CN105167061B - 一种马铃薯保健品及其制备方法和应用 - Google Patents

一种马铃薯保健品及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种马铃薯保健品及其制备方法和应用，本发明提供的马铃薯保健品的原料中红缘拟层孔菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.2‑1倍，块菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.5‑2倍，药理实验表明，所述的马铃薯保健品具有抑制肝癌细胞和胃癌细胞增生、增强免疫力的作用，具有极高的使用价值和经济价值。

Description

一种马铃薯保健品及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医药保健领域，具体涉及一种马铃薯保健品及其制备方法和应用。
背景技术
马铃薯(Solanum tuberosum)，又名土豆，是茄科茄属的一年生草本植物，是仅次于小麦、玉米和水稻的第四大粮食作物。由于马铃薯产量高，营养丰富，适应性强，又是重要的粮菜兼用型作物，许多国家和地区都以它为主食。马铃薯含有大量的抗氧化活性物质，包括多酚、维他命C和类胡萝卜素。马铃薯中主要的酚类化合物是绿原酸，大约占马铃薯块茎中酚酸含量的80％。
大量研究表明，植物多酚具有较强的抗氧化作用，可以清除体内自由基，减轻脂质过氧化；保护细胞膜和DNA免受氧化损伤，络合金属、诱导改变致癌性的酶；抗诱变和抗癌作用；抑制血小板聚集、消炎；抗过敏；抗衰老。多酚在防治一些与自由基损伤相关的疾病以及在抗衰老过程中起着很重要的作用，多酚的摄入量与癌症发生率呈负相关，摄取一定量的植物多酚能够有效地预防和抑制疾病的发生。
因此，马铃薯的深入研究与开发，将会给消费者带来更多的选择，特别是针对肿瘤患者等免疫力低下的亚健康人群，提供增强免疫力的保健品，并具有巨大的社会效益和经济效益。
红缘拟层孔菌为世界性分布的真菌。红缘拟层孔菌中含有多种三蔽类化合物以及其他多种化学成分。研究表明红缘拟层孔菌的提取物具有抗肿瘤、抑菌、抗炎、抗氧化、抑制肥胖、保护肝脏、抑制水肿的作用,并能清除游离基、调节中枢神经系统、治疗糖尿病、增强人体免疫力。
块菌(Truffle)，又称块菇、松露，属于子囊菌亚门，是一类与树木共生的外生菌根型珍稀名贵的食用菌，具有极高的使用价值和经济价值。有文献报道显示，可以从块菌中提取蛋白结合多糖，即块菌多糖(polysaccharideofTubersinica，PST)，具有抗肿瘤和调节免疫功能的作用。
在现有技术中，红缘拟层孔菌和块菌常用于抗肿瘤药物的研究和开发，对于红缘拟层孔菌和块菌用于保健品方面的还有很大的开发空间。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种马铃薯保健品及其制备方法和应用。所述马铃薯保健品具有提高免疫力的作用，具有极高的使用价值和经济价值。
第一方面，本发明提供了一种马铃薯保健品，所述马铃薯保健品的原料中红缘拟层孔菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.2-1倍，块菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.5-2倍。
优选地，所述马铃薯保健品的原料中马铃薯汁、红缘拟层孔菌发酵液与块菌发酵液体积比为1∶0.5∶0.5。
优选地，所述马铃薯汁是指：将马铃薯捣碎，过滤，即得马铃薯汁。
优选地，所述马铃薯包括但不限于紫色马铃薯、红色马铃薯、黑色马铃薯、黄色马铃薯和彩色马铃薯其中一种或多种。
优选地，所述块菌包括但不限于黑孢块菌、夏块菌、印度块菌和中国块菌中的一种或多种。
第二方面，本发明提供了一种马铃薯保健品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖30-90g/L，蛋白胨10-70g/L，硫酸镁5-50g/L，磷酸氢二钾5-50g/L，调pH值为5.0-6.0，在18-25℃培养2-3天，过滤，即得块菌发酵液；
(2)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L,葡萄糖10-70g/L,磷酸二氢钾0.5-20g/L,硫酸镁0.5-20g/L,调pH值为4.5-5.5，在23-28℃培养1-2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液；
(3)将步骤(1)、步骤(2)所得的发酵液与马铃薯汁混合后，在25-30℃发酵3-5天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得马铃薯保健饮料；其中，红缘拟层孔菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.2-1倍，块菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.5-2倍。
优选地，所述马铃薯保健品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0-6.0，在18-25℃培养2-3天，过滤，即得块菌发酵液；
(2)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,磷酸二氢钾1g/L,硫酸镁1.5g/L,调pH值为4.5-5.5，在23-28℃培养1-2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液；
(3)将步骤(1)、步骤(2)所得的发酵液与马铃薯汁混合后，在25-30℃发酵3-5天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得马铃薯保健饮料；其中，红缘拟层孔菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.2-1倍，块菌发酵液的体积为马铃薯汁体积的0.5-2倍。
优选地，所述步骤(3)中，马铃薯汁、红缘拟层孔菌发酵液与块菌发酵液体积比为1∶0.5∶0.5。
优选地，所述块菌包括但不限于黑孢块菌、夏块菌、印度块菌和中国块菌中的一种或多种。
优选地，本发明第一方面所述的马铃薯保健品为采用如第二方面所述的马铃薯保健品的制备方法所制备。
第三方面，本发明还提供了一种如第二方面所述马铃薯保健品的制备方法制备的马铃薯保健品在制备防治肝癌药物中的应用。
第四方面，本发明还提供了一种如第二方面所述马铃薯保健品的制备方法制备的马铃薯保健品在制备防治胃癌药物中的应用。
具体实施方式
以下实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种马铃薯汁的制备方法，包括如下步骤：
马铃薯汁的制备：选取新鲜马铃薯200g，洗净、去皮并切成大小均一的薯条，将薯条置于沸水中预煮10min，按质量比1:1加水打成匀浆、过滤、静置；在恒温65℃、pH为6.0条件下，添加0.04％的α-淀粉酶，液化1h；降温至60℃，调节pH为4-4.5,加0.04％异淀粉酶，糖化4h，升温至90℃，糊化1h后，灭菌、冷却，得到马铃薯汁。
实施例2
一种原料含红缘拟层孔菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将步骤(1)所得的发酵液100mL与实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌的马铃薯保健饮料。
实施例3
一种原料含黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(2)将步骤(1)所得的发酵液50mL与实施例1制备的马铃薯汁50mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例4
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例5
一种原料含红缘拟层孔菌和印度块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将印度块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得印度块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL与步骤(2)所得的印度块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在25℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和印度块菌的马铃薯保健饮料。
实施例6
一种原料含红缘拟层孔菌和中国块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将中国块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得中国块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL与步骤(2)所得的中国块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在25℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和中国块菌的马铃薯保健饮料。
实施例7
一种原料含红缘拟层孔菌和夏块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将夏块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得夏块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL与步骤(2)所得的夏块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在25℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔细菌和夏块菌的马铃薯保健饮料。
实施例8
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖10g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，调pH值为4.5，在23℃培养1天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖30g/L，蛋白胨10g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾5g/L，调pH值为5.0，在18℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液20mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在25℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例9
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖70g/L，磷酸二氢钾20g/L，硫酸镁20g/L，调pH值为5.5，在28℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖90g/L，蛋白胨70g/L，硫酸镁50g/L，磷酸氢二钾50g/L，调pH值为6.0，在25℃培养3天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液100mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液200mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在30℃发酵，发酵5天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例10
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖30g/L，磷酸二氢钾10g/L，硫酸镁10g/L，调pH值为5.0，在25℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖60g/L，蛋白胨40g/L，硫酸镁20g/L，磷酸氢二钾20g/L，调pH值为5.5，在20℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液80mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液100mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在25℃发酵，发酵4天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例11
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖15g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁5g/L，调pH值为5.0，在25℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖40g/L，蛋白胨20g/L，硫酸镁15g/L，磷酸氢二钾20g/L，调pH值为5.5，在22℃培养3天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液40mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液150mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例12
一种原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料的制备方法，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾2g/L，硫酸镁2g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液。
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基(g/mL)：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨50g/L，硫酸镁8g/L，磷酸氢二钾15g/L，调pH值为5.5，在22℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液。
(3)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL与步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液50mL，实施例1制备的马铃薯汁100mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健饮料。
实施例13
药理试验
药物制备：分别将实施例1-4所制备的马铃薯保健饮料浓缩至浓度为0.6g/mL(1mL中含有0.8g干物质，干物质为饮料干燥后的干燥物，含水量不超过5％)，分装于灭菌试管，4℃冰箱保存备用。
实验动物：昆明种小鼠90只，雌雄各半，体重20-24g，5-6周龄，由山西医科大学实验动物中心提供。
实验细胞：肝癌H22细胞株、小鼠艾氏腹水癌细胞株，购于南方医科大学，液氮保存。
肝癌实验动物：实体瘤：肝癌H22细胞株昆明小鼠体内连续传代3代后，抽取接种7d左右种鼠腹水，呈乳白色，D-Hanks液洗涤离心(800r/min*5min)3次，调整细胞浓度至1.0*107个/mL，台盼蓝拒染法检测存活率不小于95％，将细胞悬液注射至健康小鼠右腋皮下，每鼠0.2mL。全程严格无菌操作，40min内完成。
胃癌实验动物：实体瘤：小鼠艾氏腹水癌细胞株昆明小鼠体内连续传代3代后，抽取接种7d左右种鼠腹水，呈乳白色，D-Hanks液洗涤离心(800r/min*5min)3次，调整细胞浓度至1.0*107个/mL，台盼蓝拒染法检测存活率不小于95％，将细胞悬液注射至健康小鼠右腋皮下，每鼠0.2mL。全程严格无菌操作，40min内完成。
实验分组：将其随机分为9组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养，自由摄食与饮水，其中的八组为实验组，一组为对照组。采用灌胃口服给药，每日1次，连续3周，观察小鼠生活状态，包括小鼠外部特征变化及死亡情况。给药结束后，第2天处死小鼠，完整剥离肿瘤组织，电子天平称重，计算平均瘤重及抑瘤率。具体操作见表1：
表1实验分组
组别 动物数(n) 样品名称 给药量(mL)
肝癌组(1-4)
第1组 10 例1饮料制备的药物 5
第2组 10 例2产品制备的药物 5
第3组 10 例3饮料制备的药物 5
第4组 10 例4饮料制备的药物 5
胃癌组(5-8)
第5组 10 例1饮料制备的药物 5
第6组 10 例2饮料制备的药物 5
第7组 10 例3饮料制备的药物 5
第8组 10 例4饮料制备的药物 5
对照组 10 生理盐水 5
实验结果见表2和表3，所述抑瘤率按如下公式计算：
表2马铃薯保健品对小鼠H22肝癌瘤重的影响
由表2可知，与对照组相比，例1饮料制备的药物、例2饮料制备的药物、例3饮料制备的药物、例4饮料制备的药物对小鼠H22肝癌都有具有抑制效果，其中例4饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌)的抑瘤效果最好，抑瘤率达到了43.56％；例2饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌)的抑瘤率仅为21.45％，例3饮料制备的药物(原料含黑孢块菌)的抑瘤率仅为19.64％，这两种药物都低于例4饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌)的抑瘤效果，说明红缘拟层孔菌和黑孢块菌发酵产生了具有免疫作用的次级代谢产物，对小鼠H22移植瘤具有协同抑制作用，有助于增强所述保健品的抑瘤效果。
表3马铃薯保健品对小鼠艾氏胃癌瘤重的影响
由表3可知，与对照组相比，例1饮料制备的药物、例2饮料制备的药物、例3饮料制备的药物、例4饮料制备的药物对小鼠艾氏胃癌都有具有抑制效果，其中例4饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌)的抑瘤效果最好，抑瘤率达到了38.56％；例2饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌)的抑瘤率仅为10.45％，例3饮料制备的药物(原料含黑孢块菌)的抑瘤率仅为17.64％，这两种药物都低于例4饮料制备的药物(原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌)的抑瘤效果，说明红缘拟层孔菌和黑孢块菌发酵产生了具有免疫作用的次级代谢产物，对小鼠艾氏胃癌具有协同抑制作用，有助于增强所述保健品的抑瘤效果。
上述实施例说明所述马铃薯保健品的制备方法制备的马铃薯保健品在制备防治肝癌药物和胃癌药物方面具有很好的应用价值。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种马铃薯保健品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将红缘拟层孔菌接种到下述培养基：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1.5g/L，调pH值为5.0，在23℃培养2天，过滤，即得红缘拟层孔菌发酵液；
(2)将黑孢块菌接种到下述培养基g/mL：马铃薯200g/L，葡萄糖50g/L，蛋白胨30g/L，硫酸镁5g/L，磷酸氢二钾10g/L，调pH值为5.0，在22℃培养2天，过滤，即得黑孢块菌发酵液；
(3)马铃薯汁的制备：选取新鲜马铃薯200g，洗净、去皮并切成大小均一的薯条，将薯条置于沸水中预煮10min，按质量比1:1加水打成匀浆、过滤、静置；在恒温65℃、pH为6.0条件下，添加0.04％的α-淀粉酶，液化1h；降温至60℃，调节pH为4-4.5,加0.04％异淀粉酶，糖化4h，升温至90℃，糊化1h后，灭菌、冷却，得到马铃薯汁；
(4)将步骤(1)所得的红缘拟层孔菌发酵液50mL、步骤(2)所得的黑孢块菌发酵液50mL和步骤(3)所得的马铃薯汁100mL混合后，在28℃发酵，发酵3天，过滤，放置，过滤，灭菌，即得原料含红缘拟层孔菌和黑孢块菌的马铃薯保健品。
2.一种马铃薯保健品，其特征在于，为采用如权利要求1所述的马铃薯保健品的制备方法所制备。
3.如权利要求1所述马铃薯保健品的制备方法制备的马铃薯保健品在制备防治肝癌药物中的应用。
4.如权利要求1所述马铃薯保健品的制备方法制备的马铃薯保健品在制备防治胃癌药物中的应用。
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