CN105596935B

CN105596935B - 一种干预或改善糖尿病肾病的蒙药复方制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN105596935B
Application number: CN201510844774.7A
Authority: CN
Inventors: 毕力格; 李汉青; 金亮; 蔚璐
Original assignee: Inner Mongolia Autonomous Region Mongolian Medicine Research Institute
Current assignee: Inner Mongolia Autonomous Region Mongolian Medicine Research Institute
Priority date: 2015-11-27
Filing date: 2015-11-27
Publication date: 2020-10-27
Anticipated expiration: 2035-11-27
Also published as: CN105596935A

Abstract

本发明公开了一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂，其由如下成分的原料药制成：大黄、益智、诃子、赤瓟子、牛胆粉、冬虫夏草、苦瓜。根据相关实验模型的验证，所述蒙药复方制剂对糖尿病肾病有显著疗效。

Description

一种干预或改善糖尿病肾病的蒙药复方制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于蒙药制剂领域，具体地说是涉及一种预防或干预糖尿病并发症-糖尿病肾病的蒙药复方的提取纯化及制剂的制备方法。

背景技术

糖尿病及其并发症已经成为继心脑血管疾病、癌症之后威胁人类生命健康的第三大杀手。目前对于糖尿病及其并发症还没有可以彻底根治的药物。糖尿病并发症是一种常见的慢性并发症，是由糖尿病病变转变而来，后果相当严重。足病、肾病、眼病等是糖尿病最常见的并发症，是导致糖尿病患者死亡的主要因素。糖尿病肾病是糖尿病最为常见的微血管并发症之一，是威胁人们生命健康的一种常见疾病，也是导致患者死亡的主要病因之一。糖尿病肾病具有年龄大、病程长、并发症多等特点，早期的诊断、治疗对糖尿病肾病患者的病情恢复具有重要意义。西医的药物治疗除了治疗费用高昂，还给病患带来很多副作用。此外，药物在降低血糖的同时难以兼顾糖尿病的并发症，具有相当的局限性。因此从传统蒙药中研究开发新的治疗糖尿病及并发症的药物成为一个研究热点。故本发明公开了一种针对糖尿病并发症之一糖尿病肾病的蒙药复方。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种干预或预防糖尿病并发症的蒙药复方制剂，该制剂是基于传统蒙药中干预或预防糖尿病并发症的蒙药复方，根据蒙医基本理论和国家新药研究的相关规定，进行了重新加药配伍和替代，形成了一种新的复方制剂。

本发明的另一个目的是提供一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方提取纯化及其制备工艺。

具体地，所述蒙药复方制剂的构成和重量配比为：

大黄30、益智15、诃子15、赤

子15、牛胆粉5、冬虫夏草2.5、苦瓜30。

具体地，所述蒙药复方制剂可以根据现有技术制备成可接受的药物剂型。

特比地，所述药物剂型为滴丸。

特别地，所述滴丸的制备方法包括了提纯步骤和制备滴丸步骤。

更特别地，提纯步骤可以采取复方单药的提取纯化方法，其包括以下步骤：

大黄：70％乙醇加热回流提取：称取一定量大黄加适量70％乙醇(物料比例1∶5)加热回流提取3次、每次2h，每提取一次后用纱布过滤，药渣再加5倍量70％乙醇加热回流提取，最后合并过滤液，布氏漏斗抽滤过滤液。

益智和赤

子的提取方法同大黄。

苦瓜：称取一定量的苦瓜加适量的70％乙醇(物料比例1∶5)超声提取3次、每次90min，超声波提取温度调为60℃、时间为30min、每次超声后用纱布过滤，药渣再加5倍量的70％乙醇超声提取，最后合并过滤液，布氏漏斗抽滤过滤液。

诃子：称取一定量的诃子加适量20％乙醇(物料比例1∶5)超声提取，提取方法同上述苦瓜；

冬虫夏草：称取一定量的冬虫夏草加适量70％乙醇(物料比例1∶7)超声提取，提取方法同上述苦瓜。

牛胆粉：取一定量牛胆粉加入一定体积95％乙醇(物料比例1∶2)超声提取 3次，每次1h，每一次超声提取结束后，提取液上加适量乙酸乙酯放置30min沉淀，等完全沉淀后用布氏漏斗过滤，沉淀再加95％乙醇继续第二次提取，以上方法提取三次。最后合并过滤液。

特别地，上述超声波提取的频率为50～80Hz。

特别地，单药提取完成后还包括步骤：

回收浓缩：回收浓缩抽滤液，浓缩至没有乙醇味。

冷冻干燥：浓缩液冷冻干燥。

超声溶解：冻干粉40％乙醇超声溶解，备用。

D101大孔吸附树脂分离纯化：称取100g处理D101树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述溶解液，20％、40％、60％、80％乙醇洗脱，过滤，收集60％和80％乙醇洗脱液，浓缩60％和80％乙醇洗脱液，冷冻干燥60％和80％乙醇浓缩液。

另一种特别地，所述提纯步骤可以是复方提纯方法，具体地为：

(1)按重量别取大黄、苦瓜、益智、赤

子、牛胆粉、诃子药材粉碎成粗粉，加一定体积70％乙醇(物料比例1∶6)加热回流提取2次，每次2h，每次提取后过滤，合并醇提过滤液，药渣再加6倍量纯化水加热回流提取2h，过滤水提液。

(2)回收浓缩醇提液：回收浓缩滤液，浓缩至没有乙醇味。

(3)合并醇提浓缩液和水提液，备用。

(4)HPO-722大孔吸附树脂分离纯化：称取1kg处理HPO-722树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述醇提浓缩液和水提液，20％、40％、60％、80％乙醇洗脱，过滤，收集60％和80％乙醇洗脱液，浓缩60％和80％乙醇洗脱液，冷冻干燥60％和80％乙醇浓缩液。

(5)称重量比的冬虫夏草加一定体积的70％的乙醇(物料比例1∶7)浸泡24h，每次超声提取30min，共超声三次，1.5h；超声波提取温度调为：30℃，时间为30min。每次超声30min种后过滤药渣，加7倍量70％乙醇超声第二次，最后合并过滤液。回收70％乙醇过滤液浓缩至没有乙醇。最后冷冻干燥浓缩液，得冬虫夏草冻干粉。

特别地，上述超声波提取的频率为50～80Hz。

特别地，树脂经过预处理，预处理步骤包括：将树脂95％乙醇适量浸泡24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，将浸泡好的树脂湿法装柱子并测定柱体积，先95％乙醇冲洗，然后用纯化水冲洗，冲洗至不出现白色浑浊无醇味为止，然后用5％盐酸和5％氢氧化钠冲柱子，各冲5个柱体积，最后5～6柱体积纯化水冲洗至中性备用。

特比地，在提纯步骤之后，还有滴丸制备步骤。合并复方和冬虫夏草所得冻干粉。制备滴丸的药物处理方法很多，有复方直接提取之后的提取物与制剂辅料直接制备成滴丸；单味药物(药材)分别提取、纯化之后都可以合并，再与制剂辅料直接制备成滴丸。复方直接提取和单药提取是两种的不同的处理药材的方式，最终都可以制备成滴丸。

按照复方提取物冻干粉与聚乙二醇质量比1∶2-8，将复方提取物冻干粉加入熔融的聚乙二醇(PEG6000)中，搅拌至融合均匀，得混合物。

以滴速25-50滴/min、滴距8-12cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油运动粘度为100-350mm²/s，4～15℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，既得所述一种预防或干预糖尿病肾病的滴丸。

具体实施方式

实例1

称取复方比例的大黄、诃子、益智、牛胆粉、苦瓜、赤

子，共1100g加6倍量70％乙醇加热回流提取2次，每次2h，每次提取后过滤，合并醇提过滤液，药渣再加6倍量纯化水加热回流提取2h，过滤。将醇提液回收乙醇浓缩至没有乙醇。合并醇提浓缩液和水提过滤液，上HPO-722打孔吸附树脂纯化，分别用40％、60％、80％乙醇洗脱，弃40％洗脱液，收集60％、80％乙醇洗脱，回收60％、80％乙醇洗脱液浓缩至没有乙醇的浓缩液。冷冻干燥得60％复方(18.258)g，80％复方(5.602)g。

称取25g冬虫夏草，放入三角瓶中，加入175ml的70％乙醇，封盖，放入超声波中提取，超声波温度30℃，时间30min，每次提取1h，提取3次，每次超声提取结束后，过滤提取液，最后合并过滤液，然后用布氏漏斗抽滤过滤液，回收浓缩，冷冻干燥得5.688g冬虫夏草备用。提取率为22.75％。

按照复方提取物冻干粉与聚乙二醇质量以1∶8比，将复方提取物冻干粉加入熔融的聚乙二醇(PEG6000)中，搅拌至融合均匀，得混合物。放置80℃水浴锅上溶解，以滴速25～50滴/min、滴距8～12cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油运动粘度为100mm²/s，4～15℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，既得所述一种预防或干预糖尿病肾病的滴丸。

实施例2

药效试验

化学药物诱导的2型糖尿病肾病大鼠模型制备，以高糖高脂饲料与链脲佐菌素(STZ)共同诱导实验动物建立2型糖尿病肾病大鼠模型，选择180-200g，Wistar大鼠42只。

高糖高脂饮食：常规饲料内加20％蔗糖，10％猪油，2.5％胆固醇，连续喂饲 8周。

STZ给药方法：给药前大鼠需禁食12h，STZ临用前以0.1mmoL/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液(pH4.6)配制成2％的溶液，按40mg/kg腹腔内注射。注射72h后用血糖仪检测非空腹血糖，正常饲养4周。

试验检测指标：实验结束之前24h，以代谢笼收集大鼠尿液，检测尿蛋白含量。次日，大鼠经尾尖放血检测血糖，然后麻醉，经腹主动脉采血，室温放置30min，2500r/min，离心10min，分离血清，检测血清中胰岛素、血脂水平。

选择造模成功的大鼠进行给药试验。将滴丸制剂粉碎，用羧甲基纤维素钠的1％的溶液混悬，给大鼠口服给药。每天给药一次，每次100mg/kg，连续给药28天，第28天测定24小时内尿蛋白的量。用尿蛋白定量检测试剂盒测定大鼠尿中24小时内尿蛋白的量。

初步试验验证该蒙药滴丸制剂对大鼠的2型糖尿病肾病具有一定的预防与干预作用。

表1 给药之后对大鼠尿蛋白的影响

Claims

1.一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂，其特征在于由如下重量配比的原料药制成：大黄30、益智15、诃子15、赤

子15、牛胆粉5、冬虫夏草2.5、苦瓜30。

2.根据权利要求1的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其包括提纯步骤和滴丸制备步骤。

3.根据权利要求2的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其提纯步骤为单药提纯或复方提纯。

4.根据权利要求3的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中，所述单药提纯步骤为：

大黄：70％乙醇加热回流提取：称取一定量大黄，以物料比例1∶5加入70％乙醇，加热回流提取3次、每次2h，每提取一次后用纱布过滤，药渣再加5倍量70％乙醇加热回流提取，最后合并过滤液，布氏漏斗抽滤过滤液；

益智和赤

子的提取方法同大黄；

苦瓜：称取一定量的苦瓜，以物料比例1∶5加入70％乙醇，超声提取3次、每次90min，超声波提取温度调为60℃、时间为30min、每次超声后用纱布过滤，药渣再加5倍量的70％乙醇超声提取，最后合并过滤液，布氏漏斗抽滤过滤液；

诃子：称取一定量的诃子，以物料比例1：5加入20％乙醇，超声提取，提取方法同上述苦瓜；

冬虫夏草：称取一定量的冬虫夏草，以物料比例1∶7加入70％乙醇，超声提取，提取方法同上述苦瓜；

牛胆粉：取一定量牛胆粉，以物料比例1∶2加入95％乙醇，超声提取3次，每次1h，每一次超声提取结束后，提取液上加适量乙酸乙酯放置30min沉淀，等完全沉淀后用布氏漏斗过滤，沉淀再加95％乙醇继续第二次提取，以上方法提取三次，最后合并过滤液。

5.根据权利要求4的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中，单药提取完成后还包括步骤：

回收浓缩：回收浓缩抽滤液，浓缩至没有乙醇味；

冷冻干燥：浓缩液冷冻干燥；

超声溶解：冻干粉40％乙醇超声溶解，备用；

D101大孔吸附树脂分离纯化称取100g处理D101树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述溶解液，20％、40％、60％、80％乙醇洗脱，过滤收集60％和80％乙醇洗脱液浓缩60％和80％乙醇洗脱液，冷冻干燥60％和80％乙醇浓缩液。

6.根据权利要求3的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中，复方提纯步骤为：

(1)按重量别取大黄、苦瓜、益智、赤

子、牛胆粉、诃子药材粉碎成粗粉，以物料比例1∶6加入70％乙醇，加热回流提取2次，每次2h，每次提取后过滤，合并醇提过滤液，药渣再加6倍量纯化水加热回流提取2h，过滤水提液；

(2)回收浓缩醇提液：回收浓缩滤液，浓缩至没有乙醇味；

(3)合并醇提浓缩液和水提液，备用；

(4)HPO-722大孔吸附树脂分离纯化：称取1kg处理HPO-722树脂于玻璃层析柱中，缓慢加入上述醇提浓缩液和水提液，20％、40％、60％、80％乙醇洗脱，过滤，收集60％和80％乙醇洗脱液，浓缩60％和80％乙醇洗脱液，冷冻干燥60％和80％乙醇浓缩液；

(5)称重量比的冬虫夏草，以物料比例1∶7加入70％的乙醇，浸泡24h，每次超声提取30min，共超声三次，1.5h；超声波提取温度调为：30℃，时间为30min，每次超声30min种后过滤药渣，加7倍量70％乙醇超声第二次，最后合并过滤液；回收70％乙醇过滤液浓缩至没有乙醇；最后冷冻干燥浓缩液，得冬虫夏草冻干粉。

7.根据权利要求4或5或6的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中，超声波提取的频率为50～80Hz。

8.根据权利要求4-7任一的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中树脂经过预处理，预处理步骤包括：将树脂95％乙醇适量浸泡24h，去除上层漂浮的杂质及小颗粒，将浸泡好的树脂湿法装柱子并测定柱体积，先95％乙醇冲洗，然后用纯化水冲洗，冲洗至不出现白色浑浊无醇味为止，然后用5％盐酸和5％氢氧化钠冲柱子，各冲5个柱体积，最后5～6柱体积纯化水冲洗至中性备用。

9.根据权利要求2-7任一的一种预防或干预糖尿病肾病的蒙药复方制剂的制备方法，其中所述滴丸制备步骤包括：将冻干粉合并后与聚乙二醇质量比1∶2-8，将复方提取物冻干粉加入熔融的聚乙二醇6000中，搅拌至融合均匀，得混合物，以滴速25-50滴/min、滴距8-12cm，将熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液为二甲基硅油运动粘度为100-350mm2/s，4～15℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，即得所述一种预防或干预糖尿病肾病的滴丸。