CN105566451A - 一种促纤溶的土鳖小肽螯合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种促纤溶的土鳖小肽螯合物及其制备方法，属生物技术领域。其特征是以土鳖虫为起始物料，经过酶解、超滤、树脂柱纯化、鳌合反应、干燥得到土鳖小肽螯合物，可加制剂辅料按常规方法制成相应的制剂。本发明采用这种土鳖小肽螯合物具有较强促纤溶活性，具有无毒副作用、无药害、成本低等优点。

Description

一种促纤溶的土鳖小肽螯合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种促纤溶药物土鳖小肽螯合物及其制备方法。
背景技术
土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖EupolyphagasinensisWalker或冀地鳖Steleophagaplancyi(Boleny)的雌虫干燥体，为一种传统中药，最早记载于秦汉著作《神农本草经》中，东汉张仲景的《金匮要略》、明代李时珍的《本草纲目》等历代医药著作中均有记述，其性寒、味咸，有微毒，具有散血瘀、接骨续筋、消肿止痛、下乳通经等功效。药理作用研究表明，土鳖虫具有抗缺血缺氧、免疫增强、抗肝纤维化、抗肿瘤、抗血栓等作用。土鳖虫作为传统中药，临床应用很广泛，药效确实，在中医临床上，用单味或配伍复方口服给药，治疗心脑血管疾病疗效显著，然而临床现有中药制剂在土鳖虫入药的方式上通常采用原药材粉碎后直接服用，或水提或醇提或水提醇沉后服用，其所采取的提取方法比较传统，药材利用率较低，活性物质没有获得充分的利用。经现代研究，土鳖虫肽类成分确切的疗效成为土鳖虫的主要活性部位，肽类成分在土鳖虫体内以蛋白的形式存在，人体口服后蛋白经胃肠道内的胃蛋白酶及胰蛋白酶酶解成小分子的肽，再吸收入血发挥疗效，但蛋白在体内酶解成小分子肽的效率极低，绝大多数被直接排除体外，造成药材的大量浪费，疗效大大降低。应用酶解法水解动物蛋白，获得具有一定生理活性的生物活性肽是目前国内外研究的热点。
土鳖小肽是运用生物工程和酶解技术从土鳖中提取出来的小分子肽类，其相对分子质量在3KD以下，易透皮吸收，溶解性和消化利用率高。初步药效试验证实，本项目土鳖虫仿生酶解活性小肽有效部位具有高效的抗凝血、促纤溶活性，经大鼠脑缺血模型药效试验证实，土鳖虫仿生酶解活性小肽能有效降低脑含水量、明显减轻大鼠的神经行为症状对神经细胞有保护作用、明显抑制脑缺血范围；初步急性毒性试验以最大量给药未出现毒性反应。说明土鳖虫仿生酶解活性小肽不仅增强了疗效，而且消除了服用动物异蛋白引起的免疫原反应，减小了不良反应发生率，安全性高。
微量元素在体内有四个作用：①作为运载工具；②参与酶的组成或代谢过程；③参与激素组成并发挥作用；④影响遗传与变异。中风病人头发检验结果提示，微量元素铬、硒明显降低；脑梗塞病人中，微量元素锰含量升高。经研究认为，缺铬可引起糖、脂肪代谢改变，对脑血管产生不利的影响；缺硒可使体内前列腺素I2降低、血栓烷A2升高，从而加速血管损害；锰增高则引起血管内膜增厚，促使血栓形成。另外，脑梗塞病人，血清中铜、铜/锌的比值和镉、铝、铷均升高，而锌下降。并发现血清铜、铜/锌比值在急性期升高更为明显，而且脑梗塞次数越多，升得越高。经研究认为这与脑组织损伤、坏死有关。锌是参与组织修复的，故而含量降低。因此，微量元素的测定作为一个辅助指标，对中风的发生、发展与预后的了解有一定意义。人们也可以补充或控制某些微量元素达到预防中风的目的。
微量元素参与生命物质的组成和代谢活动，其中不少参与心脑血管的正常物质的组成和代谢活动。抗氧化物是人体的“清道夫”，对心脑血管的保护十分重要。其中，最重要的是超氧化物歧化酶(SOD)。SOD活只有经微量元素锌、铜、锰的参与才能发挥效能。另一种抗氧化酶一谷胺甘肽酶，则必须由微量元素硒激活后，才能与非酶系统如维生素C、维生素E等，一起形成抗氧化防线，清除人体内的活性氧自由基。
铁参加血红蛋白等的合成，分布在红细胞、肌肉中，负责氧和二氧化碳的运输和交换。铁不足可致贫血，不仅可引起心脏负担增加，同时由于氧的供给不足，也直接影响到心、脑的健康。但是如果铁过多也会致病，尤其是弓I发冠心病。芬兰一位学者新近发表了一项研究成果，血清铁蛋白每增加1％，就会使冠心病的危险性增加4％，血清铁蛋白超过了一定的水平，冠心病的发生率为正常人的两倍。研究人员还发现，人的血中铁含量过高时易患中风。铁会与其他化学物质结合，形成氧化压力，从而有损细胞。铁的大量储存会增加脑细胞、脑微血管的过氧化反应，从而导致中风的发生。一般说来，食物中的铁不会导致体内蓄积过多的铁，人们实际上只要不滥用铁剂便可以了。当然，在身体许可的条件下，争取献血无疑是明智的。
铜可以促使无机铁变为有机铁，促进铁进人骨骼，加速血红蛋白的合成，还有助于组织细胞内s0D等的合成，保护心、肝、脑、骨髓等细胞，免受自由基之害。据世界卫生组织资料报道，全世界每年死于心脏病的人占死亡总人口的第一位，而法国人的心脏病死亡率却是倒数第二。美国专家研究后认为，法国人心脏病死亡率低可能与他们膳食中含铜量丰富有关。人体如果长期缺铜，各种生理活动会受影响，造成较明显的jf瞳胆固醇、血脂及尿酸升高，容易导致冠状动脉硬化性心脏病，严重者还会发生心肌梗死。世界卫生组织根据人体对铜的需求，推荐c每人每日摄人2～5毫克铜。成年人每日摄铜量经常少于2毫克，心脏功能会发生障碍。美国一份调查资料表明，美国有2／3的人铜摄人量达不到这个标准，近30年来有进一步下降的趋势，同时期的心脏病发病率增加了44％。在当今精制食品风行的年代，人类摄铜量大大下降，为了预防心脏病的发生，可以多吃些含铜较丰富的牛肝、羊肝、牛羊肉、麦芽、花生、胡萝卜、鸡蛋等。
锌是人体80多种酶的重要组成成分。锌能提高人体免疫功能，更好地抵御感染，而现时认为一些心血管疾患的发病与感染有关。缺锌时维生素A不能正常发挥生理作用，使视力及暗适应受到影响。糖尿病患者的胰腺含锌量只有正常人的一半，说明锌是胰岛素生成的重要成分。锌含量的严重不足也许参与了糖尿病的发病，而糖尿病是心脑血管疾病的“伙伴”。
土鳖小肽螯合物不仅能更进一步提高小肽的功效，还能提高铜、锌等微量元素的吸收率，使人体摄入两类物质（小肽和微量元素），并协同发挥促纤溶的作用。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种促纤溶的土鳖小肽螯合物，本发明的第二目的是提供该土鳖小肽螯合物在制备用于促纤溶的保健食品、药品及化妆品中的应用。
本发明目的第一目的是这样实现的：
一种促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于采用以下工艺步骤制备：
（1）土鳖小肽的制备：将土鳖虫粉碎过80目筛，加8-12倍量水，加热煮沸15-30分钟，待冷至约35～45℃，调节pH值1.0～3.0，加入0.5～2%胃蛋白酶，保温1～3小时，调节pH值7.0～9.0，加入0.5～2%胰蛋白酶，保温3～5小时，煮沸10～15分钟，离心，上清液通过相对分子质量为3KD的超滤膜超滤，透过液加于DA201-C大孔吸附树脂柱上，以水洗脱，弃去水洗液，再以60～90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并继续浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的清膏，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽提取物。经LC-MS检测，土鳖小肽提取物中含有Val-Asp-His-Glu-Pro-Gly-Asn-His、Cys-Cys-Gly-Phe-Val-Gln-Trp-Cys-Pro-Lys、Val-Gly-Ser-Ala-Gly-Ala-Gly-Val-Thr、Lys-Leu-Tyr-Pro-Ala-Pro-Tyr-Met-Thr-Val-Thr四种小肽，其总含量为50%～90%。
表1土鳖小肽中小分子肽的相对分子质量及序列组成表
（2）鳌合反应：将硫酸铜（葡萄糖酸铜，或柠檬酸铜，或氯化锌，或葡萄糖酸锌，或乳酸锌）溶于蒸馏水配成浓度为10～15mg/ml盐溶液，以稀盐酸调节pH值2～4，按盐溶液与土鳖小肽提取物比例8～10:1比例加入土鳖小肽提取物，搅拌溶解，在温度为50～60℃条件下，螯合反应60～90分钟，用纳滤膜（截留相对分子质量为150～300Da）纳滤除盐，得到土鳖小肽螯合物溶液。
（3）喷雾干燥得螯合物：将土鳖小肽螯合物溶液减压浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽螯合物。
经过上述方法制备的土鳖小肽螯合物，用于制备成下述制剂：
（1）按土鳖小肽螯合物:玉米油:蜂蜡:卵磷脂比例为10:36:3:1混合物料，经胶体磨研磨，制备成软胶囊剂；
（2）按土鳖小肽螯合物:聚乙二醇400:丙二醇比例为10:38:2混合物料，经胶体磨研磨，制备成软胶囊剂；
（3）土鳖小肽螯合物，加入常规辅料，制备成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂。
但本发明不限于上述剂型。成型工艺所用的常规药剂辅料可以用其他的性质类似的辅料代替，如糖粉、蜂蜜、羧甲基纤维素钠等辅助成型药用辅料；也可与其他药用物质合用，共同达到促纤溶的作用。
本发明的第二目的是提供上述土鳖小肽螯合物的用途，其具有促纤溶的作用，其可在制备用于促纤溶的保健食品、药品及化妆品中应用。
本发明的有益效果是：本发明土鳖小肽螯合物，制备简便，成本低；土鳖小肽与微量元素协同发挥促纤溶的作用，同时具有毒副作用小、无耐药性、不易残留等优点，达到绿色、纯天然的要求，能获得良好的经济效益。
药效试验
为进一步验证本发明土鳖小肽螯合物的促纤溶的作用，发明人进行了药效试验考察，试验方法及结果如下：
1.对纤维蛋白溶解活性的影响（纤维蛋白平板法）
（1）受试药物
土鳖小肽铜螯合物，自制，含土鳖小肽（以总肽量计）76.9%，含铬1.6%。临用前采用灭菌蒸馏水配成相应浓度药液供灌胃。
土鳖小肽锌螯合物，自制，含土鳖小肽（以总肽量计）76.9%，含锌1.6%。临用前采用灭菌蒸馏水配成相应浓度药液供灌胃。
土鳖小肽，自制，含土鳖小肽（以总肽量计）78.5%。临用前采用灭菌蒸馏水配成相应浓度药液供灌胃。
葡萄糖酸铜，食品级，铜含量为14.1%。临用前采用灭菌蒸馏水配成相应浓度药液供灌胃。
葡萄糖酸锌，食品级，锌含量为14.3%。临用前采用灭菌蒸馏水配成相应浓度药液供灌胃。
（2）动物及饲养
①动物种属、来源
ICR小鼠，SPF级，雌雄各半，体重18-22g，购自由山东大学试验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（鲁）20130004。
②饲养条件
小鼠饲养于独立送风笼具（IVC）中，空气洁净度10000级，实验室温度24±2℃；相对湿度60%～80%；每小时空气交换次数：10-15次/小时；光照周期：12（日）/12（夜）小时。雌雄分开饲养，每笼不超过5只。
饲料：鼠全价颗粒饲料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司，其质量符合GB14924.1-2001《实验动物配合饲料通用质量标准》。
垫料：灭菌颗粒垫料，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司。
饮水：饮用纯化水，经酸化后自由饮用。
（3）试验方法及结果
剂量设置与分组ICR小鼠50只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为5组，每组10只，分别为：土鳖小肽铜螯合物组（50mg/kg）、土鳖小肽锌螯合物组（50mg/kg）、土鳖小肽组（50mg/kg）、葡萄糖酸铜组（6.0mg/kg）、葡萄糖酸锌组（6.0mg/kg）、空白对照组。各组连续灌胃给药7天。
纤维蛋白平板的制备称取1.5g琼脂粉加入100ml蒸馏水，煮沸，制成琼脂溶液，冷却至50~60℃，取80ml加入0.5%的纤维蛋白原溶液，加入凝血酶溶液（20U/ml），立即打旋混匀，取10ml溶液倒入细胞培养皿中制成平板，总共制备10板，放平处冷却。加热纤维蛋白平板的制备：取5板上述已做好的平板，放入85℃烘箱中30min，冷却后备用。
试验方法小鼠按上述方案分组连续预防给药7天，最后1次给药30min后，摘眼球取血，加入3.8%枸橼酸钠抗凝，以3000r/min离心10min，取上层血浆。将20μl血浆分别点到加热和未加热纤维蛋白平板上，37℃恒温培养箱放置18h，观察有无溶解圈，并测定其面积，以溶解圈面积大小衡量纤溶性的大小。面积计算公式如下：
面积（mm2）=[（长径+短径）/4]2×3.14
试验结果各组药物对纤维蛋白溶解活性的影响结果见表2。
表2对纤维蛋白溶解活性的影响（N=10，X±sd）
#P<0.05，##P<0.01，与空白对照组比较。
以上实验结果表明，与空白对照组比较，试验各组对加热平板的溶解面积没有影响；土鳖小肽铜螯合物组、土鳖小肽锌螯合物组均可使未加热平板的溶解圈面积极显著的增大（P<0.01），土鳖小肽组可使未加热平板的溶解圈面积显著的增大（P<0.05），吡啶甲酸铬组、葡萄糖酸锌组对未加热平板的溶解圈面积无显著性影响（P＞0.05）。表明土鳖小肽螯合物及土鳖小肽对纤维蛋白的溶解过程有显著的促进作用，通过两种纤维蛋白平板比较可鉴别出土鳖小肽螯合物及土鳖小肽具有纤溶酶原激活物而不具有纤溶酶活性。
对体内溶栓作用（家兔动静脉旁路血栓）
（1）受试药物
同上
（2）动物及饲养
①动物种属、来源
白色家兔，普通级，雌雄各半，体重2.0-3.0kg，购自由山东大学试验动物中心提供，许可证号：SCXK（鲁）20130004。
②饲养条件
环境适应期：动物购入后，试验前驯养适应一周，用于该项实验。
饲养条件：实验室温度24±2℃，相对湿度60%~80%，空气交换频率10分钟外循环/5分钟内循环，自然光照。
饲养管理：雌雄分养，2只/笼，笼子清洗频度1次/周，粪托盘清洗频度5次/日。
饲料和饮水：基础饲料为配方颗粒饲料，购自南京市江宁区青龙山动物养殖厂，自由摄食。饮用水为去离子水，自由饮水。
（3）试验方法及结果
剂量设置与分组家兔48只，雌雄各半，体重2.0-3.0kg，随机分为6组，每组8只，分别为：土鳖小肽铜螯合物组（30mg/kg）、土鳖小肽锌螯合物组（30mg/kg）、土鳖小肽组（30mg/kg）、葡萄糖酸铜组（3.6mg/kg）、葡萄糖酸锌组（3.6mg/kg）、空白对照组。
试验方法及检测指标取健康白兔，预先给药7天，末次给药30min后，戊巴比妥钠静脉麻醉后，分离右颈总动脉及左颈外静脉，取内径为2mm，长16cm的硅化聚乙烯管，内置一根长8cm的4号手术线，管内充满肝素生理盐水(5×104U/L)，将聚乙烯管的一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，开放血流，15min后，然后继续观察15min，中断血流，取出丝线称重，按下列公式计算血栓湿重（mg）和血栓抑制率（%）：
血栓湿重（mg）=血栓重量（mg）—丝线重量（mg）
血栓抑制率（%）=（模型组血栓重—受试组血栓重）/（模型组血栓重）×100
试验结果
表3芎芪通脉胶囊对家兔动静脉旁路血栓重量的影响（N=8，X±s）
#P<0.05，##P<0.01，与空白对照组比较。
以上实验结果表明，与对照组相比，土鳖小肽铜螯合物组、土鳖小肽锌螯合物组均能极显著减轻血栓湿重（P<0.01）；土鳖小肽组能显著减轻血栓湿重（P<0.05）；吡啶甲酸铬组、葡萄糖酸锌组无显著性差异（P＞0.05）。
具体实施方式
下面列举实施例，进一步说明本发明，各实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明：
实施例1
将土鳖粉碎过80目筛，加12倍量水煮沸，待冷至约40℃，调节pH值2.0，加入1%胃蛋白酶，保温1小时，调节pH值8.0，加入1%胰蛋白酶，保温3小时，煮沸15分钟，离心，上清液通过相对分子质量为3KD的超滤膜超滤，透过液加于DA201-C大孔吸附树脂柱上，以水洗脱，弃去水洗液，再以90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并继续浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的清膏，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽提取物。
将葡萄糖酸铜溶于蒸馏水配成浓度为15mg/ml盐溶液，以稀盐酸调节pH值3，按盐溶液与土鳖小肽提取物比例8:1比例加入土鳖小肽提取物，搅拌溶解，在温度为60℃条件下，螯合反应90分钟，用截留相对分子质量为150～300Da的纳滤膜纳滤除盐，得到土鳖小肽螯合物溶液，减压浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽螯合物。
实施例2
将土鳖粉碎过80目筛，加10倍量水煮沸，待冷至约45℃，调节pH值1.5，加入2%胃蛋白酶，保温2小时，调节pH值9.0，加入2%胰蛋白酶，保温4小时，煮沸15分钟，离心，上清液通过相对分子质量为3KD的超滤膜超滤，透过液加于DA201-C大孔吸附树脂柱上，以水洗脱，弃去水洗液，再以75%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并继续浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的清膏，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽提取物。
将葡萄糖酸锌溶于蒸馏水配成浓度为10mg/ml盐溶液，以稀盐酸调节pH值4，按盐溶液与土鳖小肽提取物比例10:1比例加入土鳖小肽提取物，搅拌溶解，在温度为60℃条件下，螯合反应60分钟，用截留相对分子质量为150～300Da的纳滤膜纳滤除盐，得到土鳖小肽螯合物溶液，减压浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥（进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃），得到土鳖小肽螯合物。
实施例3
取实施例1方法所得的土鳖小肽螯合物100g，按土鳖小肽螯合物:玉米油:蜂蜡:卵磷脂比例为10:36:3:1混合物料，经胶体磨研磨30分钟，以明胶、甘油、纯化水、氧化铁黑按100：40：100：1比例制作软胶囊囊皮胶液，控制胶盒温度55±5℃，保温罐40±5℃，喷体温度36±5℃，以压丸机压制软胶囊，每粒内容物重0.50g，18℃～26℃冷风干燥4h（相对湿度为30%～40%）定型，洗丸、干燥、选丸、包装，制备成软胶囊成品。
实施例4
取实施例1方法所得的土鳖小肽螯合物100g，按土鳖小肽螯合物:聚乙二醇400:丙二醇比例为10:38:2混合物料，经胶体磨研磨，以明胶、甘油、纯化水、氧化铁黑按100：40：100：1比例制作软胶囊囊皮胶液，控制胶盒温度55±5℃，保温罐40±5℃，喷体温度36±5℃，以压丸机压制软胶囊，每粒内容物重0.50g，18℃～26℃冷风干燥4h（相对湿度为30%～40%）定型，洗丸、干燥、选丸、包装，制备成软胶囊成品。
实施例5
取实施例2方法所得的土鳖小肽螯合物200g，加淀粉至总量250g，制粒、干燥、整粒，填装胶囊，包装，制备成胶囊成品。
实施例6
取实施例2方法所得的土鳖小肽螯合物50g，加水、丙二醇溶解至1000ml，以面膜纸浸润作为化妆品面膜。

Claims (9)

1.一种促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于采用以下工艺步骤制备：
（1）土鳖小肽的制备：将土鳖虫粉碎过80目筛，加8-12倍量水，加热煮沸15-30分钟，待冷至约35～45℃，调节pH值1.0～3.0，加入0.5～2%胃蛋白酶，保温1～3小时，调节pH值7.0～9.0，加入0.5～2%胰蛋白酶，保温3～5小时，煮沸10～15分钟，离心，上清液通过相对分子质量为3KD的超滤膜超滤，透过液加于DA201-C大孔吸附树脂柱上，以水洗脱，弃去水洗液，再以60～90%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并继续浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的清膏，喷雾干燥，得到土鳖小肽提取物；
（2）鳌合反应：将硫酸铜溶于蒸馏水配成盐溶液，以稀盐酸调节pH值2～4，加入上述土鳖小肽提取物，搅拌溶解，在温度为50～60℃条件下，螯合反应60～90分钟，用纳滤膜纳滤除盐，得到土鳖小肽螯合物溶液；
（3）喷雾干燥得螯合物：将土鳖小肽螯合物溶液减压浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15，喷雾干燥，得到土鳖小肽螯合物。
2.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（1）所述土鳖小肽提取物中含有Lys-Leu-Tyr-Pro-Ala-Pro-Tyr-Met-Thr-Val-Thr、Val-Asp-His-Glu-Pro-Gly-Asn-His、Cys-Cys-Gly-Phe-Val-Gln-Trp-Cys-Pro-Lys、Val-Gly-Ser-Ala-Gly-Ala-Gly-Val-Thr四种小分子肽，总含量为50%～90%。
3.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（2）所述硫酸铜可以用葡萄糖酸铜、柠檬酸铜、氯化锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌代替。
4.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（2）所述盐溶液的浓度为10～15mg/ml。
5.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（2）所述盐溶液与土鳖小肽提取物比例为8～10:1。
6.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（2）所述纳滤膜的截留相对分子质量为150～300Da。
7.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于步骤（1）与（3）所述喷雾干燥进风温度为180～200℃，出风温度为90～100℃。
8.根据权利要求1所述的促纤溶的土鳖小肽螯合物，其特征在于制备成下述制剂：
（1）按土鳖小肽螯合物:玉米油:蜂蜡:卵磷脂比例为10:36:3:1混合物料，经胶体磨研磨，制备成软胶囊剂；
（2）按土鳖小肽螯合物:聚乙二醇400:丙二醇比例为10:38:2混合物料，经胶体磨研磨，制备成软胶囊剂；
（3）土鳖小肽螯合物，加入常规辅料，制备成口服液、胶囊剂、片剂、颗粒剂；
（4）水蛭小肽螯合物，加水、丙二醇溶解，以面膜纸浸润作为化妆品面膜。
9.权利要求1所述的土鳖小肽螯合物用于促纤溶。
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