CN105660255A - 一种烟草根结线虫病的生物防治方法及其生防制剂 - Google Patents

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Abstract

一种烟草根结线虫病的生物防治方法及其生防制剂，属于烟草病害防控领域。生物防治方法包括：烟草育苗时根结线虫拮抗菌定殖、烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖、烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖。生防制剂包括：烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂和烟草根结线虫拮抗生物有机肥。复合微生物菌剂由巨大芽孢杆菌Ap25、褐球固氮菌YKT41、越南伯克霍尔德氏菌P418、绿色木霉L-10、哈茨木霉T11-W五种菌剂中的两种或多种复配而成。生物有机肥以5～25％的复合微生物菌剂，10～30％的蛋白渣，5～30％的褐煤，10～25％的生化黄腐酸，10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙。有益效果是：生防制剂能有效防治烟草根结线虫病，且生态环保安全；方法简单易操作，对烟草根结线虫防效高。

Description

一种烟草根结线虫病的生物防治方法及其生防制剂
技术领域:
本发明属于烟草病害防治领域，具体涉及一种烟草根结线虫病的生物防治方法及其生防制剂。
技术背景:
烟草根结线虫病是由根结线虫侵入烟株根部而引起的。此线虫属线形动物门，线虫纲、垫刃目，垫刃总科、异皮科，根结线虫属。我国以南方根结线虫(MeloidogyneincongnitaChitwood)为害为主。
烟草根结线虫病在苗期和大田期均可发生，多在大田成株期发病。染病烟株首先是根部形成大小不等的根瘤，须根上初生根瘤为白色。严重时整个根系肿胀变粗呈鸡爪状，病根后期中空腐烂，仅存留根皮和木质部，其中包含大量不同发育时期的病原线虫。病株叶片从叶尖和边缘开始干枯内卷，叶色变淡，生长不良似缺肥状。须根上长出形状、大小不等的根瘤，主根、驻叉根粗肿呈鸡爪状。高温干旱症状明显，重病株叶片发黄下垂甚至枯死。
烟草根结线虫病在云南各烟区均有为害，上世纪90年代末“双控”以前，因轮作困难等因素，发病面积较大，“双控”后烟草种植面积减少，发病面积在减少。近年来发生面积有增加的趋势，已成为为害烟草生产的主要病害之一。根结线虫除直接为害烟株外，还会因线虫在烟株根部造成伤口而诱发其他根茎部病害发生，如烟草黑胫病、根黑腐病、青枯病等，使为害加重。
目前，烟草根结线虫病的防治主要依靠化学农药、抗病品种和农业防治措施。化学农药防治往往造成环境污染并降低烟草品质和食用安全性；抗病品种选育难度大、成本高，且大多只能抗根结线虫病单个生理小种，在其他生理小种入侵时存在大面积爆发的危险；农业防治措施费工费时，防治效果普遍不理想。生物防治方法不仅能够有效防治烟草根结线虫病，还能有效保护生态环境，提高烟草品质和食用安全性。开发烟草根结线虫病生物防治方法前景广阔，对烟农和烟草种植产业良性发展具有重要意义。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种烟草根结线虫病的生物防治方法及其生防制剂。
本发明的烟草根结线虫病的生物防治方法包括：烟草育苗时根结线虫拮抗菌定殖、烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖、烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖，具体为：
A：烟草育苗时根结线虫拮抗菌定殖：在烟草育苗时将根结线虫拮抗复合微生物菌剂拌入市购的漂浮育苗基质中进行育苗，烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂拌入育苗基质的量为每100kg基质中加入0.5-5kg；或者在烟草出苗后按每亩0.2-1.0kg喷施根结线虫拮抗菌剂200-1000倍稀释液，每隔7-10天喷施1次，喷2-3次。
B：烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖：在烟苗大田移栽前塘施烟草根结线虫拮抗生物有机肥或移栽后灌施烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；烟草根结线虫拮抗生物有机肥在烟草移栽前按每亩20-100kg施入塘内；烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂按每亩2-10kg在烟苗移栽后稀释200-1000倍液灌施。
C：烟草大田生长期根结线虫拮抗菌定殖：在烟草大田生长期追施烟草根结线虫拮抗生物有机肥和/或烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；烟草根结线虫拮抗生物有机肥在烟株周围开塘穴施，每亩20-100kg，团棵期和旺长期按每亩20-100kg各追施1次烟草根结线虫拮抗生物有机肥；或者将烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂按每亩2-10kg稀释200-1000倍后灌施烟草根部，团棵期和旺长期按每亩2-10kg稀释200-1000倍后各追施1次烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂。
上述A步骤所述的烟草育苗时根结线虫拮抗菌的两种定殖方式能单独采用一种，亦能两种同时采用；
上述B步骤所述的烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌的定殖，能单独采用烟草根结线虫拮抗生物有机肥或烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂进行定殖，亦能两者同时采用进行定殖；
上述C步骤所述的烟草大田生长期根结线虫拮抗菌定殖，能单独追施含烟草根结线虫拮抗菌剂的生物有机肥或烟草根结线虫拮抗菌剂，亦能两者同时追施。
所述的烟草根结线虫的生物防治方法，在烟草苗育苗时根结线虫拮抗菌定殖、烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖、烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖三个过程能单独采用其中一部分措施，亦能全部措施一同采用。
用于本发明的烟草根结线虫病的生物防治方法中的生防制剂包括：烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂和烟草根结线虫拮抗生物有机肥；该生防制剂经由如下步骤得到：
一、分别将保藏在北京市海淀区中关村北一条13号、中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCCNo.1213、保藏日为2004年8月30日的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)Ap25株；保藏号为CGMCCNo.1211、保藏日为2004年8月30日的褐球固氮菌(Azotobacterchroococcum)YKT41株；保藏号为CGMCCNo.1212、保藏日为2004年8月30日的越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderiavietnamiensis)P418株；以及保藏在北京市朝阳区北辰西路1号院3号、中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCCNo.5938、保藏日为2012年3月27日的绿色木霉(Trichodermaviride)L-10株；保藏号为CGMCCNo.7938、保藏日2013年7月19日为的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T11-W株五种菌种分别按常规方法进行液体或固体发酵；具体如下：
1、巨大芽孢杆菌Ap25的液体发酵
巨大芽孢杆菌Ap25的液体发酵按以下步骤进行：
(1)斜面菌种：采用固体无氮培养基(K2HPO40.5g、MgSO4.7H2O0.2g、NaCl0.02g、CaCl20.2g、Fe-EDTA0.066g、Na2MoO40.002g、L-谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、琼脂15g、pH7.2-7.4)将菌种接种在试管培养基中，28-32℃培养18-24小时。
(2)摇瓶菌种：称取蛋白胨10g、酵母浸出物1g、氯化钙0.2g配制成pH7.0的液体培养基，将斜面菌种的单菌落接种在液体无氮培养基中置摇床上28-32℃培养18-24小时。
(3)液体发酵：采用含蔗糖1％、玉米粉4％、黄豆饼粉1％、硫酸铵0.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.1％(前述物料均按质量百分比添加)、pH7.2-7.4培养基，121℃灭菌20min，将摇瓶液体培养的菌种接种到发酵罐内(接种量为2-10％)，28-32℃条件下培养，每分钟通发酵罐容积1-1.5倍的气量，搅拌速度为150-250r/min，培养时间36-48小时。在接种量为10％，30℃恒温培养的情况下，32小时进入稳定期，此时可结束发酵，获得巨大芽孢杆菌Ap25的孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。
2、褐球固氮菌YKT41的液体发酵
褐球固氮菌YKT41的液体发酵按以下步骤进行：
(1)斜面菌种：采用固体无氮培养基(K2HPO40.64g、KH2PO40.16g、MgSO4.7H2O0.2g、NaCl0.2g、CaSO4.2H2O0.05g、Na2MoO40.001g、FeSO40.03g、蔗糖20g、琼脂15g、水1000ml、pH7.0-7.2)，将菌种接种在试管培养基中，28-32℃培养18-24小时。
(2)摇瓶菌种：采用液体无氮培养基(K2HPO40.64g、KH2PO40.16g、MgSO4.7H2O0.2g、NaCl0.2g、CaSO4.2H2O0.05g、Na2MoO40.001g、FeSO40.03g、蔗糖20g、水1000ml、pH7.0-7.2)，将斜面菌种的单菌落接种在液体无氮培养基中置摇床上28-32℃培养18-24小时。
(3)液体发酵：采用含蔗糖1％、玉米粉4％、黄豆饼粉1％、硫酸铵0.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.1％(前述物料均按质量百分比添加)，pH7.0-7.2的培养基，121℃灭菌20min，将摇瓶液体培养的菌种接种到发酵罐内(接种量为2-10％)，28-32℃条件下培养，每分钟通发酵罐容积1-1.5倍的气量，搅拌速度为150-250r/min，培养时间36-48小时。在接种量为10％，30℃恒温培养的情况下，32小时进入稳定期，此时作为发酵终点，获得褐球固氮菌YKT41的孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。
3、越南伯克霍尔德氏菌P418的液体发酵
越南伯克霍尔德氏菌P418的液体发酵按以下步骤进行：
(1)斜面菌种：采用固体无氮培养基(K2HPO40.5g、MgSO4.7H2O0.2g、NaCl0.02g、CaCl20.2g、Fe-EDTA0.066g、Na2MoO40.002g、L-谷氨酸(或味精)0.05g、葡萄糖5g、琼脂15g、pH7.2-7.4)将菌种接种在试管培养基中，28-32℃培养18-24小时。
(2)摇瓶菌种：称取蛋白胨10g、酵母浸出物1g、氯化钙0.2g配制成pH7.0的液体培养基，将斜面菌种的单菌落接种在液体无氮培养基中置摇床上28-32℃培养18-24小时。
(3)液体发酵：采用含蔗糖1％、玉米粉4％、黄豆饼粉1％、硫酸铵0.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.1％(前述物料均按质量百分比添加)、pH7.2-7.4培养基，121℃灭菌20min，将摇瓶液体培养的菌种接种到发酵罐内(接种量为2-10％)，28-32℃条件下培养，每分钟通发酵罐容积1-1.5倍的气量，搅拌速度为150-250r/min，培养时间36-48小时。在接种量为10％，30℃恒温培养的情况下，32小时进入稳定期，此时结束发酵，获得越南伯克霍尔德氏菌P418的孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。
4、绿色木霉L-10的液体发酵
绿色木霉L-10的液体发酵按以下步骤进行：
(1)斜面菌种：采用固体PDA培养基，将工程菌株L-10接种在试管内，28℃培养72-96小时；
(2)茄瓶菌种：采用液体PDA培养基，将试管菌种接种在液体三角瓶中，置于摇床上28℃振荡培养24-48小时；
(3)液体培养：采用发酵培养基(羧甲基纤维素钠1％，玉米粉1％，葡萄糖0.5％，豆饼粉2％，磷酸氢二钾0.2％，磷酸二氢钾0.2％，碳酸钙0.5％，pH6.0)，121℃灭菌20min，将三角瓶种接种发酵罐，接种量0.2％，28℃培养，溶氧量40-50％，通气量1：0.6-0.8，搅拌速度为160r/min，培养30hr后，调整发酵参数：25℃培养，溶氧量20-30％，通气量1：0.4-0.6，搅拌速度为120r/min，添加0.1％的诱导剂甲醛，避光培养6-8小时，至厚垣孢子量达到2×109个/ml以上时，结束发酵；即获得所述绿色木霉L-10的厚垣孢子发酵液，留作配制复合微生物菌剂用。
5、哈茨木霉T11-W的固体发酵
哈茨木霉T11-W的固体发酵按以下步骤进行：
(1)斜面菌种：采用固体PDA培养基，将哈茨木霉T11-W菌种接种在试管培养基中，28℃培养48-72小时。
(2)茄瓶菌种：采用液体PDA培养基，将试管菌种接种在液体茄瓶中，于摇床上28℃振荡培养72-96小时。
(3)固体菌种：采用固体培养基，将麸皮4份、稻壳1份按体积比混合均匀，加入50-70％的水，pH6.0，121℃灭菌40min后冷却，在混合接种器内将液体菌种与固体培养基混合均匀，接种量为5-10％，接种完毕转移到固体培养室内培养。
(4)培养：培养基厚度5cm，料温控制在28-32℃，室温控制在25-32℃，空气湿度控制在95-100％，培养时间5-7天。
(5)培养完毕将固体培养物自然风干，成品含水量控制在5-10％，得哈茨木霉T11-W固体培养物，过100目筛收集孢子粉，留作配制复合微生物菌剂用。
二、将液体或固体发酵的巨大芽孢杆菌Ap25的孢子发酵液、褐球固氮菌YKT41的孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418的孢子发酵液、绿色木霉L-10的孢子发酵液及哈茨木霉T11-W的孢子粉五种菌剂中的两种或多种菌剂配制成复合制剂，即得到有效活菌数不低于2亿/g的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；具体如下：
a.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1：
由巨大芽孢杆菌Ap25孢子发酵液、褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液按体积比1～3：1～6：1～8配制得到。
b.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2：
由褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液、绿色木霉L-10孢子发酵液按体积比1～7：1～7：1～6配制得到。
c.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3：
由绿色木霉L-10孢子发酵液和哈茨木霉T11-W孢子粉按质量比1～5:1～9配制成可湿性粉剂。
三、以复合微生物菌剂为主要功能性成分，添加蛋白渣、褐煤、生化黄腐酸、生物炭、碳酸钙配制得到有效活菌数不低于0.2亿/g，N、P、K的总养分含量不低于5％，有机质含量不低于45％，蛋白质含量不低于20％的烟草根结线虫拮抗生物有机肥；蛋白渣为玉米浆、棉籽饼粉、花生饼粉、酵母粉、蛋白胨任一种的发酵残渣晒干后得到；具体如下：
a.烟草根结线虫拮抗生物有机肥1：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
b.烟草根结线虫拮抗生物有机肥2：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
c.烟草根结线虫拮抗生物有机肥3：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
d.上述比例均为质量百分比。
本发明的有益效果在于：生防制剂不仅能够有效防治烟草根结线虫病，还能有效保护生态环境，提高烟草品质和食用安全性；防治方法简单易操作，成本低，对烟草根结线虫防效高。
具体实施方式:
下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明。
如下实施例的烟草根结线虫病的生物防治方法的及其生防制剂同发明内容部分的描述。其中：
1、烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂由如下步骤得到：
a.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1：
由巨大芽孢杆菌Ap25孢子发酵液、褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液按体积比1或2或3：1或3或6：1或5或8配制得到。
b.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2：
由褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液、绿色木霉L-10孢子发酵液按体积比1或3或7：1或4或7：1或3或6配制得到。
c.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3：
由绿色木霉L-10孢子发酵液和哈茨木霉T11-W孢子粉按质量比1或3或5:1或5或9配制成可湿性粉剂。
2、烟草根结线虫拮抗生物有机肥由如下步骤得到：
a.烟草根结线虫拮抗生物有机肥1：
由5％或15％或25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1为主要功能性成分，添加10％或20％或30％的蛋白渣、5％或15％或30％的褐煤、10％或15％或25％的生化黄腐酸、10％或20％或35％的生物炭，再按前述混合料质量比添加0.5％或1.5％或2.5％的碳酸钙配制得到；
b.烟草根结线虫拮抗生物有机肥2：
由5％或15％或25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2号作为主要功能性成分，添加10％或20％或30％的蛋白渣、5％或15％或30％的褐煤、10％或15％或25％的生化黄腐酸、10％或20％或35％的生物炭，再按前述混合料质量比添加0.5％或1.5％或2.5％的碳酸钙配制得到；
c.烟草根结线虫拮抗生物有机肥3：
由5％或15％或25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3号作为主要功能性成分，添加10％或20％或30％的蛋白渣、5％或15％或30％的褐煤、10％或15％或25％的生化黄腐酸、10％或20％或35％的生物炭，再按前述混合料质量比添加0.5％或1.5％或2.5％的碳酸钙配制得到；
上述步骤三中比例为质量百分比，蛋白渣为玉米浆、或棉籽饼粉、或花生饼粉、或酵母粉、或蛋白胨的发酵残渣晒干后得到。
实施例1:
在烟苗出苗后，每隔7天或10天分别按每亩0.2kg或0.6kg或1.0kg喷施1次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号200倍液或600倍液或1000倍液，共3次，未处理的烟苗作为对照，成苗后移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟苗出苗后分别喷施3次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在47.64～58.72％之间。
实施例2:
在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入市购的漂浮育苗基质，每100kg育苗基质拌入0.5kg或2.5kg或5kg复合微生物菌剂，未处理的烟苗作为对照，成苗后移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入育苗基质对烟草根结线虫的相对防效在51.84～62.59％之间。
实施例3:
在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入市购的漂浮育苗基质，每立方育苗基质拌入0.5kg或2.5kg或5kg复合微生物菌剂，再在烟苗出苗后，每隔7天或10天分别按每亩0.2kg或0.6kg或1.0kg喷施1次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号200倍液或600倍液或1000倍液，共2次，未处理的烟苗作为对照，成苗后移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烤烟育时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入育苗基质，再在烟苗出苗后分别喷施2次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在59.37～68.92％之间。
实施例4:
在烟苗移栽前分别将生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号按20kg/亩或60kg/亩或100kg/亩塘施，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟苗作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟苗移栽前分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号对烟草根结线虫的相对防效在49.73～58.65％之间。
实施例5:
在烟苗移栽后覆膜前分别将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或600倍或1000倍灌施，每株灌施2升稀释液，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟苗作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在48.55～61.38％之间。
实施例6:
在烟苗移栽前分别将生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号按20kg/亩或60kg/亩或100kg/亩塘施，再在烟苗移栽后覆膜前分别将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或600倍或1000倍灌施1次，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟苗作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟苗移栽前分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，再在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在56.85～69.67％之间。
实施例7:
在烟株大田生长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，团棵期和旺长期分别按20kg/亩或60kg/亩或100kg/亩各施用1次，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟株作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟株团棵期和旺长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号对烟草根结线虫的相对防效在62.49～72.33％之间。
实施例8:
在烟株大田生长期分别在烟株根际灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，团棵期和旺长期分别按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或600倍或1000倍各施用1次；移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟株作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟株团棵期和旺长期分别在烟株根际灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在64.25～73.58％之间。
实施例9:
在烟株大田生长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，按每亩20kg或60kg或100kg，同时分别对应灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或600倍或1000倍，团棵期和旺长期各施用1次，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块未处理的烟株作为对照，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烟株团棵期和旺长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号的同时分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在66.55～75.89％之间。
实施例10:
在烟苗出苗后，每隔7天或10天分别按每亩0.2kg或0.6kg或1.0kg的量稀释200倍或600倍或1000倍喷施1次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，共3次；在烟苗移栽前分别按每亩20kg或60kg或100kg塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号；在烟株大田生长期分别在烟株周围按每亩20kg或60kg或100kg开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，团棵期和旺长期各施用1次；未处理的烟苗作为对照，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在苗期分别喷施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，移栽前分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，在烟株团棵期和旺长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号对烟草根结线虫的相对防效在68.29～77.15％之间。
实施例11:
在烟苗出苗后，每隔7天或10天按每亩0.2kg或0.6kg或1.0kg的量稀释200倍或600倍或1000倍分别喷施1次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，共3次；在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，按每亩2kg或6kg或10kg的量稀释200倍或500倍或1000倍；在烟株大田生长期分别在烟株根际按每亩2kg或6kg或10kg的量稀释200倍或500倍或1000倍灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，团棵期和旺长期各1次；未处理的烟苗作为对照，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在苗期分别喷施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，在烟株团棵期和旺长期分别在烟株根际灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在70.43～79.66％之间。
实施例12:
在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入市购的育苗基质，每立方育苗基质拌入0.5kg或2.5kg或5kg复合微生物菌剂；在烟苗移栽前按每亩20kg或60kg或100kg分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号；在烟株大田生长期按每亩20kg或60kg或100kg分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，团棵期和旺长期各施用1次；未处理的烟苗作为对照，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入育苗基质，移栽前分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，在烟株团棵期和旺长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号对烟草根结线虫的相对防效在68.75～78.57％之间。
实施例13:
在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌拌入市购的育苗基质，每立方育苗基质拌入0.5kg或2.5kg或5kg复合微生物菌剂；在烟苗移栽后覆膜前按每亩2kg或6kg或10kg分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号200倍液或600倍液或1000倍液；在烟株大田生长期分别在烟株根际按每亩2kg或6kg或10kg分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，团棵期和旺长期各施用1次；未处理的烟苗作为对照，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入育苗基质，在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，再在烟株团棵期和旺长期分别在烟株根际灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在72.39～81.78％之间。
实施例14:
在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入分别拌拌入市购的育苗基质，每立方育苗基质拌入0.5kg或2.5kg或5kg复合微生物菌剂；再在烟苗出苗后，每隔7天或10天分别按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或500倍或1000倍喷施1次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，共3次；在烟苗移栽前分别按每亩20kg或60kg或100kg塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，再在烟苗移栽后覆膜前按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或500倍或1000倍分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号；在烟株大田生长期分别在烟株周围按每亩20kg或60kg或100kg开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，同时分别对应按每亩2kg或6kg或10kg稀释200倍或500倍或1000倍灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，团棵期和旺长期各施用1次；未处理的烟苗作为对照，移栽到同一片往年根结线虫病发病严重的田块，按常规方法进行管理。烟叶采烤结束时调查烟株根系根结线虫病发病情况，调查结果显示：在烤烟育苗时将复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号分别拌入育苗基质，在烟苗出苗后分别喷施3次复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，在烟苗移栽前分别塘施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号，在烟苗移栽后覆膜前分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号，在烟株团棵期和旺长期分别在烟株周围开塘穴施生物有机肥1号、生物有机肥2号和生物有机肥3号的同时分别灌施复合微生物菌剂1号、复合微生物菌剂2号和复合微生物菌剂3号对烟草根结线虫的相对防效在76.89～85.24％之间。

Claims (3)

1.一种烟草根结线虫病的生物防治方法，其特征在于该生物防治方法包括烟草育苗时根结线虫拮抗菌定殖、烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖、烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖，具体为：
A：烟草育苗时根结线虫拮抗菌定殖：在烟草育苗时将根结线虫拮抗复合微生物菌剂拌入常规漂浮育苗基质中进行育苗，烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂拌入育苗基质的量为每100kg基质中加入0.5-5kg；或者在烟草出苗后按照每亩0.2-1.0kg喷施根结线虫拮抗菌剂200-1000倍稀释液，每隔7-10天喷施一次，喷2-3次；
B：烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖：在烟苗大田移栽前塘施烟草根结线虫拮抗生物有机肥或移栽后灌施烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；烟草根结线虫拮抗生物有机肥在烟草移栽前按每亩20-100kg施入塘内；烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂按每亩2-10kg在烟苗移栽后稀释200-1000倍液灌施；
C：烟草大田生长期根结线虫拮抗菌定殖：在烟草大田生长期追施烟草根结线虫拮抗生物有机肥和/或烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；烟草根结线虫拮抗生物有机肥在烟株周围开塘穴施，每亩20-100kg，团棵期和旺长期按每亩20-100kg各追施一次烟草根结线虫拮抗生物有机肥；或者将烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂按每亩2-10kg稀释200-1000倍后灌施烟草根部，团棵期和旺长期按每亩2-10kg稀释200-1000倍后各追施一次烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂。
2.权利要求1所述的烟草根结线虫病的生物防治方法，其特征在于：
权利要求1-A步骤所述的烟草育苗时根结线虫拮抗菌的两种定殖方式能单独采用一种，亦能两种同时采用；
权利要求1-B步骤所述的烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌的定殖，能单独采用烟草根结线虫拮抗生物有机肥或烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂进行定殖，亦能两者同时采用进行定殖；
权利要求1-C步骤所述的烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖，能单独追施含烟草根结线虫拮抗菌剂的生物有机肥或烟草根结线虫拮抗菌剂，亦能两者同时追施；
权利要求1所述的烟草根结线虫的生物防治方法，所述的烟草苗育苗时根结线虫拮抗菌定殖、烟苗大田移栽时根结线虫拮抗菌定殖、烟草植株生长期根结线虫拮抗菌定殖三个过程能单独采用其中一部分措施，亦能全部措施一同采用。
3.用于权利要求1和2所述的烟草根结线虫病的生物防治方法中的生防制剂，其特征在于该生防制剂包括：烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂和烟草根结线虫拮抗生物有机肥；该生防制剂经由如下步骤得到：
(1)将保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNo.1213的巨大芽孢杆菌Ap25，保藏号为：CGMCCNo.1211的褐球固氮菌YKT41，保藏号为：CGMCCNo.1212的越南伯克霍尔德氏菌P418，保藏号为：CGMCCNo.5938的绿色木霉L-10，保藏号为：CGMCCNo.7938的哈茨木霉T11-W五种菌剂分别按常规方法进行液体或固体发酵；
(2)将液体或固体发酵的巨大芽孢杆菌Ap25孢子发酵液、褐球固氮菌YKT41的孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418的孢子发酵液、绿色木霉L-10的孢子发酵液及哈茨木霉T11-W的孢子粉五种菌剂中的两种或多种菌剂配制成复合制剂，即得到有效活菌数不低于2亿/g的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂；具体如下：
a.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1：
由巨大芽孢杆菌Ap25孢子发酵液、褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液按体积比1～3：1～6：1～8配制得到；
b.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2：
由褐球固氮菌YKT41孢子发酵液、越南伯克霍尔德氏菌P418孢子发酵液、绿色木霉L-10孢子发酵液按体积比1～7：1～7：1～6配制得到；
c.烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3：
由绿色木霉L-10孢子发酵液和哈茨木霉T11-W孢子粉按质量比1～5:1～9配制成可湿性粉剂；
(3)以复合微生物菌剂为主要功能性成分，添加蛋白渣、褐煤、生化黄腐酸、生物炭、碳酸钙配制得到有效活菌数不低于0.2亿/g，N、P、K的总养分含量不低于5％，有机质含量不低于45％，蛋白质含量不低于20％的烟草根结线虫拮抗生物有机肥；蛋白渣为玉米浆、棉籽饼粉、花生饼粉、酵母粉、蛋白胨任一种的发酵残渣晒干后得到；具体如下：
a.烟草根结线虫拮抗生物有机肥1：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂1作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
b.烟草根结线虫拮抗生物有机肥2：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂2作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
c.烟草根结线虫拮抗生物有机肥3：
由5～25％的烟草根结线虫拮抗复合微生物菌剂3作为主要功能性成分，添加10～30％的蛋白渣、5～30％的褐煤、10～25％的生化黄腐酸、10～35％的生物炭，再按前述混合料添加0.5～2.5％质量比的碳酸钙配制得到；
d.上述比例为质量百分比。
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