CN101966251B

CN101966251B - 一种用于预防及治疗支气管哮喘的药物组合物及其制备与应用

Info

Publication number: CN101966251B
Application number: CN2010105015113A
Authority: CN
Inventors: 朱慧华; 虞坚尔; 张晓峰; 江丽红
Original assignee: Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Current assignee: Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Priority date: 2010-10-09
Filing date: 2010-10-09
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2030-10-09
Also published as: CN101966251A

Abstract

本发明公开了一种用于预防及治疗支气管哮喘的药物组合物及其制备与应用，本发明的中药组合物含有下列生药组分：炙麻黄、杏仁、桃仁、椒目、地龙和炙甘草。实验研究表明采用本发明的药物组合物制备的提取物或药物制剂能显著减轻支气管哮喘模型小鼠发作症状，明显改善支气管哮喘模型小鼠气道炎症作用，减轻肺组织炎细胞浸润，减少炎性渗出，减轻平滑肌增生。作用类似于地塞米松。根据其作用机理，有望将其研发成新的支气管哮喘防治药物。

Description

一种用于预防及治疗支气管哮喘的药物组合物及其制备与应用

技术领域

本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种用于预防及治疗支气管哮喘的药物组合物及其制备与应用。

背景技术

支气管哮喘属中医哮病范畴。目前，全世界约有3亿人患有此病，预计在未来15～20年里患病总人数将增至4亿。近年来，我国哮喘的发病呈日益上升的趋势，我国每年用于哮喘的治疗费用已超过30亿元人民币，极大影响了人们的正常生活，严重威胁着人们的身心健康，浪费国家资源。因此预防和治疗哮喘具有深远的意义。由于其病因尚未阐明，目前市场上尚无根治的药物，只能达到临床治愈。

现市场上主要的预防和治疗的西药有糖皮质激素，如甲基泼尼松龙、琥珀酸青化可的松等，纯中药制剂有喘嗽宁、补肾防哮丸、千金防吼片等。但长期应用激素可抑制全身的免疫功能，引起免疫功能的混乱，不为患者所接受。

中成药临床疗效不显著，不为医生和患者所接受。我们认为哮喘作为一种慢性炎症性疾病，更适合采用中医的理念，采用中医中药方法进行治疗，且无明显的副作用。中医药防治哮喘历史悠久，经临床证实疗效显著。

发明内容

本发明的目的是提供对支气管哮喘具有明显预防和治疗作用的药物组合物及其制备与应用。

本专利提供了一种中药组合物，该中药组合物含有下列生药组分：炙麻黄(Ephedrae)、杏仁(Semen Armeniacae Amarum)、桃仁(Semen Persicae Pearl)、椒目(Semen Zanthoxyli)、地龙(Lumbricus)和炙甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)。

较佳的，所述中药组合物含有下列重量份的生药组分：

炙麻黄4-6

杏仁8-12

桃仁4-6

椒目8-12

地龙8-12

炙甘草4-6。

本发明进一步提供了一种中药提取物，由前述中药组合物提取有效成分制得。

本发明中，生药的配方最为关键，在获知生药配方后，本技术领域的技术人员可采用各种常规的中药有效成分提取方法来提取其有效成分，如常规的煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法、盐析法等，由于上述提取方法均能获得前述中药配方中的主要药效成分，因此均能对支气管哮喘具有一定的疗效。

其中，水提醇沉法为：先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度的乙醇沉淀去除提取液中杂质的方法。一般含乙醇量达到50％～60％(重量体积比即g/100ml)时，可去除淀粉等杂质，当含醇量达75％以上，除鞣质、水溶性色素等少数无效成分外，其余大部分杂质均可沉淀去除。

醇提水沉法为：先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，再用水除去提取液中杂质的方法。

所述中药组合物提取有效成分后可再经常规的步骤浓缩、纯化或干燥获得中药提取物。其中浓缩的方法包括但不限于：常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发，纯化的方法包括但不限于：盐析纯化、大孔树脂吸附纯化、乙醇沉淀纯化、离子交换树脂纯化、絮凝沉淀纯化、膜分离纯化、聚酰胺吸附纯化、硅胶吸附层析纯化等，干燥的方法包括但不限于：烘干法、鼓式干燥法、带式干燥法、吸湿干燥法、沸腾干燥法、喷雾干燥法、减压干燥法、冷冻干燥法、红外线干燥法、微波干燥法等。

优选的，所述中药组合物水提醇沉法的方法包括下列步骤：

1.水提：

将生药按比例混合后水煎1-2次，分离并合并药液；

2.浓缩步骤1获得的药液获得浓缩液；

较佳的，浓缩至含生药量约5.33g/ml。

3.制备浸膏：

浓缩液中加入乙醇至含醇量达60-70％，静置(约24)小时后过滤，滤液浓缩获得浸膏。

本发明的中药组合物或中药提取物可用于制备预防和治疗支气管哮喘的药物。

本发明还进一步提供了一种中药制剂，包括治疗有效量的前述中药提取物及一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

药学上可接受的辅料包括(但并不限于)：药物可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羚基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。诸如颗粒剂和膏剂之类的中药制剂，可通过常规方法进行制备。本发明的药物组合物还可与其他治疗剂一起使用。

优选的，所述的中药制剂为口服制剂，包括但不限于颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂、喷雾剂等。在提取出中药组合物中的有效成分后，可采用常规的药用辅料及添加剂制备前述药物组合物。

本发明的药物组合物、提取物或制剂的有效治疗剂量为，以原料药材的总重量计，口服安全有效量通常为0.25g克/千克体重·d。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的中药组合物中，炙麻黄为君药，具有平喘、发汗、利水之效，现代研究证实从麻黄碱能松弛支气管平滑肌，对痉挛状态的支气管有明显的解痉作用。方中以杏仁、桃仁为臣药，有化痰和祛瘀的功效，现代研究证实其有效成分苦杏仁苷有平喘，抗炎、祛痰、镇咳等功效，桃仁有改善血流动力学、抗血栓形成，抗炎等作用。佐以地龙、椒目解痉平喘，研究证实地龙液具有平喘作用，减轻气管痉挛和毛细血管通透，椒目具有解痉平喘与抗过敏双重作用。以炙甘草为使，主镇咳、祛痰。诸药合奏具有降气平喘、化痰、祛瘀作用。中医学认为，宿痰伏肺是哮喘反复发作的夙根，瘀血是哮喘迁延不愈的重要因素，痰瘀相结合使得哮喘迁延不愈。同时现代实验研究证实，哮喘患者存在微循环改变及气道长期的慢性炎症。现代医学发现哮喘患者缓解期虽然多数没有临床症状，但几乎所有患者均存在气道变应性炎症及气道高反应。可见精简平喘方不仅治疾病之本——伏痰、夙瘀，而且降气平喘治标，不失为治疗哮喘的一剂良方。

本发明的效果：

实验研究表明采用本发明的药物组合物制备的提取物或药物制剂能显著减轻支气管哮喘模型小鼠发作症状，明显改善支气管哮喘模型小鼠气道炎症作用，减轻肺组织炎细胞浸润，减少炎性渗出，减轻平滑肌增生。作用类似于地塞米松。根据其作用机理，有望将其研发成新的支气管哮喘防治药物。

附图说明：

图1：流式细胞术检测结果图

B为IFN-γ中平均荧光强度

E为IL-4中平均荧光强度

D为IL-5中平均荧光强度

图2：小鼠肺组织病理观察：

A-D为激发7天小鼠肺组织病理观察图

A：空白对照组激发7天肺内细支气管上皮完整，管壁上皮、肌层及管周未见异常。(HE×200)

B：模型组激发7天细支气管壁部分损伤，纤毛柱状上皮增生，基底细胞排列紊乱，周围间质中可见充血、水肿，腔内大量炎性渗出物充塞，管周灶性淋巴细胞浸润。(HE×200)

C：精简平喘方组激发7天肺内细支气管未见异常改变，管周有炎细胞浸润。(HE×200)

D：地塞米松组激发7天肺内细支气管壁未见异常改变，外周散在少量炎细胞浸润。(HE×200)

E-H为激发14天小鼠肺组织病理观察图

E：空白对照组激发14天肺内细支气管上皮完整，管壁上皮、肌层及管周未见异常。(HE×200)

F：模型组激发14天细支气管壁不规则，纤毛柱状上皮增生，平滑肌略增生，腔内大量炎性渗出物充塞，管周散在炎细胞浸润。(HE×200)

G：精简平喘方组激发14天肺内细支气管壁内皮完整，管周见少量炎细胞浸润，外周肺泡结构完整。(HE×200)

H：地塞米松组激发14天肺内细支气管壁内皮完整，基底细胞排列整齐，细支气管未见异常。(HE×200)

具体实施方式：

以下列举具体实例以进一步阐述本发明，应理解，实例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1：中药提取物的制备

1.按表1的配方称取生药

2.提取：

煎煮：将生药混合后，第一次加13倍水煮沸后1h，保温2h，将药液滤出。第二次加入11倍水煮沸后，1h保温，2h将药液滤出。滤液合并浓缩。

醇沉：加入95％乙醇适量至含醇量为63.3％，冷藏静置24h。滤出将滤液浓缩至流浸膏样。

表1(表中，所有材料的取量单位均为g)

配方	1	2	3	4	5	6	7	8	9
										炙麻黄	5	4	6	5	5	4	6	6	5
杏仁	10	11	10	11	10	8	12	9	10
										桃仁	6	5	4	6	5	6	4	5	6
地龙干	10	9	11	8	10	12	9	8	9
										椒目	8	11	10	9	10	11	8	12	10
炙甘草	6	5	4	6	5	4	6	5	5

实施例2药效学研究

1.造模药液制备

致敏液：将10g OVA(卵清白蛋白)溶于生理盐水100ml配置10％浓度的致敏液，用前即配。

雾化激发液：将5g OVA溶于生理盐水100ml配置5％浓度的致敏液，用前即配。

2.支气管哮喘模型制备

将10g OVA溶于生理盐水100ml配置10％浓度的致敏液，对小鼠进行腹腔注射致敏，造成支气管哮喘小鼠模型。除空白对照组外，每只小鼠分别于第1天和第13天以10％OVA生理盐水混合液1ml，腹腔注射致敏；第25天至第32天，每天将各组小鼠置于5L密闭容器中，以5％OVA生理盐水，由超声雾化器雾化吸入40分钟，激发哮喘，每天1次。空白对照组均以生理盐水进行腹腔注射和雾化吸入致敏和激发小鼠。造模过程中小鼠出现烦躁不安、腹肌紧张、体重下降、呼吸急促、毛发竖起、活动与饮食减少等症状提示造模成功。

3.药物提取物干预支气管哮喘模型小鼠Th1/Th2平衡的影响

3.1受试物

实施例1中采用配方5制备的含生药量5.33g/ml的流浸膏样液。

阳性对照组：地塞米松针剂，1ml∶5mg/支，将地塞米松配制成0.075mg/ml的浓度。

3.2实验动物

清洁级雄性BALB/C小鼠120只，体重18-22g，由上海斯莱克动物中心提供。实验动物生产许可证号：SCXK(沪)：2007-0005。饲养环境：温度，22℃；湿度55％。分笼饲养，自由饮水、饮食。取材前禁食12小时，不禁水。

3.3测试仪器

压缩喷雾治疗仪(Eurosol Aerosol Apparatus)：意大利梅法

流式细胞仪(Beckman Coulter Epics XL-4)：美国贝克曼库尔特公司

酶标仪(Labsystems Duagon Wellscan MK3)：芬兰雷勃公司

洗板机(Labsystems Duagon Wellwash 4MK2)：芬兰雷勃公司

旋转式切片机(LEICA RM 2235)：德国Leica公司

漂烘片机YABO 200：常州市雅博电子有限公司

石蜡包埋机Tissue-TekTEC：日本樱花检验仪器株式会社

BH-2光学显微镜：Olympus公司

Real-time检测仪(7500Sequence Detection System)(ABI-7500)：ABI(美国)

3.4实验方法

(1)造模方法：上已论述。

(2)分组及给药：将120只小鼠用随机方法分为空白对照组、模型组、精简平喘方组、地塞米松组，每组30只。空白对照组普通喂养。第14天至第39天每组都灌胃用药：精简平喘方组以配制成的含生药量5.33g/ml的精简平喘方药液0.2ml/20g鼠(50g/kg体重·d)灌胃；地塞米松组以配制成浓度为0.075mg/ml的地塞米松溶液0.2ml/20g鼠(0.75mg/Kg体重·d)灌胃；空白对照组和模型组每日以等量生理盐水灌胃。

(3)检测项目：各组分别于雾化激发第7天和第14天分二批处死、取样、检测，每时间点每组分别取15只小鼠股静脉取血，离心取上清液，采用ELISA法检测血清总IgE，采用荧光微球-流式细胞术检测其IFN-γ、IL-4、IL-5含量；每只小鼠取血完毕后，立即脱臼处死，取右肺支气管肺泡灌洗液，用荧光微球-流式细胞术检测IFN-γ、IL-4、IL-5含量；取左肺中叶，作肺组织病理切片(HE染色)；取左肺剩余组织，用荧光定量PCR法检测T-bet与GATA-3mRNA表达。

3.5实验结果：

(1)造模结果：模型组小鼠经腹腔致敏后，即出现体重下降，经抗原激发后，出现烦躁不安、呼吸急促、毛发竖起、活动与饮食减少等症状，严重者口鼻轻度发绀；同期空白对照组呼吸平稳、皮毛光滑、活动敏捷、饮食正常、体重增加；精简平喘方组小鼠毛色光泽，活动自如，饮食如常，体重增长明显；地塞米松组小鼠毛发光泽，活动自如，饮食如常，体重增加。

(2)各项指标检测结果

表2：各组小鼠血清总IgE含量检测结果(n＝15，ng/ml)

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较^◆P＜0.05，^◆◆P＜0.01。

从表2可见：

激发7天时，模型组血清中总IgE水平均明显高于空白对照组(P＜0.01)；地塞米松组和精简平喘方组血清总IgE水平均明显高于空白组(P＜0.01)。地塞米松组和精简平喘方组血清中总IgE明显低于模型组(P＜0.01)。

激发14天时，模型组血清中总IgE水平均明显高于空白对照组(P＜0.01)，地塞米松组和精简平喘方组血清中总IgE均明显低于模型组(P＜0.01)。

激发7天和14天时，地塞米松组与精简平喘方组之间血清总IgE无显著性差异(P＞0.05)。

表3：各组小鼠血清IFN-γ、IL-4含量检测结果(n＝15，

pg/ml)

从表3可见：

激发7天，模型组、精简平喘方组、地塞米松组血清中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显高于空白对照组(P＜0.01，P＜0.05)；精简平喘方组血清中IFN-γ的含量明显高于模型组(P＜0.05)，而IL-4的含量明显低于模型组(P＜0.05)；地塞米松组血清中IFN-γ的含量明显高于模型组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显低于模型组(P＜0.01)。

激发14天，模型组血清中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)；精简平喘方组血清中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.01)；精简平喘方组、地塞米松组血清中IFN-γ的含量明显高于模型组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显低于模型组(P＜0.01)；

激发7天及14天时地塞米松组与精简平喘方组血清中IFN-γ、IL-4之间均无显著性差异(P＞0.05)。

表4：各组小鼠BALF中IFN-γ、IL-4含量检测结果(n＝15，pg/ml)

从表4可见：

激发7天，模型组、精简平喘方组BALF中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)；地塞米松组BALF中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.05)，而IL-4的含量明显高于空白对照组(P＜0.05)；精简平喘方组、地塞米松组BALF中IL-4含量明显低于模型组(P＜0.01)；而BALF中IFN-γ的含量明显高于模型组(P＜0.01)。

激发14天，模型组BALF中IFN-γ的含量明显低于空白对照组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)；精简平喘方组、地塞米松组BALF中IFN-γ的含量明显高于模型组(P＜0.01)，而IL-4的含量明显低于模型组(P＜0.01)。

激发7天及14天时地塞米松组与精简平喘方组之间均无显著性差异(P＞0.05)。

表5：各组小鼠血清、BALF中IL-5含量检测结果(n＝15，

pg/ml)

从表5可见：

激发7天，模型组血清、BALF中IL-5的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)，精简平喘方组血清中IL-5的含量明显高于空白对照组(P＜0.05)，而精简平喘方组、地塞米松组BALF中IL-5的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)；精简平喘方组血清、BALF中IL-5的含量明显低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。地塞米松组血清、BALF中IL-5的含量明显低于模型组(P＜0.01)。

激发14天，模型组血清、BALF中IL-5的含量明显高于空白对照组(P＜0.01)精简平喘方组BALF中IL-5的含量明显高于空白对照组(P＜0.05)；精简平喘方组血清中IL-5明显低于模型组(P＜0.05)，而BALF中IL-5的含量明显低于模型组(P＜0.01)。地塞米松组血清、BALF中IL-5的含量明显低于模型组(P＜0.01)。

激发7天及14天时地塞米松组与精简平喘方组血清、BALF之间均无显著性差异(P＞0.05)。表6：各组小鼠肺组织T-bet、GATA-3mRNA表达检测结果(n＝15，

％)

从表6可见：

激发7天时模型组、精简平喘方、地塞米松组肺组织T-betmRNA表达均明显低于空白对照组(P＜0.01)，而GATA-3mRNA表达均明显高于空白对照组(P＜0.01)；地塞米松组和精简平喘方组肺组织T-betmRNA表达明显高于模型组(P＜0.01)；而肺组织GATA-3mRNA明显低于模型组(P＜0.01)

激发14天时，模型组肺组织T-betmRNA表达均明显低于空白对照组(P＜0.01)，而GATA-3mRNA表达均明显高于空白对照组(P＜0.01)；精简平喘方组T-betmRNA表达均明显低于空白对照组(P＜0.05)；精简平喘方组、地塞米松组T-betmRNA表达均明显高于模型组(P＜0.01)，而GATA-3mRNA表达均低于模型组(P＜0.01)。

激发7天及14天时地塞米松组与精简平喘方组之间T-betmRNA、GATA-3mRNA表达均无显著性差异(P＞0.05)。

3.6实验结论

(1)经腹腔注射卵蛋白致敏、并以卵蛋白雾化激发可使哮喘模型小鼠血清总IgE、IL-4、IL-5的含量及肺泡灌洗液中IL-4、IL-5的含量显著升高，使血清及肺泡灌洗液中IFN-γ含量显著降低。

(2)在哮喘激发早期(7天时)，模型组小鼠存在IL-4、IL-5水平升高和IFN-γ水平降低，这种变化可持续存在(14天时)。

(3)精简平喘方能显著降低模型小鼠IgE、IL-4、IL-5水平，显著升高IFN-γ水平，对减轻模型小鼠哮喘发作症状，改善哮喘模型小鼠气道炎症作用明显，其疗效与地塞米松相似。

(4)精简平喘方能显著降低哮喘模型小鼠肺组织GATA-3mRNA表达，显著提高T-bet mRNA表达。

(5)精简平喘方能减轻哮喘模型小鼠肺组织炎细胞浸润，减少炎性渗出，减轻平滑肌增生。

Claims

1.一种用于预防和治疗支气管哮喘的中药组合物，其原料药为下列重量份的中药：

炙麻黄4-6

杏仁8-12

桃仁4-6

椒目8-12

地龙8-12

炙甘草4-6。

2.一种用于预防和治疗支气管哮喘的中药提取物，由权利要求1所述中药组合物提取有效成分制得。

3.如权利要求1所述的中药组合物或权利要求2所述中药提取物在制备预防和治疗支气管哮喘的药物中的用途。

4.一种用于预防和治疗支气管哮喘的中药制剂，由治疗有效量的权利要求2所述中药提取物及一种或多种药学上可接受的辅料组成。

5.如权利要求4所述中药制剂，其特征在于，所述的中药制剂为口服制剂。