CN105579574B - 新型乳酸菌、以及含有新型乳酸菌的药品、饮食品和饲料 - Google Patents

新型乳酸菌、以及含有新型乳酸菌的药品、饮食品和饲料 Download PDF

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Abstract

将具有高的IL‑12产生促进作用的副干酪乳杆菌MCC1849(NITE BP‑01633)株作为用于IL‑12产生促进用、免疫刺激用、抗病毒用等的药品、饮食品、或饲料的成分。

Description

新型乳酸菌、以及含有新型乳酸菌的药品、饮食品和饲料
技术领域
本发明涉及属于副干酪乳杆菌的新型乳酸菌和含有该乳酸菌的饮食物、药品和饲料。
背景技术
报告了，一部分乳酸菌对于各种各样的感染症表现出了预防作用和防御作用(非专利文献1)。报告了，由乳酸菌带来的这些作用是通过刺激宿主的细胞性免疫、使来自肠管和呼吸器等的粘膜的IgA分泌亢进等导致的(非专利文献1)。报告了例如，属于干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的乳酸菌通过诱导来自宿主的免疫担当细胞的IL-12(白细胞介素-12)、IFN-γ(干扰素-γ)等细胞因子产生，刺激宿主的细胞性免疫，从而防御流感病毒等的感染(非专利文献2～4)。
IL-12、IFN-γ是具有将辅助稚T细胞向类型1辅助T细胞(Th1)分化诱导的作用、对自然杀伤细胞(NK细胞)活化的作用、以及使巨噬细胞等细胞的吞噬作用亢进的作用的细胞因子；与由病毒、细菌导致的感染防御作用、宿主的抗肿瘤效果相关。因此，为了得到对由乳酸菌导致的感染症的高的预防作用和防御作用，重要的是，使用具有强IL-12产生诱导能力的乳酸菌。作为这样的乳酸菌，已知有在酸性条件下的生存性高且IL-12产生诱导能力优异的副干酪乳杆菌(Lactobadcillus paracasei)FERM BP-11313株(专利文献1。相同文献中，也记载了MCC1375株)。
另一方面启示了在由乳酸菌产生的IL-12诱导中，乳酸菌的细胞壁的参与(专利文献2)；报告了如果对乳酸菌用细胞壁分解酶(N-乙酰胞壁酸酶)进行处理，则有损IL-12产生诱导能力(非专利文献5)。另外启示了，在由乳酸菌导致的IL-12诱导中，乳酸菌所包含的RNA也参与了；还报告了对乳酸菌的加热死菌体用RNase进行处理时，显著地有损IL-12产生诱导能力(非专利文献6)。另外，提供了到目前为止利用乳酸菌的RNA本身的免疫刺激剂(专利文献3、4)。
可以认为，在人体内，存在有对细菌具有N-乙酰胞壁酸酶活性的溶菌酶这样的细胞壁分解酶，因此摄取的乳酸菌受到了这些酶的影响。进而，RNase在环境中无处不存在且对热非常稳定，因此在制品中容易污染且在杀菌处理等中不失活而残存。另外，可以认为，在人的唾液中、消化液中这样的体内也存在有RNase，因此口服乳酸菌之后也会受到RNase的影响。
即便是本来具备高的IL-12诱导能力的乳酸菌，由于受到唾液、消化液中的细胞壁分解酶(N-乙酰胞壁酸酶)、RNase的影响，也存在在生物体内不能够充分地维持·发挥高的IL-12诱导能力的可能性。可以认为，这些细胞壁分解酶、RNase的分泌量存在个体差异，可以认为这对个体间的效果的差异也带来影响的可能性大。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开2012/133827号
专利文献2：日本特开2009-155221号
专利文献3：国际公开2009/005124号
专利文献4：国际公开2011/027829号
非专利文献
非专利文献1：Delcenserie,V.et al.,Curr.Issues Mol.Biol.(2008)10:37-54.
非专利文献2：Hori,T.et al.,Clin.Diagn.Lab.Immunol.(2002)9:105-108.
非专利文献3：Takeda,K.et al.,Clin.Exp.Immunol.(2006)146:109-115.
非专利文献4：Ogawa,T.,Clin.Exp.Immunol.(2006)143:103-109.
非专利文献5：Shida,K.et al.,J.Dairy Sci.(2006)89:3306-3317.
非专利文献6：Inoue,R.et al.,FEMS Immnol Med Microbiol.(2011)61:94-102.
发明内容
发明要解决的问题
本发明的课题在于提供对于各种感染的预防和防御有用的乳酸菌即具有高的IL-12产生促进作用或免疫刺激作用且优选这些作用在人体内等难以降低的乳酸菌。
用于解决问题的方案
为了解决上述课题，本发明人等对于目标乳酸菌进行深入探索，发现具有高的IL-12产生促进作用的副干酪乳杆菌的新型菌株，至此完成了本发明。
即，本发明提供副干酪乳杆菌MCC1849(NITE BP-01633)株。
本发明还提供包含前述菌株的药品。
前述药品为优选用于免疫刺激的方式。
另外，前述药品为优选用于抗病毒的方式。
前述抗病毒用的药品优选为抗流感病毒用的方式。
本发明还提供包含前述菌株的饮食品。
本发明还提供包含前述菌株的饲料。
本发明还提供包含前述菌株的IL-12产生促进剂。
前述IL-12产生促进剂优选为饮食品的形式。
附图说明
图1为表示利用乳酸菌的来自小鼠脾细胞的IL-12产生量的图。横轴表示乳酸菌株，纵轴表示IL-12产生量的平均值和标准偏差(S.D.)。
图2为表示MCC1849株的流感病毒感染预防作用的图。图(a)为感染后的症状评分。*标记表示观察日的两组间的统计学的显著性差异。图(b)为肺中病毒浓度。*标记表示两组间的统计学的显著性差异。统计分析使用Dunnett检验。
具体实施方式
以下，对于本发明详细地进行说明。
本发明是作为属于副干酪乳杆菌的乳酸菌的新型菌株的、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)MCC1849(NITE BP-01633)株。以下，有时将相同菌株记载为“本发明的乳酸菌”、“本发明的菌株”或简单地记载为MCC1849株。
本发明的乳酸菌以人糞便为分离源而被分离。相同菌株的细菌学性质如后述的实施例1所示。相同菌株于2013年6月6日以NITE P-01633的保藏编号保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心(〒292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)，于2014年1月31日基于布达佩斯条约移管至国际保藏，被赋予NITE BP-01633的保藏编号。
本发明的乳酸菌不限定于上述保藏菌株，也可以是与相同保藏菌株实质上等同的菌株。实质上等同的菌株是指这样的菌株：属于副干酪乳杆菌的菌株，且具有与保藏菌株相同程度高的IL-12产生促进作用并且优选利用细胞壁分解酶和RNase进行处理，IL-12产生促进作用的降低也与保藏菌株相同程度地少。另外，实质上等同的菌株，进一步，其16SrRNA基因的碱基序列具有与上述保藏菌株的16S rRNA基因的碱基序列98％以上、优选为99％以上、更优选为100％的同源性并且优选具有与上述保藏菌株相同的细菌学性质。进而，本发明的乳酸菌只要不有损本发明的效果，也可以为由保藏菌株或与其实质上等同的菌株通过变异处理、基因重组、自然变异株的选择等育种的菌株。
MCC1849株与已知的乳酸菌相比较，具有高的IL-12(白细胞介素-12)产生促进活性。通常，乳酸菌所具有的IL-12产生促进活性经N-乙酰胞壁酸酶这样的细胞壁分解酶或RNase处理显著地降低，但MCC1849株即便经过细胞壁分解酶和RNase处理，IL-12产生促进活性的降低也少。IL-12产生促进活性可以与实施例所记载的方法同样地进行测定。
MCC1849株可以通过例如培养相同菌株而容易地增殖。培养的方法，只要MCC1849株能够增殖则没有特别地限定，可以将乳酸菌的培养中通常使用的方法根据需要适宜修正而使用。例如，培养温度可以为25～50℃，优选为35～42℃。另外，培养可以在好氧条件下和厌氧条件下的任一者进行，但优选在厌氧条件下进行，例如，可以边通气二氧化碳等厌氧气体边进行培养。另外，也可以在液体静置培养等微好氧条件下进行培养。
对于培养MCC1849株的培养基，没有特别地限定，可以对乳酸菌的培养中通常使用的培养基根据需要适宜修正而使用。即，作为碳源，可以根据同化性使用例如：半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、纤维二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、淀粉、淀粉水解物、废糖蜜等糖类。作为氮源，可以使用例如：氨，硫酸铵、氯化铵、硝酸铵等铵盐类，硝酸盐类。另外，作为无机盐类，可以使用例如：氯化钠、氯化钾、磷酸钾、硫酸镁、氯化钙、硝酸钙、氯化锰、硫酸亚铁等。另外，也可以使用蛋白胨、大豆粉、脱脂大豆粕、肉提取物、酵母提取物等有机成分。另外，作为调制好的培养基，可以优选使用例如MRS培养基。
作为MCC1849株，可以直接使用培养后得到的培养物，也可以稀释或浓缩而使用，还可以使用由培养物回收的菌体。另外，只要不有损本发明的效果，可以在培养后进行加热和冷冻干燥等各种追加操作。追加的操作优选使活菌的生存性高。需要说明的是，本发明的药品、饮食品和饲料中，MCC1849株的菌体优选为活菌，但也可以为死菌。
MCC1849株可以作为IL-12产生促进剂而利用。MCC1849株或包含其的IL-12产生促进剂、或者包含它们的组合物，可以作为药品、饮食品和饲料广泛地使用。可以提供例如：IL-12产生促进用药品、IL-12产生促进用饮食品、IL-12产生促进用饲料。
另外，本发明的IL-12产生促进剂可以作为免疫刺激剂、抗病毒剂而使用。作为抗病毒剂对象的病毒，只要是能够通过IL-12产生促进或免疫刺激预防或治疗起因于该病毒的疾病，则没有特别的限制，可列举出例如流感病毒。
本发明的药品只要含有MCC1849株则没有特别的限制。作为本发明的药品，可以直接使用MCC1849株，也可以配混生理上允许的液体或固体的制剂载体制剂化而使用。
对于本发明药品的剂形，没有特别的限制，具体而言，可例示出：片剂、丸剂、散剂、液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、栓剂、注射剂、软膏剂、贴剂、滴眼剂和滴鼻剂等。另外，制剂化时，作为制剂载体，可以使用通常使用的赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂、稀释剂、表面活性剂或注射剂用溶剂等添加剂。
对于本发明的药品中的MCC1849株的含量，可以根据剂形、用法、患者的年龄、性别、疾病的种类、疾病的程度以及其他的条件等适宜设定；通常优选为1×106～1×1012cfu/g或1×106～1×1012cfu/ml的范围内，更优选为1×107～1×1011cfu/g或1×107～1×1011cfu/ml的范围内。MCC1849株为死菌的情况下，cfu/g或cfu/ml可以置换为个细胞/g或个细胞/ml。
另外，只要不有损本发明的效果，也可以将含有MCC1849株的药品和其他的药品例如，MCC1849株以外的IL-12产生促进剂、免疫刺激剂、抗病毒剂、抗炎症剂、抗溃疡剂等组合使用。
对于本发明的药品的给与时期，没有特别地限定，可以根据成为对象的疾病的治疗方法选择适宜给与时期。另外，可以预防地给与，也可以用于维持疗法。另外，给与形式优选根据制剂形式、患者的年龄、性别、其他的条件、患者的症状程度等而决定。需要说明的是，本发明的药品在所有情况下均可以1天1次或分数次给与，另外，也可以数天或数周给与1次。
本发明的IL-12产生促进用剂或含有其的组合物含有MCC1849株的菌体作为有效成分，能够显著地促进生物体内的IL-12的产生。增加的IL-12使细胞性免疫活化。因此，本发明的IL-12产生促进剂能够强化细胞性免疫，也可以作为免疫刺激剂使用。“免疫刺激”是指刺激各种免疫反应，与“免疫活化”是同义的。另外，IL-12产生促进剂可以作为IL-12产生诱导剂而使用。
本发明的药品或IL-12产生促进剂具有IL-12产生促进作用或通过相同作用的免疫刺激，促进IL-12产生或刺激免疫，由此能够应用于可预防或治疗的疾病的预防或治疗中。“治疗”也包括改善。
作为本发明的药品的适用，具体而言，可列举出例如：过敏症状例如食物过敏、支气管哮喘、荨麻疹、鼻炎、花粉症、过敏性休克等的缓和，除此之外，对于感染症的抵抗力的增进、癌的预防、防止癌症加重等。另外，本发明的药品或IL-12产生促进剂可以作为抗肿瘤剂、机会性感染的预防剂或治疗剂、过敏疾病预防剂或者治疗剂而广泛地利用。
本发明的药品可以单独给与，也可以与其他的药品，例如免疫抑制剂等组合使用。
本发明的其他的方式为IL-12产生促进剂、或免疫刺激剂的制造中的MCC1849株的应用。另外，本发明的其他的方式为包括对适用对象给与MCC1849株或本发明的药品的工序的、能够通过IL-12产生促进而预防或治疗的疾病的预防或治疗方法。
另外，本发明的药品可以以其他的形态作为抗病毒剂使用，特别是可以作为抗流感病毒剂使用。本发明的抗流感病毒剂可以应用于起因于流感病毒的疾病的预防或治疗。本发明的抗流感病毒剂能够降低流感病毒的感染或生物体内的增殖。需要说明的是，对于作为抗病毒剂对象的病毒，只要是通过IL-12产生促进或免疫刺激能够预防或治疗起因于该病毒的疾病的病毒，则没有特别的限制。
本发明的其他的方式为抗病毒剂例如抗流感病毒剂的制造中的、MCC1849株的应用。另外，本发明的其他的方式为包括对适用对象给与MCC1849株或本发明的药品的工序的、起因于病毒的疾病例如流感的预防或治疗方法。
对于本发明的饮食品，只要含有MCC1849株则没有特别的限制，作为饮食品，可例示出：清凉饮料、碳酸饮料、营养饮料、果汁饮料和乳酸菌饮料等饮料(包括这些饮料的浓缩原液和调制用粉末)；冰淇淋、雪泥、刨冰等冰点；饴糖、口香糖、软糖、橡皮糖、巧克力、片状糖果、膨化点心(snack)、饼干、果冻、果酱、奶油和烘焙点心等点心类；加工乳、乳饮料、发酵乳、可饮用酸奶和黄油等乳制品；面包；经肠营养食品、流食、育婴用配方乳、运动饮料；其他功能性食品等。另外，饮食品也可以为补充剂，例如，片状的补充剂。为补充剂的情况下，对于每一天的摄食量和摄取卡路里，可以不影响其他食品地摄取MCC1849株。
本发明的饮食品可以通过向饮食品的原料中添加MCC1849株来制造，除了添加MCC1849株以外，可以与通常的饮食品同样地制造。MCC1849株的添加可以在饮食品的制造工序的任一阶段进行。另外，也可以经过利用添加的MCC1849株的发酵工序来制造饮食品。作为这样的饮食品，可列举出乳酸菌饮料和发酵乳等。
作为食品或饮料的原料，可以使用通常的饮料、食品中所使用的原料。制造的饮食品可以经口摄取。
本发明的饮食品中也可以包含：用于饮食品制造的原料和食品添加物等在饮食品的制造工序或制造后添加至饮食品的物质。例如，本发明的乳酸菌可以作为发酵乳制造用引子而使用。另外，本发明的乳酸菌也可以在之后向制造的发酵乳中添加。
对于本发明的饮食品中的MCC1849株的含量，可以根据饮食品的形态而适宜设定，通常在饮食品中，优选为1×106～1×1012cfu/g或1×106～1×1012cfu/ml的范围内，更优选为1×107～1×1011cfu/g或1×107～1×1011cfu/ml的范围内。
本发明的饮食品可以在利用IL-12产生促进、免疫刺激、抗病毒等效果的各种用途中使用。即，可以提供含有本发明的乳酸菌且以饮食品的形式的IL-12产生促进剂、免疫刺激剂和抗病毒剂。以饮食品的形式的IL-12产生促进剂、免疫刺激剂和抗病毒剂分别与包含本发明的饮食品的IL-12产生促进剂、包含本发明的饮食品的免疫刺激剂、以及包含本发明的饮食品的抗病毒剂是同义的。
本发明的饮食品可以作为标识出IL-12产生促进用、免疫刺激用、抗病毒用等用途的饮食品而贩卖。另外，本发明的饮食品可以带有“IL-12产生促进用”、“免疫刺激用”、“免疫活化用”、“抗病毒用”、“抗流感病毒用”、“感染症预防用”等标识(indication)。另外，除此以外，也可以说只要是表示通过IL-12产生促进二次地产生的效果的语言，就能够使用。
前述“标识”是指对于需要者用于使之知道上述用途的全部的行为，只要是使之想起·类推上述用途这样的标识，则不限定于标识的目的、标识的内容、标识的对象物和介质等，相当于全部的本发明的“标识”。然而，优选通过需要者能够直接地认识上述用途这样的表达进行标识。
具体而言，可例示出：在本发明的饮食品相关的商品或商品的包装上记载上述用途的行为；用于在商品或商品的包装上记载了上述用途的商品的转让、交接、出于转让或交接目的的展示、进口的行为；在涉及商品的广告、价格表或交易文件类记载上述用途并进行展示、或者公布或在将以这些作为内容的新闻中记载上述用途并通过电磁的(互联网等)方法提供的行为等，特别优选在包装、容器、目录、小册子、POP等贩卖现场的宣传材料、其他的文件等上的标识。
另外，作为标识，优选为通过行政等授权的标识(例如，根据行政制定的各种制度受到许可、以基于这样的许可的形态进行的标识)。可例示出例如：作为健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特别用途食品、营养功能食品、药品用部外品等的标识，其他地，可列举出被厚生劳动省许可的标识例如：特定保健用食品、被与其类似的制度许可的标识。作为后者的例子，可例示出：作为特定保健用食品的标识、作为附有条件的特定保健用食品的标识、具有对身体的结构、功能带来影响的意思的标识、降低疾病风险的标识等。进而可详细地例示出：作为由健康增进法施行规则(平成15年4月30日日本国厚生劳动省令第86号)规定的特定保健用食品的标识(特别是保健用途的标识)、以及与其类似的标识等。
作为本发明的饲料，可例示出宠物饲料、家畜饲料和鱼饲料等。本发明的饲料例如可以通过在通常的饲料谷类、粕类、糠类、鱼粉、骨粉、油脂类、脱脂奶乳、乳清、矿物质饲料或酵母类等中混合MCC1849株来制造。另外，也可以例如如青贮饲料那样，经过利用添加了MCC1849株的发酵工序制造饲料。制造的饲料可以对通常的哺乳动物、家畜类、养殖鱼类和宠物等经口给与。
对于本发明的饲料中的MCC1849株的含量，可以根据饲料的形态、给与对象而适宜设定，但优选为1×106～1×1012cfu/g或1×106～1×1012cfu/ml的范围内，更优选为1×107～1×1011cfu/g或1×107～1×1011cfu/ml的范围内。
实施例
以下，使用实施例对本发明更具体地进行说明，但是本发明不限定于这些实施例。
〔实施例1〕MCC1849株的细菌学性质
MCC1849株由人糞便样品分离。作为相同株的细菌学性质，将细胞的形态、运动性、孢子形成、革兰氏染色性、过氧化氢酶、来自葡萄糖的气体产生、以及糖的发酵性示于表1。糖的发酵性使用细菌鉴定试剂盒API50CH(Sysmex Biomerieux Co.,Ltd.)进行调查。根据附属于试剂盒的手册记载的方法，将培养一晩后的菌液接种于包含各基质的培养基，将其在37℃的孵化器中进行培养，在培养第1天和第2天对各基质的糖发酵性状进行评价。
将这些这些细菌学性质示于表1。由该结果可以判定MCC1849株为副干酪乳杆菌。
[表1]
表1副干酪乳杆菌MCC1849株的细菌学性质
+：阳性；-：阴性；±：假阳性
另外，由MCC1849株的16S rRNA基因碱基序列的解析可以判断，MCC1849株为副干酪乳杆菌或干酪乳杆菌。副干酪乳杆菌与干酪乳杆菌为近亲菌种，标准株间的16S rRNA基因碱基序列的同源性显示为99％以上(Huang CH,and Lee FL.,Antonie VanLeeuwenhoek,2011,99(2):319-27)。确定MCC1849株的基因组序列，将副干酪乳杆菌标准株(ATCC25302)或干酪乳杆菌标准株(ATCC393)作为参照基因组，对读序进行映射，由此来确认同源性。
结果，MCC1849株与副干酪乳杆菌标准株的同源性为85％，与此相对，与干酪乳杆菌标准株的同源性为45％。
因此，可以确认，MCC1849株为副干酪乳杆菌。
〔实施例2〕使用小鼠脾细胞的IL-12产生诱导能力的评价
以实施例1中记载的的副干酪乳杆菌MCC1849株、和已知具有高的IL-12产生诱导能力的副干酪乳杆菌FERM BP-11313株(国际公开2012/133827)、以及作为其他乳酸菌的菌株的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ATCC53103株、约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)JCM2012株、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)JCM1149株、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)ATCC11842株作为对象，使用小鼠脾细胞评价RNase处理或细胞壁分解酶处理的有无对于乳酸菌的IL-12产生诱导能力带来的影响。
FERM BP-11313株被国际保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心。JCM2012株和JCM1149株可以从独立行政法人理化学研究所微生物系统保存设施(JCM)(〒351-0198埼玉县和光市广泽2-1)得到。另外，ATCC53103株和ATCC11842株可以从美国标准菌库(American Type Culture Collection)(地址12301Parklawn Drive,Rockville,Maryland 20852,United States of America)得到。
将上述乳酸菌的各菌株用MRS(de Man Rogasa Sharpe)培养基(BD公司制)培养16小时，对菌体进行离心分离和再悬浮于蒸馏水而洗涤3次之后，用蒸馏水以成为10mg(菌体干燥重量换算)/ml的方式进行悬浮，进行100℃、15分钟的加热处理，制成乳酸菌死菌体液(“酶未处理”)。
对于各乳酸菌死菌体液进行离心分离，去除上清，将沉淀物用包含4mM氯化镁的50mM Tris-苹果酸缓冲液(pH7.0)以成为10mg(菌体干燥重量换算)/ml的方式进行悬浮，以5μg/ml添加N-乙酰胞壁酸酶(N-acetylmuramidase SG。生化学工业株式会社)，在37℃下进行120分钟反应之后，在100℃下进行5分钟的加热处理使酶失活，从而制成细胞壁分解酶处理物(“N-乙酰胞壁酸酶处理”)。
另一方面，向各乳酸菌死菌体液中以0.1mg/ml添加核糖核酸酶A(RNase A、LifeTechnologies公司制)，在37℃下进行30分钟的处理。处理后，通过离心分离和再悬浮于蒸馏水而将沉淀物洗涤3次之后，以成为10mg(菌体干燥重量换算)/ml的方式用蒸馏水再次悬浮，从而制成RNase处理物(“RNase处理”)。
实验动物使用7周龄的雄性BALB/c小鼠(日本SLC)，在7～9周龄时进行解剖，采集脾脏。从采集的脾脏采集脾细胞，在红血球溶血液(0.144M氯化铵、17mM三羟基甲基氨基甲烷、pH7.65)中处理2分钟进行离心分离，从而调制去除了红血球级分的脾细胞。向该脾细胞与之前调制的乳酸菌死菌体液(酶未处理)、细胞壁分解酶处理物(N-乙酰胞壁酸酶处理)或RNase处理物(RNase处理)中，添加RPMI1640(SIGMA-ALDRICH公司制)中加入了10％FBS(Fetal Bovine Serum、Life Technologies公司制)、100IU/ml青霉素、0.1mg/ml链霉素的培养基，以脾细胞数为2.5×106个细胞/ml且乳酸菌死菌体液、细胞壁分解酶处理物或RNase处理物各自的终浓度5μg(菌体干燥重量换算)/ml的方式调制试验液，将该试验液200μl加入至96孔的微孔板(BD公司制)，在37℃、5％CO2存在下进行培养。
2天后回收培养上清，对于培养上清中的IL-12p70(p40-p35异二聚体)的浓度，使用测定试剂盒(Mouse IL-12p70DuoSet。R&D Systems公司制)进行测定。
试验进行3次，将其结果示于表2和图1中。
[表2]
表2利用乳酸菌的来自小鼠脾细胞的IL-12产生量
副干酪乳杆菌MCC1849株与已知具有高的IL-12产生诱导能力的FERM BP-11313株相比较，显示出其以上的IL-12产生诱导能力。另外，其他的乳酸菌株比这些菌株的IL-12产生诱导能力低。
通过N-乙酰胞壁酸酶处理或RNase处理，MCC1849株以外的乳酸菌株的IL-12产生诱导能力显著地降低，而MCC1849株即便接受这些处理也能够维持高的IL-12产生诱导能力。即便是与MCC1849相同的菌种FERM BP-11313株，通过N-乙酰胞壁酸酶处理或RNase处理也不会有损IL-12产生诱导活性，因此MCC1849株所具有的IL-12产生诱导能力的稳定性示出并非是菌种依赖的性质而是依赖于菌株的性质。
〔实施例3〕利用MCC1849株的流感病毒感染预防作用
使用小鼠调查利用MCC1849株给与的流感病毒感染预防作用。
将MCC1849株在MRS培养基中进行16小时培养，对菌体用蒸馏水洗涤2次之后，悬浮于蒸馏水中，添加蔗糖和谷氨酸钠，进行冷冻干燥。将冷冻干燥的菌体用生理盐水以1×1010cfu/ml悬浮，将所得液体作为MCC1849株活菌液。
对MCC1849株在MRS培养基中进行16小时培养的物质用PBS洗涤2次，进而用蒸馏水洗涤1次之后，用蒸馏水进行悬浮，在100℃下进行30分钟的加热处理。加热处理之后，对菌体用蒸馏水进行2次洗涤之后，用蒸馏水进行悬浮，进行冷冻干燥。将冷冻干燥的菌体用生理盐水以5mg/ml悬浮，将所得液体作为MCC1849株死菌液。
对于BALB/c小鼠经口给与0.2ml的MCC1849株的活菌液(Live组)、死菌液(HK组)或生理盐水(Control组)14天之后，使之通过鼻腔感染流感病毒(A/PR8/34(H1N1)株)。感染6天之后，对于涉及小鼠的眼(开眼睑与眼睑的程度)、被毛(横毛和立毛)、呼吸(不规则呼吸)、行为(自发运动的程度)的一般状态进行观察，按照下述基准对各项目进行评分化，由此对发症状况进行评价。
正常：0
轻度的感染：1
中度的感染：2
重度的感染：3
死亡：4
将各项目的评分的平均值作为小鼠的每个个体的症状评分(Symptom score)。
另外，感染6天后摘除肺，利用使用了MDCK细胞(来自于狗的肾脏细胞)的蚀斑法测定肺中病毒浓度。
将试验结果示于表3和图2。与MCC1849株非给与(Control组)相比较，即便通过MCC1849株活菌液(Live组)、MCC1849株死菌液(HK组)的任一者给与，症状评分显著地降低，肺中病毒浓度(Virus titer)也显著地减少。由这些结果可知，MCC1849株在活菌、死菌任一状态下给与，对于流感病毒感染的预防都是有效的。
[表3]
表3利用MCC1849株的流感病毒感染预防作用
产业上的可利用性
作为本发明的菌株的副干酪乳杆菌MCC1849株具有高的IL-12产生促进活性。相同菌株所具有的IL-12产生促进活性，即便通过细胞壁分解酶和RNase的处理，降低也少。因此可以认为，相同菌株所具有的IL-12产生促进活性的适用对象的个体差异少，作为免疫刺激剂是有用的。另外，相同菌株能够降低流感病毒等的感染或增殖，能够用于感染症的预防、治疗等。

Claims (9)

1.副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)MCC1849的菌株，所述菌株为保藏编号NITE BP-01633的菌株。
2.一种药品，其包含权利要求1所述的菌株。
3.根据权利要求2所述的药品，其用于免疫刺激。
4.根据权利要求2所述的药品，其用于抗病毒。
5.根据权利要求4所述的药品，其中，病毒为流感病毒。
6.一种饮食品，其包含权利要求1所述的菌株。
7.一种饲料，其包含权利要求1所述的菌株。
8.一种IL-12产生促进剂，其包含权利要求1所述的菌株。
9.根据权利要求8所述的IL-12产生促进剂，其为饮食品的形式。
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