CN105603058A - 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents

一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105603058A
CN105603058A CN201510745998.2A CN201510745998A CN105603058A CN 105603058 A CN105603058 A CN 105603058A CN 201510745998 A CN201510745998 A CN 201510745998A CN 105603058 A CN105603058 A CN 105603058A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pcr
add
influenza virus
virus
subtype
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510745998.2A
Other languages
English (en)
Inventor
祁贤
章倩云
宋勇春
汤奋扬
王慎骄
余慧燕
邓婓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JIANGSU DISEASE PREVENTION CONTROL CENTRAL
Original Assignee
JIANGSU DISEASE PREVENTION CONTROL CENTRAL
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JIANGSU DISEASE PREVENTION CONTROL CENTRAL filed Critical JIANGSU DISEASE PREVENTION CONTROL CENTRAL
Priority to CN201510745998.2A priority Critical patent/CN105603058A/zh
Publication of CN105603058A publication Critical patent/CN105603058A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及一种H7N9亚型禽流感病毒PCR-ELISA检测试剂盒及使用方法。检测试剂盒由RT-PCR反应体系、ELISA检测体系、3个靶基因(甲型流感病毒M基因、H7N9亚型病毒HA基因和H7N9亚型病毒NA)阳性质粒(pMD-M、Pmd-H7和Pmd-N9)、阴性质控品和3个靶基因的特异性引物探针组成。用这3组生物素标记的特异性引物，通过RT-PCR进行特异性扩增，扩增产物变性后与地高辛标记的特异性探针杂交，杂交产物包被链霉亲和素包被的96孔微板，加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体通过ELISA法进行检测。本发明涉及3组特异性引物探针在环境标本鉴别诊断和H7N9亚型禽流感病毒分离株分型鉴定中的用途。

Description

一种H7N9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分型检测H7N9亚型禽流感病毒核酸的RT-PCR-ELISA试剂盒及其使用方法。
背景技术
甲型流感病毒分类上属于正粘病毒科，基因组由8个单链负义RNA节段组成。甲型流感病毒宿主较广，可以感染人、禽和其它哺乳动物。根据病毒表面2个糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性，甲型流感病毒可以分为不同的血清亚型。目前已在甲型流感病毒的自然储存宿主野生水禽中发现16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)。一般情况下，禽流感病毒不会突破种属障碍感染人。但自1997年香港H5N1禽流感病毒感染人事件以来，禽流感病毒(包括H5、H9和H7亚型)感染人事件的发生越来越频繁。2013年初，在我国长三角地区出现一种新的通过基因重配产生的H7N9亚型禽流感病毒，该病毒能够跨物种感染人并引起严重疾病。目前中国大陆的省份和地区都有病例报道，截止，对人类健康和公共卫生造成新的重大威胁。
目前针对H7N9亚型禽流感病毒感染的核酸检测方法主要有基因测序法、Real-timetimePCR法和环等温扩增(LAMP)法等。基因测序法是分子诊断的金标准，但耗时费力，一般需要24-48小时，对实验人员的技术要求高，同时试验仪器和试剂昂贵，一般实验室难以开展。Real-timetimePCR法和LAMP法具有很好的特异性和敏感性，但前者同样依赖昂贵的仪器和试剂；而后者难以实现多重检测。因此，建立一种成本低、通量高、适合现场诊断的H7N9亚型核酸分子检测方法，对于疾病的临床救治和防控意义重大。
发明内容
本发明需要解决的问题是提供一种分型检测H7N9亚型禽流感病毒核酸的多重PCR-ELISA试剂盒及其使用方法。
本发明提供的检测H7N9亚型禽流感病毒核酸的多重PCR-ELISA的试剂盒由RT-PCR反应体系；3个靶基因甲型流感病毒M基因、H7N9亚型病毒HA基因和H7N9亚型病毒N9基因的阳性质粒：pMD-M、Pmd-H7和Pmd-N9；阴性质控品和3个靶基因的特异性引物探针(表1)组成，探针的5端用生物素(BIctO)标记。
表1靶基因的特异性引物探针
本发明所述一种多重PCR-ELISA试剂盒在H7N9亚型禽流感病毒分型检测中的使用方法：
(1)病毒核酸提取：采用常规方法提取临床鼻咽拭子标本或病毒培养物核酸，-70℃冰箱放置备用。
(2)多重PRT-PCR反应：采用TaKaRa公司的一步法试剂盒进行PCR扩增反应，反应体系为：10×ExTaqBuffer4μL，25mMMgCl5μL，2.5mMdNTPs6μL，TaqDNA聚合酶5U，M、H7和N9上下游引物各0.75μL，模板1.6μL，加DEPC水至50μL.。扩增程序为：50℃逆转录30min，94预变性2min，热循环参数为94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，35个循环后，72℃延伸7min，得到生物素标记的PCR产物，同时设置空白对照组。
(3)ELISA检测:取扩增好的生物素标记的PCR产物5μL，加至10μL的0.1mol/LNaOH溶液中，于室温下变性10min，再加入10nmol/L地高辛标记的特异性探针(用含有300mmol/LNaCl，100mmol/LTris-HClpH6.5，10mmol/LEDTA，0.1％Twee-20的杂交液稀释)，50℃孵育10min。随后，取100μL液体加至链霉亲和素包被的96孔微板中，50℃孵育60min，弃去孔中液体，加入300μLPBST洗板5次。然后加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体100μL，37℃孵育60min，洗板5次，最后加入TMB显色液进行显色，一定时间后加入终止液终止显色，于酶标仪450nm波长处测定其吸光度值(OD)。本实验需设置两个或两个以上重复，同时以PCR扩增反应中的空白对照作为阴性对照组，若实验组的OD值>2倍阴性对照组平均OD值，则判定为阳性，反之则为阴性。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：。
设计针对H7N9流感病毒3个靶基因的特异性引物探针，通过PCR-ELISA方法，可以对临床、环境及动物标本和病毒分离物进行H7N9亚型流感病毒分型鉴定，具有快速、敏感、特异等特点；且无需昂贵仪器设备，便于操作，为H7N9亚型流感监测和临床救治提供一种新的检测方法，是一种成本低、通量高、适合现场诊断的H7N9亚型核酸分子检测方法。
附图说明
图1通过M、H7、N9质粒比较普通PCR和PCR-ELISA的敏感性
具体实施方式
下面提供具体实施例进一步阐述本发明的技术方案，但本发明技术的应用不限于实施例。
实施例1：靶基因质粒构建
设计特异性引物，分别针对甲型流感病毒M基因、H7亚型病毒HA基因和N9亚型病毒NA基因，通过RT-PCR法扩增获得3个目的基因片段，回收纯化后的分别与T载体连接，获得靶基因阳性质粒，分别命名为pMD-M、Pmd-H7和Pmd-N9。
实施例2：PCR-ELISA法敏感性
(1)PCR反应：分别将靶基因克隆质粒pMD-M、Pmd-H7和Pmd-N9稀释100倍，再按10倍梯度稀释成10-2-10-9共八个浓度，以此为模板，使用上述由生物素标记的引物，采用TaKaRa公司的一步法试剂盒进行PCR扩增反应。反应条件为：94℃预变性5min，热循环参数是94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，35个循环后，72℃延伸7min，得到地高辛标记的PCR产物，同时设置空白对照组。将所得到的地高辛标记的PCR产物分别通过ELISA、1.5％琼脂糖凝胶电泳两种方法来确定各自的敏感性。
(2)ELISA检测：取扩增好的生物素标记的PCR产物5μL，加至10μL的0.1mol/LNaOH溶液中，于室温下变性10min，再加入10nmol/L地高辛标记的特异性探针(用含有300mmol/LNaCl，100mmol/LTris-HClpH6.5，10mmol/LEDTA，0.1％Twee-20的杂交液稀释)，50℃孵育10min。随后，取100μL液体加至链霉亲和素包被的96孔微板中，50℃孵育60min，弃去孔中液体，加入300μLPBST洗板5次。然后加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体100μL，37℃孵育60min，洗板5次，最后加入TMB显色液进行显色，3min后加入终止液终止显色，于酶标仪450nm波长处测定其吸光度值(OD)。本实验需设置两个或两个以上重复，同时以PCR扩增反应中的空白对照作为阴性对照组，若实验组的OD值>2倍阴性对照组平均OD值，则判定为阳性，反之则为阴性。
表1PCR-ELISA检测靶基因敏感性比较
片段 传统RT-PCR检测最低拷贝数(copies/μL) PCR-ELISA检测最低拷贝数(copies/μL)
M 1.43×104 1.43×103
H7 1.04×103 1.04×101
N9 8.80×105 8.80×103
由表格中可以看出，相比于传统的RT-PCR扩增技术，本实验中所建立的PCR-ELISA方法敏感度是其10-100倍，很好的解决了RT-PCR技术敏感性较差这一问题。
实施例3：PCR-ELISA法特异性
以肠道病毒、呼吸道冠状病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒、甲型流感病毒H1、H3、H5、H7和H9亚型和乙型流感核酸为模板，用上述3套引物进行PCR-ELISA实验。结果4套引物对肠道病毒、呼吸道冠状病毒、鼻病毒、呼吸道合胞体病毒核酸不能扩增，不同亚型流感病毒之间也不存在交叉反应，表明建立的PCR-ELISA方法具有较好的特异性。。
实施例3：临床标本检测
收集98份临床和环境标本，其中H1N1型流感病毒15份，H3N2型流感病毒15份，B型流感病毒5份，H9N2型流感病毒15份，H7N9型流感病毒40份，阴性标本8份，所有标本都经过细胞培养进行病毒分离。
(1)病毒RNA提取
采用酚氯仿法提取病毒RNA，具体步骤：1.取临床标本(鼻咽拭子或病毒分离物)100μL，加入含有300ulDEPC水的1.5mlEP中，充分混匀后加入200ul水饱和酚，剧烈震荡混匀，静置3min，加入200ul氯仿，充分震荡混匀，12000g室温离心15分钟。2.吸取上清液，加入两倍上清体积的异丙醇，再加入1/10上清体积3M醋酸钠约40ul，充分混匀后-20℃静置2h；取出于4℃下，12000g，离心20min。3.弃上清，加入75％乙醇1ml，4℃，12000g，离心20min。4.弃上清，室温干燥，加入40ulDEPC水溶解RNA。
(2)RT-PCR反应：取5ul核酸，使用上述由生物素标记的引物，采用TaKaRa公司的一步法试剂盒进行PCR扩增反应。反应条件为：94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，35个循环后，72℃延伸7min，得到生物素标记的PCR产物，同时设置空白对照组。
(3)ELISA检测：取扩增好的生物素标记的PCR产物5μL，加至10μL的0.1mol/LNaOH溶液中，于室温下变性10min，再加入10nmol/L地高辛标记的特异性探针(用含有300mmol/LNaCl，100mmol/LTris-HClpH6.5，10mmol/LEDTA，0.1％Twee-20的杂交液稀释)，50℃孵育10min。随后，取100μL液体加至链霉亲和素包被的96孔微板中，50℃孵育60min，弃去孔中液体，加入300μLPBST洗板5次。然
后加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体100μL，37℃孵育60min，洗板5次，最后加入TMB显色液进行显色，一定时间后加入终止液终止显色，于酶标仪450nm波长处测定其吸光度值(OD)。本实验需设置两个或两个以上重复，同时以PCR扩增反应中的空白对照作为阴性对照组，若实验组的OD值>2倍阴性对照组平均OD值，则判定为阳性，反之则为阴性。
通过多重PCR-ELISA检测了104临床样本，其中H1N1型流感病毒49个，H3N2型流感病毒44个，B型流感病毒11个，结果均与细胞培养一致。

Claims (2)

1.一种基于RT-PCR-ELISA的H7N9亚型流感病毒分型检测试剂盒，其特征是试剂盒的组成部分为AMV反转录体系、PCR反应体系、阳性质控品、阴性质控品和3种H7N9亚型流感病毒靶基因特异性引物探针，3种流感病毒靶基因特异性引物探针名称和序列分别是：M-Fttctaaccgaggtcgaaacgtatgt、M-RBIO-acggtgagcgtgaaaacaaaccc、M-PDIG–tcaggccccctcaaagccgagat、H7-Fcaaataacaggaaaattaaaccggc、H7-RBIO-ccccgaagctaaaccaaagtatcac、H7-PDIG–gagagagaatgctgaagaagatggc、N9-Fcacttcagccactgctatcataa、N9-RBIO-attgttccgtttgagtgtttccct和N9-PDIG–tgggaaagacaatgcagtaagaa。
2.根据权利要求1所述一种基于RT-PCR-ELISA的试剂盒的使用方法，其特征是由以下步骤构成:
(1)RT-PCR反应：采用TaKaRa公司的一步法试剂盒进行PCR扩增反应，反应条件为：50℃逆转录30min，94预变性2min，热循环参数为94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，35个循环后，72℃延伸7min，得到生物素标记的PCR产物，同时设置空白对照组；
(2)ELISA检测：取扩增好的生物素标记的PCR产物5μL，加至10μL的0.1mol/LNaOH溶液中，于室温下变性10min，再加入10nmol/L地高辛标记的特异性探针，用含有300mmol/LNaCl，100mmol/LTris-HClpH6.5，10mmol/LEDTA，0.1％Twee-20的杂交液稀释，50℃孵育10min，随后，取100μL液体加至链霉亲和素包被的96孔微板中，50℃孵育60min，弃去孔中液体，加入300μLPBST洗板5次，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体100μL，37℃孵育60min，洗板5次，最后加入TMB显色液进行显色，3min后加入终止液终止显色，于酶标仪450nm波长处测定其吸光度值OD；
(3)结果判定：本实验需设置两个或两个以上重复，同时以PCR扩增反应中的空白对照作为阴性对照组，若实验组的OD值>2倍阴性对照组平均OD值，则判定为阳性，反之则为阴性。
CN201510745998.2A 2015-11-05 2015-11-05 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法 Pending CN105603058A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510745998.2A CN105603058A (zh) 2015-11-05 2015-11-05 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510745998.2A CN105603058A (zh) 2015-11-05 2015-11-05 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105603058A true CN105603058A (zh) 2016-05-25

Family

ID=55983395

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510745998.2A Pending CN105603058A (zh) 2015-11-05 2015-11-05 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105603058A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107043829A (zh) * 2017-04-06 2017-08-15 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 流感病毒rRT‑PCR检测引物和探针及检测H7N9亚型流感病毒的方法
CN107686837A (zh) * 2016-08-03 2018-02-13 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 制备dna探针的方法、试剂盒及其应用
CN108034770A (zh) * 2018-01-24 2018-05-15 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱法检测甲型流感病毒h7n9多重pcr产物的方法及其产品

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103255237A (zh) * 2013-06-03 2013-08-21 广西壮族自治区兽医研究所 H7n9禽流感病毒三重rt-pcr检测试剂盒
CN103276110A (zh) * 2013-05-20 2013-09-04 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 用于快速检测新型h7n9亚型禽流感病毒的多重荧光rt-pcr试剂盒及方法
CN103667522A (zh) * 2013-09-13 2014-03-26 上海星耀医学科技发展有限公司 甲型h7n9流感病毒(2013)核酸检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103276110A (zh) * 2013-05-20 2013-09-04 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 用于快速检测新型h7n9亚型禽流感病毒的多重荧光rt-pcr试剂盒及方法
CN103255237A (zh) * 2013-06-03 2013-08-21 广西壮族自治区兽医研究所 H7n9禽流感病毒三重rt-pcr检测试剂盒
CN103667522A (zh) * 2013-09-13 2014-03-26 上海星耀医学科技发展有限公司 甲型h7n9流感病毒(2013)核酸检测试剂盒

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YU CHEN等: "Human infections with the emerging avian influenza A H7N9 virus from wet market poultry: clinical analysis and characterisation of viral genome", 《LANCET》 *
刘民培: "《现代临床实验研究技术》", 30 April 2008 *
武会娟等: "《临床科研常用分子生物学技术》", 31 July 2015 *
罗思思: "H7N9亚型禽流感病毒三重PCR检测方法的建立", 《中国畜牧兽医》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107686837A (zh) * 2016-08-03 2018-02-13 湖北生物医药产业技术研究院有限公司 制备dna探针的方法、试剂盒及其应用
CN107043829A (zh) * 2017-04-06 2017-08-15 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 流感病毒rRT‑PCR检测引物和探针及检测H7N9亚型流感病毒的方法
CN107043829B (zh) * 2017-04-06 2020-09-29 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 流感病毒rRT-PCR检测引物和探针及检测H7N9亚型流感病毒的方法
CN108034770A (zh) * 2018-01-24 2018-05-15 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱法检测甲型流感病毒h7n9多重pcr产物的方法及其产品
CN108034770B (zh) * 2018-01-24 2023-01-10 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱法检测甲型流感病毒h7n9多重pcr产物的方法及其产品

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lu et al. Real-time reverse transcription-PCR assay panel for Middle East respiratory syndrome coronavirus
CN103276110B (zh) 用于快速检测新型h7n9亚型禽流感病毒的多重荧光rt-pcr试剂盒及方法
CN103060478B (zh) 一种快速鉴定鸭甲肝病毒血清型的双重rt-pcr方法
CN103088165B (zh) 一种快速鉴定鸭病毒性肝炎病毒血清型的多重rt-pcr方法
CN105543414B (zh) 一种呼吸道合胞病毒a/b亚型多重荧光定量pcr检测引物组和探针组及其试剂盒和制备方法
CN105296673A (zh) 一种甲型流感病毒分子检测试剂盒及其制备方法
CN105219876A (zh) 一种人季节性流感病毒分型检测试剂盒及其使用方法
CN104862425A (zh) 鸭甲肝病毒1型和3型二重二温式rt-pcr检测试剂盒
CN105603058A (zh) 一种h7n9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其使用方法
CN104498629A (zh) H3n2亚型禽流感病毒双重实时荧光定量pcr检测试剂盒
CN103243181B (zh) 甲型h7n9流感病毒检测试剂盒及检测方法
CN103789454A (zh) H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒二重rt-pcr检测试剂盒
Golabi et al. Development of reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay for rapid and on-site detection of avian influenza virus
CN104498627A (zh) H3n8亚型禽流感病毒一步法实时荧光定量rt-pcr检测试剂盒
CN104846121A (zh) 一种病毒三重荧光定量rt-pcr检测方法及其试剂盒
CN106435036B (zh) 一种用于检测d型流感病毒的荧光pcr引物和探针及检测方法
CN103255237A (zh) H7n9禽流感病毒三重rt-pcr检测试剂盒
CN102344972B (zh) H6亚型禽流感病毒rt-lamp试剂盒
CN102534052B (zh) 一种用于检测猪流感病毒的nasba方法
CN102140557B (zh) 一种a型流感病毒核酸快速同步检测试剂盒
CN102321769A (zh) 鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用
CN104531899B (zh) 禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型的GeXP快速检测试剂盒
CN110669872A (zh) H9和h10亚型禽流感病毒三重rt-pcr检测引物组、试剂盒及方法
WO2023109031A1 (zh) 一种呼吸道病原体检测试剂盒及其制备方法与应用
CN102304591B (zh) 鉴定h3亚型禽流感病毒的pcr引物对及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160525

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication