CN105557299A - 野生松茸人工驯化方法 - Google Patents

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刘晓红
王志伟
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王志伟
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Abstract

本发明公开了一种野生松茸人工驯化方法，将野生松茸的子实体菌肉组织接种后扩繁后，采用玉米芯份、红薯藤份、鼠尾草、荔枝木屑、大蒜末、海藻酸纤维、葛仙米发酵灭菌所得的培养基进行培养，同时在培养过程中，采用钴-60γ射线处理，并合理调控温度和湿度，从而成功的实现了野生松茸的人工代料栽培和出菇。

Description

野生松茸人工驯化方法
技术领域
本发明涉及松茸栽培领域，具体涉及一种野生松茸人工驯化方法。
背景技术
松茸好生于养份不多且位于寒温带海拔3500米以上的高山林地，一般在秋季生成，通常寄生于赤松、偃松、铁杉、日本铁杉及黑松的根部；由于松茸含有多糖、甾体(steroid)、皂苷(saponin)、蒽醌类(anthraquinone)、酚类(phenols)、鞣质(tannin)、生物碱(alkaloids)、香豆素(coumarin)、萜类酯化合物(terpenoidcompound)、油脂(lipid)、三萜(terpenes)、甾醇(sterolester)及8种必需氨基酸和维生素，并具有强治疗糖尿病、调节血压、预防心血管疾病及抗癌等作用，故松茸相当具有医药价值；且当松茸生长时，一旦突出地面并张开草伞，其香气就会大量逸失，吃起来的味道也变差，经济价值也随之下滑；因此，松茸之所以珍贵在于松茸成长速度缓慢，且采集困难。
由于松茸吸收营养方式相当特殊，其由松树的细根上长出外生菌根，并通过外生菌根直接吸取松树通过光合作用产生的糖类，这种特殊的生长方式更使得松茸培育相当不易。此外，现有技术为栽种松树并造林后，再将松茸菌丝体接种至松树等以松树林栽培松茸的方法，但由于现今土地取得不易、栽种松树需长久时间、且须保持松树健康等太多变因，导致人工培育松茸具有相当的难度。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种野生松茸人工驯化方法，通过营养成分的合理配比，栽培条件的合理调控，从而成功实现了野生松茸的人工代料栽培和出菇，具有现实的意义和作用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
野生松茸人工驯化方法，包括如下步骤：
S1、按重量份称取马铃薯粉30～40份、葡萄糖11～15份，琼脂7～13份，松针营养液50～110份、葡萄叶粉18～20份、硫酸镁0.1～0.3份、磷酸二氢钾0.2～0.6份、氨基酸螯合锰0.1～0.3份、一水硫酸锌0.1～0.3份混合混匀后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种野生松茸的子实体菌肉组织，25℃恒温暗培养6d～10d后，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次，分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面；
S2、取玉米芯26～40份、红薯藤5～15份、鼠尾草25～35份、荔枝木屑5～10份、大蒜末5～15份、海藻酸纤维5～10份、葛仙米45～55份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8～1.4MPa，爆破处理11～27min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4～1.9MPa，蒸汽爆破处理0.7～2.5min，得混合物；
S3、将所得的混合物自然冷却置常温，取5～11份混合菌液稀释2～5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.3～2.2L/m3用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4～5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4～5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在70％～80％；
S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料200～300克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至100～105℃，保温20～25min；然后将温度上升至110～115℃，保温60～70min；再将温度升至120～125℃，在压力为0.13～0.14MPa的情况下保温60～70min，最后再闷置30～35min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，无菌条件下接种步骤S1所得的菌丝，放入培养暗室18～23℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在15～20℃，昼夜温差控制在5～8℃，每天给予500～1000lx散射光，每天浇水，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
其中，混合菌液由乳酸杆菌、地衣芽孢杆菌、谷氨酸棒杆菌混合而成。
其中，所述乳酸杆菌∶地衣芽孢杆菌∶谷氨酸棒杆菌的质量为1∶2∶1。
其中，所述松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。
其中，每天的浇水量为10～30毫米的降水量。
本发明具有以下有益效果：
通过营养成分的合理配比，栽培条件的合理调控，从而成功实现了野生松茸的人工代料栽培和出菇，具有现实的意义和作用。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中，所使用的混合菌液由乳酸杆菌∶地衣芽孢杆菌∶谷氨酸棒杆菌按质量1∶2∶1混合所得，所述松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。
实施例1
S1、按重量份称取马铃薯粉30份、葡萄糖11份，琼脂7份，松针营养液50份、葡萄叶粉18份、硫酸镁0.1份、磷酸二氢钾0.2份、氨基酸螯合锰0.1份、一水硫酸锌0.1份混合混匀后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种野生松茸的子实体菌肉组织，25℃恒温暗培养6d后，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次，分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面；
S2、取玉米芯26份、红薯藤5份、鼠尾草25份、荔枝木屑5份、大蒜末5份、海藻酸纤维5份、葛仙米45份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8MPa，爆破处理27min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4MPa，蒸汽爆破处理2.5min，得混合物；
S3、将所得的混合物自然冷却置常温，取5份混合菌液稀释2倍后喷入原料中并混匀；同时按2.2L/m3用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在70％％；
S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料200克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至100℃，保温25min；然后将温度上升至110℃，保温70min；再将温度升至120℃，在压力为0.13MPa的情况下保温70min，最后再闷置30min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，无菌条件下接种步骤S1所得的菌丝，放入培养暗室18℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在15℃，昼夜温差控制在5℃，每天给予500lx散射光，每天浇水，每天的浇水量为10毫米的降水量，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
实施例2
S1、按重量份称取马铃薯粉40份、葡萄糖15份，琼脂13份，松针营养液110份、葡萄叶粉20份、硫酸镁0.3份、磷酸二氢钾0.6份、氨基酸螯合锰0.3份、一水硫酸锌0.3份混合混匀后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种野生松茸的子实体菌肉组织，25℃恒温暗培养10d后，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次，分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面；
S2、取玉米芯40份、红薯藤15份、鼠尾草35份、荔枝木屑10份、大蒜末15份、海藻酸纤维10份、葛仙米55份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为1.4MPa，爆破处理11min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.9MPa，蒸汽爆破处理0.7min，得混合物；
S3、将所得的混合物自然冷却置常温，取11份混合菌液稀释5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.3L/m3用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在80％；
S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料300克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至105℃，保温20min；然后将温度上升至115℃，保温60min；再将温度升至125℃，在压力为0.14MPa的情况下保温60min，最后再闷置35min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，无菌条件下接种步骤S1所得的菌丝，放入培养暗室18～23℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在20℃，昼夜温差控制在8℃，每天给予1000lx散射光，每天浇水，每天的浇水量为30毫米的降水量，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
实施例3
S1、按重量份称取马铃薯粉35份、葡萄糖13份，琼脂10份，松针营养液80份、葡萄叶粉19份、硫酸镁0.2份、磷酸二氢钾0.4份、氨基酸螯合锰0.2份、一水硫酸锌0.2份混合混匀后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种野生松茸的子实体菌肉组织，25℃恒温暗培养8d后，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次，分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面；
S2、取玉米芯33份、红薯藤10份、鼠尾草30份、荔枝木屑7.5份、大蒜末10份、海藻酸纤维7.5份、葛仙米50份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为1.1MPa，爆破处理19min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为16.5MPa，蒸汽爆破处理1.6min，得混合物；
S3、将所得的混合物自然冷却置常温，取8份混合菌液稀释3.5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.75L/m3用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4.5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4.5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在75％；
S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料250克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至102.5℃，保温22.5min；然后将温度上升至112.5℃，保温65min；再将温度升至122.5℃，在压力为0.135MPa的情况下保温65min，最后再闷置32.5min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，无菌条件下接种步骤S1所得的菌丝，放入培养暗室20.5℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在17.5℃，昼夜温差控制在6.5℃，每天给予750lx散射光，每天浇水，每天的浇水量为20毫米的降水量，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.野生松茸人工驯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、按重量份称取马铃薯粉30～40份、葡萄糖11～15份，琼脂7～13份，松针营养液50～110份、葡萄叶粉18～20份、硫酸镁0.1～0.3份、磷酸二氢钾0.2～0.6份、氨基酸螯合锰0.1～0.3份、一水硫酸锌0.1～0.3份混合混匀后装入三角瓶中，经灭菌、冷却、摆成斜面，接种野生松茸的子实体菌肉组织，25℃恒温暗培养6d～10d后，从菌落边缘挑取尖端菌丝体，移植到常规PDA培养基斜面上，25℃恒温暗培养至菌丝长满整个斜面，如此重复3次，分离筛选保藏的菌种转管扩繁至PDA培养基斜面上，置25℃恒温暗培养至菌丝长满整个培养基斜面；
S2、取玉米芯26～40份、红薯藤5～15份、鼠尾草25～35份、荔枝木屑5～10份、大蒜末5～15份、海藻酸纤维5～10份、葛仙米45～55份置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8～1.4MPa，爆破处理11～27min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4～1.9MPa，蒸汽爆破处理0.7～2.5min，得混合物；
S3、将所得的混合物自然冷却置常温，取5～11份混合菌液稀释2～5倍后喷入原料中并混匀；同时按1.3～2.2L/m3用量的比例将过氧化尿素喷洒到原料上翻拌混合均匀，此后每周喷施1次混合菌液，翻拌均匀形成稳定菌落体，连续接种4～5周后使原料进入分解阶段，停止分解菌接种，再每隔5天翻拌1次原料，持续4～5周，保持原料堆内的有氧条件，原料堆内湿度保持在70％～80％；
S4、发酵结束后装入食用菌袋，每袋折装干料200～300克，松紧要适度，用细绳扎紧两端袋口，常压下先将温度升至100～105℃，保温20～25min；然后将温度上升至110～115℃，保温60～70min；再将温度升至120～125℃，在压力为0.13～0.14MPa的情况下保温60～70min，最后再闷置30～35min，停止加热，让其自然冷却到24℃以下，无菌条件下接种步骤S1所得的菌丝，放入培养暗室18～23℃避光培养直至培养基表面长出白色菌丝时，采用钴-60γ射线处理后，揭开瓶盖将栽培瓶侧放进行培育，白天房间温度保持在15～20℃，昼夜温差控制在5～8℃，每天给予500～1000lx散射光，每天浇水，当子座长齐、尖端膨大、孢子形成时即可采收。
2.根据权利要求1所述的野生松茸人工驯化方法，其特征在于，混合菌液由乳酸杆菌、地衣芽孢杆菌、谷氨酸棒杆菌混合而成。
3.根据权利要求2所述的野生松茸人工驯化方法，其特征在于，所述乳酸杆菌∶地衣芽孢杆菌∶谷氨酸棒杆菌的质量为1∶2∶1。
4.根据权利要求1所述的野生松茸人工驯化方法，其特征在于，所述松针营养液的制备方法为：取生长六年以上的干油松松针，加9～11倍量水煮沸1.5～2小时，取滤液，加水补足至初始液体量，加入16～24％蚕蛹粉后混合即得。
5.根据权利要求1所述的野生松茸人工驯化方法，其特征在于，每天的浇水量为10～30毫米的降水量。
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