CN105624137A - 一种褐藻胶裂解酶Algb及其编码基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种褐藻胶裂解酶Algb的基因序列及其制备方法与应用。本发明所涉及到的褐藻胶裂解酶Algb来源于来源于Vibrio？alginolyticus40B。本发明提供了制备该新型褐藻胶裂解酶的方法，即使用基因工程的方法，将该褐藻胶裂解酶的编码基因克隆到大肠杆菌表达载体上，从而获得可以异源表达该酶的大肠杆菌重组菌株，用该菌株异源表达制备的褐藻胶裂解酶Algb，具有降解褐藻酸钠制备褐藻酸钠寡糖的功能。本发明提供的褐藻胶裂解酶Algb可广泛应用于化工、农业、食品、饲料添加、医药及海藻遗传工程等领域。

Description

一种褐藻胶裂解酶Algb及其编码基因和应用

技术领域

本发明设计一种褐藻胶裂解酶基因algb。本发明还提供了含有该基因的载体和大肠杆菌重组菌株及其表达产物的生产方法和应用。

背景技术

褐藻胶是由α-L-古罗糖醛酸(G)和β-D-甘露糖醛酸(M)两种单糖醛酸组成的线型酸性多糖，广泛地存在于海带、裙带菜等大型褐藻类植物细胞壁中。随着糖生物学与糖化学研究的逐步深入，许多海洋寡糖，尤其是褐藻胶的降解产物-褐藻胶寡糖具有多种生物学活性。例如，低聚合度的褐藻胶寡糖具有降血脂、抗病毒、抗肿瘤以及抗氧化等生物学活性，有的已经开发为药品。以褐藻胶为原料制备褐藻胶寡糖有多种方法：酸解法、氧化降解法、超声降解法和酶降解法。

其中，酸解法和氧化降解法降解条件难以控制，操作较为复杂，耗时长。超声降解法一般与其他降解法共同使用，降解产物聚合度高，不易制得寡糖；酶法降解相对于其他降解方法具有降解条件温和，反应条件易于控制，产物特异性强，得率高等优点，因此成为制备褐藻胶寡糖的首选方法。

制备褐藻胶寡糖所使用的酶即褐藻胶裂解酶，属于多糖裂解酶家族成员，能够催化糖醛酸单元之间的1，4糖苷键发生水解，在断裂后新形成的非还原端生成双键。按照其底物特异性的差异，褐藻胶裂解酶可以分为三类：专一性降解聚甘露糖醛酸的聚甘露糖醛酸裂解酶(EC4.2.2.3)、专一性降解聚古罗糖醛酸的聚古罗糖醛酸裂解酶(EC4.2.2.11)和能降解上述两种片段的双功能褐藻胶裂解酶。由于其具有底物专一性，褐藻胶裂解酶主要用于制备特异性结构的褐藻胶寡糖，研究褐藻胶的化学结构等方面；此外，褐藻胶裂解酶还可以应用于治疗肺囊肿性纤维化，制备海带等大型褐藻的原生质体等。

褐藻胶裂解酶主要来源于海洋动植物(包括海洋软体动物、海洋藻类)和多种微生物(包括海洋细菌、土壤细菌和真菌)。根据其底物特异性不同，可分为两大类：专一性降解聚甘露糖醛酸的裂解酶(EC4.2.2.3)和专一性降解聚古罗糖醛酸的裂解酶(EC4.2.2.11)；此外还有一些能够降解上述两种片段的双功能裂解酶，主要是来源于交替假单胞菌NO272(Pseudoalteromonassp.NO272)的褐藻胶裂解酶Aly；从交替假单胞菌Pseudoaltermonassp.SM0524中分离得到的AlySJ-02；从Isoptericolahalotolerans分离得到褐藻胶裂解酶以及从麦芽寡养单胞菌(StenotrophomsamaltophiliaKJ-2)克隆得到的褐藻胶裂解酶；以上四种裂解酶均具有降解PM和PG的能力，降解产物多为DP2-6的寡糖。双功能的褐藻胶裂解酶由于其广泛的底物特异性而在工业生产上具有重要的应用价值，主要用于褐藻胶寡糖的生产。本发明所涉及的褐藻胶裂解酶具有降解两种片段的能力，并且在广泛的pH范围内具有良好的活性与稳定性，具有重要的工业应用价值。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种新型褐藻胶裂解酶Algb及其编码基因。

本发明的第二个目的是提供一种制备新型褐藻胶裂解酶Algb的方法。

本发明的第三个目的是提供新型褐藻胶裂解酶Algb基因重组表达质粒和重组基因工程菌株。

本发明的第四个目的是提供新型褐藻胶裂解酶Algb在褐藻胶降解中的应用。

本发明所提供的褐藻胶裂解酶Algb，来源于弧菌菌株Vibrioalginolyticus40B，其氨基酸序列具有如下特征之一：

1)序列表中的SEQIDNO.2从氨基端开始的第1-478位氨基酸残基序列。

2)将序列表中的SEQIDNO.2从氨基端开始的第1-478位氨基酸残基序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加后具有降解褐藻胶活性的蛋白质。

本发明提供了新型褐藻胶裂解酶Algb的编码基因(命名为algb)，具有下述核苷酸序列特征之一：

1)序列表中SEQIDNO.1的脱氧糖核酸(DNA)序列；

2)编码序列表中SEQIDNO.1氨基酸序列的脱氧核糖核酸(DNA)序列；

本发明的新型褐藻胶裂解酶Algb的氨基酸序列及其核苷酸编码序列也可以根据预测的Algb的氨基酸序列及其核苷酸序列人工合成获得。

制备重组酶Algb的方法，是将编码基因algb克隆到重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的褐藻胶裂解酶。

所述的重组表达内切褐藻胶裂解酶Algb的表达载体可以是大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体等。

用于重组表达褐藻胶裂解酶Algb的重组菌或转基因细胞系，可以是大肠杆菌宿主细胞(如EscherichiacoliBL21、EscherichiacoliJM109、EscherichiacoliDH5α等)、酵母菌宿主细胞(如Saccharomycescerevisiae、Pichiapastoris、Kluyveromyceslactis等)、枯草杆菌宿主细胞(如BacillussubtilisR25、Bacillussubtilis9920等)、乳酸菌宿主细胞(如LacticacidbacteriaCOCC101等)、放线菌宿主细胞(如Streptomycesspp.等)、丝状真菌宿主细胞(如Trichodermaviride，Trichodermareesei，Aspergillusniger、Aspergillusnidulans等)、昆虫细胞(如Bombyxmori，Antharaeaeucalypti等)或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞CHO，幼小仓鼠肾脏细胞BHK、中国仓鼠肺细胞CHL等)。

本发明的新型褐藻胶裂解酶Algb来源于弧菌菌株Vibrioalginolyticus40B，通过基因组挖掘技术，分析Vibrioalginolyticus40B基因组中可能的褐藻胶裂解酶基因，依据同源序列通过设计特异性引物，克隆得到褐藻胶裂解酶Algb全长编码基因，该基因编码区长1437bp，编码478个氨基酸，分子量约为54.12kDa，属于多糖裂解酶家族7。大肠杆菌表达获得重组酶Algb，以褐藻胶为底物时，在30℃、pH8.0条件下具有最高酶活力，比活力达到48.79U/mg。

附图说明

图1：新型褐藻胶裂解酶Algb的蛋白质三维结构模型：整体结构为手套状-β-三明治结构(glove-like-β-sandwich)，其中包含3个小螺旋结构(H1：22-26；H2：76-79；H3：185-189)以及2个反向平行的β-折叠片A和B，A包含8个β-strand结构，B包含7个β-strand结构。

图2：新型褐藻胶裂解酶Algb表达及纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳图(SDS-PAGE)。各泳道加入的样品分别是：M：蛋白标准分子量(marker)，条带自上到下顺序为：170kDa，130kDa，110kDa，70kDa，55kDa，40kDa，35kDa，25kDa；泳道1：重组菌体破碎后上清，上样量为10μl，泳道2：重组菌破碎后上清经镍柱纯化的流出液，上样量10μl；泳道3:10mmol咪唑洗脱液，上样量10μl；泳道4：20mmol咪唑洗脱液，上样量10μl；泳道5：50mmol咪唑洗脱液，上样量10μl；泳道6：250mmol咪唑洗脱液，上样量10μl。

图3：温度对于褐藻胶裂解酶Algb活性的影响。

图4：pH对于褐藻胶裂解酶Algb活性的影响。

图5：温度对于褐藻胶裂解酶Algb的稳定性的影响。

图6：pH对于褐藻胶裂解酶Algb的稳定性的影响。

图7：褐藻胶裂解酶Algb的底物偏好性曲线。

图8：褐藻胶裂解酶对于三种底物的降解产物ESI-MS图谱。A：褐藻胶底物的降解产物的ESI-MS谱图，B：polyM底物的降解产物的ESI-MS谱图，C：polyG底物的降解产物的ESI-MS谱图。

具体实施方式

实施例1Vibrioalginolyticus40B的培养及菌株基因组DNA提取

所采用的菌种为弧菌Vibrioalginolyticus，挑取菌株的单克隆菌落接种到50ml液体培养基中，接着放入温度为30℃、转数为220rpmin的摇床培养24小时后，将培养液离心收集菌体并丢弃上清培养基。

使用的液体培养基配方为(g/L)：牛肉膏5g、葡萄糖15g、酵母浸粉1.0g、NaCl5.0g、MgSO4·7H2O0.5g、CaCl20.2g、KH2PO41.0g、FeSO4·7H2O0.02g，pH值为7.0。

取4mL已经培养好的菌液，置于2mLtube管中，5000g，10min充分离心。弃去上清，用180μL消化液(DigestionSolution)将菌体重悬，再加入20μL蛋白酶K，充分混匀后，56℃温育30min。加入20μLRnaseA，充分混匀后，室温放置10min。加入200μL裂解液(LysisSolution)，快速混匀，过程不要超过15s。加入400μL50％(v/v)乙醇溶液，充分混匀。将上述溶液转移至吸附柱中，静置1min，离心6000g，1min，弃废液，将吸附柱转移至一个新的2mLtube管中。加入500μLwashbufferI，8000g，1min离心，弃废液。加入500μLwashbufferII，8000g，1min离心，弃废液。重复一次。将空吸附柱12000g，3min离心，将柱内残留液体充分甩干。在吸附柱基质膜中间位置加入200μL洗脱液(ElutionBuffer)静置1min，8000g，1min离心，即得基因组。

实施例2褐藻胶裂解酶Algb编码基因的克隆与鉴定

根据与Vibrioalginolyticus40B基因组中可能的褐藻胶裂解酶基因设计如下扩增引物：上游引物(5’-CGCGGATCCATGCGCTCAGAAGTTCGTGA-3’)和下游引物(5’-CCGCTCGAGTTGATGAAGAGTGCTCAAAG-3’)。以提取的菌株基因组为模板，进行PCR扩增得到褐藻胶裂解酶Algb基因全长序列。PCR条件为：94℃预变性3min，随后以94℃30s、55℃30s、72℃2min进行30个循环，最后在72℃延伸10min。琼脂糖凝胶电泳显示在1.0kb和2.0kb之间有一条特异性条带，将其从琼脂糖凝胶上切下，采用DNA凝胶回收试剂盒进行纯化。

将纯化的DNA片段连接到克隆载体pMD19-T上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞中，在LB固体培养基(含有氨苄青霉素、X-Gal和IPTG)中培养后，挑取白色菌落使用扩增引物进行PCR验证。PCR条件为94℃预变性3min，随后以94℃30s、55℃30s、72℃2min进行30个循环，最后在72℃延伸10min。将出现特异性条带所对应的重组菌株大量培养，使用质粒提取试剂盒进行质粒抽提，进行测序分析。结果表明褐藻胶裂解酶基因的全核苷酸序列全长1437bp，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；编码478个氨基酸，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，蛋白理论分子量为54.12kDa。用PHYRE2同源建模服务器对褐藻胶裂解酶Algb的蛋白质三维结构进行同源建模。最终得到的Algb的蛋白质三维结构模型如图1所示。

序列表

SEQIDNO.1

Algb编码基因开放阅读框(ORF)全长1437bp，编码褐藻胶裂解酶成熟酶序列，不含有信号肽序列。

ATGCGCTCAGAAGTTCGTGAGCGAGAAAACTTCAACATTTCAGAACAAGGCGTCTCTAGAACTTTGTATGCAGATGTTCG

ATTACCAGAGATTAACCTTGCAATGGCTAGCTCCCCTGCAAACCATGATGAAGTCACTTTCCTGCAAATTCATAACAAAG

GCACAGATACTTCTGGTACAGGTGCTATCCCACACCCTTTGTTACGAATCGTTTGGGAACAAGAACGAAACAGTATCACT

GGTCATTACTGGGCGGTAGTAAAGAACAATGCCATAGATTGCAGTCTACCTTCTAGCGCATCAGATTGTTATGCAACATC

ATACGATCGTTATGATTTAGGAAAAGCCGATCTCAACGCATTCACGCGATTCGAAGTAAAAATCGGAGAAAACACATTAA

CCATTAAAGTGAACGATGAGCAAAAGGTAAATGTAGATGTATCCTACTGGCAGCACCTCCTGAGCTACTTTAAAGCCGGA

GTTTATAACCAGTTTGAAAACGGTGAAGCAAAGGTACAATTTAATCAGTTAGGACTAACCAAAACTGACCATACTGATTC

AATAGCCTGGAATATTGACGATTGGAAATTAACCATTCCTGCAAGCAAAAATGATTGGTATGGTTTTGGCGGTGACAGCG

CGGCTGAATTAGAGCCTGAGCGTTGTAATTCAAGTAAAGATCTTCTGTCTAACGAAGAGAGCGTTTACCAACGCGAGATT

GATTTATCATACTTCAATGTTATTGACGGTAGCATGCATTTCCGCGCCGATATGGGTTACGGCACGTCAACGGCCAACTC

CAGTTACATCCGTTCAGAATTGCGAGAGCTCTACATCAGTACTAACTCCCCGGATTGCAGCACCAGCGATGAAGAGACAA

GTTGGTATATTGAAGATAGTCGTACCGGTGCAACTTCGCATACGCTAAACGCAACACTAAGAATTAACGAATACCCTAAA

ATCGACGGTCAATTACCAAAAGTCGTGGTAGGCCAGATACATGGTTGGAAAATCAGCCAAGCACTCGTGAAGCTACTTTG

GGAAGGTGACAATAAGCCAGTCAGAGTTATTCTGAACGATAACTACAAACTTGATAACAACAAAGACTGTACTGATTGCA

ACGCATTCAGCGTTAAGCTTGGTACCTACGCGGTAAACGAAGACTGGCAATATACGATCCGTGCCGATAAGGAAGGACTG

TTTTTAGCCTCCTACGATGCAGATGGCAGTAATATGGTCTCGCACACACTGAAGTGGGGAGAAGCATACTCAGACACCGC

TAACAACAAGTCCTATACTCTGACTGAAAGATGGGCGTCGCCTGATATTGCGTTTTACTTCAAAGCCGGAATTTACCCTC

AGTTTAAACCTGATAATGCATATCGAGGAGAAATCTTTGATGTGAGCTTTAGTGCTTTGAGCACTCTTCATCAATAG

SEQIDNO.2

褐藻胶裂解酶Algb结构中包含两个褐藻胶裂解酶家族2(AlginateLyase2family)结构域。

MRSEVRERENFNISEQGVSRTLYADVRLPEINLAMASSPANHDEVTFLQIHNKGTDTSGTGAIPHPLLRIVWEQERNSIT

GHYWAVVKNNAIDCSLPSSASDCYATSYDRYDLGKADLNAFTRFEVKIGENTLTIKVNDEQKVNVDVSYWQHLLSYFKAG

VYNQFENGEAKVQFNQLGLTKTDHTDSIAWNIDDWKLTIPASKNDWYGFGGDSAAELEPERCNSSKDLLSNEESVYQREI

DLSYFNVIDGSMHFRADMGYGTSTANSSYIRSELRELYISTNSPDCSTSDEETSWYIEDSRTGATSHTLNATLRINEYPK

IDGQLPKVVVGQIHGWKISQALVKLLWEGDNKPVRVILNDNYKLDNNKDCTDCNAFSVKLGTYAVNEDWQYTIRADKEGL

FLASYDADGSNMVSHTLKWGEAYSDTANNKSYTLTERWASPDIAFYFKAGIYPQFKPDNAYRGEIFDVSFSALSTLHQ

实施例3褐藻胶裂解酶Algb重组表达载体构建

根据褐藻胶裂解酶基因全序列设计上游引物(5’-CGCGGATCCATGCGCTCAGAAGTTCGTGA-3’)和下游引物(5’-CCGCTCGAGTTGATGAAGAGTGCTCAAAG-3’)，进行PCR扩增得到褐藻胶裂解酶Algb基因全长序列。PCR条件为：94℃预变性3min，随后以94℃30s、55℃30s、72℃2min进行30个循环，最后在72℃延伸10min。PCR产物用BamHI和XhoI进行酶切后回收；将大肠杆菌表达载体pET21a(+)同样用BamHI和XhoI进行酶切后回收，将其与上述所得目的基因连接后转化大肠杆菌DH5α中，筛选具有氨苄青霉素抗性的转化子。用质粒提取试剂盒抽提阳性转化子质粒，使用BamHI和XhoI进行酶切验证，得到长度分别为5.5kb和1.5kb左右两个片段，证明褐藻胶裂解酶基因已经克隆到表达载体pET21a(+)上，将此重组质粒命名为pET21a-algb。

实施例4褐藻胶裂解酶Algb基因在大肠杆菌中的重组表达与纯化制备

将重组表达质粒pET21a-algb转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)(购自美国Novagen公司)，然后按照该公司提供的操作步骤进行褐藻胶裂解酶Algb诱导表达及纯化。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测褐藻胶裂解酶Algb的纯化情况，结果如图2所示，纯化后的Algb在电泳胶上呈现单一条带，且位置与预测的分子量相吻合。

实施例5褐藻胶裂解酶Algb的酶学性质分析

(1)pH和温度对酶活性的影响

将质量浓度为1％褐藻酸钠底物、纯化的Algb酶液以及不同pH值的20mMTris-HCl、磷酸盐、醋酸盐缓冲液(pH范围为2.0-11.0)按9:1:10(体积比)的比例混合后，在30℃反应30分钟，按二硝基水杨酸法测酶活力。结果显示Algb在pH8.0时达到最大活力，表明Algb的最适反应pH为7.0(如图3)

在最适pH下，将质量浓度为1％褐藻酸钠底物、纯化的Algb酶液以及20mMTris-HCl缓冲液(pH7.0)按9:1:10(体积比)的比例混合，分别在不同温度(20℃-70℃)反应30分钟，按二硝基水杨酸法测酶活力。结果显示Algb在30℃时达到最大活力，表明Algb的最适反应温度为30℃(如图4)。

将质量浓度为1％褐藻酸钠底物、纯化的Algb酶液以及50mMTris-HCl缓冲液按9:1:10(体积比)的比例混合后，在最适温度和最适pH下反应30分钟，按二硝基水杨酸法测酶活力，接着用购于碧云天公司的蛋白质定量试剂盒测定Algb酶液的蛋白含量，结果表明重组Algb对褐藻酸钠的比活为48.79U/mg。

(2)pH和温度对酶稳定性的影响

将在不同温度(20℃-80℃)下热处理30min后的Algb酶液与质量浓度为1％褐藻酸钠底物溶液按1:9(体积比)的比例混合，然后在最适温度和最适pH下测定剩余酶活，以不经过热处理的酶液酶活定义为100％相对活力(relativieactivity)，结果表明Algb在低于40℃的温度下具有较好的热稳定性(如图5)。

将在30℃，不同的pH(pH4-10)预孵育24h后的Algb酶液与质量浓度为1％褐藻酸钠底物溶液按1:9(体积比)的比例混合，然后在最适温度和最适pH下测定剩余酶活，以不经过pH处理的酶液酶活定义为100％相对活力(relativieactivity)，结果显示在pH6～10的范围内，Algb酶活仍保持70％以上，表明Algb对pH值耐受范围较广(如图6)。

(3)Algb的底物偏好性

将纯化的Algb分别与质量浓度为0.1％的褐藻酸钠、聚甘露糖醛酸片段(polyM)和聚古洛糖醛酸片段(polyG)三种不同底物按1:9(体积比)的比例混合，然后在30℃,pH7.0条件下反应。取不同反应时间点的产物测其235nm紫外吸收值，发现随着酶解时间延长，235nm吸收值逐渐增加，根据紫外法测褐藻胶裂解酶的原理(Qing-DaAnetal.ProcessBiochemistry,2008,43:842–847)，证实Algb是裂解酶。另外，如图7所示，Algb对聚古洛糖醛酸片段、褐藻酸钠和聚甘露糖醛酸片段的降解均具有较好的降解活性，表明Algb是一个双功能褐藻胶裂解酶。

实施例6金属离子对Algb活性的影响

将质量浓度为1％褐藻酸钠底物、纯化的Algb酶液以及50mMTris-HCl缓冲液(pH7.0)按8:2:10(体积比)的比例混合，接着向反应体系中添加不同的金属离子，添加的离子终浓度为5mM，然后在30℃反应30分钟，按前述的二硝基水杨酸法测酶活力。对照组为不加任何金属离子时Algb的活性(设定为100％)，结果如下表所示。实验结果显示，Ca²⁺、Fe²⁺、Co²⁺能增加Algb活性，Mg²⁺⁺对Algb活性基本无影响，Cu²⁺、Zn²⁺等其他离子对酶活呈现抑制作用。

表1金属离子对Algb活性的影响

实施例7褐藻胶裂解酶Algb对三种底物的降解产物的ESI-MS分析

将质量浓度为0.1％底物(褐藻酸钠、polyM和polyG)、纯化的Algb酶液以及50mMTris-HCl缓冲液按9:1:10(体积比)的比例混合后，在pH7.0，30℃条件下反应，对酶解72小时后的产物进行电喷雾质谱分析。电喷雾质谱条件为采用正离子模式，离子源电压：4.5kV；鞘气流速：30arb；毛细管温度：275～300℃；管镜电压：250V；扫描范围：150-2000。

如图8所示，Algb对于三种不同底物的产物均以二到五糖为主要产物。因此，褐藻胶裂解酶Algb可被用于褐藻酸钠寡糖的制备以及与褐藻酸钠降解相关的领域，包括化工、农业、食品、饲料添加、医药及海藻遗传工程等。

Claims (6)

1.褐藻胶裂解酶Algb，具有序列表中SEQIDNO.2从氨基端开始的第1-478位氨基酸残基序列。

2.一种权利要求1所述褐藻胶裂解酶Algb的编码基因，具有序列表中SEQIDNO.1的脱氧核糖核酸(DNA)序列。

3.一种权利要求1所述的褐藻胶裂解酶的制备方法，其特征在于：是将权利要求2所述的褐藻胶裂解酶基因克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得重组表达的褐藻胶裂解酶；

所述的重组表达褐藻胶裂解酶的表达载体，是指大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、枯草杆菌表达载体、乳酸菌表达载体、链霉菌表达载体、噬菌体载体、丝状真菌表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体、或哺乳动物细胞表达载体；

用于重组表达褐藻胶裂解酶的重组菌或转基因细胞系，是指大肠杆菌宿主细胞中的EscherichiacoliBL21、EscherichiacoliJM109或EscherichiacoliDH5α、酵母菌宿主细胞中的Saccharomycescerevisiae、Pichiapastoris或Kluyveromyceslactis、枯草杆菌宿主细胞中的BacillussubtilisR25或Bacillussubtilis9920、乳酸菌宿主细胞中的LacticacidbacteriaCOCC101、放线菌宿主细胞中的Streptomycesspp.、丝状真菌宿主细胞中的Trichodermaviride，Trichodermareesei，Aspergillusniger或Aspergillusnidulans、昆虫细胞中的Bombyxmori或Antharaeaeucalypti，哺乳动物细胞中的中国仓鼠卵巢细胞CHO，幼小仓鼠肾脏细胞BHK或中国仓鼠肺细胞CHL中的一种。

4.一种权利要求1所述的褐藻胶裂解酶在褐藻酸盐降解中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的褐藻胶裂解酶具有如下用途之一或二种以上；

1)用于断裂褐藻酸盐(褐藻酸钠)的糖苷键，获得褐藻酸盐寡糖；

2)用于降解红藻、或褐藻细胞壁中的褐藻酸盐(褐藻酸钠)组分，抽提原生质体，用于食品及藻类研究；

或3)用于破坏致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)所形成的菌膜中褐藻酸钠成分。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述褐藻胶裂解酶Alga与其他褐藻胶降解酶混合后，用于协同断裂褐藻酸盐糖苷键。