CN105658206A - 抗pd-l1抗体与mek抑制剂和/或braf抑制剂的组合 - Google Patents

Abstract

一种新颖组合，包含MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐或溶剂化物，和/或B-Raf抑制剂，特别是N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐，和抗PD-L1抗体；含有该组合的药物组合物，和使用这类组合及组合物治疗病症如癌症的方法，所述病症能得益于抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用。

Description

抗PD-L1抗体与MEK抑制剂和/或BRAF抑制剂的组合

技术领域

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法和用于这类治疗的组合。特别地，所述方法涉及新颖组合，所述组合包括MEK抑制剂，合适地是N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐或溶剂化物，和/或B-Raf抑制剂，合适地是N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐，和抗PD-L1抗体；含有该组合的药物组合物，和使用这类组合及组合物治疗病症如癌症的方法，所述病症中抑制MEK和/或B-Raf和/或PD-L1与结合其的分子如PD-1相互作用是有益的。

背景技术

有效治疗包括癌症在内的过度增殖疾病一直是肿瘤学领域的目标。一般地，癌症是由于控制细胞分裂、分化和凋亡细胞死亡的正常过程的失调导致，表征为恶性细胞增殖，所述恶性细胞具有无限生长、局部扩增和全身转移的可能。正常过程失调包括信号转导通路异常和对不同于正常细胞中所见的因子的反应。

一个重要的较大酶家族是蛋白激酶家族。目前有约500种不同的已知蛋白激酶。通过转移ATP-Mg²⁺复合物的γ-磷酸到氨基酸侧链，蛋白激酶用于催化多种蛋白中所述氨基酸侧链的磷酸化。这些酶通过蛋白中丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基中羟基的可逆磷酸化来控制大部分的细胞内信号传递过程，从而控制细胞功能、生长、分化和破坏(凋亡)。研究显示蛋白激酶是许多细胞功能的关键调节因子，包括信号转导、转录调节、细胞运动和细胞分裂。数种癌基因还显示编码蛋白激酶，表明激酶在肿瘤发生中起作用。这些过程受到高度调节，通常由复杂的交错通路调节，其中各激酶自身被一种或多种激酶调节。因此，异常或不合适的蛋白激酶活性可促成与这种异常激酶活性相关的疾病状态上升，包括良性和恶性增殖疾病以及免疫和神经系统不当激活导致的疾病。由于其生理相关性、多样性和普遍性，蛋白激酶已成为生化和医学研究中一类最重要并被广泛研究的酶家族。

酶的蛋白激酶家族根据其磷酸化的氨基酸残基通常分成2个主要亚家族：蛋白酪氨酸激酶和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(PSTK)包括环AMP-和环GMP-依赖性蛋白激酶、钙和磷脂依赖性蛋白激酶、钙-和钙调蛋白-依赖性蛋白激酶、酪蛋白激酶、细胞分裂周期蛋白激酶等。这些激酶通常是胞质的或可能通过锚定蛋白与细胞颗粒部分相关。异常的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性参与或疑似参与一些病症，如类风湿性关节炎、牛皮癣、败血性休克、骨质流失、许多癌症和其它增殖性疾病。因此，丝氨酸/苏氨酸激酶及其作为一部分的信号转导通路是药物设计的重要靶标。酪氨酸激酶使酪氨酸残基磷酸化。酪氨酸激酶在细胞调节中发挥同样重要的作用。这些激酶包括诸如生长因子和激素等分子的数个受体，包括表皮生长因子受体、胰岛素受体、血小板衍生生长因子受体等。研究表明许多酪氨酸激酶是跨膜蛋白，其受体结构域位于细胞外侧而其激酶结构域位于内侧。为了鉴定酪氨酸激酶的调节剂，许多工作也在进行中。

受体酪氨酸激酶(RTK)催化多种控制细胞生长、增殖和分化的蛋白中某些酪氨酰氨基酸残基的磷酸化，这些蛋白包括其本身。

数个RTK的下游有数个信号通路，其中有Ras-Raf-MEK-ERK激酶通路。据了解，目前RasGTP酶蛋白响应生长因子、激素、细胞因子等的激活会刺激Raf激酶的磷酸化和活化。随后，这些激酶使胞内蛋白激酶MEK1和MEK2磷酸化并活化，这进而使其它蛋白激酶ERK1和2磷酸化并活化。此信号通路也称为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路或胞质级联，这一通路调节细胞对生长信号的反应。其最终功能是将细胞膜上的受体活性与控制细胞增殖、分化和存活的胞质或核靶标的修饰连接。

此通路的组成型活化足以诱导细胞转化。异常受体酪氨酸激酶活化、Ras突变或Raf突变导致的MAP激酶通路失调激活在人类癌症中常见，且代表决定异常生长控制的主要因子。Ras突变在人恶性肿瘤中很常见，已在约30％癌症中得到鉴定。GTP酶蛋白Ras家族(将鸟苷三磷酸转化成鸟苷二磷酸的蛋白)将信号从活化的生长因子受体传递到下游胞内伴侣。由活性膜结合Ras募集的靶标中突出的是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的Raf家族。Raf家族由三个充当Ras下游效应物的相关激酶(A-、B-和C-Raf)组成。Ras介导的Raf活化进而引发MEK1和MEK2活化(MAP/ERK激酶1和2)，其继而在酪氨酸-185和苏氨酸-183上磷酸化ERK1和ERK2(胞外信号调节的激酶1和2)。经活化的ERK1和ERK2易位并积聚于核内，其能在该处磷酸化多种底物，包括控制细胞生长和存活的转录因子。鉴于Ras/Raf/MEK/ERK通路在人类癌症发展中的重要性，信号级联的激酶组分渐成为癌症和其它增殖性疾病中调节疾病发展的潜在重要靶标。

MEK1和MEK2是使多种MAP激酶的苏氨酸和酪氨酸残基磷酸化的双特异性激酶大家族(MEK1-7)成员。MEK1和MEK2由不同基因编码，但其在C末端催化激酶结构域和大部分N末端调节区内共有高同源性(80％)。MEK1和MEK2的致瘤形式在人类癌症中尚未发现，但MEK的组成型活化显示引起细胞转化。除了Raf，MEK也能由其它癌基因激活。迄今唯一已知的MEK1和MEK2底物是ERK1和ERK2。除了使酪氨酸和苏氨酸残基都能磷酸化的独特能力，所述与众不同的底物特异性把MEK1和MEK2置于信号转导级联的关键点，该点使其能将许多胞外信号纳入MAPK通路。

因此，已认识到MAPK激酶通路(如MEK)蛋白的抑制剂应同时具有抗增殖、促凋亡和抗侵袭剂的价值，以用于防护和/或治疗增殖性或侵袭性疾病。

此外，还已知具有MEK抑制活性的化合物有效诱导ERK1/2活性抑制并阻遏细胞增殖(TheJournalofBiologicalChemistry,276卷,第4期2686-2692页,2001)，预期所述化合物对由不需要的细胞增殖所导致疾病如肿瘤发生和/或癌产生效果。

已鉴定多种RasGTP酶和B-Raf激酶的突变，所述突变能引起MAPK通路的持续和组成型活化，最终导致细胞分裂和存活增加。由此，这些突变与大范围的人类癌症的建立、发展和进展密切相关。Raf激酶在信号转导中的生物学作用且特别是B-Raf的生物学作用，描述于Davies,H.等,Nature(2002)9:1-6；Garnett,M.J.和Marais,R.,CancerCell(2004)6:313-319；Zebisch,A.和Troppmair,J.,Cell.Mol.LifeSci.(2006)63:1314-1330；Midgley,R.S.和Kerr,D.J.,Crit.Rev.Onc/Hematol.(2002)44:109-120；Smith,R.A.等,Curr.Top.Med.Chem.(2006)6:1071-1089；和Downward,J.,Nat.Rev.Cancer(2003)3:11-22。

自然产生的激活MAPK通路信号传递的B-Raf激酶突变已在大部分人类黑素瘤(Davies(2002)同上)和甲状腺癌(Cohen等J.Nat.CancerInst.(2003)95(8)625-627和Kimura等CancerRes.(2003)63(7)1454-1457)中发现，以及以较低但仍显著的频率在以下疾病中发现：

Barrett腺癌(Garnett等.,CancerCell(2004)6313-319和Sommerer等Oncogene(2004)23(2)554-558)、胆管道癌(Zebisch等,Cell.Mol.LifeSci.(2006)631314-1330)、乳腺癌(Davies(2002)同上)、宫颈癌(Moreno-Bueno等Clin.CancerRes.(2006)12(12)3865-3866)、胆管癌(Tannapfel等Gut(2003)52(5)706-712)、中枢神经系统肿瘤，包括原发性CNS肿瘤如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤和室管膜瘤(Knobbe等ActaNeuropathol.(Berl.)(2004)108(6)467-470,Davies(2002)同上,和Garnett等,CancerCell(2004)同上)以及继发性CNS肿瘤(即起始于中枢神经系统外的肿瘤转移到于中枢神经系统)、包括大肠结肠癌在内的结直肠癌(Yuen等CancerRes.(2002)62(22)6451-6455,Davies(2002)同上和Zebisch等,Cell.Mol.LifeSci.(2006)、胃癌(Lee等Oncogene(2003)22(44)6942-6945)、包括头颈部鳞状细胞癌在内的头颈癌(Cohen等J.Nat.CancerInst.(2003)95(8)625-627和Weber等Oncogene(2003)22(30)4757-4759)、血液癌，包括白血病(Garnett等,CancerCell(2004)同上),尤其是急性成淋巴细胞性白血病(Garnett等,CancerCell(2004)同上和Gustafsson等Leukemia(2005)19(2)310-312)、急性骨髓性白血病(AML)(Lee等Leukemia(2004)18(1)170-172和Christiansen等Leukemia(2005)19(12)2232-2240)、骨髓增生异常综合征(Christiansen等Leukemia(2005)同上)和慢性髓细胞性白血病(Mizuchi等Biochem.Biophys.Res.Commun.(2005)326(3)645-651)；霍奇金淋巴瘤(Figl等Arch.Dermatol.(2007)143(4)495-499)、非霍奇金淋巴瘤(Lee等Br.J.Cancer(2003)89(10)1958-1960)、巨核细胞白血病(Eychene等Oncogene(1995)10(6)1159-1165)和多发性骨髓瘤(Ng等Br.J.Haematol.(2003)123(4)637-645)、肝细胞癌(Garnett等,CancerCell(2004)、肺癌(Brose等CancerRes.(2002)62(23)6997-7000,Cohen等J.Nat.CancerInst.(2003)同上和Davies(2002)同上)，包括小细胞肺癌(Pardo等EMBOJ.(2006)25(13)3078-3088)和非小细胞肺癌(Davies(2002)同上)、卵巢癌(Russell和McCluggageJ.Pathol.(2004)203(2)617-619和Davies(2002)同上)、子宫内膜癌(Garnett等,CancerCell(2004)同上和Moreno-Bueno等Clin.CancerRes.(2006)同上)、胰腺癌(Ishimura等CancerLett.(2003)199(2)169-173)、垂体腺瘤(DeMartino等J.Endocrinol.Invest.(2007)30(1)RC1-3)、前列腺癌(Cho等Int.J.Cancer(2006)119(8)1858-1862)、肾癌(Nagy等Int.J.Cancer(2003)106(6)980-981)、肉瘤(Davies(2002)同上)以及皮肤癌(Rodriguez-Viciana等Science(2006)311(5765)1287-1290和Davies(2002)同上)。c-Raf过表达与AML(Zebisch等,CancerRes.(2006)66(7)3401-3408和Zebisch(Cell.Mol.LifeSci.(2006))和红白血病(Zebisch等,Cell.Mol.LifeSci.(2006))相关。

根据Raf家族激酶在这些癌症中发挥的作用以及一系列临床前和治疗剂的探索性研究，包括对一种选择性靶向抑制B-Raf激酶活性的药剂的研究(KingA.J.,等,(2006)CancerRes.66:11100-11105)，通常认为一种或多种Raf家族激酶的抑制剂会对治疗这类癌症或其它Raf激酶相关病症有用。

B-Raf突变还参与其它病症，包括心面皮肤综合征(Rodriguez-Viciana等Science(2006)311(5765)1287-1290)和多囊性肾病(Nagao等KidneyInt.(2003)63(2)427-437)。

除了防止肿瘤细胞自身增殖外，刺激患者本身的免疫应答来靶向肿瘤细胞是另一个有吸引力的癌症治疗选择，且许多研究已证明使用肿瘤抗原的免疫疗法对诱导免疫应答的有效性。然而，诱导免疫应答和有效消除癌在癌免疫治疗试验中通常不相关(Cormier等.,CancerJ.Sci.Am.,3(1):37-44(1997)；Nestle等,Nat.Med.,4(3):328-332(1998)；Rosenberg,Nature,411(6835):380-384(2001))。因此，尽管许多病例中有初次抗肿瘤免疫应答，但功能性、效应抗肿瘤T细胞反应通常至多算是微弱。

淋巴细胞的抗原特异性活化和增殖由来自共刺激分子的正和负信号调节。最广泛鉴定的T细胞共刺激通路是B7-CD28，其中B7-1(CD80)和B7-2(CD86)各自可接触刺激性CD28受体和抑制性CTLA-4(CD152)受体。与经T细胞受体的信号传递结合，CD28连接可增加T细胞的抗原特异性增殖，提高细胞因子生成，刺激分化和效应功能，并促进T细胞生存(Lenshow等,Annu.Rev.Immunol.,14:233-258(1996)；Chambers和Allison,Curr.Opin.Immunol.,9:396-404(1997)；以及Rathmell和Thompson,Annu.Rev.Immunol.,17:781-828(1999))。相反，经CTLA-4的信号传递被认为是递送抑制T细胞增殖、IL-2生成和细胞周期进展的负信号(Krummel和Allison,J.Exp.Med.,183:2533-2540(1996)；以及Walunas等,J.Exp.Med.,183:2541-2550(1996))。其它B7家族成员包括B7-H1(PD-L1)(Dong等,NatureMed.,5:1365-1369(1999)；和Freeman等,J.Exp.Med.,192:1-9(2000))、B7-DC(PD-L2)(Tseng等,J.Exp.Med.,193:839-846(2001)；和Latchman等,NatureImmunol.,2:261-268(2001))、B7-H2(Wang等,Blood,96:2808-2813(2000)；Swallow等,Immunity,11:423-432(1999)；和Yoshinaga等,Nature,402:827-832(l999))、B7-H3(Chapoval等,NatureImmunol.,2:269-274(2001))和B7-H4(Choi等,J.Immunol.,171:4650-4654(2003)；Sica等,Immunity,18:849-861(2003)；Prasad等,Immunity,18:863-873(2003)；和Zang等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,100:10388-10392(2003))。

PD-1通过其配体连接的初步结果是抑制T细胞受体(TCR)下游的信号传递。因此，经PD-1的信号转导通常向T细胞提供阻遏或抑制信号，导致T细胞增殖减少或T细胞活化中的其它减少。认为PD-1信号传递需要结合PD-1配体，靠近由主要组织相容性复合体(MHC)呈递的肽抗原，所述MHC与TCR结合(Freeman,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,105:10275-10276(2008))。PD-L1是引起T细胞中抑制性信号转导的主要PD-1配体。

T细胞还能被调节性T细胞(Treg)抑制(Schwartz,R.,NatureImmunology,6:327-330(2005))。Treg显示抑制肿瘤特异性T细胞免疫，且可能有助于人类肿瘤进展(Liyanage,U.K.等,JImmunol,169:2756-2761(2002))。在小鼠中，Treg细胞缺失可产生更有效的肿瘤排斥(Viehl,C.T.等，AnnSurgOncol,13:1252-1258(2006))。

PD-L1(程序性细胞死亡配体-1；也称为B7同源物1(B7-H7))、或由CD274基因(CD274)编码的分化群，其结合PD-L1(程序性细胞死亡蛋白1)并在包括免疫性和自身耐受性的免疫系统功能调节中发挥作用。PD-L1表达于T细胞，如调节性T细胞(Treg)、抗原呈递细胞(APC例如树突细胞(DC)、巨噬细胞和B细胞)，以及非造血细胞，包括胰岛细胞、血管内皮细胞(胎盘睾丸、眼睛)，以及肿瘤中。PD-L1:PD-1通路参与自反应性T细胞弱化、诱导型Treg细胞发育、CD-4+效应T细胞和CD8+T细胞抑制。因此，通过PD-L1:PD-1通路干扰抑制信号是增强抗肿瘤免疫的治疗选择。

尽管近期癌症治疗取得许多进展，但仍需要对患癌个体更有效和/或提高的治疗。本文的实施方式满足该需要，所述实施方式涉及组合抑制肿瘤细胞增殖与提高抗肿瘤免疫力的治疗方法。

发明内容

本发明涉及B-Raf抑制剂和/或MEK抑制剂与抗PD-L1抗体的组合，所述组合用于治疗癌症。

本发明涉及治疗剂的组合，该组合优于单独施用各试剂来治疗且优于MEK抑制剂与B-RAF抑制剂的组合治疗。特别地，本文所述药物组合包括B-Raf抑制剂N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐，和/或MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐或溶剂化物，和抗PD-L1抗体。

本发明的MEK抑制剂由式(I)的结构表示：

或其药学上可接受盐或溶剂化物(本文统称为“化合物A”)，

本发明的B-Raf抑制剂由式(II)的结构表示：

或其药学上可接受盐(本文统称为“化合物B”)。

抗PD-L1抗体和其制备方法为本领域已知。

所述抗PD-L1抗体可以是多克隆或单克隆，和/或重组体，和/或人源化的。

示例性PD-L1抗体公开于：

美国专利号8,217,149；12/633,339；

美国专利号8,383,796；13/091,936；

美国专利号8,552,154；13/120,406；

美国专利公开号20110280877；13/068337；

美国专利公开号20130309250；13/892671；

WO2013019906；

WO2013079174；

美国申请号13/511,538(2012年8月7日提交)，其是国际申请号PCT/US10/58007(2010年提交)的美国国家阶段；

和

美国申请号13/478,511(2012年5月23日提交)，其各自通过引用纳入本文。

在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是美国专利号8,217,149公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国专利号8,217,149所公开抗体的CDR。

在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是美国申请号13/511,538公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国申请号13/511,538所公开抗体的CDR。

在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是申请号13/478,511公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国申请号13/478,511所公开抗体的CDR。

在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)。在另一实施方式中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(RG7446)。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI4736。

在本发明的一方面，提供包括以下的组合：

(i)式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物

(ii)式(II)化合物

或其药学上可接受盐，

和(iii)抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：

N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐，和抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：

N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：

N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐和抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：

(i)式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

(ii)式(II)化合物：

或其药学上可接受盐，用于治疗；

和(iii)抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：

(i)式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

(ii)式(II)化合物：

或其药学上可接受盐；和(iii)抗PD-L1抗体，用于治疗癌症。

在本发明的另一方面，提供包括以下的药物组合物：

(i)式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物；和/或

(ii)式(II)化合物：

或其药学上可接受盐；和/或(iii)抗PD-L1抗体以及药学上可接受稀释剂或载体。

另一方面，提供下述组合在制备药物中的应用，所述组合包括：

(i)式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

(ii)式(II)化合物：

或其药学上可接受盐；和(iii)抗PD-L1抗体，所述药物用于联合治疗癌症。

另一方面，提供治疗哺乳动物癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用：

(i)治疗有效量的式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

(ii)式(II)化合物：

或其药学上可接受盐；和(iii)抗PD-L1抗体。

另一方面，提供在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的以下组合：N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐或溶剂化物；N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐；和抗PD-L1抗体。

另一方面，提供在有需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的以下组合：N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜溶剂化物，N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐，和抗PD-L1抗体。

在本发明的另一方面，提供在有需要的哺乳动物中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的本发明组合，其中所述组合在特定阶段内施用并持续一段时间。

附图说明

图-1图1描述CT26小鼠结直肠肿瘤细胞对化合物A的体外反应，所述细胞携带纯合KRASG12D突变和MAPK1及MET扩增。

图-2图2描述CT26小鼠结直肠肿瘤细胞对化合物A和抗小鼠PDL1抗体的体内反应，所述细胞携带纯合KRASG12D突变和MAPK1及MET扩增。

具体实施方式

如本文所用，所述MEK抑制剂N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨基)6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接受盐或溶剂化物表示为式(I)化合物：

或其药学上可接受盐或溶剂化物。为了方便起见，这组可能的化合物和盐或溶剂化物统称为化合物A，意味着提及化合物A可指选项中任何化合物或其药学上可接受盐或溶剂化物。

根据命名惯例，式(I)化合物还可被恰当地称为N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基]苯基}乙酰胺。

如本文所用，所述BRaf抑制剂N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺或其药学上可接受盐表示为式(II)化合物：

或其药学上可接受盐。为了方便起见，该组可能的化合物和盐统称为化合物B，意味着提及化合物B可指选项中任何化合物或其药学上可接受盐。

抗PD-L1抗体和其制备方法为本领域已知。

所述抗PD-L1抗体可以是多克隆或单克隆，和/或重组体，和/或人源化的。

在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是美国专利号8,217,149公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国专利号8,217,149所公开抗体的CDR。

在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是美国申请号13/511,538公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国申请号13/511,538所公开抗体的CDR。

在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是申请号13/478,511公开的抗体。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体包括美国申请号13/478,511所公开抗体的CDR。

在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(MDX-1105)。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(RG7446)。在另一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI4736。

抗PD-L1抗体能用于增加产IFNγ细胞。例如，阻断PD-L1介导的信号转导会诱导稳健效应细胞反应，导致肿瘤部位或感染位置处产IFNγ细胞的增加。

抗PD-L1抗体或其变体以及编码这些多肽和融合蛋白的核酸、或表达这类抗体的细胞能用于增强对抗原的初次免疫应答以及提升效应细胞功能，例如增加T细胞的抗原特异性增殖，提高T细胞的细胞因子生成和刺激分化。抗PD-L1抗体，例如与BRAF抑制剂和/或MEK抑制剂(如本文所述的那些)联合，能用于治疗癌症。

抗PD-L1抗体能以有效量施用于需要的对象以治疗与癌症相关的一种或多种症状，帮助克服T细胞耗尽和/或T细胞无能。通过用已知技术测量T细胞功能可确定克服T细胞耗尽或T细胞无能。在某些实施方式中，所述抗体改造成结合PD-L1而不引发经PD-1的抑制性信号转导并保持共刺激T细胞的能力。

一般，PD-L1抗体用于治疗患有或易感染任何疾病或紊乱的对象，所述对象免疫系统会对其产生免疫应答。抗体例如抗PD-L1抗体抑制或减少PD-1信号转导的能力使得更稳健的免疫应答成为可能。这种抗体用于刺激或增强涉及T细胞的免疫应答。

抗PD-L1抗体或其变体用于通过向对象施用一定量的抗PD-L1抗体或其变体来刺激或增强宿主中的免疫应答以治疗癌症，所述量有效刺激对象中的T细胞。可用所提供组合物和方法治疗的癌症类型包括但不限于以下：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、食管癌、包括肾细胞癌在内的肾癌、包括肝细胞癌在内的肝癌、肺癌、鼻咽癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、子宫癌、卵巢癌、睪丸癌和血液癌。

在一些实施方式中，抗PD-L1抗体抑制PD-L1结合T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、树突细胞或巨噬细胞上的PD-1。在一个实施方式中，PD-L1与活化T细胞上PD-1的结合被抑制。

免疫测定方法参见Coligan,J.E.等编,《免疫学实验指南》(CurrentProtocolsinImmunology),纽约的威利出版公司(Wiley-Interscience)1991(或现行版)；Butt,W.R.(编)《实践免疫测定：目前工艺水平》(PracticalImmunoassay:TheStateoftheArt),纽约的德克出版出版公司(Dekke),1984；Bizollon,Ch.A.编,《单克隆抗体和免疫测定新趋势》(MonoclonalAntibodiesandNewTrendsinImmunoassays),纽约的爱思唯尔(Elsevier),1984；Butler,J.E.,ELISA(第29章),收录于:vanOss,C.J.等,(编),《免疫化学》(Immunochemistry),纽约的马塞尔德克有限公司(MarcelDekker,Inc.),1994,759-803页；Butler,J.E.(编.),《固相免疫测定的免疫化学》(ImmunochemistryofSolid-PhaseImmunoassay),波卡拉顿的CRC出版社(CRCPress),1991；Weintraub,B.,《放射免疫测定原理，第七次放射配体测定技术培训课程》(PrinciplesofRadioimmunoassays,SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques),美国内分泌学会(TheEndocrineSociety),1986年3月；Work,T.S.等,《分子生物学的实验室技术和生物化学》(LaboratoryTechniquesandBiochemistryinMolecularBiology),纽约的北荷兰出版公司(NorthHollandPublishingCompany),(1978)(Chard,T.,"放射免疫测定和相关技术入门(AnIntroductiontoRadioimmuneAssayandRelatedTechniques)"章节)。

抗独特型抗体参见例如《生物和医学中的独特型》(IdiotypyinBiologyandMedicine),纽约的学术出版社(AcademicPress),1984；ImmunologicalReviews79卷,1984；ImmunologicalReviews90卷,1986；Curr.Top.Microbiol.,Immunol.119卷,1985；Bona,C.等,CRCCrit.Rev.Immunol.,33-81页(1981)；Jerme,NK,Ann.Immunol.125C:373-389(1974)；Jerne,NK,收录于:《独特型—内侧抗原》(Idiotypes--AntigensontheInside),Westen-Schnurr,I.,编,EditionesRoche,Basel,1982,Urbain,J.等,Ann.Immunol.133D:179-(1982)；Rajewsky,K.等,Ann.Rev.Immunol.1:569-607(1983)。

所述抗体可以是其异种、同种、同系或修饰型，如人源化或嵌合抗体。还包括对特异抗体独特型特异的抗独特型抗体，例如抗PD-L2抗体。

术语“抗体”意在包括完整分子以及其含有抗原结合位点且能结合表位的片段。这些包括Fab和F(ab')₂片段，所述片段缺乏完整抗体的Fc片段，从循环中清除更迅速，且非特异性组织结合小于完整抗体(Wahl等,J.Nuc.Med.24:316-325(1983))。还包括Fv片段(Hochman,J.等.(1973)Biochemistry12:1130-1135；Sharon,J.等.(1976)Biochemistry15:1591-1594)。这些不同片段用常规技术生产，如蛋白酶切割或化学切割(参见例如Rousseaux等,Meth.Enzymol.,121:663-69(1986))。

多克隆抗体从经免疫动物如兔、山羊、啮齿动物等以血清形式获得，且可直接使用而不需进一步处理或可接受常规富集或纯化方法如硫酸铵沉淀、离子交换色谱和亲和色谱。

所述免疫原可包括完整PD-L1或其片段或衍生物。免疫原包括PD-L1的全部或其部分胞外域(ECD)，其中这些残基包含翻译后修饰，如糖基化。含胞外域的免疫原以本领域已知的多种方法生成，例如用常规重组方法表达克隆基因或从起源细胞分离。

单克隆抗体可用常规杂交瘤技术生产，如Kohler和Milstein,Nature,256:495-97(1975)介绍的过程，以及其改良(参见上述参考文献)。动物优选小鼠接种如上免疫原来致敏，从而在致敏动物中引发所需抗体反应。来自致敏动物淋巴结、脾或外周血的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，一般是在融合促进剂如聚乙二醇(PEG)存在的情况下。任意一些鼠骨髓瘤细胞系可用于这类用途：P3-NS1/1-Ag4-1、P3-x63-k0Ag8.653、Sp2/0-Ag14或HL1-653骨髓瘤细胞系(获自马里兰州罗克维尔的ATCC)。后续步骤包括在选择性培养基中生长，从而未融合的亲代骨髓瘤细胞和供体淋巴细胞最终死亡，仅杂交瘤细胞存活。这些杂交瘤细胞进行克隆和生长，并例如通过使用PD-L1蛋白如重组PD-L1蛋白免疫测定技术筛选其上清是否存在具有所需特异性的抗体。阳性克隆通过例如有限稀释进行亚克隆，分离单克隆抗体。

单克隆抗体(mAb)和其生产及应用方法参见Kohler和Milstein,Nature256:495-497(1975)；美国专利号4,376,110；Hartlow,E.等,《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratoryManual),纽约冷泉港的冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),1988)；《单克隆抗体和杂交瘤：生物分析的新维度》(MonoclonalAntibodiesandHybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses),纽约州纽约的普雷纳姆出版社(PlenumPress),(1980)；H.Zola等,收录于《单克隆杂交瘤抗体：技术和应用》(MonoclonalHybridomaAntibodies:TechniquesandApplications),CRC出版社,1982))。

根据这些方法生成的杂交瘤能用本领域已知技术(一般参见Fink等,Prog.Clin.Pathol.,9:121-33(1984))在体外或体内(腹水中)繁殖。一般，个体细胞系在培养中繁殖，含有高浓度单一单克隆抗体的培养基可通过倾析、过滤或离心来收集。

所述抗体可生成为单链抗体或scFv，而不是正常多聚结构。单链抗体包括感兴趣Ig的高变区并重建天然Ig的抗原结合位点，而只是完整Ig大小的一部分(Skerra,A.等.Science,240:1038-1041(1988)；Pluckthun,A.等.MethodsEnzymol.178:497-515(1989)；Winter,G.等.Nature,349:293-299(1991))。在一个实施方式中，所述抗体用常规分子生物学技术生成。

一方面，所述抗体或其抗原结合片段包括一个或多个根据本文所述发明的CDR，或者一个或多个根据本文所述发明的重或轻链可变区。

本发明抗体可包括本发明的重链可变区和轻链可变区，其形式可以是天然抗体或其功能片段或等价物的结构。因此，本发明抗体能包括本发明VH区，在与合适轻链配对时，其形式为全长抗体、(Fab’)2片段、Fab片段、双特异性或双对位分子或其等价物(如scFV，双、三或四链抗体，串联多抗(Tandabs)等)。所述抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4；或IgM、IgA、IgE或IgD或其修饰变体。所述抗体重链的恒定区可相应选择。所述轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。所述抗体还可以是具有WO86/01533所述类型的嵌合抗体，其包括抗原结合区和非免疫球蛋白区。

根据所需功能选择恒定区，例如IgG1可通过结合补体和/或介导ADCC(抗体依赖性细胞毒性)来显示裂解能力。

另一方面，所述抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、双链抗体、三链抗体、四链抗体、微型抗体和小分子抗体。

在本发明的一方面，所述抗体是人源化或嵌合抗体，在另一方面，所述抗体是人源化抗体。

如果抗原结合蛋白结合同一或重叠氨基酸残基或通过空间位阻抑制本发明抗原结合蛋白的结合，可视作结合了“相同表位”。mAb的表位是mAb结合其抗原的区域。如果2个抗体各自竞争性抑制(阻断)另一个结合某抗原，则这2个抗体结合同一或重叠表位。即，如竞争性结合试验所测，相较缺乏竞争抗体的对照，1x、5x、10x、20x或100x过量的抗体使另一个抗体的结合抑制至少50％，但优选75％、90％或甚至99％(参见例如Junghans等.,CancerRes.50:1495,1990，其通过引用纳入本文)。或者，如果抗原中减少或消除一种抗体结合的基本全部氨基酸突变都会减少或消除另一抗体结合，则两种抗体具有相同表位。相同表位还可包括“重叠表位”，例如，如果减少或消除一种抗体结合的一些氨基酸突变会减少或消除另一抗体结合。

另一方面，所述抗体以高亲和力结合人PD-L1。例如，通过Biacore测量时，所述抗体结合人PD-L1的亲和力为1-1000nM或500nM或更小，或者亲和力为200nM或更小，或者亲和力为100nM或更小，或者亲和力为50nM或更小，或者亲和力为500pM或更小，或者亲和力为400pM或更小，或者亲和力为300pM或更小。另一方面，通过Biacore测量时，所述抗体结合人PD-L1的亲和力为约50nM-约200nM或约50nM-约150nM。在本发明的一方面，所述抗体结合人PD-L1的亲和力小于100nM。

在一个这种方面，通过Biacore测量，亲和力是一种分子如本发明抗体在单一结合位点与另一分子如其靶抗原的结合强度。抗体与其靶标的结合亲和力可通过平衡法(如酶联免疫吸附试验(ELISA)或放射免疫测定(RIA)或动力学(如BIACORETM分析))测定。例如，实施例5所述的BiacoreTM法可用于测量结合亲和力。

亲合力是2个分子在多个位点结合强度的总和，如考虑相互作用的价数。

一方面，抗体PD-L1相互作用的平衡解离常数(KD)是100nM或更小，10nM或更小，2nM或更小或者1nM或更小。或者，KD可为5-10nM；或1-2nM。KD可为1pM-500pM；或500pM-1nM。技术人员会理解KD数值越小，结合越强。KD的倒数(即1/KD)是平衡缔合常数(KA)，单位为M^-1。技术人员会理解KA数值越小，结合越强。

解离速率常数(kd)或“解离速率”描述抗体-PD-L1复合体的稳定性，即每秒复合体衰减的部分。例如，0.01s^-1的kd等同于每秒1％复合体衰减。在一个实施方式中，解离速率常数(kd)是1x10^-3s^-1或更小，1x10^-4s^-1或更小，1x10^-5s^-1或更小，或者1x10^-6s^-1或更小。kd可为1x10^-5s^-1-1x10^-4s^-1；或1x10^-4s^-1-1x10^-3s^-1。

本发明实施方式的抗PD-L1抗体与参照抗体之间的竞争能通过竞争ELISA、FMAT或BIAcore测定。一方面，竞争试验由Biacore完成。此竞争有数种可能的原因：2种蛋白可结合同一或重叠表位，可能存在结合的空间位阻抑制，或第一蛋白的结合可诱导防止或减少第二蛋白结合的抗原构象变化。

生物活性的减少或抑制可以是部分或全部。相对于没有抗体时的PD-L1活性，中和抗体能使PD-L1、PD-1或PD-L1所结合另一受体的活性中和至少20％、30％40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、82％、84％、86％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

中和可用一种或多种技术人员已知或本文所述试验测定或测量。

“CDR”定义为互补决定区氨基酸免疫球蛋白重和轻链。免疫球蛋白的可变部分有3个重链和3个轻链CDR(或CDR区)。因此，本文所用的“CDR”指所有3个重链CDR，所有3个轻链CDR，所有重和轻链CDR，或至少2个CDR。

CDRL1、L2、L3、H1和H2往往在结构上显示有限数量的主链构象中的一种。CDR的具体正则结构类别由CDR长度和环堆叠定义，由位于CDR和框架区中关键位置的残基确定(结构决定残基或SDR)。Martin和Thornton(1996；JMolBiol263:800-815)提供定义“关键残基”正则模式的自动方法。采用聚类分析定义CDR组的正则类别，随后通过分析包埋的疏水基、氢键残基和保守甘氨酸及脯氨酸来确定正则模式。通过比较抗体序列与关键残基模板并用相同性或相似性矩阵对各模板评分，能将抗体序列的CDR进行正则分类。

每个CDR、每个对应CDR、每个结合单元、每个重或轻链可变区、每个重或轻链和每个抗体可以有多种不同CDR正则位置，因此只要维持CDR正则结构从而抗体能特异性结合PD-L1，任何取代的组合可在本发明抗体中出现。

如上所述，CDR的具体正则结构类由CDR长度和环堆叠定义，由位于CDR和框架区中关键位置的残基确定。

查询核酸序列与对象核酸序列之间的“百分比相同性”是以百分比表示的“相同性”值，其是当进行成对BLASTN比对后，对象核酸序列具有待查询核酸序列的100％查询覆盖率时，通过BLASTN算法计算出的。所述查询核酸序列与对象核酸序列之间的成对BLASTN比对能用国家生物技术信息中心网站可获得的BLASTN算法以关闭低复杂性区域过滤器的默认设置进行。重要的是，查询核酸序列可由本申请中一项或多项权利要求或其它处指出的核酸序列来描述。

查询氨基酸序列与对象氨基酸序列之间的“百分比相同性”是以百分比表示的“相同性”值，其是当进行成对BLASTP比对后，对象氨基酸序列具有待查询氨基酸序列的100％查询覆盖率时，通过BLASTP算法计算出的。所述查询氨基酸序列与对象氨基酸序列之间的成对BLASTP比对能用国家生物技术信息中心网站可获得的BLASTP算法以关闭低复杂性区域过滤器的默认设置进行。重要的是，查询氨基酸序列可由本申请中一项或多项权利要求或其它处指出的氨基酸序列来描述。

所述查询序列可与对象序列100％相同，或可包括与对象序列相比某一整数的氨基酸或核苷酸改变，从而％相同性小于100％。例如，查询序列与对象序列至少50、60、70、75、80、85、90、95、96、97、98或99％相同。这种改变包括至少一个氨基酸缺失、取代(包括保守和非保守取代)或插入，其中所述改变可发生在查询序列的氨基或羧基末端位置或者这些末端位置之间的任何地方，单独散布于查询序列的氨基酸或核苷酸或者查询序列内的一个或多个连续基团。

％相同性能跨查询序列的完整长度确定，包括CDR。或者，％相同性可排除CDR，例如CDR与对象序列100％相同且％相同性变化是查询序列的剩余部分，从而CDR序列是固定/完整的。

变体序列基本保持未修饰蛋白的生物学特性，如结合PD-L1的胞外域。

本说明书通篇使用的术语“中和”指与没有抗体时的PD-L1活性比较时，PD-L1的体外或体内生物活性(如结合PD-1或另一配体或者经传递信号，PD-L1结合所述配体和/或经其传递信号)在本文所述抗体存在时降低。中和可能归因于以下一种或多种：阻断PD-L1结合其受体，防止PD-L1活化其受体，下调PD-L1或其受体，或影响效应物功能。

对于本文实施方式中的任何抗PD-L1抗体，可变区序列和全长抗体序列中的氨基酸残基可根据Kabat编号惯例编号。类似地，术语“CDR”,“CDRL1”,“CDRL2”,“CDRL3”,“CDRH1”,“CDRH2”,“CDRH3”。更多信息参见Kabat等,《免疫学感兴趣的蛋白序列》(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest),第4版,美国卫生和公众服务部,国立卫生研究院(1987)。

本领域技术人员清楚了解对于可变区序列和全长抗体序列中的氨基酸残基，有可替代的编号惯例。CDR序列也有可替代的编号惯例，例如Chothia等(1989)Nature342:877-883所列的那些。抗体的结构和蛋白折叠可能意味着其它残基被视作CDR序列一部分且技术人员会如此理解。

技术人员可用的其它CDR序列编号惯例包括“AbM”(巴斯大学)和“接触(contact)”(伦敦大学学院)方法。用Kabat、Chothia、AbM和接触方法中的至少2种能确定最小重叠区以提供“最小结合单元”。最小结合单元可以是CDR亚部分。

另一实施方式使抗原呈递细胞(APC)接触一个或多个所公开抗体，抗体量有效抑制、减少或阻断APC中的PD-L1:PD-1信号转导。阻断APC中的PD-L1:PD-1信号转导重振APC，增进胞内病原体或胞内病原体所感染细胞的清除。

抗体的结合特性与待施用的剂量和剂量方案有关。现有抗体剂如MDX-1106显示在单一剂量后至少3个月持续占据T细胞上60-80％PD-1分子(Brahmer等.J.Clin.Oncology,27:(155)3018(2009))。在一个实施方式中，具有PD-L1结合特性的PD-L1抗体显示对免疫细胞上PD-L1:PD-1分子较短期或较低百分比的占据。在某些实施方式中，用抗PD-L1抗体治疗在单一剂量施用后1周、2周、3周或甚至1个月引起免疫细胞上PD-1分子的5、10、15、20、25、30、35、40、45或50％PD-L1占据。在其它实施方式中，所公开抗体对PD-1的结合亲和力比MDX-1106低。

编码抗PD-L1抗体的分离核酸分子能通过标准技术生成，包括但不限于常见分子克隆，化学核酸合成技术和聚合酶链式反应(PCR)技术。

本文所用的术语“本发明组合”指含MEK抑制剂、BRAF抑制剂和抗PD-L1抗体的组合，适宜为化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体，各自可如本文所述分开或同时施用。

本文所用的术语“赘生物”指细胞或组织的异常生长，且应理解为包括良性即非癌性生长以及恶性即癌性生长。术语“赘生性”指代或涉及赘生物。

本文所用的术语“试剂”应理解为指在组织、系统、动物、哺乳动物、人或其它对象中产生所需效果的物质。因此，术语“抗肿瘤剂”应理解为指在组织、系统、动物、哺乳动物、人或其它对象中产生抗肿瘤效果的物质。还应理解“试剂”可以是单一化合物或者2种或更多化合物的组合或组合物。

本文所用的术语“治疗”和其派生词指治疗性疗法。涉及具体病症时，治疗指：(1)缓解病症或者病症的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)导致或引起病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现，(3)改善与病症相关的一种或多种症状、影响或副作用，或者与病症或其治疗相关的一种或多种症状、影响或副作用，或(4)减缓病症或者病症的一种或多种生物学表现发展。

如本文所用，“防止”应理解为指预防性施用药物以大幅减少病症或其生物学表现的可能性或严重度，或者延迟这种病症或其生物学表现发生。技术人员会理解“防止”不是绝对性术语。预防性疗法是合适的，例如当对象被认为有发展癌症的高风险，如当对象具有较强癌症家族史或对象暴露于致癌物质时。

本文所用的术语“有效量”指会引起组织、系统、动物或人中生物或医学反应的药物或药剂的量，其由例如研究人员或临床医生研究。此外，术语“治疗有效量”指与未接受所述量的相应对象相比，引起疾病、紊乱或副作用的治疗改善、治愈、预防或缓解，或者使疾病或紊乱发展速率降低的任何量。所述术语范围还包括有效提高正常生理功能的量。

施用治疗有效量的本发明组合相比个体组分化合物的优势在于该组合相较单独施用治疗有效量的组分化合物可提供一个或多个下列改善性质：i)抗癌效果高于大部分活性单一试剂，ii)协同或高度协同的抗癌活性，iii)提供更高抗癌活性而副作用降低的给药操作，iv)毒性作用减少，v)治疗窗口增加，或vi)组分化合物之一或两种的生物利用度提高。

化合物A和/或B可包含一个或多个手性原子，或另外能作为对映体存在。因此，本发明化合物包括对映体混合物以及纯化的对映体或对映体富集的混合物。还应理解化合物A和化合物B的范围包括所有互变异构体和互变异构体混合物。

还应理解化合物A和B可单独或都作为溶剂化物存在。本文所用的术语“溶剂化物”指由溶质(本发明中，式(I)或(II)的化合物或其盐)和溶剂形成的可变化学计量学的复合体。用于本发明目的的这类溶剂不得干扰溶质的生物活性。合适溶剂的示例包括但不限于水、甲醇、二甲亚砜、乙醇和乙酸。在一个实施方式中，所用溶剂是药学上可接受溶剂。合适的药学上可接受溶剂示例包括但不限于水、乙醇和乙酸。在另一个实施方式中，所用溶剂是水。

化合物A和B可具有以超过一个形式结晶的能力，所述特征称为多态性，应理解这类多态型(“多晶型物”)在化合物A和B范围内。多态性可能是响应温度或压力或两者的变化而发生，且还能由结晶过程的变化导致。多晶型物可通过本领域已知的多种物理特性区分，如X射线衍射图谱、溶解度和熔点。

在国际申请号PCT/JP2005/011082(国际申请日期为2005年6月10日，国际公开号WO2005/121142，国际公开日期为2005年12月22日)中，公开并请求保护化合物A与其药学上可接受盐和溶剂化物，其用作MEK活性抑制剂，特别是治疗癌症，所述专利申请的完整公开内容通过引用纳入本文。化合物B是实施例4-1的化合物。化合物B能如国际申请号PCT/JP2005/011082所述制备。化合物B能如2006年1月19日公开的美国专利公开号US2006/0014768所述制备，所述专利的完整公开内容通过引用纳入本文。

化合物A适宜采用二甲亚砜溶剂化物形式。化合物B适宜采用钠盐形式。化合物B适宜采用选自以下的溶剂化物形式：水合物、乙酸、乙醇、硝基甲烷、氯苯、1-戊醇(1-pentanci)、异丙醇、乙二醇和3-甲基-1-丁醇。这些溶剂化物和盐形式可由本领域技术人员根据国际申请号PCT/JP2005/011082或美国专利公开号US2006/0014768描述来制备。

在PCT专利申请PCT/US09/42682中，公开并请求保护化合物B与其药学上可接受盐，其用作BRaf活性抑制剂，特别是治疗癌症。化合物B由该申请的实施例58a到58e呈现。所述PCT申请在2009年11月12日以公开号WO2009/137391公开，并通过引用纳入本文。

更特别地，化合物B可根据以下方法制备：

方法1：化合物B(第一晶形)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(196mg,0.364mmol)和7M的溶于甲醇的氨(8ml,56.0mmol)的悬液在密封管中加热到90℃，持续24h。所述反应用DCM稀释，加入硅胶并浓缩。粗产物用硅胶进行色谱分离，用100％DCM-1:1[DCM:(9:1EtOAc:MeOH)]洗脱。浓缩干净部分以产生粗产物。粗产物通过反相HPLC(乙腈:水梯度，两者都带0.1％TFA)再纯化。然后，合并的干净部分浓缩并在DCM和饱和NaHCO₃之间分配。分离DCM层并用Na₂SO₄干燥。获得标题化合物N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(94mg,47％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.83(s,1H),7.93(d,J＝5.2Hz,1H),7.55-7.70(m,1H),7.35-7.43(m,1H),7.31(t,J＝6.3Hz,1H),7.14-7.27(m,3H),6.70(s,2H),5.79(d,J＝5.13Hz,1H),1.35(s,9H).MS(ESI):519.9[M+H]⁺.

方法2：化合物B(另一种晶形)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺19.6mgN-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(可根据实施例58a制备)与500μL乙酸乙酯在2-mL瓶中室温合并。浆液在0-40℃温度循环48小时。所得浆液冷至室温并通过真空过滤收集固体。所述固体用Raman、PXRD、DSC/TGA分析，指示晶形不同于上面实施例58a所得晶形。

方法3：化合物B(另一种晶形，大批)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

步骤A：3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯

将3-氨基-2-氟苯甲酸甲酯((50g,1eq)装入反应器，然后加入二氯甲烷(250mL,5vol)。搅拌内容物并冷却至～15℃，加入吡啶(26.2mL,1.1eq)。加入吡啶后，将反应器内容物调至～15℃，开始经加料漏斗添加2,6-二氟苯磺酰氯(39.7mL,1.0eq)。加入期间的温度保持<25℃。完成添加后，反应器内容物加热至20-25℃并保持过夜。加入乙酸乙酯(150mL)且通过蒸馏移出二氯甲烷。一旦完成蒸馏，反应混合物随之用乙酸乙酯(5vol)再稀释一次并浓缩。反应混合物用乙酸乙酯(10vol)和水(4vol)稀释，内容物在搅拌下加热至50-55℃，直到所有固体溶解。分层。有机层用水(4vol)稀释，内容物加热至50-55℃，持续20-30分钟。分层，乙酸乙酯层减压蒸发到～3vol。加入乙酸乙酯(5vol)，再次减压蒸发到～3vol。然后，向反应器加入环己烷(9vol)，内容物加热回流30分钟，接着冷却至0℃。过滤固体并用环己烷(2x100mL)冲洗。固体空气干燥过夜并获得3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯(94.1g,91％)。

步骤B：N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

根据上面步骤A制备的3-{[(2,6-二氟苯基)磺酰]氨基}-2-氟苯甲酸甲酯(490g,1eq.)溶于THF(2.45L,5vol)，搅拌并冷却至0-3℃。向反应混合物加入含1M双(三甲基硅基)氨基锂的THF(5.25L,3.7eq.)溶液，然后加入含2-氯-4-甲基嘧啶(238g,1.3eq.)的THF(2.45L,5vol)。反应随后搅拌1小时。用4.5MHCl(3.92L,8vol)淬灭反应。移出水层(底层)并弃去。有机层减压浓缩到～2L。向反应混合物加入IPAC(乙酸异丙酯)(2.45L)，所述混合物随之浓缩到～2L。加入IPAC(0.5L)和MTBE(2.45L)，N₂下搅拌过夜。过滤固体。将固体和过滤母液一起加回，搅拌数小时。过滤固体并用MTBE(～5vol)洗。固体置于50℃真空烘箱过夜。固体在真空烘箱中30℃干燥整个周末以获得N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(479g,72％)。

步骤C：N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

向反应容器加入N-{3-[(2-氯-4-嘧啶基)乙酰]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(30g,1eq)，然后是二氯甲烷(300mL)。反应浆液冷却至～10℃，N-溴代琥珀酰亚胺(“NBS”)(12.09g,1eq)以3个大致相等部分加入，每次添加间搅拌10-15分钟。最后一次加入NBS后，反应混合物加热至～20℃并搅拌45分钟。然后，向反应容器加入水(5vol)并搅拌混合物，随之分层。再次向二氯甲烷层加入水(5vol)并搅拌混合物，分层。二氯甲烷层浓缩至～120mL。向反应混合物加入乙酸乙酯(7vol)并浓缩到～120mL。随后向反应混合物加入二甲基乙酰胺(270mL)并冷却至～10℃。2,2-二甲基硫代丙酰胺(1.3g,0.5eq)以2等分加入反应内容物，两次添加之间搅拌～5分钟。反应加热至20-25℃。45分钟后，容器内容物加热至75℃，保持1.75小时。反应混合物随之冷却至5℃，缓慢加入水(270ml)，保持温度低于30℃。加入乙酸乙酯(4vol)，搅拌混合物并分层。再次向水层加入乙酸乙酯(7vol)，搅拌内容物并分层。再向水层加入乙酸乙酯(7vol)，搅拌内容物并分离。合并有机层且用水(4vol)洗4次，20-25℃搅拌过夜。然后，在加热和真空情况下浓缩有机层至120mL。容器内容物随之加热至50℃，缓慢加入庚烷(120mL)。加入庚烷后，容器内容物加热回流，接着冷却至0℃并保持～2小时。过滤固体并用庚烷(2x2vol)冲洗。随后，固体产物在30℃真空干燥获得N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(28.8g,80％)。

步骤D：N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺

在1gal压力反应器中，根据上面步骤C制备的N-{3-[5-(2-氯-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(120g)和氢氧化铵(28-30％,2.4L,20vol)混合物在密封压力反应器中加热至98-103℃，在此温度搅拌2小时。所述反应缓慢冷却至室温(20℃)并搅拌过夜。过滤固体且用最小量的母液洗，真空干燥。固体加入EtOAc(15vol)/水(2vol)混合物，在60-70C加热至完全溶解，移出水层并弃去。EtOAC层加入水(1vol)并用HCl溶液中和至～pH5.4-5.5，加入水(1vol)。在60-70℃移出水层并弃去。有机层在60-70℃用水(1vol)洗，移出水层并弃去。有机层在60℃过滤，浓缩到3vol。将EtOAc(6vol)加入混合物，加热并在72℃搅拌10分钟，然后冷却至20℃并搅拌过夜。EtOAc通过真空蒸馏移出以浓缩反应混合物至～3vol。反应混合物在～65-70℃维持～30分钟。加入溶于庚烷浆液的产物晶体，所述晶体的晶形与上面实施例58b所制备的相同(且可由实施例58b的过程制备)。在65-70℃缓慢加入庚烷(9vol)。浆液在65-70℃搅拌2-3小时，接着缓慢冷却至0-5℃。过滤产物，用EtOAc/庚烷(3/1v/v,4vol)洗涤并在45℃真空干燥以获得N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(102.3g,88％)。

方法4：化合物B(甲磺酸盐)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐

向N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(204mg,0.393mmol)的异丙醇溶液(2mL)加入甲磺酸(0.131mL,0.393mmol)，溶液在室温搅拌3小时。过滤所形成的白色沉淀和浆液，用乙醚冲洗以白色结晶固体得到标题产物(210mg,83％产率)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm10.85(s,1H)7.92-8.05(m,1H)7.56-7.72(m,1H)6.91-7.50(m,7H)5.83-5.98(m,1H)2.18-2.32(m,3H)1.36(s,9H).MS(ESI):520.0[M+H]⁺.

方法5：化合物B(另一种甲磺酸盐实施方式)-N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐

N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺(可根据实施例58a制备)(2.37g,4.56mmol)与预过滤乙腈(5.25vol,12.4mL)合并。溶于H₂O(0.75eq.,1.78mL)的预过滤甲磺酸溶液(1.1eq.,5.02mmol,0.48g)在20℃加入。所得混合物的温度提升至50-60℃，同时保持低搅拌速度。一旦混合物温度达到50-60℃，加入N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)-2-(1,1-二甲基乙基)-1,3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2,6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐种浆(seedslurry)(0.2vol预过滤乙腈中的1.0％w/w浆)，混合物老化，同时搅拌速度快到足以防止固体沉降，在50-60℃持续2小时。然后，混合物在0.25℃/min下冷却至0-5℃，0-5℃保持6小时。过滤混合物，湿饼用预过滤乙腈洗2次。第一次洗涤由14.2ml(6vol)预过滤乙腈组成且第二次洗涤由9.5ml(4vol)预过滤乙腈组成。湿固体在50℃真空干燥，产生2.39g(85.1％产率)产品。

通常，本发明的盐是药学上可接受盐。术语“药学上可接受盐”涵盖的盐指本发明化合物的无毒盐。本发明化合物的盐可包括从本发明化合物的取代基上氮衍生出的酸加成盐。代表性盐包括以下盐：乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、棒酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基阿散酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明盐(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲溴化物、甲基硝酸盐、甲磺酸盐、马来酸单钾盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、N-甲基葡糖胺盐、草酸盐、扑酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、钾盐、水杨酸盐、钠盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、三乙碘化物、三甲铵和戊酸盐。非药学上可接受的其它盐可用于制备本发明化合物且这些形成发明的另一方面。盐可由本领域技术人员易于制备。

尽管就治疗用途而言化合物A和B可作为原料化学品施用，可使活性成分呈现为药物组合物。因此，本发明还提供药物组合物，所述组合物包括化合物A和/或化合物B以及一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。化合物A和B如上所述。载体、稀释剂或赋形剂必须在以下意义上可接受：与其它制剂成分相容，能形成药物制剂，对其接受者无害。根据发明的另一方面，还提供制备药物组合物的工艺，包括混合化合物A和/或化合物B与一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。所用药物组合物的这些要素可以单独药物组合呈现或以共同配制于一种药物组合物中。因此，本发明还提供多个药物组合物的组合，药物组合物其中之一含有化合物A和一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物以及一种药物组合物含有化合物B和一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体可用于本文所述任何组合物。

药物组合物可以每单位剂量含预定量活性成分的单位剂型呈现。如本领域技术人员已知，每剂量的活性成分的量取决于所治疗病症、施用途径以及患者的年龄、体重和状况。优选的单位剂量组合物含有活性成分的日剂量或亚剂量或其合适部分。此外，这种药物组合物可通过制药领域熟知的任何方法制备。

化合物A和B可通过任何合适途径施用。合适的途径包括口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道和胃肠外(包括皮下、肌肉、静脉、皮内、鞘内和硬脑膜外)。应理解优选途径可变，例如随所述组合受体的状况和待治疗癌症而变化。还应理解施用的各试剂可经相同或不同途径施用且化合物A和B能复合在一起或处于分开的药物组合物中。抗PD-L1抗体通过缓慢注射进入静脉施用。

适合口服施用的药物组合物可作为独立单元，如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或奶油(whips)；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂呈现。

例如，对于片剂或胶囊剂形式的口服施用，活性药物组分能与口服、无毒的药学上可接受惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。粉末如下制备：粉碎化合物至合适细粒度，并与类似粉碎的药物载体如可食用碳水化合物(例如淀粉或甘露醇)混合。增味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也能存在。

胶囊如下制备：如上所述制备粉末混合物，填充形成的胶囊套。助流剂和润滑剂如硅胶、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇能在填充操作前加入粉末混合物。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善吞咽胶囊时的药物利用度。

此外，需要或必要时，合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也能造粒，粉末混合物可经过压片机，结果是未完全形成的小块会碎成颗粒。颗粒能经润滑纳入混合物。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶如阿拉伯胶、黄芪胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化纳等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。配制片剂，例如通过制备粉末混合物，造粒或冲击，加入润滑剂和崩解剂并压成片剂。粉末混合物如下制备：如上所述将适当粉碎的化合物与稀释剂或基质混合，可选联同粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滞剂如石蜡，再吸收促进剂如季盐和/或吸收剂如皂土、高岭土或磷酸氢钙。粉末混合物能如下造粒：用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶粘液(acadiamucilage)或者纤维素或聚合材料溶液湿润，并迫使过筛。防止粘住压片模具的替代方式是加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油。然后，润滑的混合物压成片剂。本发明化合物还能与自由流动的惰性载体组合并直接压成片剂，而不需经历造粒或冲击步骤。可提供澄清或不透明的保护包衣，所述包衣由虫胶密封涂层、糖或聚合材料的涂层和蜡的抛光涂层组成。能向这些包衣加入染料以区分不同单位剂量。

口服液体如溶液、糖浆和酏剂能以单位剂型制备，从而给定量包含预定量的化合物。通过将化合物溶于适当调味的水溶液可制备糖浆，使用无毒醇载剂制备酏剂。通过将化合物分散于无毒载剂可配制混悬剂。还能加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇及聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、香味添加剂如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等。

适当时，口服施用的组合物能装入微胶囊。所述组合物还能制备成延长或维持释放，例如通过将微粒材料包被或包埋于聚合物、蜡等。

根据本发明使用的试剂还可以脂质体递送系统形式施用，如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体能形成自多种磷脂，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。

根据本发明使用的试剂还可用单克隆抗体作为单独载体递送，化合物分子与所述载体偶联。所述化合物还能与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚、或聚环氧乙烷聚赖氨酸(经棕榈酰残基取代)。此外，所述化合物可偶联至一类用于实现药物受控释放的生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

适合经皮施用的药物组合物可作为独立贴片呈现，贴片旨在维持与受体表皮的长时间密切接触。例如，活性成分可通过离子导入法从贴片递送，大致如PharmaceuticalResearch,3(6),318(1986)所述。

适合局部施用的药物组合物可配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

对于眼或其它外部组织如口腔和皮肤的治疗，所述组合物优选作为局部软膏剂或乳膏剂施用。配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡或水混合性软膏基质一起使用。或者，该活性成分可与水包油乳膏基质或油包水基质配制成乳膏。

适合眼部局部施用的药物组合物包括滴眼液，其中活性成分溶解或混悬于合适的载体中，特别是水溶剂中。

适合口腔局部施用的药物组合物包括锭剂、糖果锭剂和漱口剂。

适合直肠施用的药物组合物可以为栓剂或灌肠剂。

适合经鼻施用的药物组合物(其中载体是固体)包括粒度范围为20-500微米的粗粉，可以将粉末以鼻吸药的方式施用，即，从将靠近鼻子的粉末容器中经鼻迅速吸入。用于作为鼻喷雾剂或滴鼻剂施用的合适组合物(其中载体是液体)包括活性成分的水或油溶液。

适合经吸入施用的药物组合物包括细粒粉剂或薄雾，其可通过不同类型的定量压力气雾剂、喷雾器或吸入器产生。

适合阴道施用的药物组合物可以为阴道栓剂、棉塞剂(tampons)、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂组合物。

适合胃肠外施用的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期受体的血液等渗的溶质；水性和非水性无菌混悬液，其可包括混悬剂和增稠剂。所述组合物可存在于单剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可贮存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅要求在临用前添加无菌液状载体例如注射用水。临时注射溶液和混悬液可以从无菌粉末、颗粒和片剂配制。

应理解除了上面具体提及的成分，所述组合可包括涉及考虑中的制剂类型的领域中常规的其它试剂，例如那些适合口服施用的可包括增味剂。

依照本发明，化合物A和B可以通过在含化合物A和B的单一药物组合物中同时施用而联用。或者，所述组合可在各自包括化合物A和B之一的单独药物组合物中以顺序形式分开施用，其中例如化合物A或化合物B首先施用且另一个第二施用。这种顺序施用可在时间上接近(如同时)或时间上距离较远。此外，无所谓化合物是否以同一剂型施用，如一种化合物可局部施用而另一化合物可口服施用。2种化合物都适宜口服施用。

因此，在一个实施方式中，一个或多个剂量的化合物A与一个或多个剂量的化合物B和一个或多个剂量的抗PD-L1抗体同时或分开施用。

在一个实施方式中，多剂量化合物A与多剂量化合物B和多剂量抗PD-L1抗体同时或分开施用。

在一个实施方式中，多剂量化合物A与一个剂量化合物B和一个剂量的抗PD-L1抗体同时或分开施用。

在上面所有实施方式中，化合物A可首先施用或化合物B可首先施用或抗PD-L1抗体可首先施用。

所述组合可以组合药盒呈现。本文所用的术语“组合药盒”或“成套药盒”指一种或多种药物组合物根据本发明用于施用化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体。化合物A和化合物B同时施用时，所述组合药盒能包含处于单一药物组合物或单独药物组合物如片剂中的化合物A和化合物B，以及小瓶中的抗PD-L1抗体。当化合物A和B不是同时施用时，所述组合药盒会包含分开的药物组合物中的化合物A、化合物B，以及抗PD-L1抗体，其中化合物A和化合物B在单一包装中或化合物A和化合物B在分开包装的单独药物组合物中。

一方面，提供包括以下组分的成套药盒：

化合物A，与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体联合；化合物B，与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体联合；和抗PD-L1抗体。

在本发明的一个实施方式中，所述成套药盒包括以下组分：

化合物A，与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体联合；

化合物B，与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体联合；

和抗PD-L1抗体，其中所述组分以适合顺序、分开和/或同时施用的形式提供。

在一个实施方式中，所述成套药盒包括：

含化合物A与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体的第一容器；含化合物B与药学上可接受佐剂、稀释剂或载体的第二容器；和含抗PD-L1抗体的第三容器。

所述组合药盒还能根据有说明，如剂量和施用说明。这种剂量和施用说明可以是提供给医生的类型例如药品标签，或可以是由医生提供的类型，如给患者的说明。

本文所用的术语“负荷剂量”应理解成指单一剂量或短历时方案的化合物A或化合物B或抗PD-L1抗体，剂量高于施用于对象的维持剂量以(例如)迅速增加药物的血浓度水平。合适地，本文所用的短历时方案为：1-14天；适宜1-7天；适宜1-3天；适宜3天；适宜2天；适宜1天。在一些实施方式中，“负荷剂量”能增加血药浓度到治疗有效水平。在一些实施方式中，“负荷剂量”结合药物维持剂量能增加血药浓度到治疗有效水平。“负荷剂量”可每天施用一次，或大于每天一次(如多至每天4次)。“负荷剂量”适宜每天施用一次。合适地，负荷剂量为维持剂量的2-100倍；适宜2-10倍；适宜2-5倍；适宜2倍；适宜3倍；适宜4倍；适宜5倍。合适地，负荷剂量施用1-7天；适宜1-5天；适宜1-3天；适宜1天；适宜2天；适宜3天，然后是维持剂量操作。

本文所用的术语“维持剂量”应理解成指连续施用(例如至少2次)的剂量，其用于缓慢提升化合物血药浓度到治疗有效水平，或维持该治疗有效水平。维持剂量一般每天施用一次且维持剂量的日剂量低于负荷剂量的总日剂量。

本发明组合适宜在“指定时段”内施用。

本文所用的术语“指定时段”和其派生词指所述组合第一化合物与该组合的最后一种化合物施用之间的时间间隔。例如，如果首先施用化合物A，第二施用化合物B且第三施用抗PD-L1抗体，则化合物A与抗PD-L1抗体施用之间的时间间隔是指定时段。当本发明一种组分每天施用大于一次时，指定时段在特定日首次施用各组分的基础上计算。计算指定时段时，不考虑特定日中首次施用之后的所有本发明化合物施用。

合适地，如果化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体在“指定时段”内施用且不是同时施用，其都在彼此约24小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约24小时；其适宜在彼此约12小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约12小时；其适宜在彼此约11小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约11小时；其适宜在彼此约10小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约10小时；其适宜在彼此约9小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约9小时；其适宜在彼此约8小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约8小时；其适宜在彼此约7小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约7小时；其适宜在彼此约6小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约6小时；其适宜在彼此约5小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约5小时；其适宜在彼此约4小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约4小时；其适宜在彼此约3小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约3小时；其适宜在彼此约2小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约2小时；其适宜在彼此约1小时内施用-在这种情况中，指定时段会是约1小时，且视作同时施用。

合适地，在“指定时段”施用本发明组合时，所述化合物会共施用一段“持续时间”。

本文所用的术语“持续时间”和其派生词涉及化合物A和化合物B时，指化合物A和化合物B连续施用指定天数，可选在之后连续数天仅施用一种组分化合物。

本文所用的术语“持续时间”和其派生词涉及抗PD-L1抗体时，指抗PD-L1抗体每2周施用1次，连续施用指定周数。

关于“指定时段”施用：

合适地，至少1天在指定时段内施用化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体--在这种情况中，持续时间会是至少1天；合适地，在治疗进程中，至少连续3天在指定时段内施用化合物A和化合物B，抗PD-L1抗体在此时间中施用1次-在这种情况中，持续时间会是至少3天；合适地，在治疗进程中，至少连续5天在指定时段内施用化合物A和化合物B，抗PD-L1抗体在此时间中施用1次-在这种情况中，持续时间会是至少5天；合适地，在治疗进程中，至少连续7天在指定时段内施用化合物A和化合物B，抗PD-L1抗体在此时间中施用1次-在这种情况中，持续时间会是至少7天；合适地，在治疗进程中，至少连续14天在指定时段内施用化合物A和化合物B，抗PD-L1抗体在此时间中施用1次-在这种情况中，持续时间会是至少14天；合适地，在治疗进程中，至少连续30天在指定时段内施用化合物A和化合物B，抗PD-L1抗体在此时间中施用2或3次-在这种情况中，持续时间会是至少30天。

合适地，如果所述组分不在“指定时段”内施用，则其顺序施用。本文所用的术语“顺序施用”和其派生词指化合物A、化合物B或抗PD-L1抗体组合的第一组分连续施用2天或更多天，接着该组合的第二组分连续施用2天或更多天，然后该组合的最后一种组分连续施用2天或更多天。同样，本文考虑顺序施用化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体之间采用的药物假期。如本文所用，药物假期是在顺序施用化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体之后且在施用本发明其它组分之前的一段时间。药物假期适宜是选自以下的一段时间：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。

关于顺序施用：

合适地，化合物B以在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用化合物A，之后施用抗PD-L1抗体。合适地，化合物B连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物B连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物B连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物B连续施用14天，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用7天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物B连续施用7天，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用7天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。

合适地，化合物A在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用化合物B，之后施用抗PD-L1抗体。合适地，化合物A连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物A连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物A连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物A连续施用14天，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用14天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。合适地，化合物A连续施用7天，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用7天，接着是可选的药物假期，之后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周。

合适地，抗PD-L1抗体在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用化合物B，接着是可选的药物假期，之后施用化合物A。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-30天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-21天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-14天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用14天，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用14天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物B连续施用7天，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用7天。

合适地，抗PD-L1抗体在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用化合物A，接着是可选的药物假期，之后施用化合物B。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-30天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-21天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-14天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用14天，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用14天。合适地，抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，然后化合物A连续施用7天，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用7天。

合适地，化合物A在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用抗PD-L1抗体，之后施用化合物B。合适地，化合物A连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-30天。合适地，化合物A连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-21天。合适地，化合物A连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用1-14天。合适地，化合物A连续施用14天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用14天。合适地，化合物A连续施用7天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物B连续施用7天。

合适地，化合物B在顺序中首先施用，接着是可选的药物假期，然后施用抗PD-L1抗体，之后施用化合物A。合适地，化合物B连续施用1-30天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-30天。合适地，化合物B连续施用1-21天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-21天。合适地，化合物B连续施用1-14天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用1-14天。合适地，化合物B连续施用14天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用14天。合适地，化合物B连续施用7天，接着是可选的药物假期，然后抗PD-L1抗体每2周施用1次，持续2-10周，接着是可选的药物假期，之后化合物A连续施用7天。

应理解“指定时段”施用和“顺序”施用之后可以是重复给药或替代性给药操作，重复给药或替代性给药操作之前可以是药物假期。

合适地，作为本发明所述组合一部分施用的化合物A含量(基于未成盐/未溶剂化的量)选自约0.125mg-约10mg；所述量适宜选自约0.25mg-约9mg；所述量适宜选自约0.25mg-约8mg；所述量适宜选自约0.5mg-约8mg；所述量适宜选自约0.5mg-约7mg；所述量适宜选自约1mg-约7mg；所述量适宜为约5mg。因此，作为本发明所述组合一部分施用的化合物A含量选自约0.125mg-约10mg。例如，作为本发明所述组合一部分施用的化合物A含量可以是0.125mg、0.25mg、0.5mg、0.75mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg、5mg、5.5mg、6mg、6.5mg、7mg、7.5mg、8mg、8.5mg、9mg、9.5mg、10mg。

选定量的化合物A适宜一天施用1-4次。选定量的化合物A适宜一天施用2次。选定量的化合物A适宜一天施用1次。合适地，化合物A施用以负荷剂量开始。合适地，负荷剂量是维持剂量的2-100倍；适宜2-10倍；适宜2-5倍；适宜2倍；适宜3倍；适宜4倍；适宜5倍。合适地，负荷剂量施用1-7天；适宜1-5天；适宜1-3天；适宜1天；适宜2天；适宜3天，然后是维持剂量操作。

合适地，作为本发明所述组合一部分施用的化合物B含量(基于未成盐/未溶剂化的量)选自约10mg-约600mg。所述量适宜选自约30mg-约300mg；所述量适宜选自约30mg-约280mg；所述量适宜选自约40mg-约260mg；所述量适宜选自约60mg-约240mg；所述量适宜选自约80mg-约220mg；所述量适宜选自约90mg-约210mg；所述量适宜选自约100mg-约200mg；所述量适宜选自约110mg-约190mg；所述量适宜选自约120mg-约180mg；所述量适宜选自约130mg-约170mg；所述量适宜选自约140mg-约160mg；所述量适宜为150mg。因此，作为本发明所述组合一部分施用的化合物B含量选自约10mg-约300mg。例如，作为本发明所述组合一部分施用的化合物B含量适宜选自10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg和300mg。选定量的化合物B适宜一天施用1-4次。选定量的化合物B适宜一天施用2次。化合物B适宜一天施用2次。选定量的化合物B适宜一天施用1次。

合适地，化合物B施用以负荷剂量开始。合适地，负荷剂量是维持剂量的2-100倍；适宜2-10倍；适宜2-5倍；适宜2倍；适宜3倍；适宜4倍；适宜5倍。合适地，负荷剂量施用1-7天；适宜1-5天；适宜1-3天；适宜1天；适宜2天；适宜3天，然后是维持剂量操作。

抗PD-L1抗体以每2周2mg/kg-30mg/kg的剂量施用；适宜每2周3mg/kg-20mg/kg；适宜每2周5mg/kg-10mg/kg；适宜每2周6mg/kg。

本发明的一个实施方式提供以下组合：一天施用1次的化合物A；一天施用1次或2次的化合物B；根据上述操作施用的抗PD-L1抗体，持续至少8周，适宜至少6周，适宜至少4周，适宜至少2周，所有这三种化合物适宜在每2周阶段的第一天施用。

如本文所用，就化合物A和化合物B指定的所有量表示为游离或未成盐化合物的量。

治疗方法

认为本发明组合对能得益于抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用的疾病有效用。

因此，本发明还提供用于治疗的发明组合，尤其是治疗能得益于抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用的疾病，特别是癌症。

本发明的另一方面提供治疗疾病的方法，所述疾病中抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用是有益的，所述方法包括施用本发明的组合。

本发明的另一方面提供本发明组合在生产药物中的应用，所述药物用于治疗能得益于抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用的疾病。

通常，所述疾病是癌症，从而抑制MEK和/或B-Raf和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间相互作用具有有益效果。适于本发明组合治疗的癌症示例包括但不限于原发和转移形式的头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌和前列腺癌。所述癌症适宜选自：脑癌(胶质瘤)、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、小脑发育不良性节细胞瘤、乳腺癌、炎性乳腺癌、肾母细胞瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、淋巴T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞白血病、AML、慢性中性粒细胞白血病、T细胞急性淋巴细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。

另外，待治疗的癌症示例包括Barrett腺癌；胆道癌；乳腺癌；宫颈癌；胆管癌；中枢神经系统肿瘤，包括原发性CNS肿瘤如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤(如多形性成胶质细胞瘤)和室管膜瘤以及继发性CNS肿瘤(即起始于中枢神经系统之外的肿瘤转移到中枢神经系统)；结直肠癌，包括大肠结肠癌；胃癌；头颈癌，包括头颈部鳞状细胞癌；血液癌，包括白血病和淋巴瘤如急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征、慢性髓细胞性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤和红白血病；肝细胞癌；肺癌，包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌；卵巢癌；子宫内膜癌；胰腺癌；垂体腺瘤；前列腺癌；肾癌；肉瘤；皮肤癌，包括黑素瘤；和甲状腺癌。

合适地，本发明涉及治疗或减轻选自以下的癌症严重度的方法：脑癌(胶质瘤)、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、小脑发育不良性节细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和甲状腺癌。

合适地，本发明涉及治疗或减轻选自以下的癌症严重度的方法：卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌。

合适地，本发明涉及在包括人在内的哺乳动物中治疗或减轻癌前综合征严重度的方法，其中所述癌前综合征选自：宫颈上皮内瘤样病变、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、宫颈病变、皮肤痣(黑素瘤前期)、前列腺上皮(管内)内瘤变(PIN)、导管原位癌(DCIS)、结肠息肉和重型肝炎或硬化。

合适地，本发明涉及治疗或减轻癌症严重度的方法，所述癌症是Raf和KRAS的野生型或突变体或是PI3K/Pten的野生型或突变体。这包括Raf、KRAS和PI3K/PTEN野生型，Raf、KRAS和PI3K/PTEN突变体，Raf突变体和KRAS及PI3K/PTEN野生型、Raf和KRAS野生型及PI3K/PTEN突变体的患者。

术语“野生型”在本领域应理解为指在本地人群中出现且无基因修饰的多肽或多核苷酸序列。“突变体”在本领域也理解为包括与野生型多肽或多核苷酸中所见的对应氨基酸或核酸相比，分别有至少一个氨基酸或核酸修饰的多肽或多核苷酸序列。术语突变体包括单核苷酸多态性(SNP)，其中一个核酸链序列相较最常见(野生型)核酸链存在单碱基对区别。

就Raf而言为野生型或突变体，就PI3K/Pten而言为野生型或突变体，以及作为野生型或突变体的癌症由已知方法鉴定。

例如，野生型或突变体Raf或PI3K/PTEN肿瘤细胞能通过DNA扩增和测序技术、DNA和RNA检测技术鉴定(分别包括但不限于Northern和Southern印迹)、和/或多种生物芯片和阵列技术鉴定。野生型和突变多肽能通过多种技术检测，所述技术包括但不限于免疫诊断技术如ELISA、Western印迹或免疫细胞化学。合适地，可使用焦磷酸解激活的聚合反应技术(PAP)和/或PCR法。Liu,Q等；HumanMutation23:426-436(2004).

本发明组合可单独使用或与一种或多种其它治疗剂联用。因此，本发明的另一方面提供含本发明组合与一种或多种其它治疗剂的进一步组合，含所述组合的组合物和药物以及该进一步组合、组合物和药物在治疗中的应用，特别是治疗易受MEK和/或激酶B抑制和/或中和或抑制PD-L1与其受体如PD-1之间的相互作用影响的疾病。

在一个实施方式中，本发明组合可与癌症治疗的其它治疗方法一起使用。特别地，在抗肿瘤疗法中，考虑除了上述以外，用其它化疗、激素、抗体剂以及手术和/或放射治疗的联合治疗。因此，本发明所述联合疗法包括施用化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体以及可选使用其它治疗剂，包括其它抗肿瘤剂。这种药剂组合可一起或分开施用，分开施用时，这可同时或以在时间上接近和距离较远的任何顺序依序进行。在一个实施方式中，所述药物组合包括化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体，可选至少一种额外抗肿瘤剂。

在一个实施方式中，所述另外的抗癌疗法是手术和/或放射疗法。

在一个实施方式中，所述另外的抗癌疗法是至少一种额外抗肿瘤剂。

对所治疗易感性肿瘤具有活性的任意抗肿瘤剂可用于所述组合。有用的典型抗肿瘤剂包括但不限于抗微管剂如双萜类和长春花生物碱；铂配位络合物；烷化剂如氮芥、磷、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯；抗生素如蒽环类、放线菌素和博来霉素；拓扑异构酶II抑制剂如表鬼臼毒素；抗代谢物如嘌呤和嘧啶类似物及抗叶酸剂化合物；拓扑异构酶I抑制剂如喜树碱；激素和激素类似物；信号转导通路抑制剂；非受体酪氨酸血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；和细胞周期信号抑制剂。

抗微管或抗有丝分裂剂：抗微管或抗有丝分裂剂是时相特异性试剂，针对细胞周期的M或有丝分裂期中的肿瘤细胞微管有活性。抗微管剂的示例包括但不限于双萜类和长春花生物碱。

衍生自天然源的双萜类是时相特异性抗癌剂，其在细胞周期的G₂/M期运作。双萜类被认为通过结合微管蛋白使微管的β-微管蛋白亚基稳定。然后，蛋白分解看似受到抑制，有丝分裂被阻滞且随后细胞死亡。双萜类示例包括但不限于紫杉醇和其类似物多西他赛。

紫杉醇即5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4,10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2R,3S)-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯]，是分离自太平洋紫杉短叶红豆杉(Taxusbrevifolia)的天然双萜产物，可作为注射液市售可得。其是萜烯紫杉烷家族的成员。美国已批准紫杉醇临床用于治疗难治性卵巢癌(Markman等，YaleJournalofBiologyandMedicine,64:583,1991；McGuire等，Ann.lntem,Med.,111:273,1989)和治疗乳腺癌(Holmes等，J.Nat.CancerInst.,83:1797,1991)。其是治疗皮肤肿瘤(Einzig等，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.,20:46)和头颈癌(Forastire等，Sem.Oncol.,20:56,1990)的潜在候选物。所述化合物还显示治疗多囊性肾病(Woo等，Nature,368:750.1994)、肺癌和疟疾的潜力。用紫杉醇治疗患者导致骨髓抑制(多个细胞系，Ignoff,R.J.等,CancerChemotherapyPocketGuide,1998)，所述抑制涉及上述槛限浓度(50nM)给药的持续时间(Kearns,C.M.等，SeminarsinOncology,3(6)16-23页,1995)。

多西他赛即5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4-乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2R,3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸酯]的三水合物；作为注射液市售可得。多西他赛适用于治疗乳腺癌。多西他赛是所称紫杉醇的半合成衍生物，用提取自欧洲紫杉针叶的天然前体10-脱乙酰-巴卡亭III制备。

长春花生物碱是源自长春花植物的时相特异性抗肿瘤剂。长春花生物碱通过特异性结合微管蛋白而在细胞周期的M期(有丝分裂)起作用。因此，结合的微管蛋白分子不能聚合成微管。认为有丝分裂滞留于中期，随后是细胞死亡。长春花生物碱的示例包括但不限于长春花碱、长春新碱和长春瑞滨。

长春花碱即硫酸长春碱可作为注射液市售可得。尽管其可能适合多种实体瘤的二线治疗，它主要适于治疗睪丸癌和多种淋巴瘤，包括霍奇金病；淋巴细胞性淋巴瘤和组织细胞性淋巴瘤。骨髓抑制是长春花碱的剂量限制副作用。

长春新碱即22-氧代长春碱硫酸盐，可作为注射液市售可得。长春新碱适合治疗急性白血病，还发现可用于霍奇金和非霍奇金恶性淋巴瘤的治疗方案。秃头症和神经系统影响是长春新碱最常见的副作用，骨髓抑制和胃肠粘膜炎影响出现的程度较小。

长春瑞滨即3’,4’二脱氢-4’-脱氧-C’-去甲长春碱[R-(R*,R*)-2,3-二羟基丁二酸盐(1:2)(盐)]，可作为酒石酸长春瑞滨注射液市售可得，其是半合成长春花生物碱。长春瑞滨适合作为单一药剂或与其它化疗剂如顺铂联合治疗多种实体瘤，尤其是非小细胞肺癌、晚期乳腺癌和激素抵抗性前列腺癌。骨髓抑制是长春瑞滨最常见的剂量限制副作用。

铂配位络合物：铂配位络合物是非时相特异性抗癌剂，其与DNA相互作用。铂络合物进入肿瘤细胞，经历水合作用并与DNA形成链内和链间交联，引起对肿瘤的不利生物作用。铂配位络合物的示例包括但不限于奥沙利铂、顺铂和卡铂。

顺铂即顺式二氨二氯铂，可作为注射液市售可得。顺铂主要适于治疗转移性睪丸癌和卵巢癌以及晚期膀胱癌。

卡铂即二氨[1,1-环丁烷-二羟络(2-)-O,O’]铂，可作为注射液市售可得。卡铂主要适合晚期卵巢癌的一线和二线治疗。

烷化剂：烷化剂是非时相特异性抗癌剂和强亲电试剂。通常，烷化剂通过烷化，经DNA分子的亲核部分如磷酸、氨基、巯基、羟基、羧基和咪唑基团与DNA形成共价键。这类烷化破坏核酸功能，导致细胞死亡。烷化剂示例包括但不限于氮芥如环磷酰胺、美法仑和苯丁酸氮芥；烷基磺酸盐如白消安；亚硝基脲如卡莫司汀；和三氮烯如达卡巴嗪。

环磷酰胺即2-[双(2-氯乙基)氨基]四氢-2H-1,3,2-磷-2-氧化物一水合物，可作为注射液或片剂市售可得。环磷酰胺适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤和白血病。

美法仑即4-[双(2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸，可作为注射液或片剂市售可得。美法仑适合多发性骨髓瘤和非可切除卵巢癌的姑息疗法。骨髓抑制是美法仑最常见的剂量限制副作用。

苯丁酸氮芥即4-[双(2-氯乙基)氨基]苯丁酸，可作为片剂市售可得。苯丁酸氮芥适合慢性淋巴性白血病、恶性淋巴瘤如淋巴肉瘤、巨滤泡性淋巴瘤和霍奇金病的姑息疗法。

白消安即1,4-丁二醇二甲烷磺酸盐，可作为片剂市售可得。白消安适合慢性髓细胞性白血病的姑息疗法。

卡莫司汀即1,3-[双(2-氯乙基)-1-亚硝基脲，可作为单一冻干材料瓶市售可得。卡莫司汀适合作为单一药剂或与其它药剂联合以姑息治疗脑肿瘤、多发性骨髓瘤、霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤。

达卡巴嗪即5-(3,3-二甲基-1-三氮烯)咪唑-4-羧酰胺，可作为单一材料瓶市售可得。达卡巴嗪适合治疗转移性恶性黑素瘤和与其它药剂联用于霍奇金病的二线治疗。

抗生素抗肿瘤药：抗生素抗肿瘤药是结合或插入DNA的非时相特异性试剂。通常，这类作用产生稳定的DNA复合体或链断裂，其破坏核酸的普通功能，导致细胞死亡。抗生素抗肿瘤药的示例包括但不限于放线菌素如更生霉素，蒽环霉素如道诺霉素和阿霉素；以及博来霉素。

更生霉素也称为放线菌素D，可作为注射形式市售可得。更生霉素适合治疗肾母细胞瘤和横纹肌肉瘤。

道诺霉素即(8S-顺式-)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏己吡喃基)氧基]-7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12并四苯二酮盐酸盐，可作为脂质体注射形式或注射形式市售可得。道诺霉素适合急性非淋巴细胞性白血病和晚期HIV相关卡波西氏肉瘤治疗中的缓解诱导。

阿霉素即(8S,10S)-10-[(3-氨基-2,3,6-三脱氧-α-L-来苏己吡喃基)氧基]-8-羟基乙酰基,7,8,9,10-四氢-6,8,11-三羟基-1-甲氧基-5,12-并四苯二酮盐酸盐，可作为注射形式或ADRIAMYCIN市售可得。阿霉素主要适合治疗急性成淋巴细胞性白血病和急性髓细胞白血病，但也是治疗一些实体瘤和淋巴瘤的有用组分。

博来霉素即分离自轮枝链霉菌(Streptomycesverticillus)菌株的细胞毒性糖肽抗生素混合物，可作为市售可得。博来霉素适合作为单一药剂或与其它药剂联合以姑息治疗鳞状细胞癌、淋巴瘤和睾丸癌。

拓扑异构酶II抑制剂：拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于表鬼臼毒素。

表鬼臼毒素是源自曼德拉草植物的时相特异性抗肿瘤剂。表鬼臼毒素通常通过与拓扑异构酶II和DNA形成三元复合物、导致DNA链断裂，影响细胞周期中S和G₂期的细胞。所述链断裂积聚，随后细胞死亡。表鬼臼毒素的示例包括但不限于依托泊苷和替尼泊苷。

依托泊苷即4’-脱甲基-表鬼臼毒素9[4,6-0-(R)-亚乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，可作为注射液或胶囊市售可得且通常称为VP-16。依托泊苷适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗睾丸癌和非小细胞肺癌。

替尼泊苷即4’-脱甲基-表鬼臼毒素9[4,6-0-(R)-噻吩亚甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷]，可作为注射液市售可得且通常称为VM-26。替尼泊苷适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗儿童的急性白血病。

抗代谢抗肿瘤剂：抗代谢抗肿瘤剂是在细胞周期S期(DNA合成)作用的时相特异性抗肿瘤剂，其通过抑制DNA合成或者抑制嘌呤或嘧啶碱基合成并从而限制DNA合成。因此，S期不进展，随后细胞死亡。抗代谢抗肿瘤剂的示例包括但不限于氟尿嘧啶、氨甲蝶呤、阿糖孢苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤和吉西他滨。

5-氟尿嘧啶、5-氟-2,4-(1H,3H)嘧啶二酮作为氟尿嘧啶市售可得。施用5-氟尿嘧啶导致胸苷酸合成抑制且还掺入RNA和DNA.。所述结果通常是细胞死亡。5-氟尿嘧啶适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗乳腺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌和胰腺癌。其它氟嘧啶类似物包括5-氟脱氧尿苷(氟尿苷)和5-氟脱氧尿苷单磷酸盐。

阿糖孢苷即4-氨基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-2(1H)-嘧啶酮，作为市售可得且通常称为Ara-C。阿糖孢苷被认为通过阿糖孢苷末端掺入增长中的DNA链，抑制DNA链延长而在S期显示细胞周期时相特异性。阿糖孢苷适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗急性白血病。其它胞苷类似物包括5-氮胞苷和2’,2’-二氟脱氧胞苷(吉西他滨)。

巯嘌呤即1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮一水合物，作为市售可得。巯嘌呤通过抑制DNA合成而在S期显示细胞周期时相特异性，其机制尚未明确。巯嘌呤适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗急性白血病。一种有用的巯嘌呤类似物是硫唑嘌呤。

硫鸟嘌呤即2-氨基-1,7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮，作为市售可得。硫鸟嘌呤通过抑制DNA合成而在S期显示细胞周期时相特异性，其机制尚未明确。硫鸟嘌呤适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗急性白血病。其它嘌呤类似物包括喷司他丁、赤型-羟基壬基腺嘌呤、磷酸氟达拉滨和克拉屈滨。

吉西他滨即2’-脱氧-2’,2’-二氟胞嘧啶单盐酸盐(β-异构体)，作为市售可得。吉西他滨通过阻断细胞通过G1/S期边界进展而在S期显示细胞周期时相特异性。吉西他滨适合与顺铂联合治疗局部晚期非小细胞肺癌以及单独治疗局部晚期胰腺癌。

氨甲蝶呤即N-[4[[(2,4-二氨基-6-蝶啶基)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸，作为甲氨蝶呤钠市售可得。氨甲蝶呤通过抑制嘌呤核苷酸和胸苷酸合成所需的二氢叶酸还原酶，抑制DNA合成、修复和/或复制而在S期显示细胞周期时相特异性效果。氨甲蝶呤适合作为单一药剂或与其它化疗剂联合治疗绒毛膜癌、脑膜白血病、非霍奇金淋巴瘤以及乳腺癌、头部癌、颈部癌、卵巢癌和膀胱癌。

拓扑异构酶I抑制剂：喜树碱包括喜树碱和喜树碱衍生物，其作为拓扑异构酶I抑制剂是可得的或正在开发中。喜树碱细胞毒性被认为与其拓扑异构酶I抑制活性相关。喜树碱的示例包括但不限于伊立替康、拓扑替康和不同光学形式的下述7-(4-甲基哌嗪-亚甲基)-10,11-乙二氧基-20-喜树碱。

盐酸伊立替康即(4S)-4,11-二乙基-4-羟基-9-[(4-哌啶基哌啶)羰氧基]-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲哚嗪[1,2-b]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮盐酸盐，作为注射液市售可得。伊立替康是喜树碱衍生物，与其活性代谢物SN-38一起结合拓扑异构酶I–DNA复合体。细胞毒性被认为是不可修复的双链断裂的结果，该断裂由拓扑异构酶I:DNA:伊立替康或SN-38三元复合物与复制酶相互作用导致。伊立替康适合治疗转移性结肠或直肠癌症。

盐酸拓扑替康即(S)-10-[(二甲基氨基)甲基]-4-乙基-4,9-二羟基-1H-吡喃并[3’,4’,6,7]吲哚嗪[1,2-b]-喹啉-3-14(4H,12H)-二酮单盐酸盐，作为注射液市售可得。拓扑替康是喜树碱衍生物，其结合拓扑异构酶I–DNA复合体并防止由拓扑异构酶I响应DNA分子扭应变导致的单链断裂再连接。拓扑替康适合转移性卵巢癌和小细胞肺癌的二线治疗。

激素和激素类似物：激素和激素类似物是治疗某些癌症的有用化合物，这些癌症中激素与肿瘤生长和/或不生长之间存在关联。用于癌症治疗的激素和激素类似物示例包括但不限于肾上腺皮质甾类如强的松和泼尼松龙，其用于治疗儿童的恶性淋巴瘤和急性白血病；氨鲁米特和其它芳香酶抑制剂如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦，用于治疗肾上腺皮质癌和含雌激素受体的激素依赖性乳腺癌；孕酮如醋酸甲地孕酮，用于治疗激素依赖性乳腺癌和子宫内膜癌；雌激素，雄激素和抗雄激素如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸环丙孕酮以及5α-还原酶如非那雄胺和度他雄胺，用于治疗前列腺癌和良性前列腺肥大；抗雌激素如它莫西芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、碘昔芬以及选择性雌激素受体调节剂(SERMS)如美国专利号5,681,835、5,877,219和6,207,716所述的那些，用于治疗激素依赖性乳腺癌和其它易感性癌症；促性腺激素释放激素(GnRH)和其类似物，其刺激黄体化激素(LH)和/或促滤泡激素(FSH)释放以治疗前列腺癌，例如LHRH激动剂和拮抗剂如醋酸戈舍瑞林和亮丙瑞林。

信号转导通路抑制剂：信号转导通路抑制剂是阻断或抑制引起胞内变化的化学过程的抑制剂。如本文所用，此变化是细胞增殖或分化。用于本发明的信号转导抑制剂包括以下的抑制剂：受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶、SH2/SH3结构域阻断剂、丝氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酰肌醇3-激酶、肌醇信号传递和Ras癌基因。

数种蛋白酪氨酸激酶催化细胞生长调节所涉及的多种蛋白中特定酪氨酰残基的磷酸化。这些蛋白酪氨酸激酶能大致分成受体或非受体激酶。

受体酪氨酸激酶是跨膜蛋白，具有胞外配体结合域、跨膜结构域和酪氨酸激酶结构域。受体酪氨酸激酶参与细胞生长调节且一般称为生长因子受体。许多这些激酶的不恰当或不受控活化(即异常激酶生长因子受体活性)，例如过表达或突变，显示导致细胞生长不受控。因此，所述激酶的异常活性与恶性组织生长相关。因而，这类激酶的抑制剂能提供癌症治疗方法。例如，生长因子受体包括表皮生长因子受体(EGFr)、血小板衍生生长因子受体(PDGFr)、erbB2、erbB4、ret、血管内皮生长因子受体(VEGFr)、有免疫球蛋白样和表皮生长因子同源结构域的酪氨酸激酶(TIE-2)、胰岛素生长因子–I(IGFI)受体、巨噬细胞集落刺激因子(cfms)、BTK、ckit、cmet、成纤维细胞生长因子(FGF)受体、Trk受体(TrkA、TrkB和TrkC)、肝配蛋白(eph)受体和RET原癌基因。数种生长受体抑制剂正在开发中且包括配体拮抗剂、抗体、酪氨酸激酶抑制剂和反义寡核苷酸。生长因子受体和抑制生长因子受体功能的试剂描述于例如Kath,JohnC.,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(6):803-818；Shawver等DDT第2卷第2期,1997年2月；和Lofts,F.J.等,“作为靶标的生长因子受体(Growthfactorreceptorsastargets)”,《癌症化疗的新分子靶标》(NewMolecularTargetsforCancerChemotherapy),Workman,Paul和Kerr,David编,伦敦的CRC出版社1994。

不是生长因子受体激酶的酪氨酸激酶称为非受体酪氨酸激酶。用于本发明的非受体酪氨酸激酶是抗癌药的靶点或潜在靶点，包括cSrc、Lck、Fyn、Yes、Jak、cAbl、FAK(粘着斑激酶)、布鲁顿酪氨酸激酶和Bcr-Abl。这类抑制非受体酪氨酸激酶功能的非受体激酶和试剂描述于Sinh,S.和Corey,S.J.,(1999)JournalofHematotherapyandStemCellResearch8(5):465–80；和Bolen,J.B.,Brugge,J.S.,(1997)AnnualreviewofImmunology.15:371-404。

SH2/SH3结构域阻断剂是破坏多种酶或衔接蛋白中SH2或SH3结构域结合的试剂，所述酶或衔接蛋白包括PI3-Kp85亚基、Src家族激酶、衔接分子(Shc、Crk、Nck、Grb2)和Ras-GAP。作为抗癌药靶标的SH2/SH3结构域参见Smithgall,T.E.(1995),JournalofPharmacologicalandToxicologicalMethods.34(3)125-32。

丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括MAP激酶级联阻断剂，其包括Raf激酶(rafk)、丝裂原或胞外调节激酶(MEK)和胞外调节激酶(ERK)的阻断剂；蛋白激酶C家族成员阻断剂，包括PKC(α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ)的阻断剂。IkB激酶家族(IKKa、IKKb)、PKB家族激酶、akt激酶家族成员和TGFβ受体激酶。这类丝氨酸/苏氨酸激酶和其抑制剂描述于Yamamoto,T.,Taya,S.,Kaibuchi,K.,(1999),JournalofBiochemistry.126(5)799-803；Brodt,P,Samani,A.和Navab,R.(2000),BiochemicalPharmacology,60.1101-1107；Massague,J.,Weis-Garcia,F.(1996)CancerSurveys.27:41-64；Philip,P.A.,和Harris,A.L.(1995),CancerTreatmentandResearch.78:3-27,Lackey,K.等BioorganicandMedicinalChemistryLetters,(10),2000,223-226；美国专利号6,268,391；和Martinez-Iacaci,L.等,Int.J.Cancer(2000),88(1),44-52。

磷脂酰肌醇3-激酶家族成员的抑制剂也用于本发明，包括PI3-激酶、ATM、DNA-PK和Ku的阻断剂。这些激酶参见Abraham,R.T.(1996),CurrentOpinioninImmunology.8(3)412-8；Canman,C.E.,Lim,D.S.(1998),Oncogene17(25)3301-3308；Jackson,S.P.(1997),InternationalJournalofBiochemistryandCellBiology.29(7):935-8；和Zhong,H.等,Cancerres,(2000)60(6),1541-1545。

本发明还使用肌醇信号传递抑制剂，如磷脂酶C阻断剂和肌醇类似物。这种信号抑制剂描述于Powis,G.和KozikowskiA.,(1994)《癌症化疗的新分子靶标》,PaulWorkman和DavidKerr编,伦敦的CRC出版社1994。

另一组信号转导通路抑制剂是Ras癌基因抑制剂。这类抑制剂包括法呢基转移酶、香叶酰基香叶酰基转移酶和CAAX蛋白酶的抑制剂以及反义寡核苷酸、核酶和免疫治疗。这种抑制剂显示在含野生型突变ras的细胞中阻断ras活化，从而充当抗增殖剂。Ras癌基因抑制参见Scharovsky,O.G.,Rozados,V.R.,Gervasoni,S.I.Matar,P.(2000),JournalofBiomedicalScience.7(4)292-8；Ashby,M.N.(1998),CurrentOpinioninLipidology.9(2)99–102；和BioChim.Biophys.Acta,(19899)1423(3):19-30。

如上所述，受体激酶配体结合的抗体拮抗剂还可用作信号转导抑制剂。该组信号转导通路抑制剂包括使用受体酪氨酸激酶的胞外配体结合域的人源化抗体。例如，ImcloneC225EGFR特异性抗体(参见Green,M.C.等,《实体瘤的单克隆抗体疗法》(MonoclonalAntibodyTherapyforSolidTumors),CancerTreat.Rev.,(2000),26(4),269-286)；erbB2抗体(参见《乳腺癌中的酪氨酸激酶信号传递：erbB家族受体酪氨酸激酶》(TyrosineKinaseSignallinginBreastcancer:erbBFamilyReceptorTyrosineKinases),BreastcancerRes.,2000,2(3),176-183)；和2CBVEGFR2特异性抗体(参见Brekken,R.A.等,《单克隆抗VEGF抗体选择性抑制VEGFR2活性可阻断小鼠的肿瘤生长》(SelectiveInhibitionofVEGFR2ActivitybyamonoclonalAnti-VEGFantibodyblockstumorgrowthinmice),CancerRes.(2000)60,5117-5124)。

抗血管生成剂：还可使用抗血管生成剂，包括非受体MEK血管生成抑制剂。抗血管生成剂是如抑制血管内皮生长因子作用的那些(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[Avastin^TM])和通过其它机制作用的化合物(例如利诺胺、整合素αvβ3功能抑制剂、内皮抑素和血管增生抑制素)。

免疫治疗剂：用于免疫治疗方案的试剂还可与式(I)化合物联用。免疫治疗方法包括例如增加患者肿瘤细胞免疫原性的离体或体内方法，如用细胞因子例如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，减少T细胞无能的方法，用经转染免疫细胞如细胞因子转染树突细胞的方法，用细胞因子转染肿瘤细胞系的方法和用抗独特型抗体的方法。

促凋亡剂：用于促凋亡方案的试剂(如bcl-2反义寡核苷酸)也可用于本发明组合。

细胞周期信号抑制剂：细胞周期信号抑制剂可抑制参与细胞周期控制的分子。被称为周期素依赖性蛋白激酶(CDK)的蛋白激酶家族和其与被称为周期素的蛋白家族的相互作用可以通过真核细胞周期控制进展。不同周期素/CDK复合体的配位活化和失活对整个细胞周期的正常进展是必须的。数种细胞周期信号抑制剂正在开发中。例如，包括CDK2、CDK4和CDK6在内的周期素依赖性激酶和其抑制剂的示例描述于例如Rosania等,Exp.Opin.Ther.Patents(2000)10(2):215-230。

在一个实施方式中，本发明组合包括式I化合物或其盐或溶剂化物以及至少一种选自以下的抗肿瘤剂：抗微管剂、铂配位络合物、烷化剂、抗生素、拓扑异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓扑异构酶I抑制剂、激素和激素类似物、信号转导通路抑制剂、非受体酪氨酸MEK血管生成抑制剂、免疫治疗剂、促凋亡剂和细胞周期信号抑制剂。

在一个实施方式中，本发明组合包括式I化合物或其盐或溶剂化物以及至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是选自双萜类和长春花生物碱的抗微管剂。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是双萜类。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是长春花生物碱。

在一个实施方式中，本发明组合包括式I化合物或其盐或溶剂化物以及至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是铂配位络合物。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是紫杉醇、卡铂或长春瑞滨。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是卡铂。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是长春瑞滨。

在进一步实施方式中，所述至少一种抗肿瘤剂是紫杉醇。

在一个实施方式中，本发明组合包括式I化合物或其盐或溶剂化物以及至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是信号转导通路抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是生长因子受体激酶VEGFR2、TIE2、PDGFR、BTK、erbB2、EGFr、IGFR-1、TrkA、TrkB、TrkC或c-fms的抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是丝氨酸/苏氨酸激酶rafk、akt或PKC-ζ的抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是选自src激酶家族的非受体酪氨酸激酶的抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是c-src的抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是选自法呢基转移酶和香叶酰基香叶酰基转移酶抑制剂的Ras癌基因抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是选自PI3K的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。

在进一步实施方式中，所述信号转导通路抑制剂是双重EGFr/erbB2抑制剂，例如N-{3-氯-4-[(3-氟苯甲基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺(结构如下)：

在一个实施方式中，本发明组合包括式I化合物或其盐或溶剂化物以及至少一种抗肿瘤剂，所述抗肿瘤剂是细胞周期信号抑制剂。

在进一步实施方式中，细胞周期信号抑制剂是CDK2、CDK4或CDK6的抑制剂。

在一个实施方式中，本发明方法和应用中的哺乳动物是人。

如所述，向人施用治疗有效量的本发明组合(化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体)。通常，本发明所施用试剂的治疗有效量取决于许多因素，包括例如对象年龄和体重、需要治疗的精确病症、病症的严重度、制剂性质和施用途径。最后，所述治疗有效量由主治医生自行决定。

根据已知程序测试本发明组合的功效、优势和协同性质。

方法

小鼠肿瘤细胞试验：

来自美国模式培养物保藏所的CT26小鼠结肠癌细胞(ATCC,登记号CRL-2638,批号59227052)在有10％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中培养。细胞生长抑制通过CellTiter(CTG)试验(普洛麦格(Promega))根据厂商操作手册测定。接种后约24小时，细胞接触连续3倍稀释的化合物A。细胞在含有10％FBS的培养基中与化合物孵育3天。用Levenberg和Marquardt方法和等式:y＝Vmax–{1–[xn/(Kn+xn)]}内插出IC50值，其中‘K’等于IC50(MagerME,《生物化学和生物物理中的数据分析》(DataAnalysisinBiochemistryandBiophysics).纽约的学术出版社.1972)。

化合物A对CT26细胞中MAPK信号传递的抑制通过western印迹分析测定。CT26细胞用化合物A在含10％胎牛血清的培养基中处理24小时。提取蛋白用于采用来自圣克鲁斯生物技术公司(SantaCruzBiotechnology)的抗ERK1/2和pERK1/2(T202/Y204)的免疫印迹。膜用Odyssey红外成象系统(LI-COR生物科技公司(LI-CORBiosciences))显影。

CT-26鼠癌同系小鼠模型

使用雌性BALB/C小鼠(查尔斯河实验室(CharlesRiver))。动物可随意获取食物和水，按照实验动物管理的正常标准饲养。通过皮下注射含5x10⁴CT26细胞的悬液到小鼠右侧腹来建立肿瘤。肿瘤重量用等式(lxw²)/2计算，其中l和w指每次测量采集的较大和较小尺寸。在细胞接种后第11天肿瘤约40-100mm³大小时，开始治疗。小鼠(n＝10/组)用1mg/kg化合物A处理，每天一次口服，持续21天，或用10mg/kg抗小鼠抗体大鼠IgG2a和αPD-L1(10F.9G2克隆)处理，腹腔内(i.p.)施用，每周2次，持续3周。监控肿瘤，当肿瘤达到2000mm³终点体积、溃疡或到最后一天(第21天)时(以先到者为准)，对各动物实行安乐死。肿瘤生长抑制百分比(％TGI)定义为指定对照组的平均肿瘤体积(MTV)与药物治疗组的MTV之间的差异，表示为指定对照组的MTV百分数：％TGI＝[1–(MTV_药物治疗/MTV_对照)]x100。此试验中产生至少60％TGI的药剂被认为具有潜在治疗活性。

对数转换的肿瘤体积用ANOVA分析，拟合用于治疗的项。然后，计算经拟合治疗均值之间的差异和相关原始p值。由于多重性，随后进行向下式p值调整。调整后p值<0.05被视作显著。

结果

曲美替尼与靶向PD-L1的免疫调节剂的组合增强免疫活性小鼠中CT26肿瘤模型的抗肿瘤活性

在免疫活性BALB/C小鼠的鼠同系CT26肿瘤中评估化合物A的体内效果。携带纯合KRASG12D突变和MAPK1及MET扩增的体外CT26小鼠结直肠肿瘤细胞(Castle等.BMCGenomics2014,15:190,http://www.biomedcentral.com/1471-2164/15/190)对曲美替尼敏感，细胞增殖抑制中IC₅₀值为20nM且按pERK所测呈剂量依赖性MAPK信号传递抑制(图1)。在体内，如图2所示，治疗18天后，1mg/kg化合物A单一疗法显示适度抗肿瘤活性，具有61％TGI。抗小鼠PDL1抗体显示最小功效，具有18％TGI。然而，化合物A与抗小鼠PDL1抗体的组合具有更显著活性，具有81％TGI。在治疗进程中所有组内未观察到如体重减轻、外表邋遢、死亡率和行为所定义的明显毒性。

上述数据表明化合物A与靶向PD-L1的免疫调节剂的组合在免疫活性小鼠肿瘤模型中增强抗肿瘤活性且活性显著高于采用耐受剂量的这两种单独试剂。

如图中所用，曲美替尼是化合物A。

下列实施例仅意在说明且不用于以任何方式限制发明范围。

实施例1-药盒组成

如下表I和II所示，蔗糖、微晶纤维素以及本发明组合的化合物A和B以所示比例单独混合并用10％明胶溶液成粒。筛选湿颗粒，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，随后过筛并压片。药盒还包括一瓶如表III所述的抗PD-L1抗体。

表I

表II

表III

抗PD-L1，10、15、20、30、40或50ml小瓶，浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/ml。

尽管本发明的优选实施方式如上所述，应理解本发明不限于本文所公开的精确说明且保留权利要求书范围内所有修改的权利。

Claims (14)

1.一种组合，包括：

(i)式(I)的化合物

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

(ii)式(II)的化合物

或其药学上可接受盐；

和(iii)抗PD-L1抗体。

2.如权利要求1所述的组合，其特征在于，所述化合物(i)是二甲亚砜溶剂化物形式且化合物(ii)是甲磺酸盐形式。

3.一种组合药盒，所述药盒包括如权利要求1-2所述的组合以及一种或多种药学上可接受载体。

4.如权利要求1-2中任一项所述的组合在生产治疗癌症的药物中的应用。

5.如权利要求1-2所述的组合，所述组合用于治疗。

6.如权利要求1-2所述的组合，所述组合用于治疗癌症。

7.一种药物组合物，所述组合物包括如权利要求1-2所述的组合以及药学上可接受稀释剂或载体。

8.一种在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的

(i)式(I)的化合物

或其药学上可接受盐或溶剂化物；

和

(ii)式(II)的化合物

或其药学上可接受盐；

和(iii)抗PD-L1抗体。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述癌症选自头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胶质瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、Bannayan-Zonana综合征、Cowden病、小脑发育不良性节细胞瘤、炎性乳腺癌、肾母细胞瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、肾癌、肝癌、黑素瘤、胰腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤、甲状腺癌、淋巴T细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞白血病、AML、慢性中性粒细胞白血病、T细胞急性淋巴细胞白血病、浆细胞瘤、免疫母细胞大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞白血病、早幼粒细胞白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴母细胞T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、GIST(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。

10.如权利要求8-9所述的方法，其特征在于，所述化合物(i)是二甲亚砜溶剂化物形式且化合物(ii)是甲磺酸盐形式。

11.一种组合，所述组合包括化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体。

12.一种在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括施用治疗有效量的化合物A、化合物B和抗PD-L1抗体的组合。

13.一种组合，所述组合包括：

(i)式(I)的化合物

或其药学上可接受盐或溶剂化物；和

(ii)抗PD-L1抗体。

14.一种组合，所述组合包括：

(i)式(II)的化合物

或其药学上可接受盐；和

(ii)抗PD-L1抗体。