冠突散囊菌和块菌)中，实施例3饮料所制药物的降血糖效果最好，给药后，小鼠的平均血糖浓度为6.87mmol/L，最接近正常组小鼠。
实施例1、8、9、10、11饮料所制药物以及含70g/L桃胶的生理盐水中，实施例1饮料所制药物的降血糖效果最好，其次是实施例8饮料所制药物(原料含桃胶和块菌)和实施例9饮料所制药物(原料含桃胶和冠突散囊菌)的实验组，给药后，小鼠的平均血糖浓度分别为8.65和8.98mmol/L，而，实施例10饮料所制药物(原料含块菌)、实施例11饮料制备的药物(原料含冠突散囊菌)以及含70g/L桃胶的生理盐水的实验组的疗效明显低于上述三组，说明冠突散囊菌和块菌发酵产生的真菌多糖和桃胶多糖能协同抑制血糖，有助于增强所述保健品的防治糖尿病的效果。
表2桃胶饮料制备的药物对血糖浓度的影响
实施例13
药理实验--肝癌
药物制备：分别将实施例1以及实施例8-12所制备的桃胶保健饮料浓缩至浓度为0.5g/ml(即，1ml中含有0.5g干物质，干物质为饮料干燥后的干燥物，含水量不超过5％)，分装与灭菌试管中，4℃冰箱保存备用。
实验动物：昆明种小鼠70只，雌雄各半，体重18-22g，5-6周龄，由山西医科大学实验动物中心提供。
实验细胞：肝癌HepG2细胞株，购于南方医科大学，液氮保存。
肝癌实验动物：实体瘤：肝癌HepG2细胞株昆明小鼠体内连续传代3代后，抽取接种7天左右种鼠腹水，呈乳白色，D-Hanks液洗涤离心(800r/min×5min)3次，调整细胞浓度至1.0×107cfu/ml，台盼蓝拒染法检测存活率不小于95％，将细胞悬液注射至健康小鼠右腋皮下，每鼠0.2ml。全程严格无菌操作，40min内完成。
分组实验：将实验动物所及分为13组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养，自由摄食与饮水，其中的十二组为实验组，一组为对照组。采用灌胃口服给药，每日一次，连续三周，观察小鼠生活状态，包括小鼠外部特征变化及死亡情况。给药结束后，第二天处死小鼠，完整剥离肿瘤组织，电子天平称重，计算平均瘤重及抑瘤率，抑瘤率按如下计算公式计算：抑瘤率/％＝(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％，分组实验操作如表3所示。
表3实验分组
| 组别 | 动物数量/只 | 给药样品名称 | 给药量/ml |
| 1 | 10 | 实施例1饮料所制药物 | 5 |
| 2 | 10 | 实施例2饮料所制药物 | 5 |
| 3 | 10 | 实施例3饮料所制药物 | 5 |
| 4 | 10 | 实施例4饮料所制药物 | 5 |
| 5 | 10 | 实施例5饮料所制药物 | 5 |
| 6 | 10 | 实施例6饮料所制药物 | 5 |
| 7 | 10 | 实施例7饮料所制药物 | 5 |
| 8 | 10 | 实施例8饮料所制药物 | 5 |
| 9 | 10 | 实施例9饮料所制药物 | 5 |
| 10 | 10 | 实施例10饮料所制药物 | 5 |
| 11 | 10 | 实施例11饮料制备的药物 | 5 |
| 12 | 10 | 含70g/L桃胶的生理盐水 | 5 |
| 对照组 | 10 | 生理盐水 | 5 |
实验结果如表4所示，由表4可知，与对照组相比，实施例1-11饮料制备的药物以及含70g/L桃胶的生理盐水对小鼠HepG2肝癌都具有抑制效果，其中，实施例1-7饮料所制药物中，实施例3饮料所制药物(原料含桃胶、冠突散囊菌和块菌)的抑瘤效果最好，抑瘤率高达59.64％。
实施例1、8、9、10、11以及含70g/L桃胶的生理盐水中，实施例1所制药物的抑瘤率仍然高于其他组，实施例8饮料所制药物(原料含桃胶和块菌)、实施例9饮料所制药物(原料含桃胶和冠突散囊菌)、实施例10饮料所制药物(原料含块菌)、实施例11饮料制备的药物(原料含冠突散囊菌)以及含70g/L桃胶的生理盐水的抑瘤率分别为39.26％、8.89％、27.46％、3.64％、2.26％，都低于实施例1饮料所制药物的抑瘤效果，说明冠突散囊菌和块菌发酵产生的真菌多糖和桃胶多糖对小鼠HepG2移植瘤具有协同抑制作用，有助于增强所述桃胶保健品的抗肿瘤效果。
表4桃胶饮料制备的药物对小鼠体重及肺癌瘤重的影响
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (7)
1.一种桃胶保健品，其特征在于，所述桃胶保健品包括冠突散囊菌和/或块菌发酵液，所述冠突散囊菌和/或块菌发酵液为将冠突散囊菌和/或块菌接种于含有桃胶的培养基中发酵制得，其中，所述的有桃胶的培养基包括：葡萄糖10-100g/L，桃胶10-100g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，维生素B120-80mg/L。
2.如权利要求1所述的桃胶保健品，其特征在于，所述冠突散囊菌和/或块菌发酵液中，按重量百分比计，多糖含量为0.8-6％。
3.如权利要求1所述的桃胶保健品，其特征在于，所述桃胶包括但不限于通过将原桃胶晒干，粉碎后制得的桃胶粉。
4.一种桃胶保健品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将冠突散囊菌和/或块菌接种于下述发酵培养基：葡萄糖10-100g/L，桃胶10-100g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，维生素B120-80mg/L，调节pH值为4.0-6.5，在18-30℃条件下培养1-3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得桃胶保健品。
5.一种桃胶保健品，其特征在于，为采用如权利要求4所述的桃胶保健品的制备方法所制备。
6.一种如权利要求1所述的桃胶保健品或如权利要求4的桃胶保健品的制备方法在制备防治糖尿病药物中的应用。
7.一种如权利要求1所述的桃胶保健品或如权利要求4的桃胶保健品的制备方法在制备防治肝癌药物中的应用。
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